N-氨基-D-门冬氨酸诱导大鼠下丘脑视上核、室旁核和弓状核内c-fos基因表达

实验用foS蛋白免疫组织化学方法,研究了中枢神经系统兴奋性介质N-氨基-D-门冬氨酸诱导大鼠下丘脑内c-fos的表达.N-氨基-D-门冬氨酸注射大鼠皮下后,观察了fos阳性细胞在下丘脑内开始出现与消失的时程相关以及在下丘脑内的分布.结果表明:给N-氨基-D-门冬氨酸后30分开始出现fos阳性细胞,1～2小时达高峰,4～8小时消失.fos阳性细胞主要分布于视上核、室旁核和弓状核,视上核和室旁核中fos阳性细胞分别占细胞总数的57.8%和63.6%,在弓状核中占细胞总数的60.6%.     

大鼠生后视网膜发育过程中Nurr1与TH的相关关系研究

目的:观察核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurr1)与多巴胺能神经细胞特异性标记物酪氨酸羟化酶(TH)在生后大鼠视网膜发育过程中的表达变化,探明Nurr1与视网膜多巴胺能神经元的相关关系。方法:石蜡包埋组织切片,免疫组织化学双重标记。结果:Nurr1在视网膜发育过程中的表达出现了显著的动态变化,Nurr1阳性产物主要表达在内核层细胞,生后3～7 d达到高峰,之后随着细胞的成熟阳性表达又逐渐减少,成熟的视网膜组织内仅见少量Nurr1阳性细胞,在视网膜神经细胞从幼稚到成熟的分化过程中仅见个别TH阳性细胞。Nurr1与TH的免疫组化双标结果显示两蛋白可以共表达在同一细胞中,但众多的Nurr1阳性细胞不表达TH。结论:Nurr1在大鼠视网膜多巴胺能神经细胞及非多巴胺能神经细胞从幼稚到成熟的分化过程中可能具有重要的调控作用。     

N—氨基—D—门冬氨酸诱导大鼠下丘脑视上核,室旁核和弓状核内c—fo…

实验用ｆｏｓ蛋白免疫组织化学方法，研究了中枢神经系统兴奋性介质Ｎ－氨基－Ｄ－门冬氨酸诱导大鼠下丘脑内ｃ－ｆｏｓ的表达。Ｎ－氨基－Ｄ－门冬氨酸注射大鼠皮下后，观察了ｆｏｓ阳性细胞在下丘脑内开始出现与消失的时程相关以及在下丘脑内的分布，结果表明：给Ｎ－氨基－Ｄ－门冬氨酸后３０发开始出现ｆｏｓ阳性细胞，１￣２小时达高峰，４￣８小时消失，ｆｏｓ阳性细胞主要分布于视上核、室旁核和弓状核，视上核和室旁核中ｆｏ     

多巴胺受体在弓状核神经元定位及糖尿病大鼠下丘脑的表达

目的:通过检测多巴胺受体在正常大鼠下丘脑弓状核内神经肽Y(neuropeptide Y)和前阿黑皮素(proopiomelanocortin,POMC)神经元的表达和定位,以及在链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠下丘脑表达的改变,探讨中枢多巴胺及其受体对血糖和机体能量代谢的影响。方法:大鼠分为糖尿病模型组(n=5)和实验对照组(n=8)。通过运用免疫荧光双标技术,在激光共聚焦显微镜下观察正常大鼠下丘脑弓状核内多巴胺受体的表达情况,以及这些受体与弓状核内参与能量代谢调节的一级神经元NPY神经元和POMC神经元的共定位关系;并应用Western Blot技术检测糖尿病状态下这些受体在弓状核内的表达量的改变。结果:正常大鼠弓状核内有D2DR和D5DR的表达,但没有D1DR、D3DR和D4DR的表达。几乎所有的NPY和POMC能神经元都表达D2DR和D5DR受体。在糖尿病状态下,大鼠弓状核内D2DR的表达显著减少(P0.01),而D5DR则显著增多(P0.05)。结论:正常大鼠弓状核神经元内表达D2DR和D5DR,糖尿病状态下其表达量发生变化。这些结果提示多巴胺可能通过弓状核内NPY和POMC能神经元上的多巴胺受体参与糖尿病的发生发展过程。     

不同时程吗啡依赖对大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元的影响

目的:观察不同时程吗啡依赖对大鼠中脑腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)多巴胺能神经元的影响。方法:建立吗啡慢性依赖大鼠模型,石蜡包埋组织连续切片,免疫组织化学染色观察多巴胺能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化。结果:TH免疫组化结果显示随着吗啡依赖时间的延长VTA区内TH阳性细胞逐渐减少,吗啡依赖6周组阳性细胞减少明显。结论:较长时程吗啡依赖大鼠VTA多巴胺能神经元损伤明显。     

雄性大鼠下丘脑雄激素受体蛋白及其mRNA表达的探讨

为了观察雄激素受体 ( AR)蛋白及其 m RNA在大鼠下丘脑的表达 ,本研究采用免疫组织化学和原位杂交方法观察了成年 ( 3月龄 )雄性大鼠下丘脑 AR阳性神经元的存在及其表达。结果显示 ,雄激素受体阳性神经元广泛分布于下丘脑诸核 ,尤其是弓状核、腹内侧核、背内侧核、室周核、室旁核 ,阳性神经元多为小细胞。同时在基因水平证实部分下丘脑神经元能合成 AR,提示雄激素可能作用于以上区域。     

棉酚对大鼠下丘脑视上核、室旁核和弓状核影响的组织学和组织化学观察

本文应用组织学和组织化学方法,观察了喂饲棉酚(30mg/kg/d×5周及30 mg/kg/d×5周+60mg/kg/周×5周)的成年雄性大鼠下丘脑视上核、室旁核和弓状核神经元的一般形态结构,以及反映神经分泌功能的形态学指标。结果表明,饲药5及10周,上述三个核团神经分泌细胞的光镜形态学,未见明显变化;根据细胞核体积测量、尼氏体和神经分泌物质含量,硫胺素焦磷酸酶和酸性磷酸酶活性的半定量测定,三核团神经分泌活性无显著改变,仅用药5周时,室旁核尼氏体含量增加。这说明抗生育有效剂量棉酚,对大鼠下丘脑没有明显的直接作用;室旁核分泌活性一度增强,可能是大细胞性神经分泌系统,对棉酚引起机体内环境某些改变的生理性调节反应。     

隔核ghrelin对糖尿病胃动力障碍大鼠胃运动影响及下丘脑弓状核的潜在调控机制

 目的：研究隔核ghrelin对糖尿病(DM)大鼠胃运动的调控, 并探讨下丘脑弓状核与隔核间ghrelin通路对胃运动的调控机制。方法：链脲佐霉素腹腔注射制备DM大鼠模型;荧光免疫组化和real-time PCR方法检测DM大鼠隔核内ghrelin受体GHS-R1a表达变化;大鼠胃表面固定感应片在体记录胃运动并计算胃运动变化率;荧光金逆行示踪方法显示下丘脑弓状核和隔核间纤维联系,并采用中枢注射药物、核团损毁或电刺激等方法观察核团纤维联系对DM大鼠胃运动的调控作用。结果：（1） DM大鼠隔核GHS-R1a表达低于正常大鼠（P<0.05）,胃运动明显减弱,胃收缩幅度和频率显著降低（P<0.05）。（2）隔核注射ghrelin增强正常和DM大鼠胃运动（P<0.05）,且呈量效关系。（3） 荧光金在注射入隔核7 d后逆行至弓状核内神经元,其中部分神经元为ghrelin免疫阳性神经元;（4）正常大鼠体内,损毁隔核对胃运动和电刺激弓状核引起的胃运动变化无显著影响（P>0.05）;而对DM大鼠,损毁隔核减弱胃运动和电刺激弓状核后胃运动（P<0.05）。（5）隔核微量注射ghrelin受体阻断剂［D-Lys-3］-GHRP-6未显著改变正常大鼠电刺激弓状核后胃运动变化（P>0.05）,但可减弱DM大鼠电刺激弓状核引起的胃运动变化（P<0.05）。结论:隔核ghrelin和下丘脑弓状核-隔核间ghrelin通路在糖尿病大鼠胃运动调控中发挥重要作用。     

大鼠下丘脑弓状核神经元的神经支配

用ＨＲＰ逆行追踪和免疫细胞化学与电镜结合法研究了下丘脑弓状核神经元的神经支配。结果表明，室旁核向弓状核投射的神经元中，有一部分为催产素免疫反应阳性，一部分为后叶加压素免疫反应阳性，视上核也有部分ＯＴ免疫反应阳性神经元发出纤维投射至弓状核。将零乱毒素Ｂ亚单位结合ＨＲＰ注入第三脑室后，可见弓状核内有逆行标记细胞，电镜观察发现弓状核内的脑啡肽免疫反应阳性的树突接受ＨＲＰ反应阳性的触液神经元的轴突形成突触     

大鼠垂体后叶中神经降压素阳性神经纤维的起源

向垂体后叶注射WGA-HRP,进行逆行追踪并与免疫组织化学相结合研究了大鼠垂体后叶中神经降压素(NT)能神经纤维的起源。投射到垂体后叶的NT免疫阳性神经元胞体主要位于下丘脑室旁核小细胞部、室周区,环状核、室旁核大细胞亚核内侧部、视上核背侧部、穹窿后核及下丘脑前区、外侧区。弓状核内未见任何双标记神经元,从而否定了Goedert等用损毁的方法得出的大鼠垂体后叶中NT阳性神经纤维起源于弓状核的结论。一些室周双标记神经元位于室管膜内,距第三脑室腔很近,常挤在室管膜细胞之间。提示这些神元在监测脑脊液的化学变化,调节垂体后叶分泌方面起一定的作用。     

AMPA receptors colocalize with neuropeptide-Y- and galanin-containing, but not with dopamine, neurons of the female rat arcuate nucleus: a semiquantitative immunohistochemical colocalization study

It is well established that excitatory amino acid (EAA) neurotransmission is an essential component in the regulation of the gonadotropin-releasing hormone (GnRH) delivery system. However, the morphological interconnection of these systems is not fully understood. The objective of the present study was to determine whether or not alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid (AMPA) receptors--as indicators of aspartate/glutamatergic innervation--are present in the major neuronal populations, such as the neuropeptide-Y-(NPY), galanin- (GAL) and tyrosine-hydroxylase- (TH) containing neurons of the arcuate nucleus (AN) of the female rat. Colocalization experiments using the "mirror" technique demonstrated that: (1) AN neurons containing GluR1 are also immunoreactive (IR) for GluR2/3; (2) 38.32% of AMPA-IR cells contain NPY and 31.72% of AMPA-containing neurons are also IR for GAL; in turn, 79.41% of NPY- and 56.19% of GAL-containing neurons are IR for AMPA receptors; none of the neurons are IR for both AMPA receptors and TH. These data suggest that an excitatory aspartate/glutamatergic input is implicated in the regulation of the examined neuropeptide-containing AN neurons but not in that of TH-IR cells of the same area.     

6-羟多巴损伤黑质导致室旁核离子钙接头蛋白表达变化

目的　观察6-羟多巴（6-hydroxydopamine,6-OHDA）损伤大鼠黑质损伤后下丘脑室旁核（paraventricular nucleus of hypothalamus,PVN）中离子钙接头蛋白1（ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba1）的含量变化。 方法　30只SD大鼠根据随机数字表分为6-OHDA大鼠组和对照组各15只。6-OHDA大鼠组双侧黑质内注射6-羟多巴,对照组双侧黑质（substantia nigra,SN）内注射等体积的生理盐水。6周后断头取脑,Nissl染色、免疫组化、免疫印迹方法鉴定成模,免疫组化、免疫印迹和RT-PCR检测室旁核Iba1的表达。 结果　与对照组比较,6-OHDA大鼠组SN内酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase, TH）阳性神经细胞数量从（58±5）个减少到（10±2）个（P<0.05）,蛋白表达水平从(0.71±0.12)降低至(0.28±0.12)（P<0.05）,室旁核中Iba1阳性细胞数量从（7±2）个增加到（14±3）个（P<0.05）,蛋白表达水平从(0.1±0.08)增加到(0.19±0.06)（P<0.05）。 结论　6-OHDA大鼠PVN中Iba1的表达变化有可能与帕金森病患者的胃肠功能障碍存在一定的联系。     

动脉粥样硬化大鼠弓状核和视前内侧区神经元的形态变化

用雄性大鼠６只，一次性腹腔注射ＶＤ６０万单位／ｋｇ体系，存活３５天后，取下丘脑作石蜡连续切片，用体视学方法分析了下丘脑弓状核和视前内侧区神经元的参数变化。结果发现：下丘脑区两相核团的神经元体积变小，数目增多，发生了明显的形态学改变。     

高脂血症大鼠弓状核超微结构及神经肽Y神经元的变化

目的:观察高脂血症大鼠弓状核超微结构及神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)免疫阳性神经元的变化。方法:实验组大鼠高脂饲料饲养6周测血脂,透射电镜观察弓状核超微结构,免疫组化染色观察测量NPY免疫阳性神经元光密度、数量及截面积。结果:实验组血清总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇明显升高;弓状核超微结构出现明显病理学改变。NPY神经元平均光密度、细胞数、截面积减少。结论:高脂血症可诱导弓状核神经元超微结构和NPY神经元改变,为进一步探讨血脂代谢异常与中枢神经的内分泌关系提供形态学依据。     

6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。     

高渗刺激诱导大鼠视上核与孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体反应

目的 探讨大鼠接受高渗刺激后,视上核和孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体(N-ASC)反应.方法 成年雄性SD大鼠50只,随机分为光镜组(n=40)和电镜组(n=10).采用多重免疫荧光标记法,在光镜下观察高渗刺激(9%氯化钠,5.5ml/kg尾静脉注射)后15、45、90和180 min,视上核内胶质纤维酸性蛋白(GFAP,标记星形胶质细胞)、催产素(OXT,标记视上核神经元)、Fos(标记神经元胞核)和孤束核内GFAP、酪胺酸羟化酶(TH,标记神经元)、Fos表达的时程变化.采用双重免疫电镜法,观察高渗刺激后视上核N-ASC内星形胶质细胞(用Cx43标记)与神经元(用Cx32标记)之间接触处的超微结构.结果光镜下在视上核和孤束核可分别观察到3种N-ASC,即:由 GFAP阳性星形胶质细胞与 OXT(或TH)阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos和OXT(或TH)双阳性神经元形成的N-ASC.高渗刺激后 N-ASC的数量明显增加.抗Cx43和抗Cx32的双重免疫电镜显示,高渗刺激后Cx43阳性星形胶质细胞突起(即Cx43半通道)以及Cx32和Cx43形成的异型缝隙连接(HGJ)的数量明显增加.结论视上核和孤束核内的N-ASC参与渗透压调节反应.     

腹腔注射2-脱氧-D-葡萄糖可诱发大鼠视上核和室旁核神经元表达Fos

目的 探讨腹腔注射2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）能否激活大鼠下丘脑视上核（SON）和室旁核（PVN）神经元而表达Fos。方法 健康雄性SD大鼠12只,随机分为腹腔注射2-DG组（6只）、生理盐水对照组（3只）及正常对照组（3只）。各自处理后,应用免疫组织化学方法,观察各组下丘脑SON和PVN内Fos表达及其与催产素（OT）和加压素（VP）的双标情况,同时采用ELISA方法对血清中OT和VP的含量进行检测。 结果与生理盐水对照组和正常对照组相比,2-DG引发的特异性Fos免疫阳性产物主要集中分布于下丘脑外侧区和穹隆周区,在SON、PVN也有密集表达。SON和PVN内的Fos表达与该区的特异性神经活性物质OT和VP有共存。OT/Fos双标细胞率（双标细胞占OT阳性细胞的百分率）在SON和PVN分别为87.10%、90.57%,明显高于VP/Fos在这两个核团的双标率（双标细胞占VP阳性细胞的百分率,68.42%、76.92%）,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测结果显示,2-DG组动物血清中OT和VP水平与对照组相比无明显变化。 结论 腹腔注射2-DG可激活大鼠下丘脑SON和PVN内OT和VP神经元表达Fos,SON和PVN可能参与2-DG诱导的急性应激反应。     

雄性大鼠去势后下丘脑NOS神经元的分布

目的：探讨雄性大鼠去势术后下丘脑内一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的改变。方法：发育期雄性SD大鼠,分三组：假手术组,去势组和去势＋睾酮替代治疗组,利用黄递酶组织化学染色方法观察与比较各组大鼠与生殖相关各下丘脑核团内NOS神经元数目与密度,结果：在下丘脑的视前内侧核,视前室周核,正中隆起,弓状核均可见到NOS阳性标记细胞。去势术后视前内侧核内NOS神经元数目及密度降低,睾酮替代治疗可逆转,结论：一氧化氮在雄激素对下丘脑的反馈调节中起重要的介导作用。     

Rapid modifications of somatostatin neuron activity in the periventricular nucleus after acute stress

We have previously reported that stress induces a rapid increase in hypothalamic somatostatin (SS) release. In the present work, we investigated whether SS synthesis is also affected by this treatment. Male rats were subjected to 15-min immobilization (IMO) stress, and measurements of both SS mRNA levels and SS mRNA-containing cells were analyzed in the periventricular nucleus (PeV) by radioactive and nonradioactive in situ hybridization (ISH), respectively. In addition, SS content and total SS mRNA were measured in the whole hypothalamus by radioimmunoassay (RIA) and northern blot analysis, respectively. ISH was conducted by applying either a radioactive-labeled (35S) or a digoxigenin (DIG)-labeled oligonucleotide probe on histological sections containing the periventricular region of the anterior hypothalamic area (AHA). ISH analysis using radioactive label showed a significant increase in SS mRNA levels in stressed rats. In contrast, stress treatment decreased the number of DIG-labeled cells expressing SS mRNA in this region by 35% as compared to the same histological sections from naive control rats. In addition, a significant decrease in the total SS mRNA DIG-labeled area was observed. Finally, SS content and SS mRNA measured in the whole hypothalamus of stressed rats were markedly inhibited as compared to control rats. Our data show that IMO stress induces a significant and rapid increase in SS mRNA level accompanied by a decrease in the number of cells expressing SS mRNA in the PeV-AHA. The present results suggest that a subset of PeV SS neurons, which became silent at the onset of stress, are regulated independently of the remaining whole mass of PeV neurons. This differential control is in line with the cellular heterogeneity described in periventricular SS-producing neurons and with the multiple hypothalamic and pituitary functions assigned to SS.     

老年大鼠下丘脑视上核和弓状核的超微结构变化

观察老年大鼠下丘脑视上核腹侧大细胞神经元和弓状核神经元的超微结构,结果显示:老年大鼠视上核腹侧血管加压素(VP)神经元的胞体较成年鼠大,胞质结构比较致密,内含许多核糖体颗粒,粗面内质网分散成小泡状,神经分泌颗粒增多,溶酶体、线粒体、高尔基氏复合体数量都较多.而弓状核内的暗细胞和亮细胞的核糖体减少,高尔基氏复合体和线粒体都变化,还有少数神经元固缩,细胞质内胞器明显减少,呈现变性现象.结果提示:老年期下丘脑视上核VP神经元机能增强;而弓状核内两种细胞都显示机能减弱的征象.老年时下丘脑各核团神经元的这种不协调性变化,可能是动物衰老的一种重要表现.