冷冻保存对人精子膜蛋白PH-20和透明质酸酶活性的影响

目的:探讨冷冻保存对人精子膜蛋白PH-20和顶体内透明质酸酶活性的影响。方法:24例正常生育力精液标本行冷冻保存。免疫印迹检测PH-20蛋白在人精子中的表达,免疫荧光观察PH-20蛋白在人精子上的定位,采用改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测精子顶体内透明质酸酶(HYD)活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)。结果:免疫印迹显示正常标本冷冻前、后精子均有PH-20蛋白的表达,其PH-20/β-actin平均光密度在正常组冷冻前为0.41±0.15;正常组解冻后为0.24±0.11,两者的平均光密度差异有统计学意义;间接免疫荧光染色后在荧光显微镜下观察冷冻前PH-20阳性率达72.88%±8.04%;解冻后PH-20阳性率降至46.97%±8.38%,差异有统计学意义;解冻后HYD活性与冷冻前比较均有显著性下降。结论:冷冻-解冻过程可引起精子PH-20蛋白表达减少和精子PH-20阳性率降低,以及受精过程中的关键酶-HYD活性减弱。     

两种冷冻保护剂对形态正常精子百分率影响

目的比较甘油和甘油-卵黄-柠檬酸钠(GYC)两种冷冻保护剂对精子形态影响.方法应用甘油和GYC两种冷冻保护剂(CPM)对精液标本进行速冻和缓慢冷冻保存,应用计算机精液分析仪进行精子形态分析.结果冷冻复温后形态正常精子百分率与冷冻前比较的形态正常精子百分率比较明显下降(P<0.001);速冻与缓慢冷冻法中两种保护剂间形态正常精子百分率比较均无显著性差异(P>0.05). 结论冷冻保存易造成形态正常精子百分率下降,两种保护剂对精子形态没有影响.     

人精子膜抗原基因PH-20 DNA疫苗质粒的构建

精子膜抗原与受精和胚胎的早期发育有密切关系,其中部分抗原能引起机体产生相应的抗体,导致免疫性不育。PH-20（posterior head 20）在精子表面的特异性分布及其在受精过程中的作用,使其作为免疫避孕候选疫苗一直受到人们的关注。核酸疫苗在体内为真核天然表达,不需要体外表达、纯化,且具有免疫持续时间长,制备、携带方便,廉价等优点。PH-20是一种多功能蛋白,     

冷冻保存对人类精子膜完整性的影响

本文建立“低渗肿胀－伊红”（ＨＯＳ－ＥＹ）结合试验探讨冷冻保存人类精子头部和毛部膜完整性的影响，ＨＯＳ－ＥＹ试验按照精子尾部肿胀与否和头部着色与否区分为４种膜类型。冷冻保存后，头膜－尾膜均完整的Ⅳ型精了率和头膜－尾膜的均损伤的Ｉ型精子率分别显著减少和增多（ｎ＝５０，Ｐ〈０．００１），表明冷冻－解冻过程对精子膜完整性有严重影响，头膜损伤－尾膜完整的Ⅲ型精子率在冷冻组显著增多，提示精子头部或尾部的冷东     

冷冻保存对人类精子顶体完整性及超微结构的影响

目的探讨冷冻保存对人类精子顶体完整性及超微结构的影响.方法 2 0例正常生育力精液标本(A组)和27例不育症精液标本(B组)行冷冻保存.应用荧光标记豌豆凝集素法检测冷冻前、后精子顶体完整率.采用透射电镜观察冷冻精子头部超微结构的改变 (n=3).结果解冻后A和B组的顶体完整率与冷冻前的比较均有显著性下降(P<0.01) ,且B组的降低程度明显大于A组.透射电镜观察到冷冻精子头部超微结构发生不同程度的损伤,浆膜和顶体膜出现肿胀、破损,顶体结构异常改变显著增多,顶体内容物丢失,甚至顶体帽缺失.结论冷冻-解冻过程对精子顶体造成了损伤,引起顶体完整率降低和超微结构改变.     

有机磷农药对精子凋亡的影响

目的:探讨有机磷农药接触对精子凋亡的影响。方法:抽样调查45例有机磷农药接触男性作为阳性组和25例非接触者作为对照组,应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的TUNEL法检测精子凋亡,光学显微镜和透射电镜观察凋亡精子的形态结构改变。结果:阳性组精子凋亡率为34.57%±11.32%,对照组精子凋亡率为8.96%±1.29%,阳性组精子凋亡率显著增高,凋亡精子出现形态的异常。结论:长期接触有机磷农药导致精子凋亡率增加,从而导致男性生育力下降。     

人精子膜蛋白P34H表达与透明质酸酶活性的关系

目的探讨人精子膜蛋白P34H表达和顶体内透明质酸酶活性的关系。方法收集88例精液标本,其中正常生育组20例,不育男性68例。参照世界卫生组织(WHO)标准对标本进行精液常规分析,根据精液参数的不同,将68例不育标本分为正常精液参数不育组和精液参数异常不育组。Western blotting检测P34H蛋白在人精子中的表达,免疫荧光观察P34H蛋白在精子表面的阳性表达率,采用改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测精子顶体内透明质酸酶(HYD)活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)。结果正常精液参数不育组和精液参数异常不育组的精子P34H/β-actin平均吸光度、精子P34H标记阳性率均明显低于正常生育组,经统计学分析差异均有显著性(P0.05);正常精液参数不育组和精液参数异常不育组的HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)与正常生育组比较均有显著下降(P0.05)。相关性分析提示,精子P34H蛋白表达量与HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)存在正相关性,相关系数r=0.449、0.431,P0.01;精子P34H阳性率与HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)存在正相关性,相关系数r=0.727、0.691,P0.01。结论男性不育患者精子P34H蛋白表达减少,精子P34H阳性率降低以及HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)减弱。     

双氢青蒿素对人胰腺癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素对人胰腺癌细胞(PANC-1)增殖活性及凋亡的影响,及其作用机制。方法30、60、120、240和480μmol/L双氢青蒿素作用PANC-1 48 h后,采用MTT法检测双氢青蒿素对PANC-1增殖活性的影响,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡的变化,Western blotting检测细胞内周期相关蛋白cyclin B1、Cdk1、p21及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9和细胞色素C(Cyto C)蛋白表达变化。结果 MTT实验结果表明,30~480μmol/L双氢青蒿素对PANC-1增殖活性具有明显的抑制作用(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,双氢青蒿素可以使PANC-1细胞周期阻滞于G2/M期,并诱发PANC-1细胞发生凋亡,且随药物浓度呈现升高趋势(P<0.05)。Western blotting结果显示,双氢青蒿素作用后周期相关蛋白Cdk1和Cyclin B1蛋白表达降低,而P21蛋白表达升高。凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。结论双氢青蒿素能抑制PANC-1增殖并诱发细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关。     

姜黄素对大鼠胸主动脉瘤Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中Bcl-2和Bax表达的影响。方法 将30只成年雄性Wistar大鼠随机分为3组,即对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组。采用氯化钙（CaCl2）诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材。HE染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改变;免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁Bcl-2和Bax的表达。结果 姜黄素可明显抑制胸主动脉的扩张。与对照组比较,动脉瘤组Bax表达水平明显升高,Bcl-2表达水平降低,姜黄素能有效降低动脉瘤中Bax的表达,升高Bcl-2表达水平。 结论 姜黄素可以促进胸主动脉瘤Bc1-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2的比值。     

低温冷冻对人精子顶体超微结构的影响

目的评价低温冷冻及不同冷冻方法对人精子顶体超微结构的影响。方法将人的精子分别用速冻法及缓冻法冷冻1年：在冷冻前后分别用电镜观察精子顶体的超微结构，比较冷冻前后及不同冷冻方法间顶体超微结构的变化。结果顶体超微结构相对正常（异常）的精子在冷冻后显著减少（增加）；速冻法与缓冻法相比，顶体超微结构相对正常（异常）的精子减少（增加）更显著。结论低温冷冻将对人精子顶体的超微结构造成损害；缓冻法对人精子顶体超微结构的损害较轻。     

低温冷冻对精子膜功能的影响

目的评价低温冷冻对精子膜功能的影响,为冻精的临床利用提供理论指导。方法用精子尾部低渗肿胀试验(hypoosmotic swelling test,HOST),比较冷冻前后及不同冷冻方法间精子尾部的低渗肿胀率,以评估低温冷冻对精子膜功能的影响。结果精尾低渗肿胀率在冷冻前为63．9±10．4％,经速冻法冷冻后为17．3±8．3％,经缓冻法冷冻后为 27．7±11．4％,任意二者间比较结果均有显著差异(P<0．01)。结论低温冷冻破坏了精子膜的功能完整性;降温速度越快,精子膜的功能完整性下降越显著。在冷冻前后进行精子尾部低渗肿胀试验,具有重要的临床意义。     

吸烟对男性不育患者精子DNA完整性及精子形态的影响分析

目的探讨吸烟对男性不育患者精子DNA完整性及精子形态的影响。方法 132例男性不育患者根据烟龄分为2组:A组烟龄1～5年;B组烟龄大于5年。正常对照组为100例非吸烟已生育健康男性。对其进行精子DNA完整性检测及精子形态学分析。结果 A组精子DNA碎片指数(DFI)和精子畸形率与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05),而B组精子DNA碎片指数和精子畸形率与正常对照组比较差异有非常显著性(P<0.01)。结论长期吸烟可能会损伤男性精子DNA及影响精子形态,是引起男性不育的原因之一。     

喜树碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制

目的 测定不同浓度的喜树碱（CPT）对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的影响,并探讨其促凋亡的机制。方法 人宫颈癌细胞系HeLa细胞,加入不同浓度的CPT（100 nmol/L~10 μmol/L）,继续培养24 h。MTT方法检测细胞增殖,并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,细胞核染色法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleave-Caspase-3、细胞色素C（Cyt-C）,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达。结果 MTT实验及细胞形态学结果显示,CPT对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,并可导致细胞形态改变,且具有剂量依赖性,其IC₅₀为2.45 μmol/L;细胞凋亡检测表明,不同浓度的CPT可导致凋亡小体出现,并可使早期凋亡比例增加。Western blotting法检测结果显示,不同浓度CPT可使HeLa细胞Bcl-2蛋白表达降低,而Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表达,胞质Cyt-C,89 kD 5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）蛋白表达增加且呈剂量依赖性。结论 CPT可以诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制可能为激活线粒体依赖途径,并活化作用底物PARP而实现。     

乙二醇、丙二醇对冻融人卵巢卵泡凋亡的影响

目的:比较乙二醇和丙二醇对人卵巢组织中卵泡的凋亡及凋亡相关基因P53及Bcl-2表达的影响,为人卵巢组织的最佳冷冻保护剂的选择提供实验依据。方法：获取12例活检人卵巢组织每例标本分为3组：新鲜对照组、乙二醇（EG）组和丙二醇（PROH）组,冻融卵巢皮质块采用慢速冷冻法和快速解冻法,冻融后的卵巢皮质组织采用TUNEL实验检测卵泡凋亡,免疫组化法检测凋亡相关蛋白P53及Bcl-2表达变化。结果：新鲜对照组、PROH组、EG组的卵泡凋亡率分别为14.58%、23.08%、30.43%,EG组卵泡凋亡率与新鲜对照组相比差异显著（P<0.05）,但3组卵母细胞凋亡率之间差异无显著（P>0.05）。3组P53阳性卵泡率分别为13.48%、25.00%、33.93%,EG组卵泡凋亡率与新鲜对照组相比差异显著（P<0.05）,卵泡凋亡率与P53阳性率表达正相关（r=0.7791,P<0.01）。3组Bcl-2阳性卵泡率分别为5.29%、 3.65% 、 2.41%,其差异无显著（P>0.05）,凋亡与Bcl-2表达无相关性（P>0.05）。结论:结果提示对人卵巢组织进行冻存PROH优于EG;冻融过程对颗粒细胞的凋亡有明显影响,对卵母细胞凋亡无显著影响;P53蛋白在卵巢组织冻融过程中参与凋亡的发生,但不通过Bcl-2介导的途径。     

糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的 探讨外源性糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1（HAP1）表达的影响。 方法 成年雄性Wistar大鼠80只,随机分为实验对照组（注射生理盐水）、皮质酮注射组、皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射组、饮用氢化可的松组。皮质酮注射［(5mg/(kg.12h)］组又分为注射持续1d、3d、5d、7d组;皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射［(10mg/(kg.12h)］组注射持续3d;饮用氢化可的松组大鼠饮用水中加氢化可的松（0.01g/L）,连续1个月。应用RT-PCR、免疫印迹法观察大鼠下丘脑HAP1表达的变化。 结果 注射皮质酮1d和3d后,下丘脑HAP1表达明显减少,其mRNA的表达明显下调,5d后HAP1开始回升,7d 后恢复到正常水平,HAP1 mRNA表达5d后明显增加,并高于正常水平;长期(一个月)饮用氢化可的松的大鼠,其下丘脑中HAP1的表达明显减少;在皮质酮注射的同时注射RU38486,可以对抗由皮质酮注射所引起的下丘脑HAP1的变化。 结论 外源性过量糖皮质激素能影响下丘脑HAP1的表达,下丘脑中的HAP1可能参与下丘脑神经元或神经内分泌细胞的功能活动。