诃子水提物对肺癌A549细胞中p53表达的影响

目的:探讨诃子水提物对人肺癌A549细胞增殖的影响及p53在此过程中的作用。方法:以不同浓度的诃子水提物干预人肺癌A549细胞为实验组,未经干预的为空白对照组。采用MTT法检测10、1、0.1、0.01μg/ml诃子水提物分别作用24、48、72 h A549细胞后的增殖抑制率;Real-time PCR法检测p53在不同浓度诃子水提物作用前后的相对表达量的变化;免疫细胞荧光法检测p53蛋白的表达。结果:MTT法检测结果显示,增加水提物浓度,抑制率随之上升;PCR法检测显示,实验组较对照组p53的mRNA表达量上调;免疫细胞荧光法检测显示,实验组较对照组p53蛋白表达增多,并与水提物浓度成正比。结论:诃子水提物能诱导A549细胞凋亡,可能与p53基因被激活有关。     

紫苏醇对肺癌A549 细胞增殖和侵袭的抑制作用机制的研究

目的:探讨紫苏醇(Perillyl alcohol,PA)对肺癌A549 细胞增殖和侵袭的抑制作用机制,并阐明其对肿瘤血管生成信号的影响。方法:不同浓度PA 和厄洛替尼加入到A549 细胞中,利用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定药物组对A549 细胞的抑制作用,Transwell 法检测PA 对A549 细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;分光光度法检测PA 对细胞凋亡蛋白Caspase-3 活性的影响,Western blot 法检测A549 中VEGF、HIF-1 及COX-2 的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验测定A549 细胞中NF-κB 活性。结果:与空白对照组比较,随着浓度的增加(10、50、100 g/ ml),PA 和厄洛替尼对A549 细胞生长的抑制率在不断地增加,差异均有统计学意义(P<0.05),A549 细胞侵袭能力呈现不断下降的趋势,差异均有统计学意义(P<0.05),A549 细胞内活性氧水平随厄洛替尼浓度的增加变化不大,而ROS 水平随着PA 的浓度的增加而增加,在100 g/ ml 浓度的PA 下引起的ROS 百分率达到了(80.43±6.92)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞活力检测结果显示,随着PA 和厄洛替尼浓度的增加和作用时间的延长,A549 细胞中凋亡蛋白Caspase-3 活性明显增加(P<0.05),随着紫苏醇浓度的增加,COX-2、VEGF 和HIF-1 的表达呈不断降低的趋势,EMSA 检测结果显示,随着PA 浓度的增加,NF-κB 的条带面积不断减少。结论:PA 可能参与并促进了ROS 的生成和Caspase-3 活性增加,最终诱导A549 细胞的凋亡,PA 可能通过降低NF-κB 的表达,进而诱导COX-2、VEGF 等的表达减少,使血管生成滞后,能够有效地使细胞的穿透能力下降和凋亡发生。     

川陈皮素对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用

目的:观察川陈皮素(5,6,7,8,3′4′-hexamethoxyflavone)对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用并研究其作用机制。方法:以不同浓度的川陈皮素作用于A549细胞,分别用MTT法、细胞生长曲线研究川陈皮素对A549的增殖抑制作用,Giemsa染色观察细胞形态变化。结果:MTT提示川陈皮素浓度为4mg·L-1~128mg·L-1时,对A549的48、72小时抑制率为15%~85%,48小时IC50为25.7mg·L-1,72小时IC50为16.7mg·L-1;生长曲线提示川陈皮素对A549细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;Giemsa染色后细胞出现明显的凋亡形态学变化。结论:川陈皮素对非小细胞肺癌A549细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是诱导细胞凋亡。     

miR-221通过下调PTEN促进肺癌A549细胞增殖

目的:探讨微小RNA-221(miR-221)对肺癌A549细胞增殖的影响及其相关作用机制。方法:通过脂质体转染试剂Lipofectamine 2000把miR-221 mimics转染入肺癌细胞A549内,RT-q PCR检测miR-221和PTEN mRNA的表达;Western blot检测PTEN蛋白表达;CCK-8及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。构建含PTEN 3'-UTR的萤光素酶报告载体,检验miR-221对PTEN的靶向调控作用。结果:转染miR-221后肺癌细胞中miR-221表达水平明显高于对照组及空白组(P0.01),PTEN mRNA及蛋白表达均显著下降(P0.05);细胞增殖及集落形成能力明显增强(P0.05);miR-221能抑制PTEN的萤光素酶活性。结论:miR-221能够抑制肺癌A549细胞中PTEN的表达,并促进细胞增殖。     

熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制

目的 探讨熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制.方法 体外培养A549细胞,分别以0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L熊果酸处理48h后,平板克隆实验与MTT实验检测肺癌A549细胞的增殖能力;流式细胞术检测肺癌A549细胞的凋亡率;Transwell实验检测A549...     

刚地弓形虫培养上清抑制肺癌A549细胞系增殖

目的研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)培养上清对体外培养的肺癌细胞A549增殖及细胞周期的影响。方法取对数生长期的A549细胞(浓度为5×104mL-1)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(4×107mL-1、8×107mL-1、16×107mL-1)弓形虫速殖子培养上清孵育不同时间后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490值);PI染色后检测细胞周期;以Western blot检测细胞周期蛋白cyclinB1、cdc2表达或活性。结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制A549细胞系增殖,处理组细胞周期在G2/M期产生阻滞;A549细胞系的cyclinB1、cdc2蛋白表达量下降。结论刚地弓形虫培养上清能够抑制肺癌A549细胞系增殖,并通过调节cyclinB1、cdc2等蛋白表达或活性改变引起肺癌A549细胞系G2/M期阻滞。     

nm23-HI基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法：构建nm23-HI基因的真核表达载体。转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中，通过G418筛选出稳定表达克隆，RT—PCR及免疫组化检测nm23-HI在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-HI基因对细胞生长的影响，流式细胞仪检测细胞周期，原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果：转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-HI基因，抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-HI基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少，停滞于G0期。转染nm23-HI基因后细胞边缘的伪足减少。结论：nm23-HI基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖，可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。     

LHRH-PE40对非小细胞肺癌细胞A549的作用

目的研究促黄体激素释放激素(LHRH)基因与绿脓杆菌外毒素A(PE40)基因重组蛋白(LHRH-PE40)对非小细胞肺癌细胞A549的毒性作用。方法从用扫描电镜观察LHRH-PE40对A549细胞产生的细胞毒性作用,用流式细胞仪检测LHRH-PE40对A549细胞周期的影响。结果扫描电镜观察可见LHRH-PE40对A549细胞产生的毒性作用使A549细胞表面凸凹不平,流式细胞仪检测发现LHRH-PE40使A549细胞出现明显的凋亡。结论 LHRH-PE40可以诱导A549细胞凋亡。     

川楝子醇提物通过线粒体途径诱导白血病CEM细胞的凋亡

背景:苦寒中药川楝子具有小毒,对生长环境要求不高,在实体瘤中能显著抑制肿瘤细胞的增殖,但在血液肿瘤中报道较少,基于前期研究结果,并结合中医"以毒攻毒"理论探讨其主要成分川楝素抗急性淋巴细胞白血病的作用机制.目的:探究川楝子醇提物抑制白血病CEM细胞增殖的作用机制.方法:人急性T淋巴细胞白血病CEM细胞培养至对数生长期,...     

二氢杨梅素对肺癌A549细胞凋亡的作用

目的 探讨二氢杨梅素（DMY）对肺癌A549细胞的诱导凋亡作用。方法 以肺癌A549细胞为研究对象,采用MTT法研究DMY对A549细胞的抗肿瘤作用,并进一步通过流式细胞术检测DMY对A549细胞的凋亡作用,免疫印迹法（Western blotting）检测促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2表达水平,进一步探讨其机制。
结果 DMY浓度越大,对A549细胞的抑制作用越明显,48h的IC50为64.45g/L;流式细胞术显示,随着DMY浓度的增加A549细胞凋亡也逐渐增加;Western blotting结果显示,DMY可诱导A549细胞中凋亡因子Bax蛋白表达增加,同时抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达减少,尤其高浓度组改变明显。
结论 DMY可以在体外诱导A549细胞凋亡。     

雷公藤甲素对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的抑制和凋亡的诱导

目的探讨雷公藤甲素(TP)通过调控趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对人非小细胞肺癌(A549)细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为4组:对照组、TP组(100 nm/L TP处理细胞)、CXCR4+TP组(转染质粒及TP处理细胞)和NC+TP组(转染空载质粒及TP处理细胞)。RT-qPCR和Western blot检测CXCR4表达以及转染效果;MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot检测增殖及凋亡相关蛋白表达。结果雷公藤甲素能够抑制A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。雷公藤甲素可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P<0. 05)。转染pc DNA-CXCR4能够上调CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。上调CXCR4的表达能够部分逆转雷公藤甲素对A549细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用(P<0. 05)。结论雷公藤甲素可能通过下调CXCR4的表达抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

siRNA沉默TEM8基因对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨RNA干扰靶向抑制TEM8基因的表达对人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞增殖和侵袭能力的的影响。方法采用RT-PCR检测TEM8在5对NSCLC与癌旁正常组织中的表达;采用化学合成针对TEM8基因的小干扰RNA(TEM8 siRNA)下调A549细胞中该基因的表达,应用RT-PCR和Western blot法检测转染后细胞内TEM8的表达,通过Transwell侵袭实验检测TEM8对A549细胞侵袭能力的影响;CCK8实验及平板克隆形成实验检测TEM8对A549细胞增殖能力的影响。结果与癌旁正常肺组织相比,TEM8在NSCLC组织中显著高表达(P0.05),转染TEM8特异性siRNA后,A549细胞的增殖和侵袭能力均受显著抑制。结论 TEM8在NSCLC中呈过表达,干扰TEM8表达可明显抑制NSCLC的增殖与侵袭能力,推测TEM8可能成为治疗NSCLC的新靶点。     

微小RNA-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA (miRNA)-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法 培养A549细胞,分为miRNA-622组和miRNA-622阴性对照组 (NC组),分别转染miRNA-622模拟物及miRNA-622阴性对照。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miRNA-622组和NC组miRNA-622的表达水平,采用噻唑蓝实验检测两组细胞增殖能力,采用流式细胞学技术检测两组细胞凋亡率。结果 miRNA-622组和NC组细胞中miRNA-622的相对表达水平分别为0.993±0.058、0.631±0.053,OD值分别为0.631±0.049、0.922±0.058,细胞凋亡率分别为12.230%±0.176%、7.400%±0.208 %,miRNA-622组miRNA-622的相对表达水平和细胞凋亡率均高于NC组,而OD值低于NC组,差异均有统计学意义(t=23.650、17.710、3.822,P值均<0.01)。结论 miRNA-622可抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡。     

PGRN基因沉默对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:分别用q PCR和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的m RNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将PGRNsi RNA转染A549细胞,采用q PCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:PGRN在A549细胞中的m RNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P0.05);转染PGRN-si RNA后A549细胞中PGRN的m RNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P0.05)。沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

尼古丁抑制穿孔素/颗粒酶B诱导的A549肺癌细胞凋亡

目的: 首次探讨尼古丁对穿孔素/颗粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的A549肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制。 方法: 以人肺癌细胞株A549为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞术定量检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及存活素(survivin)mRNA的表达量。结果: (1)不同浓度尼古丁单独作用A549细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长(P< 0.01),其抑制率与作用时间和剂量呈正相关。(2)0.125 mg/L perforin作用于A549细胞(1×10⁶个)时,PI染核率可达到90%以上。而当加入1 μL granzyme B(1 mg/L)孵育6 h时,perforin/granzyme B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象。(3)6 μmol/L尼古丁作用于perforin/granzyme B预处理的细胞6 h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP和survivin mRNA的含量时,发现尼古丁组表达量较高,perforin/granzyme B组表达量明显降低,而当尼古丁联合perforin/granzyme B时表达量最高。结论: 尼古丁可明显抑制perforin/granzyme B诱导的A549肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP和survivin的表达上调有关。     

过表达miR-10b促进肺癌细胞系A549增殖

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌及癌旁组织中miR-10b(miR-10b)表达水平及miR-10b是否通过调控锌指转录蛋白基因(KLF4)对肺癌细胞系A549恶性化的影响。方法 40例NSCLC患者病理切片,原位杂交检测肺癌及癌旁组织中miR-10b的表达量;对肺癌细胞系A549转染miR-10b mimics后,CCK-8法检测肺癌细胞增殖;real-time PCR及Western blot检测KLF4 mRNA及蛋白水平;软琼脂克隆形成实验检测过表达miR-10b对A549细胞的肿瘤恶性化程度的影响。结果肺癌细胞A549及肺癌组织中miR-10b的表达量分别高于正常肺上皮细胞16HBE及癌旁组织;过表达miR-10b模拟物的A549细胞中,KLF4蛋白水平显著下降(P0.05);过表达的miR-10b可显著增加A549细胞的增殖速度及在软琼脂内的成瘤性。结论 miR-10b在不同类型细胞及组织中具有分布差异性、可能是通过抑制KLF4的表达促进肺癌细胞增殖及恶性化。     

胡桃醌通过降低AKT活性抑制肺癌A549细胞增殖

目的 探讨肽酰脯氨酰顺反异构酶(PIN1)抑制剂胡桃醌(Juglone)对肺癌A549细胞增殖的影响及分子机制.方法 用胡桃醌(0、6.25、12.5、25和50μmol/L)处理A549细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,real-time PCR检测PIN1、AKT mRNA表达,Western blot检测PIN1、AKT及AKT-pS473蛋白表达.结果 胡桃醌能浓度依赖性抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G2/M期和S期.与对照组相比,各处理组PIN1 mRNA水平随着胡桃醌浓度增加而降低(P＜0.05).不同浓度胡桃醌处理组PIN1蛋白表达为1.032±0.056、0.892±0.024、0.596±0.023和0.396±0.021,均显著低于对照组的1.280±0.046(P ＜0.05);AKT-pS473蛋白表达为0.554±0.023、0.464±0.018、0.362±0.015和0.228±0.020,均显著低于对照组的0.626±0.015(P ＜0.05);48 h处理组PIN1及AKT-pS473蛋白表达分别为0.575±0.036和0.338±0.014,显著低于24h的0.764±0.032和0.436 ±0.023(P ＜0.05).结论 PIN1抑制剂胡桃醌可以抑制肺癌A549细胞的增殖,其机制可能是通过降低AKT-pS473活性来实现的.