下调microRNA-181b在小鼠缺血性脑损伤中的神经保护作用

目的:探讨microRNA-181b(miR-181b)在缺血性小鼠脑损伤病理过程中的神经保护作用。方法:应用N2A细胞氧-糖剥夺(OGD)模型模拟神经细胞缺血损伤;应用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型模拟缺血性脑损伤(成功率约60%),原位细胞凋亡检测试剂盒检测N2A细胞损伤程度,蛋白印迹检测miR-181b靶蛋白自噬蛋白5(Atg5)及caspase-9的变化情况,萤光素酶报告基因技术检测miR-181b对Atg5 mRNA的直接调控作用。结果:在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的凋亡(P0.05);miR-181b表达水平的改变可显著影响Atg5蛋白表达水平(P0.05);共转染miR-181b前体或miR-181b抑制剂可显著抑制或增高含有Atg5 mRNA 3’-UTR的萤光素酶报告基因的活性(P0.05);MCAO后活化caspase-9的表达显著升高,而miR-181b拮抗剂可使MCAO后剪切的caspase-9表达明显减少(P0.05)。结论:下调miR-181b可能通过调节Atg5的蛋白表达在缺血性小鼠脑损伤中发挥神经保护作用。     

miRNA-181b在氧-糖剥夺致N2A细胞缺血损伤中的作用及对热休克蛋白A5表达的调节

目的 探讨miR-181b在氧糖剥夺(OGD)致N2As神经瘤细胞缺血损伤中的作用,及其对热休克蛋白（HSP）A5表达的调节。方法 应用N2A细胞OGD模型模拟神经细胞缺血损伤,MTT比色法检测N2A细胞生存率,免疫印迹法检测HSPA5蛋白表达水平,实时定量PCR法检测miR-181b和HSPA5 mRNA表达水平,荧光素酶报告基因技术检测miR-181b对HSPA5 mRNA的直接调控作用。 结果 miR-181b在OGD致N2A细胞缺血损伤中表达水平明显降低(n=5);在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的生存率(n=6);而在非OGD条件下,miR-181b表达水平的改变对N2A细胞活力无影响;miR-181b表达水平的改变可显著影响HSPA5蛋白表达水平(n=3),而非HSPA5的mRNA水平;共转染miR181b前体（pre-miR-181b）或miR-181b抑制剂（anti-miR-181b）可显著抑制或增高含有HSPA5 mRNA 3’-UTR的荧光素酶报告基因的活性(n=5)。 结论 miR-181b通过负性调节HSPA5的蛋白表达水平,在OGD致N2A神经细胞缺血性损伤中发挥重要作用。     

吗啡预处理减轻脑中动脉阻塞所致小鼠缺血性脑损伤

目的探讨吗啡预处理(MP)对小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)所致缺血性脑损伤的影响及其可能机制。方法复制小鼠MCAO模型,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、神经行为学评分和Western blot等,观察小鼠行为学变化、脑梗死面积、脑水肿率,以及sham组左侧皮质组织,MCAO组和MP组脑梗死核心区、半影区及对侧皮质组织热休克蛋白70(Hsp70)蛋白表达量。结果 MCAO组小鼠脑梗死面积为31.69%±4.19%,脑水肿率为8.98%±1.79%,MP可明显降低MCAO所致的脑梗死面积及水肿率,分别为23.34%±4.85%和4.60%±0.86%(P<0.05),同时明显改善小鼠神经行为缺陷评分(P<0.05)。MCAO组皮质梗死核心区、半影区及对侧皮质Hsp70蛋白表达水平高于sham组(P<0.05),MP组半影区Hsp70蛋白表达水平较MCAO组进一步显著升高(P<0.05)。结论吗啡预处理降低小鼠脑中动脉阻塞所致缺血性脑损伤,半影区Hsp70蛋白水平的高表达可能参与了这种保护作用。     

P38 MAPK磷酸化水平增高参与HPC降低MCAO所致小鼠缺血性脑损伤

目的 探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化和蛋白表达水平在低氧预适应(HPC)降低脑中动脉阻塞(MCAO)所致缺血性脑损伤中的变化情况。方法 利用已建小鼠HPC-MCAO模型,将健康雄性BALB/c小鼠随机分为常氧假手术(H0 Sham)、HPC假手术(H4 Sham)、常氧缺血(H0)和HPC缺血(H4)4组,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、Nissl染色等方法观察脑损伤情况,应用Western blot并结合Gel Doc凝胶成像系统,定量检测小鼠脑组织内p38 MAPK磷酸化和蛋白表达水平的变化。结果 HPC可明显减小MCAO所致的脑梗死体积(P<0.05),与H0 sham相比,缺血组小鼠皮层缺血核心区和半影区p38 MAPK磷酸化水平显著升高(P<0.05, n=6),HPC可进一步增加缺血半影区和对侧皮层组织中p38 MAPK磷酸化水平(P<0.05, n=6)。各组间p38MAPK蛋白表达量水平无明显变化。结论 p38 MAPK可能参与了HPC降低MCAO所致小鼠缺血性脑损伤的作用。     

miR-17-5p调控PTEN对大鼠中动脉阻塞的神经保护作用研究

目的探究microRNA-17-5p(miR-17-5p)在中动脉阻塞(MCAO)中的神经保护作用及其可能机制。方法将60只清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)、MCAO+mimic组、MCAO+inhibitor组和MCAO+BPV组,每组12只。采用线栓法建立MCAO大鼠模型。建模24 h后,检测大鼠神经功能和脑组织含水量;HE染色观察大鼠脑组织病理学损伤;TUNEL染色检测大鼠脑组织神经元细胞凋亡情况;RT-PCR检测miR-17-5p和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)的mRNA表达水平,预测两者是否存在连续的结合位点;Western blot检测脑组织通路蛋白磷酸化水平。结果MCAO+mimic组和MCAO+BPV组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、PTEN的mRNA和蛋白表达水平均低于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05);MCAO+mimic组和MCAO+BPV组脑组织病理学损伤明显改善,miR-17-5p和PTEN存在连续结合位点,而这2组的miR-17-5p表达水平、AKT和mTOR磷酸化水平高于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05);MCAO+inhibitor组神经功能评分、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、PTEN的mRNA和蛋白表达水平高于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05);MCAO+inhibitor组脑组织病理学损伤加重,同时AKT和mTOR磷酸化水平低于MCAO组。结论miR-17-5p表达上调对MCAO大鼠神经具有保护作用,其功能发挥可能与介导调控PTEN信号通路相关。     

比较热休克蛋白A5和3-甲基腺嘌呤和介导小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:比较研究热休克蛋白A5(HSPA5)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)介导小鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤性自噬的保护作用。方法:成年雄性BALB/c小鼠30只,分为6组:sham组、缺血再灌注组(I/R组)、vehicle+I/R组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+I/R组、scramble siRNA+I/R组和HSPA5 siRNA+I/R组,每组5只。采用大脑中动脉阻塞(MCAO)60 min后再灌注24 h制作小鼠I/R模型。Vehicle+I/R组和3-MA+I/R将5μl 0.9%Na Cl或3-MA(30 mg/ml)在MCAO前30 min侧脑室注射;scramble siRNA+I/R group组和HSPA5 siRNA+I/R组将5μl scramble siRNA或HSPA5 siRNA(2μg/μl)在MCAO前24 h侧脑室注射。通过小鼠I/R后神经功能评分确定运动功能障碍程度。小鼠神经细胞内自噬体形成用透射电子显微镜测定,再灌注24 h缺血大脑皮层(LC3)-II/LC3-I表达用Western Blot方法检测。小鼠I/R后缺血大脑神经细胞损伤用Nissl染色进行观察。结果:HSPA5和3-MA可以影响I/R小鼠行为学改变并使脑缺血性损伤和神经症状加重(P0.05)。透射电子显微镜检测可见,sham组小鼠大脑皮层神经细胞形态正常,I/R组小鼠缺血大脑皮层神经元胞质中细胞器减少,形成自噬体。与sham组小鼠比较,I/R组小鼠缺血大脑皮层LC3-II蛋白表达水平显著增高(P0.05);3-MA+I/R或HSPA5 siRNA+I/R小鼠缺血大脑皮层LC3-II蛋白表达水平明显低于I/R小鼠(P0.05)。结论:HSPA5和3-MA在介导小鼠脑缺血再灌注损伤导致的自噬可发挥相同的保护作用,并且促进神经细胞凋亡。     

低氧预适应减轻脑中动脉阻塞所致小鼠缺血性脑损伤

目的 探讨低氧预适应(HPC)对脑中动脉阻塞(MCAO)所致脑缺血性损伤的影响及其可能机制.方法 借助已建小鼠整体HPC和脑MCAO模型,应用2,3,5-氯化二苯基四氮唑(TTC)染色、神经行为学评分、SDS-PAGE和Western blot等技术方法 ,观察脑梗死面积、水肿率、行为学,以及脑梗死核心和半影区新奇型蛋白激酶C(nPKC)膜转位的变化.结果 MCAO可诱发小鼠脑皮层、海马和丘脑(由于发生率很低,数据未统计)等3种典型缺血模式;在皮层缺血模式中,HPC明显减小脑梗死面积(P<0.05,n=12)、缺血区吸光度值(P<0.05,n=12)和水肿率(P<0.05,n=12);而在海马缺血模式上,HPC只明显降低海马梗死区吸光度值(P<0.05,n=12);HPC可在一定程度上缓解MCAO小鼠的行为学改变;此外,HPC 可缓解MCAO所致皮层缺血半影区nPKC膜转位水平的降低.结论 HPC降低MCAO所致脑缺血性损伤,且nPKC可能参与了这种保护作用.     

MSK-1和CREB参与低氧预适应降低小鼠缺血性脑损伤

目的 探讨丝裂原和应激激活蛋白激酶1(MSK-1)及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在低氧预适应(HPC)保护小鼠缺血脑组织中的作用.方法 将健康成年雄性BALB/c小鼠随机分为4组:常氧假手术组(NS)、HPC假手术组(HS)、常氧缺血组(NI)和HPC缺血组(HI).利用已建整体HPC和大脑中动脉阻塞(MCAO)小鼠模型,并结合神经行为学评价、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和蛋白印迹(Western blot)等技术,观察HPC对小鼠脑缺血损伤的影响,检测小鼠脑皮层不同缺血区域内MSK-1和CREB磷酸化水平和蛋白表达量的变化.结果 HPC可明显改善小鼠脑缺血后神经行为学表现,减小MCAO致脑缺血皮层梗死体积和水肿率;MCAO致小鼠脑局部皮层缺血后,其缺血核心区内MSK-1和CREB磷酸化水平明显下降(P<0.05);HPC可明显增加缺血半影区内MSK-1和CREB磷酸化水平(P<0.05),而MSK-1和CREB总蛋白表达量在缺血核心区和半影区内均无明显改变.结论 HPC可能通过提高缺血半影区内MSK-1及其底物CREB的磷酸化水平来降低小鼠缺血性脑损伤.     

蛋白激酶CβⅡ和γ参与低氧预适应降低脑中动脉阻塞所致鼠脑缺血性损伤

目的 探讨低氧预适应(HPC)对脑中动脉梗塞(MCAO)小鼠脑的保护作用,以及缺血皮层内经典型蛋白激酶C(cPKC) II和 膜转位水平的改变。方法 健康雄性BALB/c小鼠(18～22g,8～10周)随机分为：H0假手术(n=6), H0缺血(n=6),H4假手术(n=6)和H4缺血(n=6)组。运用整体低氧预适应模型和脑中动脉梗塞缺血模型,结合2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)等分子生物学技术,观察脑梗死面积、缺血区密度值和水肿率,以及MCAO小鼠缺血皮层组织内PKC II和 膜转位水平的变化。 结果 研究发现,HPC可明显减小MCAO导致的鼠脑梗死面积(P<0.05),降低缺血区吸光度值(P<0.05)和水肿率(P<0.05);与H0假手术组相比,缺血组小鼠皮层半影区cPKC II和 膜转位水平显著降低 (p<0.05);与H0缺血组小鼠皮层半影区相比,H4缺血组小鼠皮层半影区内PKC II和 膜转位水平明显增高 (p<0.05)。结论 HPC可能通过增加MCAO小鼠皮层组织内cPKC II和 的膜转位水平,对缺血损伤起保护作用。     

miR-181b在动脉粥样硬化血管中的表达及对H2O2诱导的血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨miR-181b在动脉粥样硬化血管中的表达及miR-181b对H2O2诱导的血管内皮细胞增殖与凋亡的影响.方法 qPCR法检测动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞中miR-181b的表达情况;酶联免疫法检测miR-181b对鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-10含量的影响;克隆形成实验检测miR-181b对H2O2诱导的血管内皮细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-181b对H2O2诱导的血管内皮细胞凋亡能力的影响;qPCR和Western blot法检测miR-181b对主动脉和H2o2诱导的血管内皮细胞中Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响.结果 miR-181b在动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞表达水平显著下调,血清中TNF-α、IL-6含量均增加,IL-10含量减少;过表达miR-181b使小鼠血清中TNF-α、IL-6含量均减少(P＜0.05),IL-10含量增加(P＜0.05).与对照组比较,H2O2诱导的血管内皮细胞的增殖能力显著下降,凋亡能力显著提高,miR-181b过表达使血管内皮细胞增殖能力提高,凋亡能力下降;与对照组比较,动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞中Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平均上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下调,miR-181b过表达使动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞中Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平均下调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05).结论 miR-181b在动脉粥样硬化血管和H2O2诱导的血管内皮细胞中低表达,过表达miR-181b抑制细胞凋亡及促进细胞的增殖,可能在动脉粥样硬化的治疗中起到积极作用.     

海马注射miR-181c对CCI模型大鼠热痛的影响

目的:观察大鼠海马CA1区注射miR-18Ic激动剂/抑制剂对坐骨神经缩窄性损伤(CCI)大鼠热痛及海马炎症因子和转录因子表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机分为6组,分别是假手术组(Sham)、CCI模型组(CCI)、CCI+miR-181c激动剂阴性对照组、CCI+miR-181c抑制剂阴性对照组、CCI+miR-181c激动剂组和CCI+miR-I8le抑制剂组。在术前1 d,术后第1、3、5、7 d测定热缩足潜伏期(TWL)。连续7 d给药后取海马,real time RT-PCR、ELISA及Western Blot检测TLR4、炎症因子(TNF-α和IL-1β)和转录因子(CTCF和Nrt2)表达。结果:与Sham组相比,CCI组大鼠TWL缩短(P<0.05),海马miR-18Ic表达下降(P<0.05),TLR4.TNF-a和IL-1βmRNA表达上调(P<0.05),IL-1β和TNF-α含量增多(P<0.05);与CCI组相比,注射miR-181c激动剂后CCI大鼠TWL延长(P<0.05),海马miR-181c表达上调(P<0.05),而TLR4、TNF-α和IL-IβmRNA表达下降(P<0.05),IL-1β和TNF-c含量下降(P<0.05);注射miR-181c抑制剂则TWL降低(P<0.05),CCI大鼠海马miR-18lc表达进一步下降(P<0.05),TLR4、TNF-α和IL-IβmRNA表达进一步上升(P<0.05),IL-1β和TNF-α含量上升(P<0.05)。与Sham组相比,CCI组海马CTCF表达下降,Nrf2在胞核表达上升(P<0.05)。结论:海马注射miR-181c激动剂减轻CCI大鼠热痛敏可能是由于miR-181e下调TLR4和TNF-α表达导致。CCI大鼠海马miR-181e表达下调可能与CTCF低表达有关。     

经典型蛋白激酶Cγ对突触蛋白-Ⅰ磷酸化调节及其在脑缺血损伤中的作用

目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(c PKCγ)对突触蛋白-Ⅰ磷酸化水平的影响及其在小鼠原代脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中作用。方法借助c PKCγ基因敲除(c PKCγ~(-/-))小鼠,利用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)在体缺血模型和原代脑皮层神经元OGD离体细胞缺血模型,采用免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印迹和免疫荧光等生物化学技术,验证c PKCγ与突触蛋白-Ⅰ的相互作用,探讨c PKCγ对突触蛋白-Ⅰ磷酸化水平的调节及小鼠原代脑皮层神经元OGD损伤后对神经元形态的影响。结果免疫共沉淀结果证明,正常及缺血小鼠脑皮层组织中c PKCγ与突触蛋白-Ⅰ均存在相互作用;对突触蛋白-Ⅰ5个可能的丝氨酸磷酸化位点进行筛选发现,只有Ser549和Ser553位点的磷酸化水平在OGD和c PKCγ敲除前后有明显变化;进一步统计分析得出,野生型(c PKCγ~(+/+))小鼠原代脑皮层神经元中,OGD处理使突触蛋白-ⅠSer549和Ser553位点的磷酸化水平显著降低(每组n=5,与野生型常氧组相比P0.05),c PKCγ基因敲除可显著降低上述两个位点的磷酸化水平(每组n=5,与野生型常氧组相比P0.05),而OGD处理后降低趋势更明显(每组n=5,与野生型OGD组相比P0.05);除此之外,OGD处理可使c PKCγ~(+/+)和c PKCγ~(-/-)脑皮层神经元突起的长度和数目均显著降低(每组n=8,与野生型常氧组相比,P0.05),c PKCγ~(-/-)组降低现象更加显著(每组n=8,与野生型OGD组相比,P0.05)。结论缺血/低氧损伤情况下,c PKCγ可能通过调节突触蛋白-ⅠSer549和Ser553磷酸化水平影响神经元突起的形态,从而保护神经元免受缺血/低氧损伤。     

miR-150-5p抑制TLR-5/NF-κB p65信号通路对大脑中动脉阻塞模型大鼠的神经保护效应

文题释义： 缺血性脑梗死：临床常见的一种中枢神经系统疾病,是由于脑组织局部供血动脉血流的减少或停止,造成脑组织缺血、缺氧导致脑组织坏死,具有较高的死亡率和致残率,严重威胁人类的健康和生存质量。 微小RNA：是一类长度为18-25 nt的非编码单链小分子RNA,广泛存在于从病毒到人类的各种生物中,能够与mRNA互补结合调控蛋白编码基因的表达,与细胞的生物学行为密切相关。 背景：缺血性脑梗死的病变组织中发生炎症反应,且miR-150-5p表达明显下降,miR-150-5p是否经Toll样受体5/核因子κB途径抑制炎症因子释放并减轻缺血性脑梗死组织损伤尚不清楚。 目的：探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在大鼠缺血性脑梗死中的作用及初步机制。 方法：①构建大脑中动脉阻塞模型大鼠,建模后将大鼠分为5组：对照组、miR-150-5p agomir 组、agomir control、miR-150-5p antagomir组和antagomir control组;②对照组大鼠给予生理盐水脑室注射,后4组大鼠脑室分别给予miR150-5p agomir(miR150-5p激动剂)、agomir阴性对照、miR150-5p antagomir (miR150-5p抑制剂)和antagomir阴性对照;③干预7 d后进行神经功能缺损程度(mNNS)评分,磁共振检测法测量脑梗死体积,苏木精-伊红染色观察脑组织病理学变化,qRT-qPCR法、ELISA法和免疫印迹法检测分别检测脑组织中miR-150-5p、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体5和核因子κB p65表达情况,通过检索生物信息学网站Targetscan预测miR-150-5p与Toll样受体5的结合位点,荧光素酶试验验证二者的靶向关系。 结果与结论：①与对照组比较,miR-150-5p agomir组大鼠神经功能损伤评分、脑组织中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平及Toll样受体5、核因子κB p65蛋白表达明显降低(P < 0.05);miR-150-5p antagomir组生理评分及生化指标均明显升高(P < 0.05);②苏木精-伊红染色显示,对照组神经细胞排列紊乱、轮廓模糊不清,神经细胞明显变性坏死;上述病理变化在miR-150-5p agomir组明显减轻,而在miR-150-5p antagomir组中明显加重。而agomir control 组和antagomir control组与对照组各指标比较差异均无显著差异(P > 0.05);③TargerScan网站预测结果和荧光素酶报告基因分析显示,miR-150-5p与Toll样受体5存在靶向结合位点;④结果证实,miR-150-5p可抑制缺血所致脑损伤过程中Toll样受体5/核因子κB p65炎性信号通路,降低炎性反应,从而减轻神经功能损害,发挥保护作用。 ORCID: 0000-0003-4635-0842(谢媛媛) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

脂肪来源的干细胞移植对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡及Bcl-2、caspase-12表达的影响

目的:探讨脂肪来源的干细胞(ADSCs)移植对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的影响及其机制研究。方法:72只清洁级成年雄性Sprague-Darley大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(Vehicle组)和ADSC治疗组(ADSC组),每组18只,采用改良Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,ADSC组于造模成功1d后经侧脑室注射入30μL的ADSC细胞悬液(内含1×106个细胞),分别于术后4d、7d和14d采用TUNEL法检测缺血区神经细胞凋亡,用免疫组织化学法和RT-PCR法检测脑组织Bcl-2、caspase-12表达的变化。结果:大鼠脑缺血后缺血周边区可见大量细胞凋亡,ADSC组较MCAO组和Vehicle组细胞凋亡明显减少(P<0.05);ADSC组术后4d、7d和14d脑组织中Bcl-2的表达水平较MCAO组和Vehicle组明显增高(P<0.05),而caspase-12的表达水平较MCAO组和Vehicle组明显降低(P<0.05)。结论:ADSCs移植减少脑缺血大鼠缺血区细胞凋亡,其机制可能与促进Bcl-2的表达和抑制caspase-12的表达有关。     

五味子醇甲通过调控自噬流减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的:探究五味子醇甲(Sch A)减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及其潜在机制.方法:成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组[大脑中动脉闭塞(MCAO)组]及Sch A低、中、高剂量治疗组,每组6只.制备大鼠左侧MCAO模型,90 min后再灌注,治疗组Sch A的剂量分别为40、80和160μg·kg?...     

脑衰蛋白反应调节蛋白-2参与低氧预适应减轻小鼠脑缺血损伤

目的 研究参与低氧预适应(HPC)的经典型蛋白激酶C II(cPKC II)相互作用的脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP-2) 对缺血脑是否有保护作用。方法 成年雄性BALB/c小鼠随机分为常氧(Nor)、HPC、常氧假手术(Nor+sham)、HPC假手术(HPC+sham)、常氧缺血(Nor+I)和HPC缺血(HPC+I)等6组(每组n=6)。应用小鼠整体HPC和脑中动脉梗死(MCAO)致脑局部缺血模型,结合免疫沉淀、双向凝胶电泳和质谱等技术,分离和鉴定与cPKC II相互作用蛋白;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)技术,分析CRMP-2磷酸化和蛋白降解水平在脑HPC和缺血中的变化。结果 与Nor组比,HPC鼠脑皮层组织内有10种与cPKC? II相互作用蛋白的表达发生了明显变化,其中CRMP-2在膜相关蛋白组分中的表达量升高,而在胞质蛋白组分中的表达量降低。在脑缺血模型中,与Nor+Sham组相比,Nor+I组小鼠脑皮层缺血核心区(Ic)CRMP-2磷酸化水平明显降低(p<0.05, n=6);与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层Ic区内CRMP-2磷酸化水平明显增高(p<0.05, n=6)。脑缺血可导致CRMP-2发生水解并伴随着大量55-ku水解片段(BDP)的出现,但与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层缺血半影区(P)内CRMP-2水解片段减少,水解率明显降低(p<0.05, n=6)。结论 CRMP-2参与了 HPC缓解小鼠脑缺血Ic区内CRMP-2磷酸化水平的降低和减少P区内CRMP-2水解片段从而减轻缺血脑组织的损伤。     

肢体缺血后适应对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及机制

目的:建立小鼠脑缺血后进行短暂肢体缺血提高脑缺血耐受模型,确定肢体缺血后适应对脑缺血时程的影响及热休克蛋白70(HSP70)的作用,探讨肢体缺血后适应(LIPostC)对脑缺血/再灌注损伤抑制作用和机制。方法:复制小鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),第1批实验将小鼠分为9组:假手术组、脑缺血/再灌注组(缺血时间分别0.5 h、1 h、1.5 h、2 h组),脑缺血/再灌注+短暂肢体缺血(LIPostC)组(0.5 h+LIPostC、1 h+LIPostC、1.5 h+LIPostC、2 h+LIPostC组)。分别观察小鼠运动行为变化;TTC染色测量脑梗死体积;HE染色观察脑组织损伤程度;TUNEL法检测神经元凋亡程度。第2批实验将小鼠随机分为4组:假手术组、脑缺血/再灌注组、MCAO+LIPostC组和MCAO+LIPostC+quercetin组(缺血时间为2 h)。术后24 h用Western blotting法检测脑皮质中HSP70蛋白表达和神经功能评分。结果:脑缺血时程影响小鼠运动行为和脑损伤程度,随脑缺血时间延长,小鼠的脑再灌注损伤程度加重,其行为缺陷和脑病理变化明显;缺血2 h组脑损伤程度比缺血1.5 h组和缺血1 h组严重(P0.05)。脑缺血后不同时间施加LIPostC显示不同程度的神经保护作用。LIPostC各组与相对应的I/R组比较,其脑再灌注损伤程度呈现不同程度减轻,行为学评分降低、脑梗死体积减小,脑皮质损伤减轻,TUNEL阳性凋亡细胞数目减少。脑缺血2 h再灌注损伤较重,但LIPostC仍具有明显的脑保护作用。以2 h脑缺血小鼠为模型进行机制研究,结果表明,LIPostC可提高缺血脑组织HSP70蛋白表达,改善神经功能,HSP70抑制剂quercetin可削弱LIPostC的这种脑保护作用。结论:LIPostC可抑制MCAO小鼠的脑缺血再灌注损伤,促进缺血脑区HSP70表达和改善神经功能。HSP70在LIPostC提高MCAO小鼠的脑缺血耐受机制中发挥重要作用。