环氧化酶选择性抑制剂NS-398对Hela细胞线粒体膜电位改变及诱导凋亡作用研究

目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398诱导宫颈癌细胞凋亡的作用机制.方法 用不同浓度NS-398作用于人宫颈癌Hela细胞,CCK-8法检测NS-398对宫颈癌细胞增殖的影响,应用罗丹明（Rhodanmine） 123染色检测癌细胞线粒体膜电位改变;琼脂糖凝胶电泳检测DNA 降解梯度（ladder）.结果 NS-398对Hela细胞的增殖具有明显抑制作用;其抑制率随药物浓度的增高、药物作用时间的延长而显著增高.NS-398作用24 h可以使线粒体膜电位显著降低且与NS-398浓度密切相关;作用48 h可以诱导Hela细胞发生凋亡.结论 NS-398对宫颈癌Hela细胞生长具有显著的抑制作用.其可能通过线粒体途径诱导癌细胞凋亡.     

白藜芦醇对TGF-β1诱导的足细胞凋亡及骨架分子损害的干预作用

目的:探讨白藜芦醇对肾足细胞凋亡和骨架蛋白异常的干预作用。方法:体外分化条件下培养小鼠足细胞10d,用转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)诱导作为研究模型,白藜芦醇干预,肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor hepatocyte,HGF)作为对照。流式细胞术检测足细胞线粒体膜电位以及Vimentin、Nestin等蛋白表达,采用western-blotting技术检测骨架蛋白α-actinin-4蛋白表达。用蛋白滤过试验检测单层足细胞的蛋白滤过功能。结果:TGF-β1可诱导足细胞线粒体膜电位显著降低,骨架蛋白Vimentin、α-actinin-4等表达水平显著下调,而Nestin表达显著增高。白藜芦醇干预可增高足细胞线粒体膜电位以及Vimentin、α-actinin-4等表达,对Nestin表达则差异无统计学意义;HGF对线粒体膜电位、Vimentin、α-actinin-4等差异无统计学意义,但可显著降低Nestin表达;白藜芦醇和HGF干预均可显著降低透过单层足细胞的蛋白滤过量。结论:白藜芦醇抑制TGF-β1诱导的足细胞骨架系统蛋白表达异常和细胞凋亡的作用,可能是其维持足细胞滤过屏障完整性的机制之一,HGF对足细胞损害的干预作用与白藜芦醇不同,机制尚不明确。     

平阳霉素诱导人血管瘤内皮细胞凋亡过程中PARP-1和Cyt-C的表达及意义

目的:探讨平阳霉素诱导人血管瘤内皮细胞凋亡过程中PARP-1、Cyt-C的表达及可能机制。方法:在体外培养人血管瘤内皮细胞,设立两组:A组为平阳霉素组,其中加入平阳霉素(200μg/ml),诱导血管瘤内皮细胞凋亡,B组为空白对照组。对两组血管瘤内皮细胞通过倒置显微镜、电镜观察其形态学变化,采用流式细胞仪检测平阳霉素诱导血管瘤内皮细胞的凋亡率。利用基因芯片技术筛选出差异表达的基因,从中选定PARP-1及Cyt-C表达基因,对其进行RT-PCR验证。结果:平阳霉素(200μg/ml)可以诱导体外培养的人血管瘤内皮细胞凋亡,加药24h后,在倒置显微镜和电镜下观察到明显的细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测凋亡率可达13.11%。空白对照组血管瘤内皮细胞倒置显微镜下观察无明显形态学变化,流式细胞仪检测凋亡率为3.56%。利用基因芯片技术筛选出两组差异基因4752个,其中2543个上调,2209个下调。应用DAVI D软件对鉴定出来的差异基因进行生物信息学分析,从中选出与线粒体凋亡途径直接相关的蛋白表达基因:PARP-1、Cyt-C。对其进行RT-PCR检测得到的CT值显示:平阳霉素药物组相对于空白组PARP-1及Cyt-C蛋白基因呈高表达状态。结论:平阳霉素在体外可以通过多种途径诱导血管瘤内皮细胞发生凋亡,其中PARP-1及Cyt-C参与了线粒体途径调控的凋亡。     

骨形成蛋白2诱导肝癌细胞凋亡及其机制

目的观察骨形成蛋白2（BMP-2）诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制。方法以ELISA法检测BMP-2诱导HepG2细胞凋亡，并以Westernblot法检测BMP-2处理后Bcl-2和Fas抗原的表达变化。结果1～100ng／mL浓度BMP-2均对HepG2细胞有诱导凋亡的作用，并能下调Bcl-2的表达量，同时增加Fas抗原的表达。结论BMP-2可诱导HepG2肝癌细胞凋亡，其机制可能是通过Fas介导的途径。     

中药制剂PC-SPESⅡ对前列腺癌激素非依赖型细胞株PC-3诱导凋亡的作用

目的:探讨中草药混合制剂PC-SPESⅡ诱导雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测细胞增殖在用药后的改变,荧光显微镜观察凋亡细胞,FCM测定用药前后细胞凋亡,Western印迹方法分析细胞凋亡相关蛋白表达在用药组(加入PC-SPESⅡ药液)和对照组(加入等体积70%乙醇)之间的改变。结果:PC-SPESⅡ可以促使PC-3发生凋亡或死亡。通过荧光显微镜观察发现用药组细胞出现明显的凋亡,FCM用药组出现凋亡峰,凋亡细胞数为(29.8±5.6)%,而对照组为(0.06±0.014)%(P<0.01)。用药组线粒体抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL与对照组相比表达降低,而促凋亡蛋白Bax表达升高(P<0.01),下游caspase-3裂解后的活性片段在用药组表达明显升高(P<0.01)。结论:PC-SPESⅡ具有促进PC-3细胞凋亡的作用。通过线粒体途径激活caspase-3发挥作用可能是其诱导凋亡发生的机制之一。     

吉西他滨治疗骨肉瘤研究进展

体外研究及动物试验证实吉西他滨具有良好的抗骨肉瘤作用.吉西他滨抗骨肉瘤作用主要通过抑制增殖和诱导凋亡的细胞毒性作用完成,抑制增殖的机制主要是抑制细胞有丝分裂间期DNA的合成及修复,使细胞增殖停滞;诱导凋亡的机制可能与死亡受体Fas介导的死亡受体途径及与凋亡抑制基因Bcl-2家族相关的线粒体途径有关.相关研究显示吉西他滨单药治疗肉瘤(包括骨肉瘤)的作用不甚理想,可能是由于肉瘤对吉西他滨耐药,耐药机制可能与细胞核因子-κB/丝(苏)氨酸蛋白激酶Akt途径有关;吉西他滨与其他化疗药物联合应用可产生显著效果.临床试验证实吉西他滨具有骨肉瘤放疗增敏作用,与放疗药物联合应用产生中等姑息治疗作用,为骨肉瘤放疗提供了理论依据.吉西他滨治疗骨肉瘤具有良好的临床应用前景.     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡机制的研究

探讨阿霉素诱导HCC-9204细胞凋亡的作用机制,及其与凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的关系。方法用TUNEL法和流式细胞仪观察和检测阿霉素对HCC-9204细胞增殖周期的影响以及细胞凋亡,并检测HCC-9204细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果阿霉素能够显著诱导HCC-9204细胞凋亡,染色显示有典型的凋亡特征。在药物处理24h后流式细胞仪检测出显著的“亚二倍体峰”。阿霉素作用HCC-9204细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);而Bax蛋白的表达虽有所增加,但与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论阿霉素能诱导癌细胞凋亡,是其发挥抗癌作用的重要机制之一,这可能与其下调Bcl-2基因表达有关。     

羧甲基壳聚糖通过抑制线粒体途径保护氧化损伤诱导雪旺细胞凋亡

[目的]探讨线粒体途径在羧甲基壳聚糖(carboxymethylated chitosan,CMCS)保护过氧化氢(H_2O_2)诱导雪旺细胞(Schwann cells,SCs)凋亡中的作用及机制。[方法]体外培养SCs,S-100免疫荧光染色鉴定。将SCs分为空白对照组、H_2O_2诱导组、H_2O_2加CMCS处理组。流式细胞仪检测细胞凋亡比率,罗丹明(Rhodamine123)荧光染色检测细胞线粒体膜电位水平,Western blot检测SCs内细胞色素C(Cytochrome C)表达水平。[结果]本实验培养细胞经S-100荧光染色鉴定阳性率达95%以上,H_2O_2诱导SCs凋亡,降低线粒体膜电位,增加细胞色素C释放;而在加入CMCS后SCs凋亡比例降低,线粒体膜电位增加,细胞色素C释放减少。[结论]CMCS通过抑制线粒体细胞凋亡途径保护H_2O_2诱导SCs凋亡。     

尼美舒利对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

我们通过噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术、逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）等方法，观察体外尼美舒利对人胰腺癌细胞株PANC-1的作用，并探讨其可能的作用机制，为临床开辟新的抗癌途径提供依据。[第一段]     

野菊花提取物对人肝癌MHCC97H细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察中药野菊花提取物(chrysanthemum indicum extact,CIE)对人肝癌MHCC97H 细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养人肝癌MHCC97H细胞,以0.4、0.8、1.2 mg/ml的CIE(实验1、2、3组)作用于MHCC97H细胞,并设立空白对照组.分别于药物作用24、48、72 h时,应用MTT法检测细胞增殖情况.于药物作用24 h时,用AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡、Rhol23检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化;Western blot检测细胞色素C、Caspase-9、-3的蛋白表达.结果 三种浓度的CIE对MHCC97H细胞的增殖均有明显的抑制作用,且呈明显的时间和浓度依赖性.与对照组相比,各实验组MHCC97H细胞的凋亡率明显增高(P＜0.05),线粒体膜电位水平明显降低(P＜0.05),细胞色素C、Caspase-9和-3的蛋白表达显著增强(P＜0.05),以上各项均呈明显的量效关系.结论 野菊花提取物对肝癌MHCC97H的增殖具有抑制作用,这可能与药物诱导肝癌细胞凋亡有关.线粒体途径可能是CIE诱导MHCC97H细胞凋亡的主要机制之一.     

多沙唑嗪诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的实验研究

目的探讨多沙唑嗪(doxazosin)对雄激素非依赖性人前列腺癌PC-3细胞株增殖与凋亡的影响及其机制。方法用MTT法测定不同浓度多沙唑嗪对PC-3细胞生长抑制情况,用荧光显微镜、流式细胞仪观察多沙唑嗪对细胞凋亡的诱导作用,Western-Blot检测caspase-3,caspase-8,caspase-9、FADD和Bid、Bax、Bcl-2的表达水平。流式细胞仪检测不同时段Caspase-9抑制剂对细胞凋亡率的影响。结果多沙唑嗪可显著抑制PC-3细胞的体外生长,其25,50,100μmol/L浓度组的A值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。PC-3细胞中FADD、caspase-3,-9,-8和Bid、Bax表达显著增加,Bcl-2无明显变化。PC-3细胞凋亡可显著被caspase-9抑制剂抑制。结论多沙唑嗪能诱导PC-3细胞凋亡,其作用可能通过死亡信号途径激活caspase-8,同时Bid,Bax表达上调,引发线粒体途径激活caspase-9和caspase-3而实现的。     

线粒体损伤机制与肾脏及腹膜纤维化研究进展

<正>线粒体是诸多真核细胞中重要的细胞器,在生化过程中起到关键作用。当有害因素刺激线粒体,会出现细胞功能损伤,导致组织纤维化及器官功能障碍：新冠病毒中的原始毒株可能通过线粒体损伤导致免疫代谢受损,其攻击肾脏细胞引起急性肾损伤最终导致肾脏纤维化;肾衰竭患者腹膜透析导致TGF-β表达增加,诱导和加速腹膜纤维化。部分药物可减轻线粒体损伤,维持其功能以延缓组织纤维化,因此进一步探究干预线粒体损伤以延缓纤维化的途径尤为重要。     

钛颗粒诱导破骨细胞分化过程中活化T细胞核因子c1的表达

目的探讨钙调磷酸酶（CN）／活化T细胞核因子（NFAT）途经在磨损颗粒诱导破骨细胞分化调节中的作用。方法MTT法检测11R—VIVIT肽和钛（Ti）颗粒对小鼠骨髓单核／巨噬细胞系细胞（BMMs）活力的影响;RT—PCR法分析Ti颗粒诱导破骨细胞分化过程中NFATcl mRNA表达,并观察1R—VIVIT肽对Ti颗粒诱导NFATcl表达的影响;TRAP染色进行破骨细胞分化鉴定。结果11R—VIVIT肽和Ti颗粒均不影响体外培养中的BMMs活力;Ti颗粒显著刺激破骨细胞分化（P〈0.01）和NFATcl mRNA表达;应用11R—VIVIT肽阻断CN／NFAT途径可显著抑制Ti颗粒诱导的NFATcl表达。结论Ti颗粒刺激BMMs向破骨细胞分化;其作用机制可能与激活CN／NFAT途径有关。     

人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡诱导作用

[目的]探讨人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡诱导作用及其具体作用机制。[方法]MG-63细胞分为空白对照组和CK药物处理组。采用MTT法检测细胞活性及增殖能力,倒置显微镜下观察细胞凋亡形态。细胞凋亡形态检测、Hoechst细胞核染色及Annexin V/PI细胞凋亡实验检测药物CK对细胞的诱导凋亡作用;Western blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-9、Bcl-2及BAX的表达,研究其具体凋亡机制。[结果]CK能够显著降低MG-63的体外活性及生存率(P<0.05);细胞凋亡形态检测、Hoechst细胞核染色及Annexin V/PI细胞凋亡实验证明CK可诱导MG-63凋亡(P<0.05);CK处理后MG-63细胞表达的Caspase-9及BAX表达上调,相反Bcl-2表达下调(P<0.05)。[结论]人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63具有凋亡诱导作用,而以Caspase-9为关键因素的线粒体凋亡途径在此凋亡中起着决定性作用。     

高温预处理对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞线粒体金属硫蛋白表达的影响

目的 探讨高温预处理对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠心肌细胞线粒体金属硫蛋白(MT)表达的影响.方法 采用随机数字表法,将体外培养的H9C2大鼠心肌细胞分为3组(n=6):正常对照组(C组)心肌细胞加入含血清DMEM培养基,置于37℃5％CO2培养箱中3 h;H2O2组加入含0.5mmol/L H2O2的无血清DMEM培养基,置于37℃5％CO2培养箱中孵育3h;高温预处理组(HTP组)加入含血清DMEM培养基,置于42℃恒温水浴lh,行高温预处理,然后在37℃5％CO2细胞培养箱中孵育12 h,去除DMEM培养基,随后处理同H2O2组.采用流式细胞术测定心肌细胞凋亡率;观察心肌细胞线粒体超微结构;采用Western blot法测定线粒体MT的表达.结果 与C组比较,H2O2组和HTP组细胞凋率升高,线粒体MT表达上调(P＜0.01);与H2O2组比较,HTP组细胞凋率降低,线粒体MT表达上调(P＜0.01).HTP组心肌细胞线粒体损伤较H2 O2组减轻.结论 高温预处理减轻H2O2诱导大鼠心肌细胞损伤的机制可能与上调线粒体MT表达,增强心肌内源性保护机制有关.     

三氧化二砷与阿霉素对人肝癌细胞株HepG2中survivin表达的影响

目的探讨三氧化二砷与阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的可能机制。方法用不同浓度的As2O3或／和ADM干预人肝癌细胞株HepG2不同时间，以免疫细胞化学和RT—PCR方法检测HepG2细胞中survivin表达的改变。结果(1)未加药物干预之前，HepG2细胞中可见survivin强烈表达；(2)不同浓度的As2O3或ADM均可降低HepG2细胞survivin表达程度，并且随药物浓度的增加或作用时相的延长，降低程度更明显；浓度与时相之间存在交互作用；(3)ADM降低HepG2细胞survivin表达的作用比As2O3更明显，两者联用后，作用进一步增强。结论(1)单用As2O3或ADM均可降低HepG2细胞中survivin表达，并呈浓度和时间依赖性；(2)相同浓度下，ADM对HepG2细胞中survivin表达的减弱作用较As2O3更强，但两者的联用较单用者能更显著降低survivin表达；(3)As2O3和ADM可能通过下调survivin表达而参与诱导癌细胞凋亡，从而发挥其抗癌作用；两者联用有叠加抗癌作用，从而可降低各自的临床使用剂量。     

微RNA-214在肾脏疾病中的研究进展

微RNA（microRNA,miR）-214是脊椎动物中特有的microRNA之一,在多种肾脏疾病的肾组织中呈现差异表达,通过促进炎性反应、参与上皮-间充质转化、诱导线粒体功能障碍、抑制细胞凋亡、促进细胞增殖等途径发挥不同的病理生理作用,与急性肾损伤及慢性肾脏病的发生发展密切相关。因此,microRNA-214可能是未...     

白藜芦醇促进膀胱癌细胞对TRAIL凋亡诱导作用的研究

目的探讨白藜芦醇对膀胱癌细胞的作用及其与TRAIL联合对膀胱癌细胞的凋亡诱导作用及其可能的机制。方法MTT法检测白藜芦醇或/和TRAIL对膀胱癌细胞5637和T24体外生长能力的影响。流式细胞术测定白藜芦醇和/或TRAIL对细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响。Western blot检测白藜芦醇对死亡受体(DR)4、5与细胞凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果 MTT证实白藜芦醇可抑制膀胱癌细胞体外生长能力,且呈剂量与时间依赖性。单独应用TRAIL未能抑制膀胱癌细胞的生长,但与白藜芦醇联合应用时可显著抑制细胞的增殖速度。白藜芦醇能够诱导膀胱癌细胞发生凋亡,而TRAIL则不能诱导细胞凋亡,但联合应用白藜芦醇和TRAIL可诱导膀胱癌细胞发生显著的凋亡。此外,在白藜芦醇或联合应用白藜芦醇与TRAIL可诱导肿瘤细胞丢失线粒体膜电位(ΔΨm),而单独应用TRAIL则未能诱导线粒体膜电位的丢失。Western blot结果表明,白藜芦醇可上调DR4和DR5的表达,并下调Bcl-2与survivin的表达。结论白藜芦醇可抑制膀胱癌5637和T24细胞增殖并诱导细胞凋亡。此外,白藜芦醇可以提高膀胱癌细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡作用。单独应用白藜芦醇或与TRAIL联合应用可能成为临床膀胱癌治疗的新策略。     

中药癌痛克对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡作用及机制研究

目的通过观察不同浓度癌痛克对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的作用，以及在相应状态下细胞内视网膜母细胞瘤（Rb）基因相对表达量的改变，探讨中药癌痛克的抗胃癌作用机制。方法以不同浓度癌痛克作用SGC-7901细胞，CCK-8检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率细胞周期，RT—PCR方法检测细胞内Bcl-2基因表达变化。结果2～50μg／ml癌痛克可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡，其抑制及诱导凋亡效应呈浓度依赖性；细胞周期分析处于G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，Rb基因mRNA表达上调。结论中药癌痛克可通过抑制SGC-7901细胞增殖或诱导其凋亡，且其机制可能通过上调Rb基因表达途径使细胞阻滞在G1期，进而诱导细胞凋亡。     

邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用及机理研究

目的：研究邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素（ODE）抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用及机理。方法：采用MTT比色法测定体外抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态学;采用激光共聚焦显微镜测定SOSP-9607细胞内Ca^2＋、Mg^2＋．pH值和线粒体膜电位（MMP）的荧光强度;免疫细胞化学技术检测细胞内Bcl-2和Bax表达。结果：ODE时间、浓度依赖性地抑制SOSP-9607细胞生长,诱导细胞凋亡具有典型的凋亡形态特征如细胞膜表面微绒毛消失、核固缩、核碎裂等;剂量依赖性地增加SOSP-9607细胞内Ca^2＋,Mg^2＋浓度而降低细胞内pH值和线粒体膜电位;使SOSP-9607细胞内Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达增加。结论：邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素在体外实验中能明显抑制骨肉瘤SOSP-9607细胞生长,其作用机制可能与改变细胞内环境稳态及Bcl-2和Bax蛋白表达而诱导细胞凋亡有关。