髓样分化蛋白2在脂多糖所致大鼠急性肺损伤中的作用

目的研究髓样分化蛋白2(MD-2)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的表达及其作用。方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为LPS组和对照组,通过支气管肺泡灌洗分离肺泡巨噬细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法分别检测MD-2 mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。将MD-2 siRNA转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383,以终浓度1μg/mL的LPS刺激细胞,采用RT-PCR和Western blot方法分别测定细胞MD-2mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液TNF-α水平。结果 LPS组大鼠肺泡巨噬细胞和肺组织标本中MD-2 mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P0.01),血清TNF-α水平明显升高(P0.01)。在LPS刺激下,NR8383细胞MD-2 mRNA和蛋白的表达显著增加(P0.01),细胞培养上清液中TNF-α水平升高(P0.01)。经MD-2 siRNA处理后,NR8383细胞在LPS刺激下MD-2mRNA和蛋白的表达未见明显增加(P0.05),细胞培养上清液中TNF-α水平未见明显升高(P0.05)。结论 MD-2在LPS所致ALI大鼠肺组织中表达显著上调,沉默肺泡巨噬细胞MD-2基因可抑制LPS刺激引起的细胞因子分泌增加,提示MD-2在LPS所致大鼠ALI中起重要作用。     

脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体表达及活性变化

目的探讨脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞24 h内,糖皮质激素受体表达及活性变化特点.方法将原代培养的大鼠肺泡巨噬细胞分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT-PCR和Western Blot在mRNA水平和蛋白质水平测定肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体;EMSA测定肺泡巨噬细胞核蛋白中糖皮质激素受体活性.结果脂多糖作用后,糖皮质激素受体mRNA表达下调,24 h恢复正常水平;糖皮质激素受体蛋白质表达降低,4 h降至最低,24 h维持在低水平表达;糖皮质激素受体活性在1 h降到最低,24 h未恢复至正常水平.地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持糖皮质激素受体活性.结论脂多糖(100 ng/ml)作用大鼠肺泡巨噬细胞后,糖皮质激素受体蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;糖皮质激素受体活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗.     

姜黄素对急性肺损伤大鼠的保护作用及分子机制研究

目的探讨血红素加氧酶（HO-1）在姜黄素减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤（ALI）中的作用。方法将大鼠随机分为5组：正常组、ALI模型、LPS＋姜黄素组、LPS＋姜黄素＋氯血红素（Hm）组以及LPS＋姜黄素＋锌原卟啉（ZnPP）组。给药后进行肺组织的形态学观察,并测定丙二醛（MDA）的含量以及HO-1的活性;RT-PCR和Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白的表达情况。结果用LPS成功复制出ALI模型,同时,肺组织中MDA含量、HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA以及蛋白水平均高于阴性对照组（P均〈0.05）;姜黄素＋LPS组、姜黄素＋LPS＋Hm组肺组织损伤程度、MDA含量低于LPS模型组,但HO-1活性、mRNA和蛋白水平高于相应LPS组（P均〈0.05）。LPS＋姜黄素＋ZnPP组肺损伤程度、MDA含量高于LPS组,而HO-1活性、mRNA和蛋白水平低于LPS组（P〈0.05）。结论姜黄素对ALI的保护作用可能通过增强HO-1活性、上调mRNA和蛋白表达水平而实现的。     

糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR2的表达及对PG反应性的研究

目的 观察糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体2(TLR2)的表达水平及其对肽聚糖(PGN)反应性的变化,探讨该变化在糖尿病机体防御病原体感染中的作用.方法 将32只Wistar雄性大鼠用随机数字表法分为正常组(A组),糖尿病组(B组),正常+ PGN组(C组)及糖尿病+ PGN 组(D组).用免疫细胞化学方法、逆转录一聚合酶链反应(RT PCR)法检测各组大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达的变化.结果 B组及C组大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达与A组相比均明显增高(P<0.05);D组大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达较B组及C组升高更为明显,糖尿病与脂多糖刺激存在交互作用(P<0.05).结论 糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达明显增高,提示糖尿病机体处于促炎症状态,而且我们发现糖尿病与肽聚糖刺激在使TLR2表达增高方面存在交互作用.     

脂多糖结合蛋白多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子的影响

目的　研究脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)多抗对内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响 ,探讨LBP多抗对LPS炎症反应减敏作用的部分机制。方法　将从 4 0只大鼠分离、培养的肺泡巨噬细胞随机分为 4组 ,A组为正常对照组 ,B组为LPS刺激组 ,C组为LBP LPS刺激组 ,D组为LBP多抗 LBP LPS组。运用RT -PCR和ELISA的方法 ,分别检测LBP多抗对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后IL - 1β ,IL - 18的mRNA表达与TNF -α分泌量的变化。 结果　B组细胞分泌的TNF -α和IL -1β,IL - 18的mRNA表达显著高于正常对照A组 ,而C组细胞显著高于B组 ,D组却低于C组。LBP多抗显著减少LPS刺激的大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子TNF -α的分泌和IL - 1β ,IL - 18mRNA表达。 结论　LBP多抗可能降低LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后炎症因子表达 ,减少炎症因子分泌 ,对LPS炎症反应起减敏作用     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

LBP多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响

目的探讨脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein, LBP)多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响,为LBP多抗治疗急性肺损伤提供实验依据.方法 Wistar 雄性大鼠40只,随机分段等分为5组,A组为正常对照组; B组为LPS处理组;C组为LPS注射前30 min加LBP多抗预处理组;D组为LPS和LBP多抗同时处理组;E组为LPS注射后30 min加LBP多抗处理组.分离培养各组大鼠肺泡巨噬细胞,用RT-PCR方法测定其IL-10、IL-18 mRNA表达.结果 LPS显著增加IL-10、IL-18 mRNA表达(B组);LBP多抗能显著降低二者的表达,尤以预处理组(C)更明显.结论 LBP多抗能显著降低内毒素急性肺损伤炎症因子的IL-10、IL-18表达.     

p38蛋白激酶在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞活化中的作用

目的探讨p38蛋白激酶在脂多糖(LPS)刺激肺泡巨噬细胞激活机制中的作用.方法分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,设正常对照组、LPS刺激组、SB203580干预组(SB203580 LPS组).分别采用免疫组织化学和原位分子杂交方法检测p38蛋白质及其mRNA的表达,用放射免疫分析法检测细胞培养上清TNF-α、IL-8的含量.结果LPS刺激肺泡巨噬细胞p38胞核染色阳性细胞百分比、胞浆p38mRNA的表达以及培养上清TNF-α、IL-8含量显著升高,分别为正常对照组的5.75倍、1.44倍、3.57倍和3.22倍;加入SB203580预处理后,上述指标均较LPS刺激组显著下降,较正常对照组稍高,但差异无显著性.肺泡巨噬细胞p38蛋白质胞核染色阳性细胞百分比及其mRNA的表达与培养上清TNF-α、IL-8含量均呈显著正相关.结论LPS刺激肺泡巨噬细胞释放炎性细胞因子可能是通过p38蛋白激酶介导的,抑制p38的活性可能成为治疗炎症反应的一条新途径.     

白藜芦醇对脂多糖诱导的巨噬细胞极化改变的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞极化表型改变的影响。方法体外培养的RAW264．7小鼠巨噬细胞在六孔板孵育12 h ,分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS（100 ng／mL）组、LPS（100 ng／mL）＋白藜芦醇（30μmol／L）组,LPS＋白藜芦醇组在加入LPS前预先加入白藜芦醇孵育12 h;上述细胞在LPS刺激12 h后分别收集细胞和培养上清液;实时定量PCR（RT‐qPCR）检测经典的炎症活化型巨噬细胞（M1）型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA表达,以及替代活化巨噬细胞（M2）型相关基因IL‐10、PPARγ和Arg‐1 mRNA表达,Western blot检测细胞iNOS、Arg‐1蛋白表达,ELISA检测培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、IL‐10和 TNF‐α的水平。结果 RT‐qPCR检测结果显示,与LPS组相比,M1型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA较LPS＋白藜芦醇组显著上升（P＜0．05）,而M2型相关基因IL‐10、PPARγ、Arg‐1 mRNA表达显著下调（P＜0．05）。Western blot检测发现,LPS组iNOS蛋白水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而Arg‐1蛋白水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。ELISA检测发现,LPS组培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、TNF‐α水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而IL‐10和水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。结论白藜芦醇可能促进了LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞向M2型极化改变。     

大鼠缺血再灌注心肌TLR4，TNF-α，NF-κB表达及其关系

目的：研究缺血再灌注大鼠心肌TLR-4,TNF-α仪和NF-κB的表达及相互关系．方法：建立大鼠缺血再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、缺血组、再灌注30min组、再灌注60min组、再灌注90min组．以RT—PCR法检测心肌中TLR4及TNF—α mRNA的表达．结果：各种心肌中均检测到TLR4的表达,缺血及再灌注后TLR-4 mRNA含量显著增加,随着再灌注时间延长,TLR-4 mRNA含量增加更为显著．缺血组与假手术组TNF—α mRNA表达无统计学差异,而再灌注后表达显著增加,随再灌注时间延长,TNF-α mRNA含量继续增加更为明显．缺血及再灌注后心肌NF—κB mRNA表达增加,随再灌注时间延长,NF—κB mRNA含量继续增加,具有统计学意义．TLR-4表达增加时TNF—α和NF-κB表达也增加,三者有一定相关性．结论：心肌缺血再灌注损伤使TLR-4,TNF—α表达增高,阻断TLR-4可能有助于减轻缺血再灌注所致心肌损伤,并抑制急性炎症反应的发生．     

心肝宝对糖尿病大鼠肾脏MCP（-1）、MIF表达的影响

目的研究糖尿病大鼠中MCP-1、MIF等细胞因子的表达以及心肝宝对糖尿病大鼠肾脏MCP-1、MIF表达的影响。方法选取雄性Wistar大鼠35只,行右肾切除术后两周,随机分成模型组和正常对照组（A组）,将糖尿病模型组大鼠随机分为糖尿病大鼠对照组（B组）和糖尿病大鼠治疗组（C组）。采用HE、PAS染色,行肾脏组织形态学分析,用Real time FQ-PCR检测MCP-1、MIF等细胞因子的mRNA表达情况。结果糖尿病组大鼠肾脏MCP-1、MIF的mRNA表达均明显升高。治疗组大鼠肾脏MCP-1、MIF的mRNA表达均有不同程度下调。结论 DN大鼠肾脏MCP-1、MIF炎症相关的细胞因子表达水平显著升高,是DN炎症相关的直接证据。DN大鼠肾脏肥大、系膜ECM沉积以及UAER增加均与肾脏MCP-1、MIF细胞因子的高表达有关。提示炎症参与了DN肾脏病理改变和肾功能损害的发生和发展。心肝宝可下调肾脏MCP-1、MIF等细胞因子mRNA的表达,从而减少ECM沉积、抑制肾脏肥大、降低尿蛋白,防止DN的发生发展。心肝宝可通过非特异性抗炎作用对DN产生保护作用并且对DN脂代谢紊乱有显著调节作用。     

银杏黄酮甙对糖尿病大鼠肾组织PAI-1、MMPs-3表达的影响

目的探讨银杏黄酮甙对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制。方法选择雄性SD大鼠48只，随机分为3组，每组16只，即正常对照组（A组），糖尿病组（B组），银杏黄酮甙治疗组（C组）。B、C组腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制模成功后，C组给予银杏黄酮甙灌胃，10周后将大鼠宰杀，用免疫组化方法观察肾脏PAI-1、MMPs-3的表达。结果与A组相比免疫组化：PAI-1第6周时B、C组均高于A组（P〈0．01，P〈0．05），持续至第10周（P〈0．01），但C组低于B组（P〈0．01）。MMPs-3第6周时B组低于A组（P〈0．05），持续至第10周（P〈0．01），C组则高于A、B组（P〈0．01）。结论STZ诱导的糖尿病大鼠PAI-1表达增强、MMPs-3表达下调。应用银杏黄酮甙治疗，可以使PAI-1的表达下调，MMPs-3的表达上调，对糖尿病大鼠肾脏有保护作用。     

胃转流术对2型糖尿病大鼠内脏脂肪组织vaspin mRNA表达的影响

目的：探讨胃转流术（gastric bypass,GBP）对2型糖尿病大鼠（T2DM）脂肪组织 vaspin mRNA 表达的影响。方法采用高脂饮食联合链脲佐菌素建立 SD T2DM 大鼠模型,随机分为 T2DM-GBP 组（A 组）和 T2DM-假手术组（B 组）,另取周龄、性别相匹配的正常 SD 大鼠,随机分为 GBP 组（C 组）和假手术组（D 组）。分别于术前及术后第4周和第8周检测大鼠的空腹血糖（FPG）水平,术后第8周处死大鼠,RT-PCR 方法检测内脏脂肪组织 vaspin mRNA 表达。结果术后A 组 FPG 水平呈进行性下降,术后第4周、第8周 FPG 水平均低于术前（P 〈0.05）,B 组、C 组、D 组内手术前及术后第4周、第8周 FPG 水平变化差异无统计学意义（P 〉0.05）。术后8周 A 组、 C 组、D 组大鼠内脏脂肪组织 vaspin mRNA 表达水平比较,差异无统计学意义（P 〉0.05）,而 C 组内脏脂肪组织 vaspin mRNA 表达水平分别高于 A 组、C 组、D 组,差异有统计学意义（P 〈0.05）。结论 GBP 手术能显著降低 T2DM 大鼠血糖,可能与术后 vaspin mRNA 表达水平降低,胰岛素敏感性改善有关。     

两种单肺通气方式对大鼠肺AQP-5表达影响的对比研究

目的研究两种单肺通气（OLV）方式下大鼠肺组织水通道蛋白-5（AQP-5）表达的变化。方法建立两种OLV大鼠模型：夹闭左侧肺门OLV组（A组）,过深插管OLV组（B组）。按不同通气时间分亚组A1、A2、A3和B1、B2、B3。设双对照组：双肺通气组（C组）,同样分亚组C1、C2、C3;空白对照（D组）。免疫印记法检测肺AQP-5的表达。结果 A、B、C组AQP-5的表达均较D组减少（P〈0.05）;各亚组左右两侧肺AQP-5的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;A、B、C组组内各亚组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;A1、B1、C1组间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;A2、B2、C2组间比较,A2比B2和C2均有减少（P〈0.05）,B2与C2差异无统计学意义（P〉0.05）;A3、B3、C3组间比较,A3和B3均较C3组减少（P〈0.05）,A3比B3减少（P〈0.05）。结论机械通气可致大鼠AQP-5表达下调,与时间相关,夹闭法OLV和插管过深法OLV对AQP-5表达的影响超过双肺通气,前者更明显。     

青藤碱对糖尿病大鼠肾脏TGF-β_1表达的影响

目的研究青藤碱对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,以探讨青藤碱对DN大鼠的治疗作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠45只随机分为3组：正常对照组（N组）、DN组（D组）及青藤碱治疗组（S组）,每组15只。S组在成模后皮下注射青藤碱20mg/（kg.d）;D组给予等量生理盐水皮下注射,共给药6周。每2周观察大鼠体质量、血糖及24h尿蛋白排泄量的变化;每组每2周随机处死3只大鼠,取血标本测肌酐（Scr）;取肾组织光镜观察病理改变,RT-PCR法检测肾组织中TGF-β1mRNA的表达。结果随着病程的延长,D组大鼠体质量增长慢、24h尿蛋白排泄量大、Scr水平高、TGF-β1mRNA表达水平高,与N组比较差异有显著性（P〈0.05）;S组大鼠体质量、24h尿蛋白排泄量及TGF-β1mRNA表达水平与D组比较明显改善,差异有显著性（P〈0.05）,Scr水平及光镜下病理改变有所好转,但差异无显著性意义（P〉0.05）。大鼠肾组织TGF-β1mRNA表达水平与24h尿蛋白排泄量及Scr水平呈正相关（r=0.892,P〈0.01;r=0.845,P〈0.01）。结论青藤碱可通过下调肾组织TGF-β1的表达水平,对DN大鼠的肾脏起保护作用。     

锌指蛋白A20对抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1、TLR-4表达的作用

目的 探讨锌指蛋白A20对氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）和toll样受体-4（TLR-4）表达的作用.方法 体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,简单随机化分成4组：A组（对照组）;B组（OX-LDL组）;C组（A20组）;D组（ox-LDL＋A20组）.收集以上各组细胞,用RT-PCR检测LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达;提取核蛋白,并用western blot的方法检测NF-κ B核易位的量.结果 ox-LDL刺激大鼠主动脉平滑肌细胞后LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达明显增加及核因子κ B（NF-κ B）的活化均明显增加.转染含A20基因质粒的平滑肌细胞TLR-4 mRNA的表达达到正常水平,LOX-1 mRNA的表达及NF-κ B的核移位的量甚至降低到正常水平以下.结论 ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA表达增加,可能由此激活TLR-4/NF-κB信号系统,启动动脉壁的炎症反应,触发动脉粥样硬化发生.A20明显抑制了ox-LDL对平滑肌细胞的上述诱导作用,可能由此阻断了ox-LDL引发的不断级联扩大的正反馈效应.阻止了动脉粥样硬化的发展.     

黄芪多糖对糖尿病大鼠神经肽Y及其Y_2受体表达的影响

目的：探讨黄芪多糖（APS）对糖尿病大鼠肾脏神经肽Y（NPY）及其Y2受体（Y2R）表达的影响。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组、糖尿病组和黄芪多糖干预组;采用放射免疫法检测血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率（UAER）、肾重/体重。结果：①APS干预能显著削弱糖尿病大鼠血糖、UAER和肾重/体重的增加;②APS干预后显著降低糖尿病大鼠血浆和肾皮质NPY水平（P〈0.01）;③APS干预组大鼠肾皮质NPYmRNA和Y2R蛋白表达显著低于糖尿病组（P〈0.05）。结论：APS对糖尿病肾病的保护作用机制可能与下调肾脏NPY及其Y2R的表达有关。     

参芍口服液对缺血再灌注心肌大鼠MMP-2、TIMP-2和心肌激酶的影响

目的观察参芍口服液对心肌缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)和心肌激酶的影响。方法选取40只SD大鼠,随机平均分为4组,即假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、参芍口服液组(C组)、瑞舒伐他汀组(D组),每组10只。C组、D组分别于术前3 d给予参芍口服液8ml/d、瑞舒伐他汀10 mg/d灌胃,A组、B组给予生理盐水。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min再灌注120 min的方法复制大鼠心肌缺血再灌注模型(假手术组不结扎)。分析各组大鼠心肌HE染色情况、MMP-2和TIMP-2的表达、心肌激酶变化。结果心肌HE染色:A组心肌结构正常,B组心肌细胞破坏最严重,C组心肌细胞破坏程度较B组和D组明显减轻。免疫组化检测:MMP-2蛋白的表达水平A组C组>D组>B组,各组间相比有统计学意义(P<0.05)。大鼠心肌酶:CK的水平A组有很少量的表达,其余各组均有大量表达(P<0.05);CK-MB、LDH的水平A组相似文献