三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选

目的 研究三叶木通表观遗传多样性,建立并优化三叶木通甲基化敏感扩增多态性（methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP）反应体系。方法 以三叶木通叶片为材料,利用正交试验建立三叶木通MSAP的预扩增和选择性扩增的最佳反应体系。结果 建立的MSAP最佳反应体系为酶切反应：HpaII/MspI 10 U,EcoR I 10 U;预扩增反应：总体积20 μL,连接产物2 μL,E00、HM00各125 ng,dNTPs 0.312 5 mmol/L,Mg^2＋ 1.875 mmol/L,Taq DNA聚合酶2 U;选择性扩增反应：总体积20 μL,稀释200倍的预扩增产物5 μL,引物E-ACT、HM-CAT各50 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg^2＋ 1.250 mmol/L,Taq DNA酶1 U。利用优化的体系,最终从MSAP的80对引物中筛选出有效引物6对。结论 建立的MSAP反应体系可用于后续三叶木通DNA甲基化的相关研究。     

巴戟天与三叶木通的鉴别

巴戟天为茜草科植物巴戟天 Morinda offici-nalis How的根。我市曾发现其伪品羊角藤、虎刺等。最近在进行药品检查时发现一种巴戟天伪品 ,经鉴别为木通科植物三叶木通 Akebia trifoliata(Thunb.) Koidz的干燥根皮 [2 ]。1　仪器及试剂日本岛津 2 4 0 1型紫外分光光度计。ZF- 型三用紫外分析仪。双槽薄层展开槽 (1 2 cm× 7cm× 1 2cm)。聚乙酰胺板 (英国产 )。乙醇 :95 %分析纯。2　生药性状2 .1　巴戟天 :根扁圆柱形[1] ,宽约 1 cm,长短不一。表面黄色或暗灰色 ,有明显纵纹及横裂纹 ,皮部断裂后露出木质部 ,皮部厚 ,质韧 ,易剥离。断面…     

三叶木通藤茎的化学成分研究

木通科木通属植物的主要化学成分为三萜皂苷，并具有显著的利尿活性。国内外学者已从该属植物的根、茎、果实和果皮中分离得到30多种皂苷类成分，但对三叶木通藤茎的化学成分尚未见报道。本实验以三叶木通的藤茎为研究对象。对其正丁醇部位的化学成分进行研究，利用各种色谱技     

三叶木通种子品质性状研究

目的探讨三叶木通种子品质对栽培用种价值的影响。方法用电子天平测定种子净度及饱满度,用水分仪测定种子含水量,通过发芽试验确定种子发芽率。结果三叶木通鲜种子的种子净度、百粒质量、千粒质量、含水量、生活力、发芽率及发芽势分别为98.7%、6.64g、66.6g、43.1%、94.5%、82.6%、52.8%;风干10、60d时,三叶木通种子含水量分别为28.5%、7.8%,发芽率分别为64.3%、14.7%。结论三叶木通种子宜在30℃下清水浸种24h,5~12℃室温下湿沙层积发芽,当种子含水量低于8%时,失去栽培用种价值。     

三叶木通可溶性蛋白及同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对三叶木通可溶性蛋白及同工酶进行初步研究.结果表明,各样品的蛋白质、同工酶酶谱有共有带,但酶带数量与活性强度有差异;POD同工酶差异明显,可作为品种鉴定的生化指标.     

三叶木通中总黄酮的提取工艺研究

目的：确定三叶木通总黄酮的最佳水浴提取工艺条件。方法：采用正交设计“3。）方法,考察乙醇浓度、提取时间、提取温度和乙醇倍量等因素对提取率的影响,用分光光度法测定含量。结果：用料液比：1：25（g／mL）的70％的乙醇,提取温度为80℃,提取时间为1h,根中黄酮的提取效率较高。总黄酮含量为6．01％;平均回收率为99．66％。结论：本方法测定结果准确,重复性好,专属性强,可为三叶木通药材质量控制提供科学的依据。     

华细辛 AFLP 反应体系的建立和优化

目的 建立优化的华细辛 Asarum sieboldii AFLP 反应体系,为华细辛遗传多样性的研究提供技术支持。方法 以华细辛叶片为材料,对基因组 DNA 提取、酶切连接、PCR 扩增等操作过程中各关键因素进行分析,筛选最适条件,建立完善的 AFLP 反应体系。结果 建立了优化的华细辛 AFLP 分析体系：在基因组 DNA 提取时,提取液中添加巯基乙醇、样品温浴时间为 30 min;Tru1Ⅰ和PstⅠ的酶切时间分别为 3 h;在扩增反应中,Mg²⁺终浓度为 1.5 mmol/L、Taq DNA 聚合酶用量为 0.2 μL。结论 本反应体系可获得良好的 AFLP 分析结果,可用于华细辛遗传多样性研究。     

314从三叶木通茎中分得新的三萜和三萜皂苷

作者从三叶木通Akebia trifoliata茎中分离、鉴定了3个新的三萜化合物(1～3)和3个新的三萜皂苷(11～13)，以及7个已知三萜(4～10)和12个已知三萜皂苷(14～25)。     

关木通与木通的鉴别

关木通曾收载于<中国药典>2000年版一部,因其毒副作用大,为保证人体用药安全,同时也为纠正历史上木通品种的混用问题,国家药品监督管理局国药监注[2003]121号文决定取消关木通的药用标准,而用<中国药典>2000年版2002年增补本中收载的木通替换关木通.     

木通、川木通与关木通的比较鉴别

1管理现状 木通是常用中药,临床应用十分广泛.在"关木通"的肾毒性未引起重视之前,药品使用单位往往以"木通"为药斗名,关木通与川木通混用.自"关木通"中所含马兜铃酸的毒性越来越明确之后,至现在SFDA已取消"关木通"的药用标准,成方制剂中所用"关木通"以"木通"替代.     

天门冬ISSR分子标记技术的建立与体系优化

目的 建立并优化天门冬ISSR-PCR反应体系和扩增程序，为探讨天门冬种质间遗传多样性提供依据。方法 采用单因子试验和正交设计法，研究Mg²⁺、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响。结果 天门冬ISSR-PCR的最佳反应体系为25 μL的反应体系中含模板DNA 40 ng、Mg²⁺ 1.25 mmol/L、dNTP 320 μmol/L、引物1.2 μmol/L、Taq DNA 聚合酶1.5 U。在此基础上，从50条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物，并通过梯度PCR试验，确定引物最佳退火温度。结论 建立的天门冬ISSR-PCR反应体系，经过17份天门冬种质检验，证明该体系稳定可靠，可用于天门冬遗传分析。     

水蛭ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的 建立并优化水蛭ISSR-PCR反应体系及扩增程序,为水蛭进行遗传多样性研究提供依据。方法 使用引物ISSR825,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg²⁺、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择。结果 在25 μL总体积中,其中包括10×PCR 缓冲液 2.5 μL、Mg²⁺ 2.0 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.8 μmol/L、Taq DNA聚合酶2.5 U、模板DNA 2.0 ng/μL,最佳退火温度为49.7 ℃。结论 所建立的最佳ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于水蛭遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析。     

三角叶黄连ISSR反应体系的建立与优化

目的 针对三角叶黄连ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系,为进一步研究三角叶黄连的种质资源遗传多样性奠定基础。方法 通过筛选引物并设定影响三角叶黄连ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测其不同反应体系的扩增效果,分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立三角叶黄连ISSR-PCR稳定可靠的反应体系。结果 建立了可用于三角叶黄连ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系：25 μL PCR反应体系中,内含10×PCR Buffer 2.5 μL,1.5 mmol/L Mg²⁺,200 μmol/L dNTP,0.3 μmol/L引物,40 ng模板,1.0 U Taq DNA聚合酶。扩增程序为94 ℃预变性5 min,然后进行35个循环：94 ℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性60 s,72 ℃延伸90 s,循环结束后72 ℃延伸7 min,4 ℃保存。结论 所建立的三角叶黄连ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好等特点,可以较好地应用于三角叶黄连的种质资源遗传多样性及居群鉴别的研究。     

金线莲ISSR反应体系的建立与优化

目的 针对金线莲ISSR反应的特点,建立一个稳定性高、重现性好,适合金线莲ISSR遗传差异分析的反应体系。方法 确立金线莲ISSR初始反应体系并对引物进行初筛;设定反应体系中各因子的不同浓度并进行PCR扩增,依据稳定性高、重现性好的原则,对该反应体系进行调整与优化,最终建立稳定可靠的ISSR反应体系。结果 首次建立了金线莲ISSR反应的最适体系（25 μL）：1×PCR buffer,2 mmol/L MgCl₂,200 μmol/L dNTP Mixture,0.2 μmol/L引物,1 U Taq酶,DNA模板约20 ng;扩增程序：94 ℃充分变性7 min,94 ℃变性30 s,52 ℃退火45 s,72 ℃延伸2 min,45个循环后,最后72 ℃延伸10 min。结论 所建立的金线莲ISSR反应体系具有稳定性高、重现性好、标记位点清晰、检测多态性能力强等特点,可以较好地应用于野生金线莲的居群差异研究及经长期组培繁殖后金线莲无菌苗的遗传变异研究。     

半夏毒针晶的致炎作用研究

目的 探讨半夏毒针晶引起的刺激性炎症的机体表现及对相关炎症介质的影响。方法 采用小鼠毛细管通透性实验、小鼠腹腔炎症实验及大鼠足跖肿胀实验,考察不同剂量半夏毒针晶的致炎效应及其量-效关系,并测定相关炎症介质的量。结果 半夏毒针晶混悬液可使小鼠腹腔毛细血管通透性增加,腹腔渗出液中炎症介质前列腺素E₂（PGE₂）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）的量增加;亦可引起大鼠足跖肿胀,并在一定剂量范围内表现为典型的量-效关系,还可使大鼠致炎足跖中炎症介质PGE₂、环氧合酶-2（COX-2）的量显著增加。结论 半夏毒针晶刺激性毒性在机体内表现为炎症反应。     

水半夏组培快繁体系的建立

目的 建立水半夏的组培快繁体系,为快速、大量生产水半夏种苗提供基础。方法 利用不同植物激素配比的培养基,以水半夏块茎为外植体进行试验。结果 愈伤培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋KT 1.0 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L可成功诱导水半夏愈伤组织;丛生芽培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋6-BA 2.0 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L诱导不定芽效果较好,增殖倍数高;生根培养基1/2 MS＋NAA 0.2 mg/L＋IBA 0.4 mg/L＋KT 0.2 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L＋AC 0.3 g/L,有利于水半夏不定根的快速形成,12～14周即可获得再生水半夏植株。培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋6-BA 1.5 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L为诱导水半夏分化一次性成苗的最佳激素配比,5～6周可形成试管苗,10周后可用于炼苗。结论 建立的水半夏组培快繁体系为水半夏优良品种的快速繁殖奠定基础,且可应用于工厂化生产水半夏种苗。     

馥芳艾纳香快繁体系的建立

目的 建立馥芳艾纳香Blumea aromatica 的快繁技术体系,为大量生产种苗提供基础。方法 利用不同激素配比的培养基,筛选出馥芳艾纳香快速繁殖的最适培养基。结果 带腋芽茎段是丛生芽诱导的最佳材料;丛生芽诱导的最适培养基为MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L NAA,诱导率为100%;最佳继代增殖培养基为MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L KT＋0.2 mg/L NAA,增殖倍数为6.83;最适的生根培养基为1/2 MS＋0.3 mg/L NAA,生根率100%,移栽成活率84.07%。最适培养条件为温度26 ℃、光照强度为2 000 lx、光照时间10 h。结论 快繁技术体系可在短时间内提供大量种苗,并为馥芳艾纳香规模化生产种苗提供技术指导。     

铁棒锤快速繁殖体系的建立

目的 建立铁棒锤高效快速繁殖体系。方法 以铁棒锤越冬芽为外植体,用不同的培养基、激素和附加物组合培养。结果 培养基MS＋2, 4-D 2.0 mg/L＋NAA 0.4 mg/L＋活性炭（AC）1.5 g/L＋聚乙烯吡咯烷酮（PVP）1 g/L有利愈伤组织的形成;培养基MS＋6-BA 2.5 mg/L＋NAA 0.2 mg/L＋AC 1.5 g/L＋PVP 1 g/L有利于成芽;培养基MS＋6-BA 3.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋2, 4-D 0.1 mg/L＋AC 1.5 g/L＋PVP 1 g/L有利芽增殖;培养基1/2 MS＋NAA 0.2 mg/L＋AC 1.5 g/L＋PVP 1.0 g/L有利于根的生成。结论 以种子发芽苗为外植体进行离体培养,可以实现铁棒锤种苗的工业化快速繁殖。