亚砷酸联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导人淋巴瘤细胞Raji凋亡的研究

本研究探索亚砷酸、硼替佐米对人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的协同诱导凋亡作用。小剂量亚砷酸、硼替佐米单用以及二者联合分别处理Raji细胞，用台盼蓝拒染法计数活细胞数和细胞生长抑制率；用流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化；以Western blot检测Caspase-3、BCL-2、BAX、JNK2、IκB-α等凋亡相关元件在蛋白水平的变化。结果表明：相比于单用亚砷酸和硼替佐米，以小剂量亚砷酸联合硼替佐米处理Raji细胞后，细胞生长受明显抑制（P〈0．01），细胞凋亡比例增加（P=0.001），但细胞周期未见明显阻滞；在蛋白水平，细胞凋亡相关元件Caspase-3、BAX和IκB-α表达增加，而BCL-2和JNK2表达量下降。结论：小剂量亚砷酸联合硼替佐米能更有效地诱导Raji细胞凋亡，并具有协同作用。该作用可能是通过抑制NF—κB和JNK2通路实现的。     

硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响

目的:研究硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞的增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响。方法:用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞增殖的作用;利用细胞形态学检查、流式细胞仪检测细胞凋亡;用RT-PCR的方法检测硼替佐米处理淋巴瘤细胞株前后SHP-2基因的mRNA表达水平。结果:硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖性。在5-100 nmol/L硼替佐米处理后,Jurkat细胞株和Raji细胞株中SHP-2 mRNA的表达水平上调。结论:硼替佐米明显抑制Jurkat细胞株和Raji细胞株增殖,诱导其凋亡,上调细胞株SHP-2 mRNA的表达水平,表明SHP-2基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞和Jurkat细胞凋亡的调控。     

CXCR4抑制剂AMD3100联合硼替佐米对人淋巴瘤细胞株Ramos增殖、凋亡的影响

目的探讨CXCR4抑制剂AMD3100、硼替佐米对人淋巴瘤细胞株Ramos协同诱导凋亡作用。方法 1检测淋巴瘤患者骨髓单个核细胞中CXCR4及核因子κB(NF-κB)表达水平;2AMD3100、硼替佐米单用以及联合用药分别处理Ramos细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖;利用流式细胞术检测细胞凋亡;Wester blot检测NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1及Caspase-3表达水平。结果 1淋巴瘤患者骨髓单个核细胞中CXCR4、NF-κB表达增高;2AMD3100、硼替佐米作用Ramos细胞后,随着药物浓度的增加,对细胞增殖的抑制作用逐渐增强、凋亡增加,两药具有协同作用(P0.05);3AMD3100、硼替佐米单药组NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl及c-IAP1表达降低,Caspase-3表达升高,联合用药组作用增强。结论 AMD3100、硼替佐米对Ramos细胞的增殖抑制、凋亡促进具有协同作用,其作用机制可能是通过抑制NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1及增强Caspase-3表达。     

三氧化二砷增强硼替佐米、地塞米松对多发性骨髓瘤细胞的作用

目的 通过观察硼替佐米单用及与三氧化二砷(As_2O_3)、地塞米松(DXM)联合应用对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3细胞增殖及凋亡的影响,探讨As_2O_3能否增强硼替佐米、DXM的抗MM作用.方法 采用MTT法检测硼替佐米单用及与As_2O_3、DXM联合应用对KM3细胞增殖的抑制作用,计算其IC_(50)值.采用细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段观察硼替佐米对KM3细胞凋亡的影响,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测硼替佐米联合As_2O_3、DXM后KM3细胞凋亡率的变化.结果 硼替佐米、As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制呈时间和浓度依赖性IC_(50)值分别为0.27、3.10、8.01 μmol/L;硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞的增殖抑制作用强于硼替佐米联合As_2_O3或DXM[(34.51±0.51)%对(25.39±0.90)%;(34.51±0.51)%对(23.80±0.78)%].0.25μmol/L硼替佐米与KM3细胞共孵育48 h后,KM3细胞出现典型的凋亡形态学改变,DNA电泳呈现梯形条带,Annexin V阳性细胞比例增高;硼替佐米联合As_2O_3、DXM组的KM3细胞凋亡率明显高于硼替佐米联合DXM组.结论 在体外,硼替佐米能够抑制KM3细胞增殖,诱导其凋亡.硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制作用显著增强;As_2O_3可增强硼替佐米、DXM对KM3细胞的诱导凋亡作用.     

硼替佐米对慢性髓系白血病急变期原代细胞耐药的逆转作用及XIAP表达的影响

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对伊马替尼耐药的慢性髓系白血病(CML)急变期原代细胞药物敏感性及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响。采用MTT法观察伊马替尼单用与联合硼替佐米对伊马替尼耐药的CML急变期原代细胞生长增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡与P170糖蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测XIAP基因表达。结果表明,伊马替尼及硼替佐米单药对单个核细胞均表现出抑制作用,且呈时间-剂量依赖;联合5、10 nmol/L硼替佐米能明显增强单个核细胞对伊马替尼的敏感性;流式细胞术检测显示硼替佐米作用后细胞凋亡明显增高,同时P170糖蛋白表达明显降低;实时荧光定量PCR检测显示,耐伊马替尼CML急变期原代细胞高表达XIAP基因,硼替佐米作用后其表达下调。结论:硼替佐米可抑制白血病原代细胞并提高其对伊马替尼的敏感性,硼替佐米可能通过抑制XIAP的表达从而增加凋亡,这为扩展硼替佐米在临床上治疗CML提供实验依据。     

酪蛋白激酶CK2抑制剂TBB增加硼替佐米诱导的结肠癌细胞系HT29细胞凋亡

目的探讨酪蛋白激酶CK2抑制剂TBB对硼替佐米诱导的结肠癌细胞凋亡的影响。方法选用人结肠癌细胞系HT29细胞,MTT法检测单独使用硼替佐米和联合四溴苯三唑(TBB,CK2抑制剂)对HT29细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测单独使用硼替佐米和联合TBB对HT29细胞凋亡的影响,Western blot方法检测硼替佐米和联合TBB处理的HT29细胞Cleaved Caspase-3的表达情况。结果 MTT结果显示硼替佐米能抑制HT29细胞增殖并呈现剂量依赖性,硼替佐米与TBB联合使用更能抑制增殖。单独使用硼替佐米能诱导细胞凋亡,两者联合的细胞凋亡效应更加明显。硼替佐米能促使Cleaved Caspase-3表达上调,两者联合使用会进一步增加Cleaved Caspase-3的表达。结论硼替佐米能诱导HT29细胞凋亡,而CK2促进了硼替佐米诱导的细胞凋亡。     

硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1诱导凋亡作用及其对Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达影响

本研究探讨蛋白酶抑制剂硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1增殖和凋亡的影响及Bcl2112、Bcl-2和Bax基因在其中的作用。用MTT比色法观察硼替佐米对SHI-1细胞的生长抑制作用，用Annexin—V标记、线粒体跨膜电位（△ψm）和DNA凝胶电泳分析细胞凋亡，用RT—PCR方法检测0、6，12和24小时Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达。结果表明，硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制SHI-1细胞生长，24小时和48小时半数抑制浓度分别为54．13nmol／L和5．45nmol／L；硼替佐米能够诱导SHI-1细胞凋亡，在6小时Annexin-V阳性细胞就开始增高并呈时间依赖性，ACm减低，形态学可见明显细胞核凝聚、固缩和碎裂，DNA凝胶电泳显示DNA片段化；RT-PCR显示，Bcl2112表达增高，Bcl-2表达减低，但Bax表达无明显改变。结论：硼替佐米抑制SHI-1细胞增殖，并可能通过上调Bcl2112基因和下调Bcl-2基因，使线粒体膜电位下降而促使SHI-1细胞发生凋亡。     

硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷诱导U937细胞凋亡的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞株的作用及机制。通过细胞计数,细胞形态学检查,流式细胞术和Western blot方法检测硼替佐米(10 nmol/L)和(或)Ara-C(50 nmol/L)处理前后U937细胞的增殖抑制和凋亡及其机制。结果显示,硼替佐米和Ara-C单药均能抑制U937细胞增殖,两药联合的抑制作用更加明显,细胞增殖抑制率在24和48 h分别达(55.00±2.81)%和(70.02±3.33)%;硼替佐米联合低浓度Ara-C能协同诱导U937细胞凋亡,促使线粒体跨膜电位下降,阳性细胞率达(38.70±1.54)%。两药联合应用还能协同诱导caspase-9,-8,-3的活化。结论:硼替佐米联合低浓度Ara-C主要通过线粒体途径、可能还通过死亡受体途径诱导U937细胞凋亡。     

Xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通过慢病毒载体PLL3.7介导的xbp-1 shRNA表达,能有效抑制H929细胞XBP-1蛋白表达,xbp-1 shRNA表达细胞的凋亡率显著高于对照组[(10.13±0.61)%vs(2.5±0.2)%,p0.05];经硼替佐米处理后,xbp-1基因功能缺陷的H929细胞的凋亡率显著高于空载体组[(45.07±1)%vs(2.73±0.25)%,p0.05]。结论:xbp-1基因沉默能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。     

硼替佐米联合5-氮杂胞苷对K562细胞凋亡和SHIP基因表达的影响

本研究旨在探讨硼替佐米联合5-氮杂胞苷对K562细胞凋亡和SHIP mRNA表达的影响.用不同浓度硼替佐米和5-氮杂胞苷处理K562细胞24 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,RTPCR法检测SHIP基因mRNA的表达.结果表明：5-20 nmol/L硼替佐米对K562细胞增殖均有一定抑制作用,并随着浓度增加抑制作用逐渐增强.硼替佐米和5-氮杂胞苷联合处理组对细胞的抑制作用比同剂量两药单用时都显著增强（P＜0.05）.硼替佐米能促使K562细胞凋亡,且随浓度增加而凋亡增多,联合处理组对细胞的凋亡作用比同剂量单药作用时显著增强（P＜0.01）.硼替佐米能下调K562细胞SHIP mRNA的表达,且随着药物浓度增加,表达逐渐降低,联合处理组与同剂量单药组相比更显著下调SHIP mRNA表达（P＜0.05）.结论：硼替佐米或5-氮杂胞可以下调K562细胞中SHIP mRNA的表达,并可能通过此机制诱导K562细胞凋亡,两药具有协同作用.     

普罗布考和氟伐他汀对由Ox—LDL诱导的人单核细胞CX3CR1表达的影响

【目的】探讨氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）是否上调人单核细胞（THP-1）趋化因子Fractalkine受体CX3CR1的表达,及普罗布考、氟伐他汀干预对这种诱导表达的影响。【方法】用不同浓度的Ox-LDL刺激THP-1细胞及用不同浓度普罗布考、氟伐他汀和吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTc）预处理细胞后再用OxLDL刺激,分别用半定量RT～PCR方法检测CX3CR1以及NF-κBp65的rnRNA的表达,Western—blot测定CX3CR1、NF-KBp65的蛋白表达。【结果】①与对照组比较,Ox-LDL呈浓度依赖性诱导CX3CR1及NF-κBp65在mRNA水平及蛋白水平的表达。②普罗布考、氟伐他汀可以押制Ox-LDL诱导的上述袁达;联合用药组与单药组比较抑制Ox-LDL诱导的上述表达有显著性差异。③PDTC干预后,再用Ox-LDL刺激,与未用PDTC干预组（只用Ox-LDL刺激）比较,细胞核NF-κBp65蛋白水平明显下调（P〈0．01）,但CX3CR1mR—NA和蛋白及NF-κBp65mRNA的表达均无明显下调（P〉0．05）。【结论】Ox-LDL通过NF_KB以外信号途径上调人单核细胞THP-1表达CX3CR1;PDTC可以抑制NF—κB的活化,但是不能抑制Ox-LDL上调人单核细胞THP-1表达CX3CR1;普罗布考和氟伐他汀可以抑制NF-κB的活化,亦能抑制氧化低密度脂蛋白上调人单核细胞THP-1表达CX3CR1,这种抑制作用与普罗布考和氟伐他汀抑制NF-κB的活化无关。     

NF-κB和PUMA与重症胰腺炎致急性肺损伤的关系以及PDTC的干预作用

目的 探讨NF-κB(核因子-κB)与PUMA(P53正向凋亡调节因子)表达在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的影响.方法 SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、SAP-ALI组、PDTC组,每组18只.各组再按6,12,24 h时间点分为三个亚组,每个亚组6只.假手术组开腹后翻动胰腺数次;SAP-ALI组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;PDTC组在SAP-ALI组的基础于术前1h给予PDTC(15 mg/kg),各组按时间点处死大鼠.观察胰腺和肺脏病理变化.Western-blot法检测肺组织NF-κB p65,PUMA表达,采用RT-PCR法测量各组bax,bcl-2和Caspase-3 mRNA,通过荧光检测试剂检测Caspase-3活性.投射电镜下观察各组肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化,TUNEL检测肺泡上皮细胞的凋亡指数.结果 成功建立了大鼠SAP-ALI模型,Western-blotting结果显示,SAP-ALI组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达在6h后增加,24 h增加最明显,NF-κB p65与PUMA显著正相关;SAP-ALI组肺组织bax mRNA和Caspase-3mRNA在6 h后增加,24 h增加最明显,bcl-2 mRNA在6 h后下降,24 h下降最明显,Caspase-3活性在24h增加最明显.PDTC组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达明显降低;bax mRNA和caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性明显降低,bcl-2 mRNA表达明显增加.假手术组肺组织各组蛋白的表达与PDTC组比无显著改变.PDTC组肺损伤病理组织学评分在术后各时间点较SAP-ALI组显著降低,PDTC组细胞凋亡指数较SAP-ALI组明显降低.SAP-ALI组24h市泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛消失.结论 NF-κB活化激活PUMA与肺泡上皮细胞凋亡有关,PDTC通过抑制NF-κB活化,下调NF-κB活化后引起的PUMA表达,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,减轻SAP-ALI.     

LHRH-PE40诱导分化胃癌细胞凋亡的研究

目的研究NF-κB mRNA和Caspase-3mRNA及其蛋白在诱导分化BGC-823细胞中的表达,探讨LHRH-PE40与胃癌细胞凋亡的关系。方法应用RT-PCR、Western blot法检测BGC-823细胞中NF-κB P65mR-NA、Caspase-3mRNA表达及其蛋白的表达情况。结果 LHRH-PE40诱导BGC-823细胞凋亡时,NF-κB mRNA和Caspase-3mRNA表达水平有所增加,NF-κB P65和Caspase-3P20活性片段也增加。结论 LHRH-PE40可以诱导胃癌细胞内NF-κB的活化;引起Caspase-3级联反应,促进细胞凋亡。     

survivin反义寡核苷酸诱导淋巴瘤细胞凋亡及对化疗药的增敏作用

目的　观察survivin反义寡核苷酸 (ASODN)对淋巴瘤细胞的增殖、凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法　人工合成survivin硫代ASODN ,通过脂质体转染淋巴瘤细胞株Raji后 ,用MTT法检测细胞毒作用 ;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡 ;RT PCR、Westernblot检测survivinmRNA及蛋白的表达。结果　①survivinASODN抑制Raji细胞增殖呈时间和剂量依赖性 ;②survivinASODN处理组Raji细胞凋亡率为 33.0 % ,正义寡核苷酸 (SODN)组为 11.5 % ,两组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;③survivinASODN处理组Raji细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降 ;④survivinASODN和Vm2 6联合处理组Raji细胞增殖受抑率为 5 6 .5 % ,显著高于单用survivinASODN组的 2 9.2 % (P <0 0 5 )和单用Vm2 6处理组的 2 6 .9% (P <0 .0 5 )。结论　survivinASODN能够抑制Raji细胞增殖、诱导凋亡 ,并能增加Raji细胞对化疗药物的敏感性 ,推测可能通过下调survivinmRNA及蛋白表达而起作用。     

LBH589或联合硼替佐米逆转髓系白血病耐药及其分子机制研究

目的 探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米逆转急性髓系白血病(AML)细胞耐药效应及其分子机制.方法 耐药AML细胞株HL-60/ADM和难治性AML原代细胞与不同浓度LBH589、硼替佐米或两者联合进行体外培养,采用MTT法检测细胞增殖活力,Hoechst33342染色和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,用阿霉素摄取率并结合细胞增殖抑制率评估逆转耐药效应.进一步检测处理前后细胞MRP1及信号通路蛋白变化.结果 LBH589、硼替佐米均能够抑制HL-60/ADM和难治性AML原代细胞增殖,诱导凋亡,其中21 nmol/LLBH589和12 nmol/L硼替佐米联合时作用最强,经Calcusyn软件分析证明两者联合具有明显的协同作用(CI值分别为0.531和0.498).联合组MRP1阳性率为(57.78±3.34)%,显著低于LBH589、硼替佐米单药组[(76.06±5.17)%和(71.83±4.53)%,P值均＜0.05],而单药组与对照组之间差异也有统计学意义(P值均＜0.01).联合组细胞内阿霉素摄取率为(64.81±3.69)%,明显高于单药组[(28.96±2.52)%和(37.29±3.71)%](P值均＜0.05).LBH589联合硼替佐米可以明显抑制磷酸化Akt和磷酸化IKKα/β蛋白的表达,降低PI3K/Akt/NF-κB通路的活性,明显上调P53蛋白的表达,抑制NF-κB P65、Bcl-2、XIAP和MRP1蛋白活性,促进Caspase-8、Caspase-3和PARP的裂解激活.结论 LBH589、硼替佐米能够抑制耐药AML细胞增殖和促进凋亡,并逆转耐药,两者联合具有明显的协同作用.PI3K/Akt/NF-κB信号传导通路受抑或阻断可能是其主要的作用机制.

Abstract：

Objective To investigate reversal effect of histone deacetylase inhibitor LBH589 alone or in combination with proteasome inhibitor bortezomib on drug resistance in acute myeloid leukemia(AML) and its mechanism.Methods Ex vivo cultures of HL-60/ADM cells and fresh refractory AML cells were treated with LBH589, bortezomib or their combination at varying concentrations.Proliferation capacity, apoptosis rate and reversal of drug resistance were evaluated by MTT assay, dual staining of Hoechst33342 and AnnexinVFITC/PI by flow cytometry, and adriamycin uptake rate with proliferation inhibition, respectively.The change of signal pathway at protein level was analyzed by Western blot.Results Synergistic cytotoxicity was observed in the combination treatment with LBH589 and bortezomib against HL-60/ADM cells, as well as the fresh AML cells, the most powerful synergy being observed at 21 nmol/L LBH589 plus 12 nmol/L bortezomib,with CI values of 0.531 and 0.498, respectively by Calcusyn software analysis.Moreover, the accumulation of adriamycin in HL-60/ADM cells was increased more in combination treatment[(64.81 +3.69)%]than in either LBH589[( 28.96 + 2.52 ) %]or bortezomib[( 37.29 ± 3.71 ) %]alone ( P ＜ 0.05 ), and so did the uptake rate of adriamycin being (64.81 ± 3.69 ) %, ( 28.96 ± 2.52 ) % and ( 37.29 ± 3.71 ) % respectively (P ＜ 0.05 ).The combination treatment induced multiple apoptotic molecules co-action and intracellular drug accumulation contributed to the synergistic cytotoxity, including caspase activation, PARP cleavage, XIAP downregulation, p53-dependent suppression of Bcl-2 and MRP1 expression via the inhibition of phosphoinositide 3-kinase ( PI3K )/Akt/nuclear factor-κB ( NF-κB ) signaling pathway. Conclusions Combination treatment of drug resistant AML cells with LBH589 and bortezomib produces a synergistic effect of in creasing sensitivity to chemotherapy.The mechanism may be mainly resulted from inhibition of PI3K/Akt/NF-κB signaling pathway.     

Bortezomib sensitizes malignant human glioma cells to TRAIL, mediated by inhibition of the NF-{kappa}B signaling pathway

Previous studies have shown that the tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) has significant apoptosis-inducing activity in some glioma cell lines, although many lines are either moderately or completely resistant, which has limited the therapeutic applicability of this agent. Because our recent studies showed that inhibition of proteasomal function may be independently active as an apoptosis-inducing stimulus in these tumors, we investigated the sensitivity of a panel of glioma cell lines (U87, T98G, U373, A172, LN18, LN229, LNZ308, and LNZ428) to TRAIL alone and in combination with the proteasome inhibitor bortezomib. Analysis of these cell lines revealed marked differences in their sensitivity to these treatments, with two (LNZ308 and U373) of the eight cell lines revealing no significant induction of cell death in response to TRAIL alone. No correlation was found between sensitivity of cells to TRAIL and expression of TRAIL receptors DR4, DR5, and decoy receptor DcR1, caspase 8, apoptosis inhibitory proteins XIAP, survivin, Mcl-1, Bcl-2, Bcl-Xl, and cFLIP. However, TRAIL-resistant cell lines exhibited a high level of basal NF-κB activity. Bortezomib was capable of potentiating TRAIL-induced apoptosis in TRAIL-resistant cells in a caspase-dependent fashion. Bortezomib abolished p65/NF-κB DNA-binding activity, supporting the hypothesis that inhibition of the NF-κB pathway is critical for the enhancement of TRAIL sensitization in glioma cells. Moreover, knockdown of p65/NF-κB by shRNA also enhanced TRAIL-induced apoptosis, indicating that p65/NF-κB may be important in mediating TRAIL sensitivity and the effect of bortezomib in promoting TRAIL sensitization and apoptosis induction.     

大黄素衍生物对伯基特淋巴瘤细胞株周期、凋亡、NF-κB通路的作用研究

目的:探讨新型大黄素衍生物YX-18对伯基特淋巴瘤(BL)细胞的作用和机制。方法:不同浓度YX-18分别作用BL细胞株CA46和Raji细胞,MTT法检测YX-18对BL细胞株CA46和Raji增殖的影响,Annexin V-PE/7-AAD双染法检测YX-18对CA46和Raji细胞凋亡的影响,PI/RNase染色法检测YX-18对CA46和Raji细胞周期的影响,JC-1法检测YX-18作用后细胞线粒体膜电位的变化及DAPI染色检测细胞凋亡形态,Western blot检测YX-18对NF-κB通路蛋白(P65、P-P65、IκB、P-IκB)在胞浆和胞细胞核中的分布变化,细胞周期相关蛋白P21、CDK2、P-CDK2、Cycling D1、Cycling E1以及凋亡、增殖相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、C-MYC、BCL-2的表达变化,实时荧光定量PCR技术检测YX-18对CA46、Raji细胞的C-MYC、Ki-67的m RNA和Raji(EBV⁺)细胞EBV的EBEA-1、EBER的m RNA表达的影响。结果:大黄素衍生物YX-18能有效抑制BL细胞株CA46和Raji的增殖并呈时间依赖效应(24,48和72 h分别r_CA46=0.89、0.75和0.75,r_Raji=0.87、0.73和0.64)。作用两种细胞24 h的IC50分别为1.77±0.04和1.97±0.22μmol/L。YX-182.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h均出现明显凋亡,与药物浓度呈正相关(r_CA46=0.99,r_Raji=0.92),且两种细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9不同程度被活化。YX-181.0、2.0μmol/L作用CA46细胞24 h及0.5、1μmol/L作用Raji细胞24 h后,两种细胞均明显阻滞在G0/G1期(P<0.01);经过不同浓度YX-18处理两种细胞的周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、CDK2、P-CDK2表达水平均下降,p21^Waf1/Cip1与对照组相比,表达水平上升。以YX-182.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,线粒体膜电位下降(r_CA46=-0.96,r_Raji=-0.99);且DAPI染色可见经YX-18处理后的CA46细胞核固缩、裂解。YX-181.0、2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,随着该药物作用浓度的增高,2株细胞内胞浆和胞核P65均明显降低,细胞内IκB升高,P-IκB、P-P65均明显降低,肿瘤增殖蛋白C-MYC、BCL-2表达水平明显降低。YX-181.0、2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h,细胞内C-MYC、Ki-67基因m RNA表达水平均明显降低,Raji(EBV⁺)细胞EBNA-1基因m RNA表达水平也明显降低。结论:新型大黄素衍生物YX-18可以显著抑制BL细胞的增殖,同时诱导细胞凋亡并引起细胞周期阻滞。YX-18的作用可能与影响Caspase-分子和C-MYC、Ki-67等增殖凋亡相关分子,抑制NF-κB通路等有关。     

三氧化二砷联合硼替佐米对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制的实验研究

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）单独或联合硼替佐米（Bor）对髓系白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度的As2O3、Bor处理细胞24、48h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测单用As2O3、Bor及二者联用的细胞凋亡率及细胞周期的变化;免疫组织化学法分析各组核转录因子（NF-κB）的表达水平。结果表明,As2O3（0．1-0．8μmol／L）和Bor（5-50nmol／L）均能抑制K562细胞的增殖,且与作用时间和药物浓度有关,时间越长,浓度越大,抑制越明显（P〈0．05）;Bor和As2O3作用48h的IC50值分别为20nmol／L和0．6μmol／L。As2O3（0．5μmol／L）或Bor（10nmol／L）分别单独处理细胞24h,K562细胞凋亡增加,联合用药组的细胞凋亡率高于单药组（P〈0．01）。As2O3或Bor处理K562细胞6h时细胞周期分布显示：As2O3组细胞阻滞于G0／G1期,Bor组细胞阻滞于G2／M期。As2O3或Bor分别单独处理细胞24h,NF-κB表达阳性率及积分较对照组明显降低（P〈0．05）,联合用药组的NF-κB表达阳性率及积分较As2O3及Bor单用组均明显降低（P〈0．01）。结论：As2O3及Bor单药均可以直接抑制K562细胞增殖,促进凋亡,两药小剂量联合作用后,细胞增殖抑制及促凋亡作用较单药明显增强。细胞周期阻滞点的不同及NF-κB表达的下降可能是As2O3和Bor联用后协同作用的机制之一。