HLA研究的进展

近年来，ＨＬＡ已全面转入分子生物学研究。发现了ＨＬＡ参与抗原提呈和处理的机理，报道了不同民族的多态分布，从分子角度阐明了ＨＬＡ与依赖胰岛素糖尿病等疾病相关的机理。ＨＬＡ采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ、ＰＣＲ－ＳＳＰ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ等技术分析已用于移植配型，且初见成效。     

肾移植HLA-DR血清学分型与PCR-SSP基因分型的比较

目的：比较肾移植供受体ＨＬＡ－ＤＲ血清学分型与ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型方法的差异,以探讨两种方法的优缺点。方法：对已作ＨＬＡ－ＤＲ标准血清学分型的供受体标本,用ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型法作ＨＬＡ－ＤＲ抗原分型。结果：血清学法耗时８０ｍｉｎ,ＰＣＲ－ＳＳＰ法耗时１４５ｍｉｎ;血清学方法误差率为１１．５％（受者１５．１％,供者８．７％）。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ法作ＨＬＡ－ＤＲ分型具有准确、简便、快速等优点。     

三种方法在检测Leber‘s视神经萎缩mt—DNA突变的比较

比较ＭＳＰ－ＰＣＲ、ＳＳＣＰ、ＲＦＬＰ在检测Ｌｅｒｂｅｒ’ｓ视神经萎缩（ＬＨＯＮ）线粒体ＤＮＡ（ｍｔ－ＤＮＡ）１１７７８突变中的优缺点。７７例受试者，分别用ＭＳＰ－ＰＣＲ、ＳＳＣＰ、ＲＦＬＰ法检测ｍｔ－ＤＮＡ１１７７８突变。被ＭＳＰ－ＰＣＲ检出的４８例阳性者同时也被ＳＳＣＰ检出，另外ＳＳＣＰ还检出６例杂合性突变；ＭＳＰ－ＰＣＲ和ＳＳＣＰ检测阳性的９例患者，再用ＲＦＬＰ（ＭａｅⅢ）检测也得出一致结果     

HLA的PCR—SSP分型技术

ＰＣＲ－ＳＳＰ是采用ＰＣＲ技术，针对被检基因设计一系列具有等位基因多态性的序列特异上物扩增被检标本，分析ＰＣＲ产物判定ＨＬＡ型别，ＨＬＡ－ＤＲＩ￣ＤＲ１８可以采用１９对引物检定，采用两步法以７９对引物可以检定ＤＲ全部基因型。ＨＬＡ－ＤＱ采用２０条引物不同组合，陈检定与血清学型别一致的特异性还可分析部份基因型；以２２对引物则可检定ＤＱＢ１全部基因型。ＰＣＲ－ＳＳＰ技术比ＰＣＲ－ＳＳＯＰ及ＰＣＲ－ＲＥ     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ＡＢＯ血型系统的分子基础及在此基础上对ＡＢＯ血型系统的基因分型的几种主要方法：ＰＣＲ－ＤＮＡ测序法、ＰＣＲ－限制性内切酶酶切法、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ－序列特异性引物（ＳＳＰ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）等。另外还介绍了基因分型技术在ＡＢＯ亚型研究中的应用。     

人类血小板抗原基因分型

本文介绍了５个对人类影响最大且已被国际上公认的血小板抗原系统的分子生物学研究结果及其分型方法，包括最早采用的血清学方法，近几年发展起来的分子生物学方法：ＤＮＡ序列分析、等位基因特异性寡核苷酸点杂交（ＰＣＲ－ＡＳＯ）、聚合酶链反应－限制性片断长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）及聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ），其中重点介绍了ＰＣＲ－ＳＳＰ方法的可靠性及实用性。     

应用PCR—SSP对异基因骨髓移植供受者HLA—DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ１位点的纯合体和杂合体     

应用PCR－SSP对异基因骨髓移植供受者HLA－DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ＿１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ＿１位点的纯合体和杂合体等位基因，并能检测出单一碱基的点突变；它将ＰＣＲ扩增和检测两个步骤合并为一次完成，操作更简便、快速。并已将ＰＣＲ－ＳＳＰ方法成功地用于１５对异基因骨髓移植的供、受者的分型。ＰＣＲ－ＳＳＰ作为基因分型的有效技术，可为骨髓来源提供直接的科学依据。     

P38MAPK在旨多糖诱导人单核细胞产生肿瘤坏死因子中 …

目的：探讨Ｐ３８信号通道（Ｐ３８ＭＡＰＫ）在脂多糖（ＬＰＳ）诱导人单核细胞表达肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）中的作用。方法：采用免疫沉淀法、免疫复合物蛋白激酶测定法、Ｗｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｐ３８ＭＡＰＫ在ＬＰＳ诱导的人单核细胞产生ＴＮＦ－α中的激活程度,应用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）观察Ｐ３８信号通道抑制剂ＳＢ２０３５８０地单核细胞ＴＮＦ－αｍＲＮ     

骨髓移植供受者HLA—DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受对Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表现此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供的意义     

骨髓移植供受者HLA－DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受者的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受者对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受者对的Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表明此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供者的意义。     

HLA-DRB、DQB的血清学和PCR/SSOP法分型结果比较

ＨＬＡ－ＤＲＢ、ＤＱＢ的血清学和ＰＣＲ／ＳＳＯＰ法分型结果比较３６１００４厦门市中心血站黄如欣倪宏英胡延桂目前国内多数对ＨＬＡ－ＤＲＢ、ＤＱＢ的检测采用血清学微量淋巴细胞毒试验，该方法灵敏度、特异性均有较大不足，因而第１１届国际组织相容性研讨会把ＰＣ...     

以PCR为基础的指纹图谱技术对军团菌分型的研究进展

本文概述了ＲＡＰＤ、ＲＥＰ／ＥＲＩＣ－ＰＣＲ及ＡＦＬＰ等以ＰＣＲ为基础的基因指纹图谱技术对军团菌分型的研究，分析了它们的优缺点，并提出改进的方向。     

血小板同种抗原P1A基因型检测及其与突发性耳聋的关系探讨

建立一种简便，易行，适于一般分子生物学实验室操作的检测血小板同种抗原Ｐ１＾Ａ基因型的方法并对Ｐ１＾Ａ２基因型与突发性耳聋之间的相关性进行初步研究。设计一对引物，用ＰＣＲ方法特异扩增血板ＧＰⅢａ基因上包含造成Ｐ１＾Ａ基因多态性的碱基在内的２４７ｂｐ片段，ＰＣＲ产物用ＭＳＰⅠ酶切。电泳后观察酶切位点的限制性片段长度多态性。用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ的方法检测了４０例对照和４０例突发性耳聋患者，结果均为Ｐ１＾Ａ     

血栓栓塞症患者抗活化的蛋白C的研究

目的 探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）现象在中国人血栓栓塞症发病中的作用。方法 用ＡＰＴＴ法检测ＡＰＣＲ敏感比率（ＡＰＣＲ－ＳＲ）来研究４０例深静脉血栓症（ＤＶＴ）患者、５２例脑血栓形成患者和１００例正常人的ＡＰＣＲ发生率;用多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）来检测ＦＶ Ｌｅｉｄｅｎ突变;用免疫火箭电泳测血浆总蛋白Ｓ和游离蛋白Ｓ。结果 正常人的正常化ＡＰＣＲ－ＳＲ（ｎ－ＡＰＣＲ     

混合淋巴细胞培养在骨髓移植供体选择中的作用

混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）是传统的配型骨髓移植（ＢＭＴ）供受体主要组织相容性复合（ＭＨＣ）的重要方法。但近年来，随着分子生物学和ＰＣＲ技术发展，出现了许多新的配型ＨＬＡ的基因学方法。利用这些方法，学者们对ＭＬＣ配型ＨＬＡ及选择ＢＭＴ供体的作用进行了研究。认为ＭＬＣ在有血缘关系的同胞间ＢＭＴ供体选择中尚有一定的作用，耐 在无关供体的选择时，ＭＬＣ可被省略而为ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－Ｆ等方法代替。     

上海地区深静脉血栓形成患者抗活化的蛋白C及FⅤLeiden突变的初步调查

应用抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）试验、多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析及ＤＮＡ序列分析对上海地区深静脉血栓形成（ＤＶＴ）患者ＡＰＣＲ及ＦⅤＬｅｉｄｅｎ突变进行调查。正常人群正常ＡＰＣＲ敏感比值（ｎ－ＡＰＣ－ＳＲ）的５％百分位数为０．７５，在被调查的３１例ＤＶＴ患者中有５例患者的ｎ－ＡＰＣ－Ｒ低于此值，ＤＶＴ患者ＡＰＣＲ的发生率为１６％，且ＤＶＴ患者与正常人的ＡＰＣＲ发生率有显著差异（Ｐ＜０．０５）。用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检查了１４１例排除ＤＶＴ的个体和３５例ＤＶＴ患者的Ｌｅｉｄｅｎ突变情况，发现所有样本的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ均显示了同样的代表野生型基因型的电泳条带，未发现Ｌｅｉｄｅｎ型突变。ＡＰＣＲ试验阳性的２例ＤＶＴ患者之多聚酶链反应（ＰＣＲ）产物测序结果进一步证实了实验中ＰＣＲ反应和ＭｎｌＩ酶切反应的特异性。结果说明ＡＰＣＲ现象可能是中国人群ＤＶＴ发病的一个危险因素；但我们与西方调查者实验结果的差别，说明在不同种族中，ＤＶＴ的致病机制可能不同     

严重型再生障碍性贫血患者骨髓和外周血 HLA-DR~ T 细胞的变化及其淋巴细胞造血抑制活性的研究

目的：进一步阐明免疫紊乱在严重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）发病中的作用。方法：对１３例初诊ＳＡＡ、７例抗淋巴细胞球蛋白（ＡＬＧ）治疗后恢复期ＳＡＡ（ｒＳＡＡ）患者骨髓和外周血及对照组（包括９名骨髓对照和１１名外周血对照）的ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞进行检测，并对部分患者和对照组刺激的外周血去单核细胞的单个核细胞培养上清液（ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ）的造血活性进行检测。结果：初诊ＳＡＡ患者骨髓及外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者骨髓和外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞较初诊ＳＡＡ下降，但仍高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＳＡＡ患者骨髓内ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于外周血（Ｐ＜０．００１）；与对照组比较，初诊的ＳＡＡ患者外周血ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ具有显著的抑制作用（Ｐ＜０．００１），而ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用明显减弱。结论：ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞在ＳＡＡ的发病中可能发挥重要的作用。     

微量淋巴细胞毒试验与PCR检测HLA—B27的比较

比较微量淋巴细胞毒试验与ＰＣＲ检测ＨＬＡ－Ｂ２７的方法，从中找出一种实用，可靠的方法为临床诊强直性脊柱炎提供依据。方法分别用微量淋巴细胞试验和ＰＣＲ对５０份临床怀疑ＡＳ的病人标本进行检测ＨＬＡ－Ｂ２７。结论无优质抗血清的情况下，可用ＰＣＲ代替微量淋巴细胞毒试验检测ＨＬＡ－Ｂ２７。     

HLA-B27 PCR-SSP基因分型及血清学结果比较

采用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术检测３９份样本的ＨＬＡ－Ｂ２７基因并研究甘油在Ｂ２７基因扩增中的作用，同时与血清学结果比较。７份样本血清学难以判定结果或与ＰＣＲ结果不一致。ＰＣＲ技术与血清学方法比较有快速、简便、准确性高等优点。