肾细胞癌肿瘤抑制基因VHL的 变异多药耐药基因Mdr的表达

 目的　探讨人肾细胞癌中的VHL肿瘤抑制基因的变异和Mdr基因的表达水平，同肾癌发生发展的关系。方法　采用多聚酶链式反应(PCR)，DNA单链多态性分析和DNA测序的方法分析了40例肾细胞癌标本(其中包括30例富糖原型，6例是嗜染型、3例多形性、1例颗粒型)。用免疫组织化学法检测了正常肾组织和35例肾细胞癌组织切片。结果　19/30(63%)的富糖原型肾细胞癌的VHL肿瘤抑制基因发生了变异，其中包括13例缺失、3例插入、2例错译和1例无义。而在对照组未发现基因变异。而Mdr表达与组织学类型相关，且表达量与肿瘤分级有关。结论　富糖原型肾细胞癌可能在分子遗传学水平上与其它类型的肾细胞癌有所区别。     

MAGE-A3基因及其产物在肾透明细胞癌组织中的表达

目的:探讨肿瘤特异性黑色素瘤抗原(MAGE-A3)基因mRNA及MAGE-A3蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测45例肾透明细胞癌患者癌组织(新鲜标本,T1期14例,T2期12例,T3期11例,T4期8例;G1 18例,G2 15例,G3 12例)及其中10例患者癌旁组织MAGE-A3基因mRNA表达;Western-blot技术检测上述组织中MAGE-A3蛋白的表达.结果:45例肾透明细胞癌组织中,24例(53%)MAGE-A3 mRNA表达阳性,10例癌旁组织表达均阴性;21例(47%)MAGE-A3蛋白表达阳性,10例癌旁组织表达均阴性.肿瘤不同分期、不同分级之间MAGE-A3基因mRNA及MAGE-A3蛋白表达的差异均无统计学意义(Pearson χ2 检验法,P> 0.05).结论:MAGE-A3基因在肾透明细胞癌中有较高表达,可望成为肾透明细胞癌特异性免疫治疗的靶基因.     

肾透明细胞癌中miR-200c负性调控ZEB2基因表达的机制研究

目的:探讨肾透明细胞癌中miR-200c调控ZEB2基因表达的分子机制。方法:实时定量PCR法检测肾透明细胞癌及癌旁组织中miR-200c及ZEB2基因的表达水平。培养肾透明细胞癌Caki-1细胞,将miR-200c的前体转染Caki-1细胞,Western blot法检测ZEB2蛋白的表达改变,荧光素酶报告基因表达分析实验验证miR-200c与ZEB2基因的3' 非翻译区(3' UTR)的结合及调控作用。结果:实时定量PCR表达检测显示,与癌旁组织相比,miR-200c在肾透明细胞癌组织中的表达显著下调,而ZEB2 mRNA在肾透明细胞癌组织中的表达则呈现明显上调。Pearson相关性分析结果表明,在肾透明细胞癌及癌旁组织中miR-200c与ZEB2基因的表达均显示负性相关。荧光素酶报告基因表达分析实验明确miR-200c能够与ZEB2基因的3' UTR特异性地结合,并抑制荧光素酶的表达。miR-200c前体能够显著下调Caki-1细胞中ZEB2蛋白的表达。结论:miR-200c与ZEB2基因的表达异常与肾透明细胞癌相关,在肾透明细胞癌细胞中miR-200c能够负性调节其靶基因ZEB2的表达。     

基于Keap1基因多态性的肾透明细胞癌分子标志物的研究

目的:探讨KeapJ基因单核苷酸多态性与肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的相关性,为临床诊疗提供有效的分子靶点.方法:采集ccRCC组织108例与正常对照肾组织86例,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)和基因测序技术检测KeapJ基因单核苷酸多态性,判读两组样本基因型,实时荧光定量PCR法检测Keap1基因在两组中的表达情况.结果:Keap1基因rs1048289的不同基因型与等位基因频率在肿瘤组和对照组之间的分布不同,差异均有统计学意义(P＜0.05).AA基因型及A等位基因携带者患肾透明细胞癌的风险明显升高,AA基因型(OR=2.292,95％ CI:1.159～4.533,P＜0.05)及A等位基因(OR =2.067,95％ CI:1.280 ～3.342,P=0.001)为肾透明细胞癌患病的危险因素.肿瘤组Keap1基因表达量比对照组明显降低(P＜0.05),但不同基因型样本间Keap1基因表达量无明显差异(P＞0.05).结论:Keap1基因rs1048289与肾透明细胞癌患病显著相关,有望成为肾透明细胞癌早期诊断与基因治疗的有效分子靶点.     

基于数据挖掘分析VHL，PBRM1，TTN，SETD2，BAP1在肾透明细胞癌中的表达及预后意义

目的:研究相关基因在肾透明细胞癌中的表达变化,评价相关基因与肾透明细胞癌的关系及其对预后的影响。方法:在TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库中配对肾透明细胞癌组织和正常肾细胞组织相关基因表达谱数据,通过数据挖掘技术挖掘相关基因（VHL,PBRM1,TTN,SETD2,BAP1）与肾透明细胞癌表达及预后的关系。结果:相对比正常肾透明细胞组织,VHL,PBRM1,SETD2,BAP1均呈低表达,TTN呈高表达,通过建立相关生存曲线,可知PBRM1低表达与TTN高表达能够减少肾透明细胞癌患者的生存时间,而VHL、SETD2、BAP1基因低表达与肾透明细胞癌患者的生存时间无统计学差异。结论:PBRM1的低表达与TTN高表达是影响肾透明细胞癌预后的不良因素,因此PRBM1、TTN基因的表达对判断肾透明细胞癌患者的生存预后具有参考价值。     

基于公共数据库分析GABRD基因在肾透明细胞癌组织中的表达及预后意义

目的:探讨γ-氨基丁酸A受体δ亚基（GABRD）基因在肾透明细胞癌组织中的表达及预后意义,通过富集分析初步了解GABRD基因在肾透明细胞癌中可能发挥的功能。方法:提取Oncomine和TCGA数据库中有关GABRD基因表达的数据集,进行数据挖掘。筛选GABRD基因在肾透明细胞癌中的关联基因并进行富集分析。结果:Oncomine和TCGA数据库中检索到涉及GABRD基因的研究包含肾透明细胞癌标本75例和正常组织597例。在肾透明细胞癌组织中GABRD mRNA的表达量显著高于正常组织（P＜0.01）。使用UALCAN网站分析来自TCGA数据库531例肾透明细胞癌患者发现,GABRD高表达的患者总体死亡率较高,而低表达GABRD的患者预后较好（P=0.012）。基于UALCAN网站筛选出的GABRD关联基因,富集分析发现这些基因主要涉及血管生成、肌动蛋白着丝过程、细胞连接、对生长因子的反应、小GTP酶介导的信号转导、涉及细胞分化的细胞表型等。结论:GABRD基因在肾透明细胞癌组织中呈现高表达,并与肾透明细胞癌预后相关,其共表达基因参与多个和肿瘤发生进展有关的生物过程,有望成为肾透明细胞癌的治疗靶点。     

Mdr1反义寡核苷酸联合磁性载药微球逆转胰腺癌耐药实验研究

目的：探讨辐射促细胞转染的多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因Mdr1反义寡核苷酸（ASON）逆转肿瘤细胞SW1990／Fu的耐药效果。方法应用RT-PCR方法和流式细胞仪,检测2种不同的转染方法对SW1990／Fu细胞的Mdr1-mRNA及其表达产物P-糖蛋白（ P-gp）的调控情况。结果反转录RT-PCR和流式细胞仪的结果显示,联合辐射的阳性脂质体介导ASON组的SW1990／Fu细胞Mdr1-mRNA的表达水平及细胞膜糖蛋白（ P-gp）的阳性率均明显低于反义寡核苷酸（ASON）组（P＜0．01）。结论辐射促转染的Mdr1ASON联合磁性载药微球对肿瘤细胞具有较好的耐药逆转作用。     

一种新的抑癌基因PTEN在肾细胞癌中的表达及生物学意义

背景与目的：PTEN基因是新发现的一种抑癌基因,定位于人染色体10q23,它的缺失和突变可能构成一个新的信号转导途径,与人类恶性肿瘤的发生普遍相关,资料报道。肾细胞癌有抑癌基因PTEN的缺失和突变。但目前尚未见到关于抑癌基因PTEN在肾细胞癌中表达的研究,本实验研究抑癌基因PTEN在肾细胞癌的表达和生物学意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测5例正常肾组织,18例癌旁肾组织和40例肾细胞癌组织中抑癌基因PTEN的表达,分析抑癌基因PTEN的表达与肾细胞癌病理类型,淋巴结转移之间的关系。结果：5例正常肾组织和18例癌旁肾组织均有较强的PTEN蛋白的表达,正常肾组织和癌旁肾组织PTEN蛋白的表达强度,阳性细胞的分布形式无明显差异,肾小管上皮细胞的胞质呈PTEN蛋白阳性,免疫组化染色程度较强,肾小球无PTEN蛋白的表达。抑癌基因PTEN在肾细胞癌中的表达不同于正常肾组织和癌旁肾组织,12．5％,呈PTEN蛋白阴性,17．5％呈弱阳性,70％呈阳性或强阳性,PTEN蛋白阴性,弱阳性和阳性的肾细胞癌,肾门淋巴结转移率分别为80％,51．74％,10．71％,PTEN蛋白阴性和弱阳性肾细胞癌的肾门淋巴结转移率与PTEN阳性者比较,差异有显著性（P＜0．05）,结论：本实验提示肾细胞癌中存在着抑癌基因PTEN的表达缺失和异常,可能与肾细胞癌的发生,发展有关,抑癌基因PTEN是肾细胞癌的一种新的相关基因。     

基于数据挖掘分析PEG3基因在肾透明细胞癌中的表达及预后意义

目的:阐述印迹基因PEG3在肾细胞癌中的表达及意义。方法:利用Oncomine数据库及GEPIA分析PEG3在肾透明细胞癌组织中的表达情况;利用KM-Plotter做PEG3与肾透明细胞癌患者生存期的相关性分析,经MethHC分析PEG3启动子区甲基化水平,String-DB数据库分析PEG3相互作用蛋白;通过The Human Protein Atlas分析PEG3蛋白在肾透明细胞癌中的蛋白表达情况。结果:在mRNA水平上,PEG3在肾透明细胞癌中较正常肾组织显著低表达,表达水平与肾癌预后呈负相关（Log-rank P=0.001 1）,PEG3蛋白在肾透明细胞癌中也较正常肾脏组织低表达,且其启动子甲基化水平则显著增高。与PEG3相关蛋白有NLRP7、MEST、SIAH1、PEG10、CDC25B等,可能参与细胞有丝分裂周期调节及遗传印迹等细胞功能。结论:通过肿瘤基因数据库信息挖掘发现, PEG3在肾透明细胞癌组织中呈低表达,且与患者生存期有关,将为后续的肿瘤研究提供重要的理论依据。     

肾透明细胞癌中Ang-2的表达及与血管生成的关系

目的:探讨Ang-2及CD34在肾透明细胞癌中的表达及与肾透明细胞癌血管生成的关系.方法:应用免疫组化S-P法,分别检测80例肾透明细胞癌组织及10例癌旁肾组织中Ang-2及CD34的表达.结果:肾透明细胞癌组织中Ang-2阳性表达率为61.25%(49/80),明显高于癌旁肾组织.Ang-2的表达与肾透明细胞癌患者血尿、临床分期及淋巴结转移显著相关.结论:Ang-2可能在肾透明细胞癌血管生成中起重要作用,与肾透明细胞癌的分期、转移相关.     

肾癌组织mdr—1基因表达

目的研究ｍｄｒ１基因在肾癌组织中的表达状况。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术检测２０例肾癌和５例正常肾组织ｍｄｒ１基因ｍＲＮＡ的表达。结果８５％（１７／２０）的肾癌和１００％（５／５）的正常肾组织表达ｍｄｒ１ｍＲＮＡ。结论肾癌ｍｄｒ１基因的高表达是肾癌耐药的重要原因,检测ｍｄｒ１基因表达可为临床化疗药物的选择提供依据。     

Multiple drug resistance gene expression in human renal cell cancer is associated with the histologic subtype.

Overexpression of p170 glycoprotein, the product of the multiple drug resistance (mdr) gene, has been associated with resistance to various cytotoxic drugs used in the treatment of human neoplasms. Normal renal epithelial cells express p170 as a function of their secretory capacity. Because renal cell carcinomas (RCC) respond poorly to chemotherapeutic regimens, p170 expression was studied in primary RCC. Such expression was measured in 40 human RCC and normal kidney tissues using immunohistochemical staining with the monoclonal antibody C-219. Staining intensities of the whole tumor and of different areas of the cryostat sections were transformed into digital numbers using an algorithm designed for this purpose. In most tumors, an inhomogeneous staining pattern and a correlation between grade of differentiation and C-219 immunoreactivity was observed. A comparison of the tumors according to their histopathologic subtypes showed clear differences. The means (range) of the staining intensities of the different types of RCC: clear cell carcinoma Grade 1 (n = 3), 2.0 (2.0 to 2.0); clear cell carcinoma Grade 2 (n = 19), 0.8 (0.0 to 2.9); clear cell carcinoma Grade 3 (n = 5), 0.1 (0.0 to 0.2); tubular carcinoma (n = 4), 2.0 (2.0 to 3.0); anaplastic carcinoma (n = 8), 0.05 (0.0 to 0.2); oncocytoma (n = 1), 0.0 (0.0 to 0.0); and normal kidney (n = 40), 0.5 (0.0 to 2.0). The differences between anaplastic, clear cell, and tubular carcinoma were significant (P less than 0.001 by Kruskal-Wallis test). In addition, the difference between the three subgroups of clear cell carcinoma was significant (P less than 0.01). It was concluded that the histopathologic subtypes of RCC correlate with the degree of mdr gene expression, as determined by staining with the C-219 monoclonal antibody.     

X射线照射诱导鼻咽癌细胞mdrl和p53基因的表达及临床意义

目的:探讨X射线照射后鼻咽癌CNE-1细胞产生多药耐药的机制。方法:采用RT-PCR和Westernblot方法,检测X射线照射后CNE-1细胞mdr1和p53基因的表达。结果:照射后细胞mdrlmRNA和P-gp表达均增强,p53蛋白的表达也增强,并与P-gp表达呈正相关性(P<0.05)。结论:X射线照射可诱导CNE-1细胞mdr1和p53基因的表达,两者的相互协调作用可能是照射后肿瘤细胞产生多药耐药的重要机制之一。     

食管、贲门癌组织多药耐药基因表达的临床意义

 目的 探讨多药耐药基因（MDR1）在食管、贲门癌组织中的表达及其与临床病理的关系。方法 应用RT-PCR方法检测161例手术切除食管、贲门癌组织中的MDR1。术前未用化疗。结果 MDR1的阳性表达率为34.78 %（56／161）。其中＜60岁40.26 %，≥60岁20.76 %；男36.97 %，女28.57 %；肿瘤大小3.1 ~ 5 cm 29.23 %，＞5 cm 38.54 %；浸润深度达肌层30.77 %，达外膜或浆膜外35.14 %；腺癌41.67 %，鳞癌27.27 %；淋巴结转移阳性35.19 %，阴性33.96 %；Ⅰ、Ⅱ期33.33 %，Ⅲ、Ⅳ期35.58 %。MDR1基因的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、组织学类型、淋巴结转移及TNM分期等无关。结论 化疗前食管、贲门癌组织中MDR1基因表达率较高，且独立于病理形态学之外。提示化疗前要区别对待，对MDR1基因表达阳性者应合理选择化疗。     

p53表达与肺癌多药耐药的相关性研究

目的 :探讨 p5 3蛋白与肺癌多药耐药 (MDR)的关系。方法 :运用 S- P免疫组化法和反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术 ,对 40例肺癌组织中 p5 3蛋白、多药耐药 (mdr- 1)基因和多药耐药相关蛋白 (mrp)基因表达进行检测。结果 :癌组织 p5 3阳性的 mdr- 1、m rp阳性率高于 p5 3阴性者 (P<0 .0 5 ) ;p5 3和 mdr- 1、m rp阳性率与肺癌的病理分期、组织学类型、分化程度和淋巴结转移无关 (P>0 .0 5 ) ,但它们在低分化肿瘤和淋巴结转移标本的阳性率高于中高分化和无淋巴结转移者。结论 :p5 3蛋白对肺癌细胞的 mdr- 1、mrp表达可能起调控作用 ,促使肺癌细胞 MDR的产生。     

维甲酸逆转人宫颈癌耐药细胞株耐药性的实验研究

目的 :本研究旨在探讨全反式维甲酸 (ATRA)逆转人宫颈癌Hela/MMC耐药株对MMC的耐药作用。方法 :观察ATRA作用下Hela/MMC细胞的增殖 ,采用MTT法观察ATRA对Hela/MMC药物敏感性的影响 ,半定量RT PCR检测mdrI基因的表达情况。结果 :ATRA能提高MMC对Hela/MMC细胞的杀伤作用 ,上调细胞mdr1mRNA的表达。结论 :ATRA能逆转Hela/MMC对MMC的耐药性 ,但这种作用与mdrl基因表达无关     

Use of the human MDR1 promoter for heat-inducible expression of therapeutic genes

The promoter of the human multidrug resistance gene (mdr1) harbors stress-responsive elements, which can be induced e.g., by heat or cytostatic drugs. In previous studies the drug-responsiveness of the mdr1 promoter was successfully used for the drug-inducible expression of the human TNF-alpha gene in vitro and in vivo. Beside the drug-responsive elements of the mdr1 promoter, heat-shock responsive elements have also been identified, which could be exploited for construction of heat-inducible expression vectors. To analyze the hyperthermia-inducibility of the mdr1 promoter we used the pmdr-p-CAT and pM3mdr-p-hTNF vector constructs. Both constructs carry the mdr1 promoter fragment spanning from -207 to +153 to drive expression of the CAT-reporter or TNF-alpha gene. We tested the heat-induced CAT-reporter and TNF-alpha expression in vitro in transduced HCT15 and HCT116 human colon carcinoma cells. For the studies the transduced tumor cells were treated with hyperthermia at 41.5 degrees C or 43 degrees C for 2 hr to induce CAT or TNF-alpha expression. Cells and supernatants were harvested before hyperthermia and at certain time points (0-120 hr) after heat shock. The heat-induced CAT-reporter expression or TNF-alpha secretion was determined by specific ELISA. The experiments indicate that hyperthermia activates the mdr1 promoter in a temperature and time dependent manner. This induction leads to an 2- to 4-fold increase in CAT-reporter or 2- to 7-fold increase in TNF alpha expression in the tumor cell lines. These experiments reveal that the mdr1 promoter driven expression of therapeutic genes can be employed for combined cancer gene therapy approaches.     

Constitutive expression of multidrug resistance in human colorectal tumours and cell lines.

In this study we report detection of mdr1 gene expression in the liver metastases of 7/11 patients with colon carcinoma and characterise the MDR phenotype associated with a panel of 19 human colon carcinoma cell lines. Within this panel, mdr1 mRNA biosynthesis and surface localisation of Pgp were assessed with respect to MDR functionality where the cell lines are representative of different clinical stages of tumour progression, metastatic potential and differentiation. The data indicates that constitutive levels of mdr1 mRNA/Pgp expression may not necessarily result in the functional expression of the MDR phenotype. While low levels of mdr1 mRNA/Pgp were detected in 5/8 well differentiated colon cell lines, only 2/8 were functionally MDR. In contrast, 10/11 moderate and poorly differentiated lines expressed mdr1 mRNA/Pgp and of these, 9/11 were functionally MDR. The phosphorylation status of the mature 170 kD P-glycoprotein and the surface localisation of this glycoprotein showed the strongest correlation with functionality. Analysis of cell lines for cross-resistance and chemosensitivity profiles against a battery of chemotherapeutic drugs suggests multiple mechanisms, in addition to Pgp, contribute to the overall resistance of colorectal cancer.