死亡受体5在肝癌细胞系及肝细胞系表面的表达

目的:利用抗死亡受体5(DeathReceptor5)单克隆抗体(mAb),检测DR5在肝癌细胞系的表达。方法:sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术测定抗DR5mAb结合至细胞表面的量来分析死亡受体DR5在肝癌细胞系及肝细胞表面的表达情况。结果:不同细胞表面DR5的表达水平分别为:人肝癌SMMC7721细胞95%、人肝细胞癌HepG2细胞40%,人正常肝细胞HL-770220.3%。结论:抗DR5mAb能够特异性与DR5结合。DR5在人肝癌SMMC7721细胞高水平表达,人肝细胞癌HepG2细胞中度表达,人正常肝细胞HL-7702细胞低表达。该特异性mAb在研究TRAIL受体的生物功能上是一种有用的工具,对研究DR5在组织和细胞系表达十分有价值。     

TRAIL受体在人肝细胞癌中的表达及TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡

目的 研究了RAIL受体在肝癌组织及肝癌细胞中的表达,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在肝癌细胞凋亡诱导中的作用。 方法 应用RT-PCR法和免疫组化方法检测肝癌组织及细胞系SK-Hepl中TRAIL受体的表达,并以TRAIL蛋白和γ-干扰素作用于SK-Hepl细胞,观察其对细胞的凋亡诱导作用。 结果 在肝癌组织及肝癌SK-Hepl细胞系中均可检测到TRAIL受体,其中,死亡受体DR4、DR5在肝癌、癌旁组织以及SK-Hepl肝癌细胞系中均呈高表达,而诱骗受体DcR1及DcR2呈低表达,明显低于正常组织。TRAIL对肝癌细胞有凋亡诱导作用,与干扰素的协同时,其作用明显增强。 结论 肝癌组织中存在着TRAIL受体的表达,TRAIL可诱导肝癌SK-Hepl细胞系凋亡,其作用与DR4、DR5的高表达有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

目的　探讨TRAILR在肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)中的表达及其临床意义。方法　采用原位杂交方法检测了 6 0例肝癌组织、两种肝癌细胞株以及 2 0例正常肝组织中TRAILR的表达 ,并结合临床资料进行分析。结果　 6 0例肝癌组织及 2 0例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织DR表达量。 5 4例肝癌组织不表达诱捕受体DcR1( 90 % ) ,2 5例肝癌组织不表达DcR2 ( 41.7% ) ,而 2 0例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达 ,两者间有显著差异性。两种肝癌细胞株中均检测到DR5、DR4、DcR2的表达 ,但DcR1表达缺失。HCC组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分级有关 ,低分化的肿瘤DR表达减少 (P <0 .0 1) ,Ⅲ /Ⅳ期肿瘤DR的表达显著低于Ⅰ/Ⅱ级DR表达 (P <0 .0 5 )。DR的表达与病人的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤的大小以及是否转移无关。肿瘤细胞耐药株DR表达降低。结论　HCC普遍存在TRAILR的表达 ,并存在受体类型的表达差异。DcR1的表达大多缺失有利于TRAIL治疗HCC。     

肺癌组织中HLA—DR抗原表达的临床意义

目的探讨HLA-DR抗原在肺癌中的表达及其临床意义.方法采用免疫组化ABC法检测57例原发性肺癌组织中HLA-DR抗原表达情况,并分析了该抗原表达与肺癌临床病理的关系.结果 57例肺癌组织中,腺癌、鳞癌和大细胞未分化癌的阳性表达率分别为72.0%、42.1%和28.6%,6例小细胞未分化癌(SCLC)和20例癌旁组织均未见阳性表达.腺癌的阳性率明显高于鳞癌和大细胞未分化癌(P<0.05).随着肿瘤进展,HLA-DR表达逐渐降低,Ⅰ期和Ⅱ Ⅲ期之间其阳性率差异有显著性(P<0.05),分化程度高的肺癌HLA-DR阳性表达率明显高于中、低分化程度的肺癌(P<0.01).HLA-DR表达与肺癌有无淋巴结转移无明显相关性(P>0.05).结论 HLA-DR异常表达可能是肺癌发生和发展过程中的标志物之一,对判断肺癌患者的生物学行为具有一定的意义.     

OCT4在肝细胞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:近年关于肝癌干细胞问题备受关注,已发现部分干细胞标志物在肝细胞癌中表达并与预后有关,其中OCT4基因是POU转录因子的重要组员,是维持胚胎干细胞自我更新能力和分化潜能的关键因子。本研究旨在检测OCT4A在肝细胞癌中的表达情况,并探讨其与病理因素和预后的关系。方法:用半定量RT-PCR检测5株人肝癌细胞系和1株永生化肝细胞系,以及107例肝细胞癌组织、相应的癌旁肝组织和20例正常无肝硬化肝组织中OCT4A mRNA的表达,并结合肝癌临床病理因素及预后进行分析。结果:OCT4A mRNA在人肝癌细胞系SMMC-7721、BEL-7402、Hep-G2、MHCC-97L、MHCC-97H中均表达,而在永生化肝细胞系L-02中无表达。OCT4A mRNA在肝癌组织中表达率为72.0%,明显高于癌旁肝组织的30.8%(P<0.001),在正常无肝硬化肝组织中无表达。肝癌组织中OCT4A mRNA的表达与肿瘤大小、血管侵犯及TNM分期有关(P<0.05)。OCT4A mRNA阳性肝癌患者及阴性患者的3年总生存率分别为48.0%和83.7%,3年无瘤生存率分别为34.1%和58.0%,差异均有统计学意义(P<0...     

肝癌及相关组织中NET-1基因与蛋白的表达

背景与目的:NET-1是最近发现的肿瘤相关基因,它在肝癌中的表达目前尚未见报道。本研究在胚胎肝、成人肝、肝癌及相应的癌旁组织中筛检和比较NET-1基因和蛋白表达,以探讨NET-1基因在肝癌表达的特征。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3例胚胎肝、4例成人肝、4例验证肝癌组织和28例肝癌与相应癌旁组织中NET-1mRNA的表达,由四星图像分析系统软件检测NET-1基因mRNA的光密度。用基因生物工程方法制备NET-1多克隆抗体,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学检测培养的人肝癌细胞系SMMC-7721中NET-1抗体的表达,免疫组化法检测28例肝癌与癌旁组织中NET-1蛋白的表达。结果:(1)正常成人和胎儿肝组织中NET-1基因mRNA不表达,4例验证肝癌组织中NET-1基因mRNA均呈阳性表达;肝癌与癌旁组织中NET-1基因mRNA高表达,阳性率均为85.71%(24/28)。肝癌组织中NET-1mRNA的平均光密度显著高于癌旁组织(0.64与0.47,P<0.05)。(2)经激光共聚焦显微镜观察SMMC-7721细胞中NET-1抗体的表达定位于胞浆。(3)免疫组化检测NET-1多克隆抗体在同组肝癌和癌旁组织中NET-1蛋白检出率分别为96.43%(27/28)和71.43%(20/28),两者差异具有显著性意义(P<0.05)。(4)RT-PCR方法和免疫组化方法检测肝癌和癌旁组织中NET-1基因mRNA表达与蛋白表达两者之间阳性率无显著性差异,并呈显著性正相关(癌中r=0.48,癌旁r=0.40,均P<0.05)。结论:NET-1基因表达可能是肝癌发生的早期分子事件,该基因在肝癌诊断中可能有一定的参考价值。     

人醛氧化酶蛋白在肝癌中的表达及其临床意义

目的:探讨人醛氧化酶(human aldehyde oxidase, hAOX)蛋白在肝癌细胞系、肝癌组织、癌旁肝组织、肝硬化及正常肝组织中的表达及其临床意义.方法:采用Western印迹法和免疫组织化学法检测hAOX蛋白在7个肝癌细胞系、2个永生化肝细胞系、10例正常肝、12例肝硬化、57例肝癌及癌旁肝组织中的表达差异,分析其表达差异的临床意义.结果:Western印迹法检测结果表明,hAOX蛋白在MHCC-LM3、Hep3B、Huh-7和BEL-7402肝癌细胞系以及人永生化肝细胞系L-02和Chang's liver等6个细胞系中均有较高表达,在MHCC- 97L、 HepG2和SMMC-7721细胞中则为低表达.免疫组织化学检测发现,hAOX在正常肝、肝硬化组织和癌旁肝组织中高表达,在癌旁肝组织中的表达较匹配肝癌组织的高(P<0.001).Western印迹法检测结果提示癌旁肝组织中hAOX表达明显高于肝癌组织.hAOX表达与肝癌患者性别、年龄、血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)水平、乙肝表面抗原、肿瘤大小、病理学分级以及是否伴有肝硬化均无相关性(P>0.05),而与肿瘤血管侵犯和肿瘤生长方式有一定的相关性(P=0.053, P=0.011).结论:hAOX在正常肝、肝硬化、癌旁肝组织中高表达,而在肝癌组织中表达明显降低,其表达可能会影响肝癌的血管侵犯和肿瘤生长方式.     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的研究

方法 采用原位杂交方法检测肝癌组织、肝癌细胞株以及正常肝组织中TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL蛋白处理肝癌细胞株Hep2和SMMC7721,应用流式细胞仪和原位末端标记,观察经药物处理前后该细胞株的凋亡发生率。结果 60例肝癌组织及20例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织。54例(90．0％)肝癌组织不表达诱捕受体DcR1,25例(41．7％)肝癌组织不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达,不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达,两者间差异有显著性。两种肝癌细胞株中均可检测到DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。肝癌组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分期有关,低分化的肿瘤DR表达减少(P＜0．01),Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR表达显著低于I、Ⅱ期(P＜0．05)。DR表达与患者的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。结论 肝细胞肝癌普遍存在TRAILR的表达,并存在受体类型的表达差异。但单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

TC21/R-Ras 2在肝癌中的表达、亚细胞定位及意义

目的:探讨TC21基因在肝癌细胞、肝癌及癌旁组织中的表达、亚细胞定位及意义。方法:用RT-PCR检测TC 21在肝癌细胞系及人肝癌及癌旁组织中mRNA水平的表达,用免疫组化及Western印迹检测TC21蛋白在肝癌相关组织中的表达差异,用组织芯片技术结合免疫组化检测TC21蛋白的亚细胞定位。结果:RT-PCR检测结果表明TC21 mRNA在SMMC-7721、BEL-7402、Huh-7、Hep3B、HepG2、MHCC-97L、MHCC-LM3 7个肝癌细胞系及L-02和Chang liver 2株永生化人肝细胞系、7对肝癌及对应癌旁肝组织中均有较高表达;Western印迹结果表明上述细胞系中TC21蛋白表达与mRNA表达一致,TC21在4对肝癌及癌旁组织中均呈较高水平的表达;免疫组化检测结果表明TC21在人原发性肝癌、癌旁组织、硬化肝组织与正常肝组织中的表达阳性率分别为84.2%、77.2%、41.7%、0%,肝癌与肝硬化、正常肝相比显著高表达(P<0.05,P<0.01),与癌旁组织比无统计学意义(P>0.05);统计学分析结果表明TC21蛋白表达与肿瘤大小呈正相关(P<0.05),与是否肝硬化呈负相关(P<0.05);肝癌组织中TC21主要定位于肝癌细胞核,部分定位于胞质,膜定位不明显,TC21蛋白在肝癌细胞中的核定位显著高于癌旁肝细胞(P<0.001)。结论:本研究首次揭示TC21蛋白在肝癌组织中的高表达及核定位预示其在肝细胞恶性转化及肝癌发生发展中发挥重要作用。     

PTEN基因在人和树鼠句肝细胞癌组织中低表达

目的：研究人和树鼩肝癌和癌旁组织中PTEN基因的表达情况以及与肝癌侵袭转移的关系。方法：用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测人肝癌、癌旁组织和正常组织以及树鼩肝癌和癌旁组织中PTEN mRNA和PTEN蛋白的表达情况。结果：PTEN mRNA在人的正常组织、癌旁组织、肝癌组织中的表达依次降低,差异有统计学意义,t值分别为-0.955和-10.065,P值均〈0.001;树鼩肝癌组织中PTEN mRNA的表达显著低于癌旁组织中的表达,t=-3.25,P=0.004。PTEN蛋白的表达在人的癌旁组织显著高于肝癌组织,t=-2.163,P=0.038;在树鼩则无差别,t=0.757,P=0.459。结论：PTEN基因的表达缺失可能与肝癌的发生有关;用树鼩进行肝癌发病学的研究基本上是可行的。     

肝癌组织中人白细胞共同抗原和凋亡相关基因Fas、bcl-2及bax的表达及意义

目的:探讨人白细胞抗原(HLADR抗原)和凋亡相关基因Fas、bcl2及bax在肝癌中表达的意义。方法:应用免疫组化方法研究40例肝癌组织中HLADR、Fas、bcl2及bax的表达。结果:40例肝细胞癌中18例HLADR阳性,阳性率45%,癌旁肝细胞阴性。6例癌细胞Fas阳性,阳性率为15%,癌旁细胞20例阳性,阳性率500%。癌细胞bcl2阳性6例,阳性率为15%,8例癌旁细胞阳性,阳性率为20%。癌细胞bax阳性8例,阳性率为20%,癌旁细胞25例阳性,阳性率为625%。结论:提示HLADR异常表达与肝细胞癌变有关;Fas可能不是引起肝癌细胞凋亡的主要途径;bcl2和bax的变化可能影响肝细胞的凋亡状态,在肝癌发生中可能起一定作用。     

肺癌细胞的HLA抗原表达与组织类型及免疫修饰

目的 了解肺癌细胞的ＨＬＡ抗原表达及肺癌的组织类型和免疫饰对其的影响。方法 采用免疫组织化学方法和流式细胞术从体探讨肺癌组织的ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达。结果 在５６例病理确诊的肺癌患者癌组织中,腺癌７６％（２３／２９）,鳞癌８％（２／２４）表达为ＨＬＡ－ＤＲ抗原阳性,而３例小细胞癌均为阴性。腺癌的阳必同于鳞癌和小细胞癌（Ｐ〈０．０５）。ＨＡＬ－ＤＲ抗原阳性癌细胞周围可见较多的淋巴细胞浸润,二者呈明显的     

MicroRNA-182 downregulates metastasis suppressor 1 and contributes to metastasis of hepatocellular carcinoma

ABSTRACT: BACKGROUND: miR-182 is one of the most significantly up-regulated miRNAs in hepatocellular carcinoma (HCC). Metastasis suppressor 1 (MTSS1), one target gene of miR-182, plays an important role in the metastasis of cancers. However, it remains unclear that the exact function and mechanism of miR-182 and MTSS1 in HCC. METHODS: miR-182 expression was tested in 86 cases of paired HCC and normal tissues by real-time PCR and the relationships between miR-182 expression and clinicopathological parameters were analyzed. The expression of MTSS1 was evaluated by immunohistochemistry and western blot in the above tissues and its correlation with miR-182 expression was analyzed. Moreover, western blot and invasion assay were performed after transfection of pre-miR-182 or anti-miR-182 in HCC cell lines. In addition, luciferase assay and rescue experiment were performed in HCC cell lines. RESULTS: Compared with normal tissue, miR-182 was up-expression and MTSS1 was down-expression in HCC tissues. Moreover, the over-expression of miR-182 was correlated with intrahepatic metastasis (p=0.034) and poor prognosis (p=0.039) of HCC patients. There was a negative correlation between miR-182 and MTSS1 expression both in HCC tissues (r =-0.688, p<0.01) and HCC cell lines (r =-0.931, p=0.021). Furthermore, the up-regulation of miR-182 resulted in the down-expression of MTSS1 and increased invasive potential of HUH-1, and reverse results were also confirmed when the expression of miR-182 was inhibited. In addition, the results of luciferase assay demonstrated the targeted regulation of miR-182 on MTSS1. CONCLUSIONS: miR-182 could promote metastasis of HCC through the down-regulation of its target gene MTSS1. miR-182 and MTSS1 were potential prognostic markers and/or therapeutic targets in HCC.     

miR-509-3p在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞迁移侵袭的影响

背景与目的：肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界范围内致死率第三高的恶性肿瘤,microRNA（miRNA）被认为在HCC的发病机制中起重要作用。本研究旨在探讨在原发性肝癌中miR-509-3p的表达水平、细胞功能及调控的相关基因。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）技术检测miR-509-3p在46例肝癌患者组织样本、人肝癌细胞系及永生化人正常肝细胞系中的表达水平,采用transwell实验检测miR-509-3p对肝癌细胞转移的影响。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测miR-509-3p与上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）之间的关系。结果：RTFQ-PCR技术检测结果显示,miR-509-3p在46例肝癌患者的肝癌组织样本以及MHCC97H、HCCLM3和SMMC-7721肝癌细胞系中异常高表达。体外功能实验证实抑制miR-509-3p表达能降低MHCC97H和HCCLM3肝癌细胞的迁移能力。Western blot检测结果显示,在MHCC97H和HCCLM3肝癌细胞中抑制miR-509-3p的表达可以降低MMP-9和MMP-2蛋白的表达。结论：本研究表明miR-509-3p通过正向调控MMP-9和MMP-2蛋白的表达而促进肝癌细胞的迁移和侵袭。     

lncRNA LOC730101对肝细胞癌增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LOC730101对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）生物学行为的影响。方法 利用R软件分析TCGA数据库LIHC数据集374例HCC组织和50例正常组织中LOC730101的表达差异。收集2018年广西医科大学附属肿瘤医院外科手术切除、经病理确诊的40例HCC患者的癌组织及其相应癌旁组织,培养肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3、HepG2和人正常肝细胞系L02,采用qRT-PCR检测组织和细胞系中LOC730101的相对表达水平。在肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3中采用慢病毒感染法构建过表达LOC730101(OE-LOC730101)和敲低LOC730101(sh-LOC730101)的稳转细胞株,同时设置相应空白对照（control组）及阴性对照组（sh-NC组、OE-NC组）,然后采用qRT-PCR验证感染效果,CCK-8实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果 TCGA数据库分析结果显示,LOC...     

CISD2在肝细胞肝癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的:探究CDGSH铁硫结构域2(CISD2)在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织和细胞中的表达及临床病理意义。方法:采用免疫组织化学染色方法检测100例HCC肿瘤组织标本及46例癌旁肝组织标本中CISD2的蛋白表达水平,分析CISD2与临床病理特征、增殖相关蛋白Ki-67、患者生存率的相关性;运用Western blot法检测人HCC细胞株BEL7404、HepG2、SMMC-7721以及人正常肝细胞株L02中CISD2的表达,分析其表达差异。结果:CISD2在HCC肿瘤组织中的表达水平明显高于癌旁肝组织,CISD2在肝癌细胞株中的表达水平也明显高于正常肝细胞,差异有统计学意义(P＜0.01)。CISD2的表达与HCC患者的肿瘤大小（P＜0.05）以及Ki-67指数相关(P＜0.001),CISD2高表达患者的总生存率低于低表达者。结论:CISD2在HCC组织和细胞中高表达,其表达水平与患者的预后有关。CISD2可能成为HCC预后判断的标志和治疗的潜在靶点。