分化相关基因的染色体荧光原位杂交定位

为提高标记效率基因定位的准确性，将维甲酸诱导食管癌细胞系ＥＣ８７１２通过消减杂交获得的一个能抑制食管癌细胞生长的ｃＤＮＡＲＡ５３８克隆，并将其定位于人染色体８ｑ区。方法采用改良的非同位素标记方法，使生物素标记程度提高，对染色体原位杂交信号检出率有明显的影响。结果采用两次标记的探针进行染色体原位杂交，可见明显的杂交信号，观察６０个中期分裂相，两条染色单体上均出现阳性信号的核型有１８个，检出率达３０％，而仅用单次标记的探针进行杂交时，信号检出率明显降低，观察６０个分裂相，出现杂交信号的分裂相仅有７个，且多位于染色体的一条单体上。结论使用双标记荧光原位杂交技术，增加了标记分子的掺入率，提高了检测的成功率，将分化相关基因ＲＡ５３８定位于人８号染色体的长臂２区。     

Raji细胞中EB病毒染色体整合的荧光原位杂交定位

目的:对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位.方法:用Southern免疫印迹检测Raji细胞中EBV DNA,应用G显带和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位.结果:Raji细胞gDNA经BamHI酶切消化后,与同位素标记的Probe-1(EBV基因组13 232～16 189)杂交,阳性片段大小为10 kb和4 kb,与Probe-2(EBV基因组5～3271)杂交,阳性片段大小为23 kb.Raji细胞中EBV整合位点有1 P,1 q,2 q,3 P,3 q,4 q,5 q,6 q,7 P,7 q,9 q,11 P,14 q,15 q等,其中4 q,2 q,1 q,7 q为EBV DNA整合的高频位点.计数33个整合信号,分别有7,4,4,4个信号位于染色体4 q,2 q,1 q,7 q,这4个位点的信号占所有信号的构成比为64%,15号以后的染色体及2条性染色体均未见EBV整合.结论:本研究用G显带和FISH方法首次对Raji细胞中EBV整合位点进行了定位,Raji细胞中EBV整合具有一些高频位点,是一种非随机性整合.     

荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征患者染色体复杂核型变化及临床意义的研究

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者复杂核型变化及其临床意义。方法:在常规细胞遗传学(CC)方法检测基础上,运用荧光原位杂交技术(FISH),采用多种位点特异性DNA探针(染色体全染、特殊位点、双色易位融合探针)对35例MDS患者进行染色体核型分析。结果:35例MDS患者中有24例出现染色体异常,包括染色体数目及结构的异常,阳性率占68.6%。其中6例出现5号染色体单体或5号染色体长臂丢失;4例出现7号染色体单体或7号染色体长臂丢失;1例出现等臂7号染色体;2例出现8号染色体三倍体;3例出现Y染色体丢失;2例出现16号染色体倒位;5例出现复杂的染色体易位,包括t(6;?),(t8;21)(q22;q22),(t7;?),der(19)(t19;?)(q13.3;?),der(9)(t9;?)(p11;?)(t6;9),(t8;14),(t1;8)。结论:FISH技术在MDS染色体核型分析上可作为重要技术补充手段弥补CC检查的不足,对MDS准确诊断分型、合理治疗方法的选择乃至对预后的评估都具有重要的临床意义。     

45,X,der(Y)t(Y;13)不育男性患者的临床细胞和分子遗传学研究

目的:了解核型为45, X, der (Y) t (Y; 13)(q11.1; q12), -13伴无精子症、双侧乳腺轻微发育和多发性皮下结节男性患者的分子遗传学特点. 方法:进行常规染色体核型分析,用荧光原位杂交(FISH)进一步确定患者核型.用PCR-STSs以确定Yq上的断裂点.用DNA多态性方法检测位于13q12 上的BRCA 2基因拷贝数.对患者的睾丸和皮下结节进行活检. 结果:细胞遗传学和FISH证实患者SRY基因和Y染色体着丝粒位于13号染色体上.因此,患者核型为45,X,der(Y)t(Y;13)(q11.1;q12),-13.ish der(Y)(SRY , DYZ3 , wcp13 ).Y染色体长臂上的AZFa,b,和C区域全部丢失,断裂点位于sY82以下.BRCA 2基因的多态性检测无拷贝数的丢失.睾丸活检结果为唯支持细胞综合征.皮下结节病理检查为血管脂肪瘤. 结论:患者的男性表型是由于基因组中存在SRY基因.无精子症、睾丸体积小与病理结果一致,是由于Y染色体Yq11.1 → Yqter 片段丢失所致.但血管脂肪瘤的分子机制仍然不清楚.     

急性混合表型白血病合并BCR/ABL(p230)阳性一例

<正>急性混合表型白血病(mixed phenotype acute leukemia,MPAL)是白血病细胞同时表达髓系和淋系抗原标志或患者骨髓同时含有髓系和淋系两类白血病细胞,是一种少见类型的急性白血病(AL)。人abl基因位于9号染色体长臂,bcr基因位于22号染色体长臂。bcr基因断裂点集中在三个区域:主要(major bcr,M-bcr)、次要(minor bcr,m-bcr)和μ(μ-bcr)区域有6种     

膀胱癌差异表达基因BQ135232的全长克隆及意义

目的 克隆并鉴定膀胱移行上皮细胞癌(BTCC)的差异表达基因.方法 应用抑制消减杂交技术(SSH)构建膀胱癌和其正常上皮组织差异表达的cDNA消减文库,进一步利用斑点印迹杂交筛选出BTCC差异表达的基因, 对其中明显差异表达的BQ135232应用SMART RACE克隆全长,再应用免疫荧光原位杂交进行染色体定位,并应用Northern blot进行差异表达分析.结果 成功构建了人膀胱癌组织的cDNA消减文库,共含有376个阳性克隆和83个阴性克隆.随机挑出的100个阳性克隆中,76个克隆含有肿瘤差异表达的基因片段,对其进行同源性比对分析,其中有66个克隆为已知基因,其余的10个克隆代表5种未知基因.未知基因中BQ135232共有3个拷贝,染色体定位发现其位于第12号染色体近末端处.Northern杂交分析显示它在膀胱癌组织中高表达,而在正常膀胱组织中无明显表达.结论 本研究表明BQ135232是跟膀胱癌发生发展密切相关的新基因,它的成功克隆为阐明膀胱癌发生发展的分子生物学机制开辟了新的途径.     

双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立

建立：用双色FISH检测人精子染色体非整倍体的方法。方法：采用双色荧光原位杂交（FISH）方法取适量精子标本用EDTA／PBS处理,然后用二硫苏糖醇（DTT）,使精子去凝集。固定后滴片,然后与双色荧光直接标记探针杂交。结果：在OLYMPUS荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号,头部有1个绿色荧光杂交信号的精子为X染色体精子（X精子）,有1个红色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子（Y精子）。精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。结论：双色荧光原位杂交（FISH）方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化。     

中国汉族群体17号染色体上5个STR位点多态性分析

高血压的基因定位是当前"复杂性状"疾病研究的重点之一.在众多已知的高血压候选基因中,血管紧张素原基因颇受注目.已有资料提示该基因区域附近可能存在高血压的易感基因.基于此,同时为了配合原发性高血压的全基因组扫描连锁定位分析,笔者对中国群体17号染色体上5个短串联重复序列(STR)位点的多态性进行研究.已知这5个STR位点在17号染色体上的相互关系为pter-30cM-GATA64B04-35cM-GGAA7D11-7cM-GATA25A04-19cM-GATA49C09-26cM-GATA28D11-qter,平均24cM.在连锁分析基因定位中,若被测基因位于17号染色体上,则至少有2个位点显示连锁,从而为更精确的基因定位打下了基础. 1997-11-15收稿     

C—myc基因在人类染色体上的定位

本文应用染色体原位杂交方法对c-mye基因在人类染色体上的位置进行定位研究。结果表明,在100个正常人染色体分裂相中,38％的杂交银粒位于8号染色体上,其中80％在8q24位置。在其它染色体上,杂交银粒随机分布。c-myc基因的激活在许多人类肿瘤的形成和发展中起重要作用。研究其在正常及恶变细胞中位置的变化,为探讨癌变机理,诊断肿瘤,防止癌的形成提供依据。     

应用荧光原位杂交检测HBV基因在转基因小鼠染色体上的整合

目的应用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）,检测本研究中心制备的乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠目的基因的整合位点。方法采用荧光原位杂交技术,以正常小鼠染色体标本为对照,通过荧光标记的探针与转基因小鼠染色体标本进行杂交,对比分析同一中期分裂相的G显带和FISH结果。结果转基因小鼠染色体检测到一对明显的荧光信号,推测其在14号同源染色体上,而对照组无信号。结论外源HBV基因以单位点形式稳定地整合到转基因小鼠的染色体上。     

双色FISH检测21号染色体及DSCR Cosmid克隆制图

应用Ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ分别标记人２１／１３号染色体着丝粒区ＤＮＡ探针（Ｄ１３ＺＩ／Ｄ２１ＺＩ）和Ｄｏｗｎ综合征核心区（ＤＳＣＲ）ＣｏｓｍｉｄＤＮＡ探针，与人类正常二倍体染色体进行原位杂交（ＩＳＨ），并用相应的免疫荧光系统检测杂交信号，在两条１３号和两条２１号染色体着丝粒区显示绿色（ＦＩＴＣ）信号；在两条２１号染色体长臂（２１ｑ２２）显示红色（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）信号。双色ＦＩＳＨ为检测２１号染色体数目和结构异常提供了可靠的手段，为基因在染色体上制图提供了有效的方法。     

Chromosomal cryptic insertion of the terminal region and its formative mechani sm determined by fluorescence in situ hybridization

Objective To determine the karyotype of a cryptic structural abnormality and explore the mechanism of apparent chromosomal terminal deletion. Methods Fluorescence in situ hybridization(FISH) with a whole chromosome 7 painting probe and a 7q subterminal probe (7q36→qter), prepared by chromosome microdissection technique, was used to analyze a case with a history of spontaneous abortion and 7q terminal deletion detected by conventional G-banding technique.Results The case was a maternal cryptic insertional translocation between chromosome region 1p32 and 7q32→q35. The region of chromosome 7q36→qter was not inserted into chromosome 1, and the abnormal chromosome 7 was not a terminal deletion but an interstitial deletion. Conclusions Chromosome insertion of the terminal region retains its telomere, which is consistent with the concept of a three-break rearrangement. Interstitial deletion may be regarded as another mechanism for terminal deletion in the chromosome banding level. Combined with chromosome microdissection, FISH technique could be a powerful diagnostic tool for detecting chromosome structural abnormalities.     

Complex t(8;13;21)(q22;q14;q22)--a novel variant of t(8;21) in a patient with acute myeloid leukemia (AML-M2)

Variants of the t(8;21)(q22;q22) involving chromosome 8, 21, and other chromosomes account for about 3% of all t(8;21)(q22;q22) in acute myeloid leukemia (AML) patients. We report a case of AML-M2 with t(8;13;21)(q22;q14;q22), not reported earlier. Using a dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis with ETO and AML1 probes, we demonstrate an ETO/AML1 fusion signal on the derivative chromosome 8. Whole chromosome painting probes were used for chromosomes 8 and 13, to demonstrate the three-way translocation t(8;13;21)(q22;q14;q22). Involvement of chromosome region 13q14 has never been reported earlier, although region 13q12 as a variant in AML with t(8;21) has been reported earlier. The possible role of genes in this region in leukemogenesis, its response to the treatment and its clinical implications are discussed.     

用荧光原位杂交技术显示染色体易位

目的：应用荧光原位杂交技术（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）对Ｇ显带提示有染色体易位的病例进行分析,阐明易位本质。方法：以定位于待研究染色体区段的酵母人工染色体（ｙｅａｓｔ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ,ＹＡＣ）作为ＤＮＡ来源,结果：两组经Ｇ显带未能明确显示的染色体结构异常,经ＦＩＳＨ证实,一例为发生于１１号染色体与１３号染色体之间的平衡     

胃癌细胞系的细胞遗传学与分子细胞遗传学研究

对胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３、ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１进行体外传代２，收获分裂中期细胞、计算染色体众数，进行Ｇ显带核分析，并以１６号染色体着丝粒探针和３号染色体长臂涂染探针分别对ＢＧＣ－８２３和ＭＧＣ－８０３两个细胞系进行染荧光原位杂交。结果发现，在３个细胞系中存在大量的染色体数目与结构异常。其中１６号染色体和１染色体的增加涉及３号染色体的易位，以及多拷贝的５号染色体短臂等臂染色体的出现是这     

Alu-PCR联合荧光原位杂交技术鉴定bcr基因相关YAC克隆

目的制备慢性髓细胞性白血病（ＣＭＬ）ｂｃｒ基因重排的ＤＮＡ探针。方法应用Ａｌｕ－ＰＣＲ和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ） 技术,对３个酵母人工染色体（ＹＡＣ）候选克隆进行鉴定,制备ＤＮＡ探针,并经正常人外周血淋巴细胞和慢性髓细胞性 白血病患者骨髓细胞筛选。结果确定了ＹＡＣ７６５Ｅ３为非嵌合体,定位于染色体２２ｑｌｌ ｂｃｒ基因区域,而且可在Ｐｈ染 色体阳性细胞中易位至９ｑ３４。探针特异性杂交效率达９５％。结论ＦＩＳＨ技术是染色体、染色体畸变鉴定和染色体上特 殊序列定位的重要检测方法。联合应用Ａｌｕ－ＰＣＲ技术特异性扩增载体ＹＡＣ中人类基因组来源的ＤＮＡ制备探针,为慢性髓细胞白血病的诊断和监测微小残留病提供了一个新的手段。     

种植前人胚胎细胞荧光原位杂交检测染色体非整倍体

建立应用13/21染色体特异性探针荧光原位杂交技术(FISH)检测种植前人类胚胎13/21染色体非整倍体的方法。方法:应用FITC标记的13/21染色体着丝粒部位杂交的α卫星重复序列探针对27个未受精卵母细胞和36个多精受精胚胎的卵裂球进行原位杂交。结果:单倍体卵母细胞核呈现2个杂交信号,固定率80%,杂交效率67%;多精受精胚胎的卵裂球核呈现6个杂交信号,固定率72%,杂交效率65%。结论:应用荧光原位杂交技术在卵母细胞和胚胎细胞可检测13/21染色体非整倍体。     

Chromosomal and Genetic Analysis of a Human Lung Adenocarcinoma Cell Line OM

Background:

Lung cancer has become the leading cause of death in many regions. Carcinogenesis is caused by the stepwise accumulation of genetic and chromosomal changes. The aim of this study was to investigate the chromosome and gene alterations in the human lung adenocarcinoma cell line OM.

Methods:

We used Giemsa banding and multiplex fluorescence in situ hybridization focusing on the human lung adenocarcinoma cell line OM to analyze its chromosome alterations. In addition, the gains and losses in the specific chromosome regions were identified by comparative genomic hybridization (CGH) and the amplifications of cancer-related genes were also detected by polymerase chain reaction (PCR).

Results:

We identified a large number of chromosomal numerical alterations on all chromosomes except chromosome X and 19. Chromosome 10 is the most frequently involved in translocations with six different interchromosomal translocations. CGH revealed the gains on chromosome regions of 3q25.3-28, 5p13, 12q22-23.24, and the losses on 3p25-26, 6p25, 6q26-27, 7q34-36, 8p22-23, 9p21-24, 10q25-26.3, 12p13.31-13.33 and 17p13.1-13.3. And PCR showed the amplification of genes: Membrane metalloendopeptidase (MME), sucrase-isomaltase (SI), butyrylcholinesterase (BCHE), and kininogen (KNG).

Conclusions:

The lung adenocarcinoma cell line OM exhibited multiple complex karyotypes, and chromosome 10 was frequently involved in chromosomal translocation, which may play key roles in tumorigenesis. We speculated that the oncogenes may be located at 3q25.3-28, 5p13, 12q22-23.24, while tumor suppressor genes may exist in 3p25-26, 6p25, 6q26-27, 7q34-36, 8p22-23, 9p21-24, 10q25-26.3, 12p13.31-13.33, and 17p13.1-13.3. Moreover, at least four genes (MME, SI, BCHE, and KNG) may be involved in the human lung adenocarcinoma cell line OM.     

同时进行原位杂交及染色体分带的基因定位新方法

作者报道一种同时进行染色休原位杂交及染色休分带的基因定位新方法。它具有简单、快速、准确以及结果稳定、易重复等优点。细胞经常规培养制成染色体玻片后，进行染色体原位杂交。杂交信号经抗体检测放大后，染色体依次用色霉素Ａ３以及甲绿处理进行荧光反带分带（Ｒ带）。玻片在荧光显微镜下观察，只要调换滤片即可分别观察杂交点及染色体Ｒ带。两者互不干扰，结果清晰、直观，杂交点及Ｒ带持久而稳定。此方法尤其适用于做基因定位，及检测有关病毒基因在受感染细胞染色体上的插入部位。