星形胶质细胞条件培养液对体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的作用

目的：探讨星形胶质细胞(Ast)条件培养液(ACM)对体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的影响。方法：分离纯化培养大鼠大脑皮质Ast和神经元,体外模拟脑缺血再灌注损伤模型,用ACM培养损伤后的神经元,测定其神经元的活性、存活率、死亡率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率和NOS强阳性细胞的表达量。结果：ACM能使脑缺血再灌注损伤神经元的活性和存活率明显提高,使死亡率、LDH的漏出率和NOS强阳性细胞的表达量显著降低。结论：(1)体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的变化具有一定的规律性;(2)ACM对受损的神经元具有重要的保护和修复作用;(3)Ast在脑缺血预适应中发挥重要的作用。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠 Nogo-AmRNA的表达

为观察 Nogo-A m RNA在脑缺血再灌注后的动态变化 ,探索其在大脑皮质及纹状体神经元表达的意义及作用 ,应用原位杂交方法在大鼠局灶性大脑中动脉阻塞动物模型上观察脑缺血再灌注时大鼠 Nogo-A m RNA的表达。结果显示 :脑缺血再灌注大鼠缺血侧大脑皮质 Nogo-A m RNA的表达与假手术组比较明显增加 ,在 12 h内达高峰 (P<0 .0 1) ,2 4h时下降 ,48h时又升高 ,出现第二个高峰 ,然后逐渐降低 ,7～ 14 d降至基础水平 ;大脑纹状体脑缺血 1h后再灌流 ,2 h时 Nogo-A m RNA的表达明显增加 ,之后逐渐下降 ,到 2 4h时接近基础水平 ,48h时又升高 ,以后表达水平下降 ,3～ 14 d时 ,接近基础水平。结果提示 ,脑缺血后内源性 Nogo-A m RNA的表达呈动态性变化 ,参与了脑缺血后神经元的再生过程的调节。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型...     

GFAP与局灶性脑缺血(FCI)再灌注

脑血管疾病是一组严重害人类健康的疾病 ,目前已成为人类致残和死亡的重要原因之一。脑缺血再灌注损伤是脑缺血疾病临床治疗中的关键问题。星形胶质细胞 (AST)约占正常成人中枢神经系统细胞总数的 40 % ,对神经元有支持、保护、营养、修复作用 ,另外 ,AST在保持中枢神经系统离子浓度和pH值稳定 ,调节脑内葡萄糖水平中起着重要的作用 ;同时AST上还存在高亲和力谷氨酸转运体 ,能逆浓度摄取释放至细胞外液的谷氨酸 ,对维持细胞外液谷氨酸正常浓度也起着重要的作用[1 ] 。研究不同损伤条件下AST在时间、空间、形态 ,数目 ,功能状态等方面…     

小胶质细胞在脑缺血再灌注损伤中的作用

炎症反应在脑缺血再灌注损伤机制中十分重要,而脑内小胶质细胞的激活是炎症反应中的重要环节.在脑缺血再灌注损伤过程中,小胶质细胞被激活,并对神经细胞发挥了损伤与保护双重作用.小胶质细胞对脑缺血再灌注损伤机制作用的复杂性,使其在脑缺血再灌注损伤研究中的意义也越来越受到重视.研究从小胶质细胞在脑缺血再灌注损伤后被激活参与炎症反应,与活化的小胶质细胞自身对脑缺血再灌注损伤的作用对小胶质细胞在脑缺血再灌注损伤中的双重作用很有意义.     

小胶质细胞在大鼠暂时性局灶脑缺血再灌注后脑损伤区活化反应的初步研究

目的:探讨暂时性局灶脑缺血后小胶质细胞的反应规律,进一步探讨小胶质细胞在脑缺血损伤中的作用。方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,应用组织学、免疫组化染色及免疫荧光双标技术,观察大脑中动脉阻塞30 min,再灌注0.5、3、6 h以及1、3、7、14 d和28 d后脑组织的损伤情况,小胶质细胞的形态学和数量变化。结果:组织学观察结果显示:MACO30 min再灌注0.5 h后,梗死区出现神经元肿胀,脑水肿;再灌注3 h和6 h,脑水肿加重,部分神经元出现核固缩,对侧脑组织也出现水肿。脑水肿和神经元固缩在再灌注1 d时最重。再灌注3 d开始,脑水肿程度逐渐减弱,缺血区浸润的小胶质细胞增多。再灌注7 d时,缺血灶小胶质细胞浸润最明显,伴胶质结节形成,再灌注14 d,胶质瘢痕逐渐减小。再灌注28 d,大多数动物梗死区仅存少量小胶质细胞,个别未能修复的坏死灶液化并形成囊腔。免疫组化和免疫荧光双标记结果显示:假手术组小胶质细胞的胞体小,突起细长柔和。脑缺血30 min再灌注0.5 h可见小胶质细胞的体积增大,突起少而短。缺血再灌注6 h,小胶质细胞的胞体增大,突起减少或消失。再灌注1 d和3 d,小胶质细胞的数量明显多于假手术组(P0.05)。再灌注7 d,细胞数量增加达到高峰。再灌注14 d以后,小胶质细胞的数量进一步减少,再灌注28 d后小胶质细胞的数量少于再灌注7 d,但仍多于假手术组和缺血再灌注3 d(P0.05)。结论:暂时性局灶脑缺血能够引起小胶质细胞活化和增生,经历损伤性、反应性、效应性和恢复性变化四个阶段。小胶质细胞在脑缺血损伤组织的清除和损伤修复等方面发挥重要作用。     

星形胶质细胞条件培养液对体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元抗凋亡作用的研究

目的：探讨体外模拟脑缺血再灌注(Is/Rp)损伤条件下星形胶质细胞条件培养液(ACM)、经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液（ACMk）及ACM与抗呆Ⅰ号联合应用（ACM+K）对损伤神经元表达神经元特异性的烯醇化酶（NSE）、bcl-2、bax和caspase-3的影响。 方法： 先分别进行大鼠大脑皮质星形胶质细胞（Ast）和神经元的分离纯化培养及体外模拟脑Is/Rp损伤模型的建立，然后用Rp-18 h后收集的ACM与ACMk、ACM+K以1∶5的浓度来培养损伤后的神经元，最后利用免疫细胞化学染色技术测定其神经元在Is-4 h和Rp-3 h、18 h、24 h、36 h、48 h、72 h后表达NSE、bcl-2、bax和caspase-3的变化。 结果： ACM、ACMk和ACM+K均能使受损神经元表达NSE和bcl-2的能力增强，表达bax和caspase-3的能力降低。其作用：ACMk>ACM+K>ACM。 结论： （1）通过受损神经元表达NSE的变化反映出ACM对受损神经元具有重要的保护和修复作用；（2）通过受损神经元表达bcl-2、bax和caspase-3的变化表明ACM具有抗凋亡作用; (3) 抗呆Ⅰ号可通过Ast间接地保护和修复受损的神经元。     

姜黄素降低局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质缺血半暗带神经元丢失

目的探讨姜黄素减轻局灶脑缺血/再灌注损伤的可能机制。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(tMCAO)和姜黄素组(Cur,100 mg/kg腹腔注射)(n=15)。于再灌注后24 h,用Longa评分评价大鼠神经功能;RT-qPCR检测大脑皮质缺血半暗带内Shh、Ptc和Smo mRNA含量;免疫荧光共聚焦检测大脑缺血半暗带内NeuN阳性细胞数量和Gli蛋白在细胞内分布。结果再灌注后24 h,Cur组大鼠Longa评分明显低于tMCAO组(P0.05);Cur组大脑皮质缺血半暗带内NueN阳性神经元较tMCAO组明显增多(P0.05);与sham相比,tMCAO组大脑皮质半暗带内Shh、Ptc和Smo mRNA表达明显升高(P0.05),Cur组上述mRNA进一步升高(P0.05);sham组缺血半暗带内Gli-1蛋白主要分布在细胞质,缺血后Gli-1蛋白部分转位至细胞核,Cur组Gli-1蛋白主要分布在细胞核。结论姜黄素治疗可促进局灶脑缺血/再灌注模型大鼠神经功能恢复,减少大脑皮质缺血半暗带内神经元丢失。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠不同脑区中PSD- 95的表达

近年来，ＰＳＤ－９５（Ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ ｄｅｎｓｉｔｙ－９５）独特的生物效应，以及其在神经元中的特殊作用，受到国外许多研究者重视，但国内尚未见相关报道。ＰＳＤ－９５（也称作ＳＡＰ９００）是一种相对分于质量（Ｍｒ）为９５０００的细胞支架蛋白，在神经元突触后致密物质（ＰＳＤ）中含量丰富［１］。ＰＳＤ－９５可和中枢神经系统的各种信号分子相互连接，有利于这些信号分子在神经元突触后的簇集和定位从而直接凋控神经元对神经传导信号的免疫应答，在突触发育和再塑中具有重要的意义［２，３］。本研究通过制备局灶…     

大鼠局灶脑缺血/再灌注模型TGTβ的表达

用线栓法模型观察脑缺血再灌注时ＴＧＦβ在脑组织的表达情况。大鼠随机分为假手术组、空白对照组、Ｏ２４Ｒ０、Ｏ４Ｒ２４、Ｏ２Ｒ０．５、ＯＺＲＺ、ＯＺＲ４、ＯＺＲＳ、Ｏ２Ｒ２４、Ｏ２Ｒ４８、Ｏ２Ｒ９６组，每组各６只，１２组共７２只。动物经灌注固定后进行苏木素一伊红，ＴＧＦβ１、β２免疫组化染色和ＢＳＬ凝集素组化染色。结果显示ＴＧＦ６１的表达有两种模式，即早期的普遍表达和后期的与损伤有关的表达。ＴＧＦ６２的表达只有相当于ＴＧＦ６１的第二期反应。大部分ＴＧＦ６来源于小胶质细胞和吞噬细胞。ＴＧＦβ１在神经元的表达是神经元存活的标志，对保护半暗带神经元有重要意义。     

银杏叶提取物对局灶性脑缺血再灌注后GFAP表达的影响

目的研究银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba,EGB)对局灶性脑缺血再灌注后星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法大脑中动脉插线法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。75只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、EGB治疗组。缺血2h再灌注48h后,采用免疫组织化学法检测脑组织内GFAP蛋白的表达。结果缺血再灌注后可诱导脑组织GFAP表达增强,EGB可抑制缺血再灌注后GFAP的表达(P<0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注后,可诱导脑组织GFAP表达增强,EGB可抑制脑缺血后星形胶质细胞GFAP的高表达,提示EGB可能对缺血诱导的星形胶质细胞活化具有抑制作用,这可能是EGB抗脑缺血损伤保护神经元作用的机制之一。     

局灶脑缺血区星形胶质细胞可塑性变化的实验研究

为了探索星形胶质细胞在慢性局灶脑缺血区的分布以及形态和数量变化的时期 ,进而探讨其在脑缺血灶恢复中的作用 ,本研究运用免疫组织化学技术对大鼠进行了研究。结果证明 :胶质纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞在脑梗塞灶的周围发生肥大和增生性改变 ,其突起的变化尤为显著 ;粗大的突起呈纤维状 ,并相互交织呈密集的网 ,其末端向脑梗塞灶的中央延伸。其变化发生于脑缺血第 1周 ,脑缺血第 2周最显著 ,在 6周的脑缺血期间 ,显示持续性变化。 S- 10 0阳性星形胶质细胞在脑梗塞灶周围区的肥大和增生性变化 ,发生于脑缺血第 3d,并持续到脑缺血 4周 ,其形态学改变没有胶质纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞显著。本研究提示慢性局灶脑缺血诱导星形胶质细胞发生形态学的可塑性变化 ,这种变化积极地参与脑梗塞灶的修复过程     

插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究

目的：介绍一种简便易行的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备方法。方法：用自制的插线,从颈外动脉向颈内动脉插入,栓塞大脑中动脉。结果：插线前端经自制装置的处理和插线直径与动物体重不同组合的选择,插线栓塞大脑中动脉的成功率可达８１．３％￣９４．５％。不同缺血时间再灌注总的成功率可达７０％￣８５％。结论：该方法简便快捷（手术时间３０分钟）,结果可靠,适合于形态学对比观察。     

尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的:研究尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤是否具有神经保护作用。方法:在大鼠大脑中动脉堵塞(MCAO)前30min给予腹腔注射尼古丁酒石酸盐溶液,观察局灶性脑缺血2h再灌注24h后,大鼠神经行为学评分及脑梗死容积的变化。结果:再灌注24h后,与单纯缺血再灌注组相比,给予尼古丁酒石酸盐溶液注射可以改善动物的神经行为学评分、减少脑梗死容积百分比(P0.05)。结论:尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。     

大鼠脑缺血再灌流时神经元损伤与星形胶质细胞的反应

为探讨星形胶质细胞在缺血性神经元损伤中的作用及其与神经元损伤的关系 ,本实验阻塞大鼠大脑中动脉 2 h,再灌流0 .5～ 48h建立短暂局灶性脑缺血模型 ,进行 H-E染色 ;通过胶质原纤维酸性蛋白和细胞核增殖抗原免疫组化单重或双重反应 ,TU NEL和胶质原纤维酸性蛋白免疫组化双重反应观察了神经元和星形胶质细胞的反应。结果表明 :再灌流 2 4h缺血区面积最大 ,再灌流 6h开始出现神经元不可逆变性 ,2 4h梗塞成熟 ;星形胶质细胞表现为反应性、营养不良性和退形变三种不同的形态特点。再灌流 48h时星形胶质细胞数量开始增多。 48h之内星形胶质细胞无增生 ,且有少量星形胶质细胞凋亡。这些结果提示脑缺血时星形胶质细胞反应与神经元损伤密切相关 ,反应性星形胶质细胞是其积极应答神经元损伤的结果 ,在维持神经元存活中起作用。     

缺血再灌注对大鼠神经元与星形胶质细胞的影响

应用免疫组织化学单标记法分别观察大鼠在大脑中动脉阻塞再灌注时胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和Fos蛋白在大脑皮质内表达的时间规律,并用免疫组织化学双重标记法观察GFAP和Fos蛋白表达的相互关系。结果发现在缺血1h再灌注2h时,大脑皮层的星形胶质细胞被激活,细胞体积增大,突起粗大,呈GFAP阳性。星形胶质细胞的反应直至48h依然强烈。被激活的星形胶质细胞和神经元表达Fos蛋白,并呈现时程变化规律。结果提示星形胶质细胞可能和神经元一起参与了大脑皮层缺血再灌注后的变化。     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后缺血脑区缓激肽含量的变化

目的研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注后缺血脑区缓激肽含量的变化。方法用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞的脑缺血/再灌注动物模型,用免疫细胞化学法结合图像分析技术,检测缺血脑区缓激肽样免疫反应阳性物的平均光密度(A)值作为缓激肽的相对含量,比较局灶性脑缺血3h组、假手术对照组、正常对照组和再灌注30min、2h、4h、16h组缓激肽的相对含量。结果缺血脑区缓激肽样免疫反应阳性物的A值于脑缺血3h/再灌注2h后明显增高(P<0.05),随后下降至增高前水平。结论大鼠局灶性脑缺血/再灌注后,缺血脑区缓激肽含量于再灌注2h后明显增高,其可能在脑缺血后脑水肿的发生中起着重要作用。     

局部亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经营养因子-3表达的影响

目的：观察病变侧缺血至再灌期亚低温(32～33 ℃)对局灶脑缺血再灌注后梗死体积和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)表达的影响。方法：采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血30 min后应用负反馈控温半导体制冷块对大鼠病变侧给予亚低温治疗并持续至再灌期。处死大鼠前进行神经功能缺陷评分,氯化三苯四氮唑染色及计算机图像分析技术观察脑梗死体积,采用免疫组织化学方法检测NT-3表达,末端脱核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术观察神经细胞凋亡情况。结果：同常温缺血组相比,亚低温缺血组梗死体积明显减少,NT-3阳性细胞数量增加,凋亡的神经细胞明显减少(均P<0.05)。神经功能缺陷评分亚低温缺血组明显低于相应时间点常温缺血组(P<0.05或P<0.01)。结论：病变侧亚低温可通过增加脑缺血后NT-3的表达水平,抑制细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的改进与探讨

目的提供一种比较简易的大鼠局灶性脑缺血／再灌注模型制备方法。方法应用SD雄性大鼠，线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，选择在颈总动脉（CCA）分叉处切口，使线栓从CCA顺行进入颈内动脉（ICA）。造模后直接将栓线缝合在皮内，再灌注时拔出一定长度拴线，使栓线回至CCA即可。通过神经功能检测，红四氮唑（TTC）染色和病理学检查等方法评价该模型的可靠性。结果大鼠手术后神经功能缺损明显，TTC染色清楚显示了梗死病灶，病理学检查显示典型病理改变。结论该改良方法术式简便，缺血效果可靠，可以用于脑缺血再灌注的研究。