壳聚糖基因纳米粒子诱导L02细胞凋亡的机制研究

目的研究壳聚糖基因纳米粒子（CGNP）引起人正常肝细胞系L02细胞凋亡的分子机制。方法通过复凝聚方法制备CGNP,用原子力显微镜和粒度分析仪进行纳米粒子的表征;将浓度分别为5,10,30,50ug／mL（以DNA含量计）的CGNP与L02细胞共育,采用荧光分析技术检测活性氧自由基（ROS）的含量,运用Western-blot方法检测细胞色素C（Cyt C）的释放。结果CGNP平均粒径为115．6nm,粒径范围在74．14～136．28nm。当CGNP的浓度大于30ug／mL时,胞浆中有少量的Cyt C释放;当浓度大于50ug／mL时,ROS的量显著增加。结论当达到一定浓度时,CGNP可影响细胞线粒体的功能,从而引起细胞凋亡。     

生物相容性Fe3O4@SiO2纳米粒子的合成及性能

背景：Fe₃O₄纳米粒子具有良好的磁学特性,SiO₂具有良好的生物相容性,Fe₃O₄@SiO₂复合纳米粒子有望成为靶向治疗的载体。 目的：采用反相微乳液法合成生物相容性的Fe₃O₄@SiO₂纳米粒子。 方法：首先,以FeCl₃•6H₂O、FeCl₂•4H₂O、油酸、氨水等为原料,采用一壶化学共沉淀法合成油酸修饰的疏水性Fe₃O₄纳米粒子。随后,将油酸包裹的Fe₃O₄纳米粒子分散于环己烷中,然后将Triton-X100、正己醇及水在搅拌条件下加入到上述溶液,形成稳定的反相微乳液;在反相微乳液中,以氨水为催化剂,使正硅酸四乙酯水解、缩合,从而获得Fe₃O₄@SiO₂复合纳米粒子。 结果与结论：①透射电镜、X射线衍射显示：采用一壶化学沉淀法合成的Fe₃O₄具有尖晶石结构,平均粒径约为3.5 nm;微乳液法能将SiO₂成功包覆于Fe₃O₄表面,形成平均粒径为40 nm的均一Fe₃O₄@SiO₂复合纳米粒子。②磁性能分析显示：Fe₃O₄纳米粒子包裹后饱和磁化强度下降,但包裹前后矫顽力趋于零,均显示超顺磁性。③MTT结果显示纳米粒子与人脐静脉细胞融合细胞(EA.hy926)共培养24 h时Fe₃O₄@SiO₂组吸光度高于对照组(P < 0.05);细胞培养48,72 h,两组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。结果表明经反相微乳液法合成的Fe₃O₄@SiO₂纳米粒子是一种优良的生物材料,其具有稳定、易分散及超顺磁性等特性。     

STI571及As2O3诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：探讨比较STI571和As₂O₃诱导K562细胞凋亡及抑制其生长的可能机制，为进一步揭示慢性粒细胞白血病（CML）的发病机制及STI571和As₂O₃的临床应用提供理论依据。方法：采用细胞培养、台盼蓝染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、Western blot等方法研究STI571和As₂O₃分别对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用，检测两种药物在诱导K562细胞凋亡的过程中某些凋亡相关蛋白的表达。结果：STI571和As₂O₃均可抑制K562细胞的增殖、诱导其凋亡。两种药物均可下调Bcl-XL的表达，并裂解caspase-3。As₂O₃作用浓度为2 μmol/L时其下调Bcl-XL的作用与1 μmol/L时没有明显的差别，但是其裂解caspase-3的作用较后者更加明显。结论：STI571作为凋亡诱导剂，可通过抑制Bcl-XL的表达从而激活caspase-3，诱导K562细胞凋亡；As₂O₃诱导K562细胞凋亡过程中伴有caspase-3的激活，但其作用并非完全是通过下调Bcl-XL蛋白水平而实现的。     

陡脉冲电场对体外人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用

为研究陡脉冲电场的诱导凋亡作用,以体外人肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,采用Annexin V-FITC/PI双染色并利用流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸(PS)外翻,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段化.实验发现,陡脉冲电场能有效(P<0.05)地使PS外翻,并且微秒级陡脉冲(μsSPEF)比纳秒级陡脉冲(nsSPEF)更有效(P<0.05);陡脉冲电场能使DNA降解片段化,且nsSPEF比μsSPEF更有效.实验结果表明,陡脉冲电场能有效诱导体外人肝癌细胞凋亡,其机理与陡脉冲电场非热效应及其频谱特性有关.μsSPEF主要作用于细胞膜,而可能通过外源性通路诱导细胞凋亡;nsSPEF主要作用于细胞核和线粒体等胞内细胞器,可能通过内源性通路诱导细胞凋亡.实验结果为陡脉冲电场杀伤肿瘤细胞的机制和参数选择提供了依据.     

维生素K3对HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的:观察维生素K₃(VK₃)对HL-60细胞凋亡的诱导作用。方法:通过形态学、DNA电泳、Annexin V标记法检测VK₃作用后HL-60细胞的凋亡发生情况。结果:2、5、10、20 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞48h后凋亡发生率分别为8.76%、9.7%、18.54%、75.4%;10 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞24、48、72、96 h后凋亡发生率分别为11.35%、18.54%、21.22%、37.54%。结论:VK₃能诱导HL-60细胞发生凋亡,并具有一定的量效和时效关系。     

维生素E对H2O2诱导的人甲状腺细胞凋亡的保护作用

目的研究维生素E对H2O2引起的人甲状腺细胞凋亡的影响。方法取良性甲状腺腺瘤手术中的腺瘤旁正常甲状腺组织进行细胞培养。预防组加VE(50μmol/L)或无血清培养液后再加入不同浓度H2O(2200～800μmol/L),治疗组预先加入不同浓度H2O(2200～800μmol/L)后再加入VE或无血清培养液刺激单层培养的甲状腺细胞,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术(FCM)检测各组甲状腺细胞凋亡率。结果预防组和治疗组单纯200～800μmol/L H2O2作用24 h均可使甲状腺上皮细胞存活率降低、凋亡率升高(P<0.01),并呈浓度效应关系。与相应单纯H2O2处理相比,加入50μmol/L VE预干预及治疗后,细胞存活率升高、凋亡率下降,400、800μmol/L H2O2处理时上述反应尤为显著(P<0.05)。结论维生素E对H2O2诱导的人甲状腺细胞凋亡具有保护作用。     

1,25-二羟基维生素D3协同转染反义端粒酶RNA诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察在抑制肝癌细胞端粒酶活性表达情况下,1,25-二羟基维生素D3(1,25-VD3)对肝癌细胞凋亡的影响。方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTR导入维生素D3受体(VDR)阳性的肝癌细胞株SMMC7721细胞中培养。细胞克隆转移扩大培养,将其分为对照组、药物组、转染组和转染药物组。添加1,25-VD3,分别作用于转染药物组、药物组,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和电子显微镜检测肝癌细胞凋亡。结果转染组和对照组细胞的端粒酶活性分别为0.686和1.685,说明反义端粒酶RNA可显著降低肝癌细胞端粒酶活性。对照组、药物组、转染组和转染药物组细胞凋亡率分别为3.4%、12.2%、8.8%、23.6%;差异有显著统计学意义(P<0.01)。超微结构检查也证实存在凋亡发生。1,25-VD3或转染反义端粒酶RNA对肝癌细胞有促细胞凋亡作用,两者协同对肝癌细胞凋亡作用显著增强。结论转染反义端粒酶RNA,可降低肝癌细胞端粒酶活性,可显著增强1,25-VD3对肝癌细胞的促凋亡作用,并且对细胞的增殖也存在明显的抑制作用。     

丹参单体通过下调粘着斑激酶诱导H2O2刺激的肝星状细胞凋亡

目的: 研究丹参单体IH764-3对H₂O₂刺激的肝星状细胞(HSCs)凋亡的诱导作用以及此过程中粘着斑激酶(FAK)的变化。方法: 通过直接细胞计数法测定HSCs增殖;光学显微镜及透射电镜技术观察凋亡细胞的形态学改变,并应用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)联合标记法检测HSCs的凋亡率;运用RT-PCR方法观察FAKmRNA表达。结果: H₂O₂具有刺激HSCs增殖的作用;丹参单体IH764-3能够诱导H₂O₂刺激的HSCs凋亡,并呈剂量依赖关系:10mg/L、20mg/L、30mg/L及40mg/LIH764-3干预48h后各组凋亡率分别为6.35%、9.28%、15.10%、19.69%,而H₂O₂组为2.30%;30mg/LIH764-3干预HSCs不同时间(12h、24h、48h)的凋亡率分别是6.73%、10.34%、15.10%,呈时间依赖关系;RT-PCR分析表明FAK基因表达强度在加入IH764-3后2h即明显下调,10mg/L,20mg/L,30mg/L及40mg/L组分别比H₂O₂组低了68.71%、71.00%、86.72%、95.16%。结论: 丹参单体IH764-3可以诱导H₂O₂刺激的HSCs凋亡,下调FAKmRNA表达是其诱导HSCs凋亡的机制之一。     

人参皂苷Rg3对人肝癌细胞增殖、迁移、黏附和凋亡的影响及其作用机制

目的研究人参皂苷Rg3对不同肝癌细胞增殖、迁移、黏附和调亡的影响及其作用机制。方法以人肝癌细胞系Hep G2、QGY细胞以及人成纤维细胞系HEL细胞为研究对象,运用MTT、细胞黏附、Transwell以及流式细胞仪观察Rg3对肝癌细胞的增殖、黏附、侵袭和转移以及细胞凋亡的影响;结合Western blot检测Rg3作用于Hep G2和QGY细胞后CD44、VEGF蛋白的表达。结果 Rg3能特异性抑制Hep G2和QGY肝癌细胞增殖、黏附、侵袭转移并显著诱导细胞凋亡(P0.05);Hep G2和QGY肝癌细胞暴露于Rg3后细胞中CD44和VEGF蛋白表达显著下调(P0.05)。结论Rg3能抑制人肝癌细胞增殖、黏附、侵袭转移并诱导细胞凋亡,其功能与CD44和VEGF蛋白表达密切相关。     

热休克蛋白参与PI3K/Akt 介导H2O2 预处理的抗凋亡作用

目的: 探讨热休克蛋白(HSP)是否参与PI3K/Akt信号通路介导的H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。方法: 利用PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗高浓度H₂O₂诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2) 损伤组;(3)预处理＋损伤组; (4)LY294002＋预处理＋损伤组;(5) LY294002组;(6) quercetin＋预处理＋损伤组;(7) 17-AAG＋预处理＋损伤组;(8) 溶剂对照组。应用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定caspase-3的活性,免疫印迹法(Western blotting)测定HSP的表达水平。结果: 100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/L H₂O₂引起的细胞凋亡,使caspase-3的活性降低,同时上调HSP70和HSP90的表达。HSP70和HSP90的抑制剂quercetin和17-AAG拮抗H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。 PI3K抑制剂LY294002不仅拮抗了H₂O₂预处理抗细胞凋亡的作用,并且抑制H₂O₂预处理对HSP70和HSP90的表达上调。结论: PI3K/Akt通路、HSP70和HSP90均参与H₂O₂预处理诱导的细胞保护作用。并且HSP70和HSP90参与PI3K/Akt信号通路介导H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。     

维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的凋亡诱导作用

目的： 观察维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M的凋亡诱导作用。方法： MTT增殖抑制实验；吖啶橙染色检测细胞凋亡；流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化；NAC抗氧化试验；DCFH-DA荧光分光光度法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平；RT-PCR检测GSH-Px和CAT基因表达的改变。结果： 60 μmol/L剂量以上的VK3均可以有效抑制PC-3M细胞的增殖，并且呈时间剂量依赖性；联合应用不同剂量NAC（5、10、20、40、80 μmol/L）与VK₃（60 μmol/L）共同作用于PC-3M细胞后，结果显示与单独应用VK3相比各浓度的NAC能不同程度增加细胞存活率；吖啶橙染色证明在VK₃（60 μmol/L）作用12 h后，PC-3M细胞出现凋亡的形态学改变；流式细胞计数结果显示VK₃（60 μmol/L）作用12 h后细胞出现凋亡峰，细胞周期被阻滞于G₀/G₁期；DCFH-DA荧光染色，在VK₃作用后1-2 h，细胞内即出现了较强的荧光表达；RT-PCR结果显示，在VK₃作用后细胞内的CAT和GSH-Px两种主要的抗氧化酶类表达降低。结论： VK₃可能主要通过引起PC-3M细胞内氧化应激诱导细胞发生凋亡。     

二甲双胍对H2O2诱导的肺泡上皮细胞的炎症反应及增殖、凋亡的作用研究

目的 探究二甲双胍通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人肺泡上皮细胞炎症反应、增殖、凋亡的影响。方法 体外培养人肺泡上皮细胞A549并建立H₂O₂损伤细胞模型,分为对照组(不做干预)、H₂O₂组(以400μmol/L H₂O₂刺激A549细胞24 h构建体外急性肺损伤细胞模型)、1.25 mmol/L二甲双胍组(H₂O₂组基础上加入1.25 mmol/L二甲双胍)、2.50 mmol/L二甲双胍组(H₂O₂组基础上加入2.5 mmol/L二甲双胍)、5.00 mmol/L二甲双胍组(H₂O₂组基础上加入5.00 mmol/L二甲双胍)、SB 203580组(H₂O₂组基础上加入10 mmol/...