AS2O3对胶质母细胞瘤细胞增殖的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）及其联合地塞米松（DEX）对胶质母细胞瘤细胞的增殖抑制作用。方法实验分为空白对照组、As2O3组、DEX组、As2O3-4-DEX组，经倒置显微镜观察细胞形态、细胞计数、MTT法、流式细胞计数等方法研究As2O3及其联合DEX作用对胶质母细胞瘤细胞的增殖抑制作用。结果As2O3能够且呈浓度和时间的依赖性抑制BT-325细胞的增殖；DEX具有明显的协同效应。结论As2O3及其与DEX联合用药可能成为治疗胶质母细胞瘤的一条新途径。     

2-羟基戊二酸对胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨2-羟基戊二酸(2-HG)对异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型胶质母细胞瘤增殖、迁移的作用.方法 通过细胞培养,细胞增殖实验(CCK-8)检测不同浓度(5、10、15、20、30、40 mmol/L)2-HG对胶质瘤细胞的增殖抑制作用,细胞迁移实验检测细胞迁移能力,聚合酶链式反应(PCR)检测相关基因mRNA的表达.结果 外源性加入2-HG使胶质母细胞瘤细胞形态发生间质样改变,随浓度的升高作用愈明显,呈浓度依赖性,促进胶质母细胞瘤细胞的增殖和迁移,下调上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达,上调间质细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和β-链蛋白(β-catenin)的表达.结论 2-HG能够促进IDH野生型胶质母细胞瘤的增殖、迁移.     

肉碱-酰基肉碱转位酶对胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移的影响

目的:研究肉碱-酰基肉碱转位酶(CACT)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法:采用GEPIA(http://gepia.cancer-pku.cn/)在线数据库分析和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CACT基因在GBM组织和癌旁正常脑组织的表达;采用siRNA敲低GBM细胞中CACT的表达水平,再通过平板克隆形成实验、CCK-8实验和EdU实验验证CACT对GBM细胞增殖能力的影响;通过划痕实验验证CACT对GBM细胞迁移功能的作用;最后通过Western blot检测CDK2、MMP-2和MMP-9的表达水平。结果:GBM组织中CACT的表达水平高于癌旁正常脑组织;敲低CACT可以抑制GBM细胞的增殖和迁移,CACT表达降低可以抑制GBM细胞系中CDK2、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结论:CACT可以调控GBM细胞的增殖和迁移,可能成为GBM潜在的治疗靶点。     

FoxO3在复发胶质母细胞瘤中的表达及其对替莫唑胺耐药性的影响

目的：研究抑癌基因FoxO3在复发胶质母细胞瘤中的表达及其在胶质母细胞瘤替莫唑胺耐药中的潜在作用机制。方法：通过基因芯片分析、qPCR和Western blot检测FoxO3在原发和复发胶质母细胞瘤中的表达,并检测其在替莫唑胺耐药细胞株中的表达。通过FoxO3过表达芯片筛选其下游靶基因,并进一步探讨FoxO3在胶质母细胞瘤替莫唑胺耐药中的作用机制。结果：FoxO3 mRNA及蛋白的表达在复发胶质母细胞瘤组织及耐替莫唑胺细胞系中明显减低。过表达FoxO3可通过抑制跨损伤修复蛋白REV3L的表达来增加胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺的敏感性。结论：FoxO3在复发胶质母细胞瘤组织中表达减低。FoxO3表达减低与胶质母细胞瘤化疗耐药密切相关。FoxO3可能通过抑制REV3L基因表达增加胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性。     

PRL-3基因对胶质母细胞瘤替莫唑胺敏感性的影响

目的 研究PRL-3基因在胶质母细胞瘤中的表达及其对胶质母细胞瘤替莫唑胺敏感性的影响。方法 通过TCGA数据库分析PRL-3基因在胶质母细胞瘤及正常组织中表达情况,进一步选取空军军医大学第一附属医院诊治的15例胶质母细胞瘤患者术后肿瘤组织（原发性10例,复发性5例）,采用免疫组织化学法检测PRL-3阳性细胞在胶质母细胞瘤中的表达情况。选取人胶质母细胞瘤LN229细胞系及替莫唑胺耐药的LN229/TMZ-R细胞系,采用qRT-PCR、Western blot检测PRL-3 mRNA及蛋白的表达情况。选取LN229、SHG44细胞系及对替莫唑胺不敏感的U87细胞系,分别设置正常组、对照组、空载质粒组、PRL-3过表达组、PRL-3下调组。比较正常组、空载质粒组、PRL-3过表达组、PRL-3下调组PRL-3 mRNA表达情况以验证PRL-3过表达及下调是否成功。然后将对照组、PRL-3过表达组、PRL-3下调组采用替莫唑胺（LN229、SHG44细胞系加入替莫唑胺100μmol/L,U87细胞系加入替莫唑胺500μmol/L）进行处理,正常组不处理,72 h后采用CCK-8法测定细胞活性。...     

TRAF7在胶质母细胞瘤中的表达及其对肿瘤增殖和迁移的影响

目的：检测TRAF7在正常脑组织和胶质母细胞瘤中的表达情况,并且进一步分析TRAF7对胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移能力的影响。方法：在中国脑胶质母细胞瘤基因组计划（CGGA）数据库中分析正常脑组织及胶质母细胞瘤中TRAF7的表达情况和与预后的关系,在U87和LN229细胞转入TRAF7的小干扰RNA（si?TRAF7）以敲低TRAF7的表达,通过CCK8试验、克隆形成试验及划痕试验观察胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移能力的改变。结果：胶质母细胞瘤中TRAF7的表达量明显高于正常脑组织,胶质母细胞瘤中TRAF7高表达组较低表达组预后差,下调TRAF7表达能够显著抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖和迁移能力。结论：TRAF7在胶质母细胞瘤中明显高表达并且其表达量与胶质母细胞瘤患者临床预后相关,TRAF7促进胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移。     

TRIM22通过PI3K/AKT信号通路调控胶质母细胞瘤增殖、侵袭和迁移的研究

目的：探讨基因TRIM22在人脑胶质母细胞瘤中的表达及对增殖、侵袭和迁移等生物能力的影响。方法：通过TCGA数据库分析胶质母细胞瘤组织和正常脑组织中TRIM22表达水平,采用实时定量PCR（qRT?PCR）和Western blot 两种方法分别检测胶质母细胞瘤细胞系U87和U251中TRIM22 mRNA和蛋白表达水平。应用Lipofectamine 3000将2种TRIM22?siRNA分别转染至U87及U251细胞中,再分别通过qRT?PCR和Western blot检测胶质母细胞瘤细胞中TRIM22敲低效率。 应用CCK?8法、细胞平板克隆形成实验来评估TRIM22敲低后对于细胞增殖能力的影响;应用细胞划痕实验和Transwell实验检测TRIM22敲低后细胞侵袭和迁移能力的变化。应用Western blot检测TRIM22敲低对PI3K/AKT信号通路蛋白和上皮间质化标记蛋白（N?cadherin、Vimentin、E?cadherin）表达的影响。结果：在U87及U251细胞中敲低TRIM22后,细胞增殖、侵袭和迁移都明显减弱,p?AKT（S473）、N?cadherin、Vimentin表达水平则明显降低,E?cadherin表达水平明显升高。结论：TRIM22可能通过调节PI3K/AKT信号通路调控胶质母细胞瘤增殖、侵袭和迁移能力。     

DNA甲基化转移酶3B在脑胶质母细胞瘤中的差异表达

目的 脑胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中存在广泛的基因组低甲基化,本研究检查了DNA甲基化转移酶3B (DNA methyltransferase 3B,DMNT3B)是否在这种肿瘤中的表达和突变情况,以期寻找肿瘤基因组低甲基化发生的原因。方法用RNA抽提试剂盒从 25例人脑胶质母细胞瘤组织中提取总RNA,用反转录聚合酶链反应方法扩增 DNMT3B 的cDNA,然后测序,所得序列经DNASTAR软件与NCBI发表的正常序列进行比对。结果 从25例脑胶质母细胞瘤样本中的成功扩增了全长 DNMT3B cDNA,测序分析结果显示 DNMT3B 基因在该肿瘤样本中差异性存在多种剪接变异体,以 DNMT3B-V1、DNMT3B-V3、DNMT3B-V7 为主。没有发现改变氨基酸序列的点突变。结论 DNMT3B 基因在脑胶质母细胞瘤中没有点突变,但存在多种剪接变异体(以 DNMT3B-V3、DNMT3B-V7 为主),其是否为脑胶质母细胞瘤的广泛基因组低甲基化的原因尚有待进一步研究。     

胶质母细胞瘤微血管内皮细胞中Nogo-B的表达意义

目的:研究人胶质母细胞瘤(GBM)源性微血管内皮细胞(GBMDMEC)和正常人脑组织源性微血管内皮细胞(GBMDMEC)中Nogo-B的功能表达,了解Nogo-B在GBM血管生成中起的作用.方法:通过显微外科神经手术获得14例GBM标本,利用CD105免疫磁珠内皮细胞分选系统纯化内皮细胞,采用免疫组化染色,Real-time PCR和Western Blot等方法检测其中Nogo-B在蛋白和mRNA水平上的表达.结果:与正常脑组织源性微血管内皮细胞相比较,Real-time PCR和Western Blot检测结果发现,在GBM源性微血管内皮细胞中Nogo-B表达上调.结论:Nogo-B在恶性GBM中mRNA和蛋白水平上表达均显著上调,证明Nogo-B参与了GBM新生血管形成,与GBM发生发展密切相关.     

胶质母细胞瘤PTEN基因突变和ki-67表达的研究

目的 :研究胶质母细胞瘤中PTEN基因突变及Ki- 6 7表达情况 ,并探讨其与两者之间的关系。方法 :对10 2例胶质瘤 (包括 4 2例胶质母细胞瘤 )石蜡切片中PTEN基因进行聚合酶链反应～单链构象多态性分析(PCR -SSCP) ,检测PTEN基因突变。同时采用免疫组化S -P法 ,检测胶质瘤中Ki- 6 7的表达。结果 :4 2例胶质母细胞瘤中有 11例发生PTEN基因突变 ,突变率为 2 6 % (11/ 4 2 ) ,显著高于其它 6 0例胶质瘤 (χ2 =11.6 2 ,P <0 .0 1) ;胶质母细胞瘤Ki- 6 7的平均标记指数为 2 4 .6 1± 6 .81,其它胶质瘤的平均标记指数为 6 .72± 4 .6 8,后者Ki- 6 7指数显著小于前者 (u =5 .6 783,P <0 .0 1)。结论 :PTEN基因突变在胶质母细胞瘤的发生、发展中起重要作用 ;胶质瘤中Ki- 6 7的表达程度与病理恶性程度呈正相关 ;胶质母细胞瘤中PTEN基因突变与Ki- 6 7表达强度呈正相关。     

抑制Pygo2表达对U251细胞增殖的影响

目的 构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响.方法 针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体.经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶...     

成骨细胞培养微环境对Hela细胞STAT_3的转录表达及细胞增殖的调控作用

目的:探讨成骨细胞微环境(OBM)对Hela细胞STAT3转录表达及细胞增殖的影响。方法:分离培养大鼠成骨细胞,取其培养液与DMEM血清培养基按照1:1比例混合,培养Hela细胞。分为对照组与实验组(添加成骨细胞培养液)。采用Real time PCR检测STAT3的mRNA水平,CCK-8法检测Hela细胞增殖。结果:成功分离成骨细胞,并取其培养液作用于宫颈癌Hela细胞。与对照组相比,在24 h、48 h、72 h,实验组STAT3mRNA水平分别升高约28.2%、37.5%、32.1%,实验组细胞增殖能力分别升高约11.7%、29.5%、24.6%。结论:OBM可上调宫颈癌Hela细胞中STAT3的转录表达并促进细胞增殖。     

下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。     

UNBS5162对脑胶质瘤细胞增殖和转移的抑制作用及机制

目的 通过体外实验,研究UNBS5162对脑胶质瘤细胞增殖和转移的抑制作用,并对其分子机制进行初步探究.方法 采用10μmol/L UNBS5162处理脑胶质瘤细胞U251细胞为实验组,二甲基亚砜处理为对照组,分别应用CCK8实验、Tran-swell实验、流式细胞凋亡实验检测UNBS5162对U251细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡的影响,应用蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平.结果 实验组细胞增殖能力低于对照组(P<0.05);并且其细胞迁移数和侵袭数均低于对照组[(18±5)个比(32±2)个,P<0.05;(30±2)个比(78±4)个,P<0.05];与对照组相比,实验组细胞凋亡率提高[(24.46±2.03)％ 比(5.75±0.74)％,P<0.05],且抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低、促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达量增加(P<0.05).与对照组相比,PI3K/AKT信号通路的关键蛋白AKT和mTOR的磷酸化水平受到抑制,其下游p70S6K蛋白表达水平也相应降低(P<0.05).绪论UNBS5162通过促进细胞凋亡对脑胶质瘤细胞的增殖和转移具有抑制作用,其机制与UNBS5162可以抑制PI3K/AKT信号通路的激活有一定相关性.     

慢病毒介导的调节因子XI过表达及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的：构建调节因子X1(regulatory factor X1,RFX1)过表达慢病毒载体,并观察其对F98细胞增殖的影响。方法：运用PCR技术扩增RFX1,并将其插入慢病毒空载体质粒pITA,构建pITA-RFX1慢病毒质粒,经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定正确。将包装慢病毒共转染293T细胞,然后感染F98细胞。利用Western印迹和激光共聚焦验证RFX1过表达情况,用流式细胞仪和CCK-8试剂盒观察转染前后细胞增殖情况。 结果：电泳和测序显示慢病毒载体pITA-RFX1构建成功,将其感染F98细胞后过表达RFX1蛋白,同时可以明显抑制细胞的增殖。结论：过表达慢病毒载体构建成功,上调RFX1可以降低恶性胶质瘤细胞的增殖。     

雷洛昔芬对大鼠垂体瘤GH3细胞Seladin-1基因表达与增殖的影响

目的探讨选择性雌激素受体拮抗剂雷洛昔芬对大鼠垂体瘤GH3细胞株的seladin-1基因表达及其对瘤细胞增殖的影响。方法以不同浓度(0.1～1 000 nmol/L)的雷洛昔芬作用于大鼠GH3细胞,培养48 h后检测雷洛昔芬的作用效果;荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测seladin-1mRNA和蛋白;Cell Counting Kit-8试剂盒检测不同浓度药物对瘤细胞增殖的影响。结果雷洛昔芬在10～100 nmol/L的浓度范围能有效抑制selandin-1的表达,瘤细胞增殖受抑制(P<0.05)。结论雷洛昔芬能够有效抑制大鼠垂体瘤GH3细胞株selandin-1表达及瘤细胞生长,可作为垂体瘤的药物和基因治疗的新靶点。     

干扰水通道蛋白3对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探究水通道蛋白3(AQP3)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法:通过RT-PCR、Western-blot实验检测胃癌细胞株中的AQP3表达水平;小干扰RNA构建AQP3低表达细胞系;CCK-8增殖实验和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡水平;Western-blot检测细胞自噬水平,透射电镜观察自噬小体数目。结果:胃癌细胞AQP3表达水平较高;与干扰前相比,AQP3低表达细胞系中胃癌细胞增殖水平降低(P<0.05),凋亡水平提高(P<0.001),自噬标记蛋白LC3Ⅱ水平降低(P<0.001),P62表达水平上升(P<0.001)。结论:AQP3在胃癌细胞中高表达,干扰AQP3可通过降低自噬水平促进细胞凋亡,进而抑制胃癌细胞增殖,提示AQP3具有成为胃癌治疗分子靶点的潜能。     

穿心莲内酯对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：观察穿心莲内酯（Andro）对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,阐明其作用机制。方法：取对数生长期U87细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、4H-穿心莲内酯(4H-Andro)对照组和Andro组, MTT法检测不同浓度(0、5、10、15、20和25 μmol•L^-1) DMSO 、4H-Andro 及Andro对U87细胞活力的影响,计算U87细胞半数抑制浓度（IC50）;Western blotting法检测各组U87细胞NF-κB蛋白表达强度。结果：通过浓度筛选,Andro平均IC50为8 μmol•L^-1。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol•L^-1 Andro处理24 h后U87细胞增殖活性降低（P<0.01）,增殖抑制率达到50%;Andro处理96 h时,U87细胞增殖活性进一步降低（P<0.01）,增殖抑制率达到65%。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol?L-1 Andro处理48 h后, U87细胞中NF-κB（即磷酸化p65）蛋白表达强度下降（P<0.01）。结论：Andro作为临床上常用的天然抗炎药物,具有抑制胶质瘤细胞增殖的功能,并且可通过靶向抑制NF-κB蛋白表达强度发挥作用。     

碘化砷-硫脲对白血病HL-60细胞增殖及survivin基因表达的影响

目的:探讨新型砷剂配合物砷化砷-硫脲(AsI3-Tu)对白血病HL-60细胞增殖及survivin基因表达的影响。方法:以不同浓度的砷化砷-硫脲作用于HL-60细胞,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡,RT-PCR半定量检测细胞中sur-vivin mRNA表达。结果:①各实验组AsI3-Tu均能抑制HL-60细胞增殖,并与时间和剂量相关。②TUNEL法观察细胞凋亡,可见AsI3-Tu各浓度组凋亡细胞数明显增多。③AsI3-Tu各浓度组细胞中survivin mRNA表达水平降低,且表达水平与AsI3-Tu剂量呈负相关。结论:AsI3-Tu能有效抑制白血病细胞系HL-60细胞的增殖,诱导其凋亡,机制可能与抑制HL-60细胞中survivin基因表达有关。