双膦酸盐诱导骨巨细胞瘤细胞凋亡的实验研究

目的　探讨双膦酸盐（唑来膦酸）对骨巨细胞瘤多核巨细胞和基质细胞的诱导凋亡作用。方法　对我院收治的７例唑来膦酸治疗前后患者的肿瘤组织切片进行透射电镜观察和ＴＵＮＥＬ凋亡染色及图像分析。另１０例未予唑来膦酸治疗的患者,取术中切除的骨巨细胞瘤新鲜组织进行细胞原代培养,分别给予５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导肿瘤细胞凋亡４８ｈ,倒置相差显微镜观察细胞形态,Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析。结果　唑来膦酸治疗后的肿瘤组织切片透射电镜观察到多核巨细胞和基质细胞呈明显的凋亡表现;ＴＵＮＥＬ染色呈强阳性;基质细胞凋亡率治疗前为１.３１％,治疗后３３.４２％（Ｐ＝０.０１８）;多核巨细胞凋亡率治疗前为８.４１％,治疗后５６.８３％（Ｐ＝０.０１８）。在原代培养的骨巨细胞瘤基质细胞中予不同浓度的唑来膦酸诱导凋亡４８ｈ后,细胞数量减少,部分细胞形态有显著变化;Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析结果显示,对照组以及５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导组的凋亡率分别为（１０.６７±２.１５）％、（２０.４７±３.７７）％、（４４.２１±８.３４）％和（５６.９６±９.６８）％,各诱导组显著高于对照组（Ｐ＜０.０５）,且凋亡率呈剂量依赖性（ｒ＝０.７７５,Ｐ＝０.０００）。结论　双膦酸盐能够诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡,且骨巨细胞瘤基质细胞的凋亡率呈剂量依赖性,因此,双膦酸盐可以作为骨巨细胞瘤辅助治疗的方法之一。     

双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化

目的:探讨双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化。方法:取我院收治的7例双膦酸盐(唑来膦酸)治疗前后的患者肿瘤组织切片进行了透视电镜观察和TUNEL凋亡染色及图像分析。结果:双膦酸盐(唑来膦酸)治疗后的肿瘤组织切片中透视电镜下多核巨细胞和基质细胞出现了明显的凋亡表现,细胞质变化的特点是大量扩张紊乱的粗面内质网及分散于细胞质中包含于囊泡中央的高电子密度核。线粒体水肿或空泡化。巨细胞核变化的特点是形成致密的染色质材料分散于细胞核中,核膜增厚或分离,部分核碎裂和形成凋亡小体;双膦酸盐(唑来膦酸)治疗后的肿瘤组织切片中TUNEL染色强烈阳性,基质细胞凋亡率从治疗前的1.31%至治疗后的33.42%,差异有显著性意义(P=0.018),多核巨细胞凋亡率从治疗前的8.41%至治疗后的56.83%,差异有显著性意义(P=0.018)。结论:双膦酸盐可以诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡。从细胞和分子生物学水平证实双膦酸盐作为骨巨细胞瘤辅助治疗方法的可行性。     

miR-181d对骨巨细胞瘤生物学行为的影响

目的:观察miR-181d在骨巨细胞瘤中的表达及其对骨巨细胞瘤生物学行为的影响。方法:收集20例骨巨细胞瘤病理标本及瘤旁组织,利用RT-PCR和荧光原位杂交技术检测肿瘤组织及瘤旁组织中miR-181d的表达。以原代培养的骨巨细胞瘤基质细胞（giant cell tumor stromal cell,GCTSC）转染miR-181d的仿生剂和抑制剂,通过CCK8实验检测miR-181d对GCTSC增殖活性的影响;通过萤光素酶活性实验及western blot检测miR-181d对细胞周期分裂蛋白37（CDC37）调控作用。结果:RT-PCR检测骨巨细胞瘤中miR-181d的表达量显著低于瘤旁组织［（1.09±0.12） vs （3.07±0.43）,P<0.05］;荧光原位杂交显示肿瘤组织内荧光值明显低于瘤旁组织。GCTSC转染miR-181d agomir后,细胞增殖活性显著低于对照组［（0.51±0.11） vs （0.95±0.12）,P<0.05］;而转染miR-181d antagomir后,细胞增殖活性显著高于对照组［（1.63±0.15） vs （0.89±0.09）,P<0.05］;萤光素酶活性实验及western blot显示miR-181d可以抑制CDC37表达。结论:miR-181d可通过调控CDC37抑制骨巨细胞瘤细胞增殖。     

双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化

目的：探讨双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化。方法：取我院收治的7例双膦酸盐（唑来膦酸）治疗前后的患者肿瘤组织切片进行了透视电镜观察和TUNEL凋亡染色及图像分析。结果：双膦酸盐（唑来膦酸）治疗后的肿瘤组织切片中透视电镜下多核巨细胞和基质细胞出现了明显的凋亡表现,细胞质变化的特点是大量扩张紊乱的粗面内质网及分散于细胞质中包含于囊泡中央的高电子密度核。线粒体水肿或空泡化。巨细胞核变化的特点是形成致密的染色质材料分散于细胞核中,核膜增厚或分离,部分核碎裂和形成凋亡小体;双膦酸盐（唑来膦酸）治疗后的肿瘤组织切片中TUNEL染色强烈阳性,基质细胞凋亡率从治疗前的1.31%至治疗后的33.42%,差异有显著性意义（P=0.018）,多核巨细胞凋亡率从治疗前的8.41%至治疗后的56.83%,差异有显著性意义（P=0.018）。结论：双膦酸盐可以诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡。从细胞和分子生物学水平证实双膦酸盐作为骨巨细胞瘤辅助治疗方法的可行性。     

骨巨细胞瘤p53、c-myc表达

[目的]探讨骨巨细胞瘤p53、c鄄myc的表达与骨巨细胞瘤临床分期及复发之间的关系。[方法]对75例骨巨细胞瘤标本,采用免疫组织化学法检测p53、c鄄myc蛋白的表达,分析其与骨巨细胞瘤临床病理特性的关系。[结果]骨巨细胞瘤p53、c鄄myc的表达率分别为28%、24%。p53、c鄄myc的表达与Enneking’s外科分期有关(P<0.05)。p53表达阳性组复发率明显高于阴性组(P<0.05)。c鄄myc表达与p53表达有显著相关性(P<0.05),且p53(+)/c鄄myc(+)组肿瘤复发率明显高于单一阳性组及双阴性组(P<0.05)。[结论]p53、c鄄myc的表达与骨巨细胞瘤的恶性程度及复发有关,可作为判定骨巨细胞瘤恶性程度、复发潜能及指导临床治疗的参考指标。     

p63蛋白在软骨母细胞瘤中的表达及其价值探讨

目的探讨p63蛋白在软骨母细胞瘤中的表达水平及其诊断价值。方法 采用免疫组织化学法(Maxvision)技术对25例软骨母细胞瘤、52例骨巨细胞瘤、10例动脉瘤样骨囊肿和20例腱鞘巨细胞瘤中p63和S-100p蛋白的表达水平进行分析。结果 p63蛋白在软骨母细胞瘤中呈单核细胞的胞核阳性,阳性率为88.0%(22/25)。而骨巨细胞瘤中除呈单核细胞的胞核阳性,少数多核巨细胞的胞核亦呈阳性,阳性表达率为92.3%(48/52)。p63蛋白在软骨母细胞瘤和骨巨细胞瘤中的表达两者比较差异无统计学意义(P>0.05),而S-100p在软骨母细胞瘤和骨巨细胞瘤中阳性表达率分别为88.0%(22/25)和1.9%(1/52),两者差异有统计学意义(P<0.05)。p63蛋白和S-100p在动脉瘤样骨囊肿和腱鞘巨细胞瘤中均不表达。结论 p63蛋白在软骨母细胞瘤和骨巨细胞瘤中均呈高表达,并有相似的免疫表型,提示两者在发生分化上可能均来自相同的起源细胞或肿瘤干细胞。p63蛋白结合S-100p联合应用对鉴别软骨母细胞瘤及其相关性病变具有一定辅助诊断意义。     

骨巨细胞瘤电子显微镜初步观察(之二)

为了探讨骨巨细胞瘤多核巨细胞和基质细胞的相互关系和组织发生,自四十年代(Gomori,1946)以来,陆续有采用酶的组织化学进行观察的报道。在光学显微镜水平,Pep-ler(1958)、Schajowicz(1961)和Jeffree等(1965)都曾对骨巨细胞瘤的酸性磷酸酶     

骨巨细胞瘤肺转移的化疗现状

骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCT)是一种由增殖性单核细胞和破骨细胞样多核巨细胞构成的、具有局部复发倾向的侵袭性原发良性骨肿瘤.GCT约占原发骨肿瘤的4%～5%,少数患者可发生远处转移,其主要转移部位为肺部,发生率约1%～9%[1-2].Seethalakshmi[2]认为,GCT发生肺转移可能有自限性良性过程的转化及血管转移两种机制,肿瘤组织和肺组织均血运丰富,瘤细胞侵犯间质,破坏血管壁,通过血行转移而至肺组织.     

骨巨细胞瘤组织中VEGF、COX-2的表达

目的探讨骨巨细胞瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶-2(COX-2)的表达水平及与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化S-P法检测31例骨巨细胞瘤和15例正常骨组织中VEGF、COX-2的表达水平,并分析其与临床病理参数的关系及两者的相关性。结果骨巨细胞瘤组织中VEGF、COX-2的表达阳性率高于正常骨组织(P<0.05)。骨巨细胞瘤组织中VEGF、COX-2的表达均与患者的临床分期、Jaffe分级、预后有关(P<0.05)。骨巨细胞瘤组织中VEGF、COX-2的表达呈正相关(rs=0.597,P<0.05)。结论 VEGF、COX-2在骨巨细胞瘤组织中存在高表达,可能参与了骨巨细胞瘤的发生、发展、复发或转移。     

乳腺癌组织中血管生成素样蛋白4与骨形成蛋白7的表达及临床意义

目的:研究乳腺癌组织中血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4）与骨形成蛋白7（bone morphogenetic protein 7,BMP7）的表达,探讨其临床意义。方法:选取2014年01月至2015年07月我院120例乳腺癌及癌旁正常组织石蜡标本,采用免疫组化检测ANGPTL4和BMP7蛋白表达水平,分析与临床病理参数间的关系。收集32例新鲜乳腺癌及癌旁正常组织,采用Western blot检测ANGPTL4和BMP7蛋白表达水平。结果:石蜡组织中,乳腺癌ANGPTL4蛋白和BMP7蛋白阳性率均高于癌旁正常组织。ANGPTL4蛋白表达水平与肿瘤大小、TNM分期有关（P＜0.05）。BMP7蛋白表达水平与淋巴结转移、TNM分期有关（P＜0.05）。ANGPTL4和BMP7蛋白阳性表达患者5年生存率均低于阴性表达患者（P＜0.05）。ANGPTL4和BMP7蛋白是影响乳腺癌预后的独立危险因素。新鲜组织中,乳腺癌组织ANGPTL4和BMP7蛋白表达量分别为2.55±0.17和3.03±0.16,高于癌旁正常组织的2.42±0.28和2.89±0.12（P＜0.05）。乳腺癌组织中,ANGPTL4和BMP7蛋白表达量呈正相关（P＜0.05）。结论:ANGPTL4与BMP7蛋白可能协同促进乳腺癌的发生发展,是判断乳腺癌预后的重要指标,可能为乳腺癌的治疗提供新的分子靶点。     

乳腺癌转移抑制基因1对卵巢癌细胞血管生成的影响及其机制探讨

目的探讨乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)对人卵巢癌细胞OVCAR3诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响及可能的机制。方法应用脂质体介导的方法将BRMS1 shRNA重组质粒转染人卵巢癌细胞OVCAR3,经G418筛选获得稳定转染株。荧光定量PCR和Western blot法检测BRMS1 mRNA和蛋白的表达水平;体外血管形成实验检测OVCAR3诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的血管形成能力;Western blot法检测生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素-6(IL-6)的蛋白表达情况。结果稳定转染BRMS1 shRNA后,OVCAR3细胞BRMS1的表达在 mRNA和蛋白水平均受到明显抑制。体外血管形成实验提示,BRMS1表达下调后能显著促进卵巢癌细胞诱导的HUVECs形成管腔样结构的能力;Western blot法显示干扰组中ING4蛋白表达量较对照组下降30%,而IL-6蛋白表达上调,是空白对照组的1.5倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论干扰BRMS1基因的表达可促进卵巢癌细胞诱导血管形成能力,其机制可能与调节下游基因ING4和IL-6的表达有关。     

2017年福建省肿瘤登记地区肝癌发病和死亡分析

 目的 分析2017年福建省肿瘤登记地区肝癌发病和死亡数据,为肝癌防治策略制定和评估提供科学依据。方法 根据全国肿瘤登记中心制定的数据审核和评价方法,对福建省12个肿瘤登记处上报的2017年数据进行评价,将符合要求的10个登记处数据合并分析。按城乡、性别和年龄组分别计算肝癌发病和死亡粗率、标化率、累积率（0~74岁）。中国人口标化率（简称中标率）根据2000年中国标准人口构成计算,世界人口标化率（简称世标率）按照Segi's标准人口构成计算。结果2017年福建省10个肿瘤登记处共覆盖登记人口6 588 959人,城市地区占43.89%,农村地区占56.11%。2017年福建省肿瘤登记地区肝癌发病率为31.14/10万（男性48.02/10万,女性13.70/10万）,中标率为22.51/10万,世标率为21.70/10万。农村地区发病率（中标率23.87/10万,世标率22.90/10万）高于城市地区（中标率20.81/10万,世标率20.16/10万）。2017年福建省肿瘤登记地区肝癌死亡率为28.09/10万（男性43.78/10万,女性11.88/10万）,中标率为20.04/10万,世标率为19.45/10万。农村地区死亡率（中标率20.91/10万,世标率20.18/10万）高于城市地区（中标率18.99/10万,世标率18.56/10万）。结论 福建省肝癌流行呈现地区和性别差异,应从一级预防和二级预防方面开展针对性防控工作。     

干扰GTPBP4基因对食管癌EC9706细胞放射敏感性影响

目的:探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法:通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通...     

shRNA干扰RACK1表达增强口腔鳞癌细胞放射敏感性的研究

目的 探讨下调RACK1基因表达对口腔鳞癌细胞生长及放射敏感性的影响。方法 构建RACK1基因的shRNA载体,通过脂质体转染技术将其转入口腔鳞癌HSC-3细胞,G418筛选得到稳定转染细胞。荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞中RACK1mRNA和RACK1蛋白表达水平;CCK8实验检测细胞生长能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;克隆形成实验检测下调RACK1表达联合X射线照射对细胞增殖能力的影响。构建裸鼠移植瘤模型,观察下调RACK1基因表达联合X射线照射对口腔鳞癌的生长抑制作用。结果 RT-PCR和Western blot结果显示转染后HSC-3细胞RACK1mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),RACK1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK8实验结果显示下调RACK1表达可抑制HSC-3细胞生长(P<0.05),联合X射线照射使细胞凋亡率明显升高(P<0.05),外侵袭穿透细胞数显著减少(P<0.05)。克隆形成实验结果显示shRACK1组的存活分数低于对照组,放射增敏比为1.37(D0值比)。裸鼠移植瘤实验显示shRACK1组照射后瘤体生长缓慢,瘤体体积减小幅度低于对照组(P<0.05),瘤体质量低于对照组(P<0.05)。结论 下调RACK1表达可以增强口腔鳞癌细胞的放射敏感性,为提高口腔鳞癌放射敏感性研究提供新思路。     

Growth Inhibition and Apoptosis Induction of HumanUmbilical Vein Endothelial Cells by Apogossypolone

Aims and Background: Prostate cancer is one of the most common malignant tumors in the male reproductivesystem, which causes the second most cancer deaths of males, and control of angiogenesis in prostate lesions is ofobvious importance. This study assessed the effect of apogossypolone (ApoG2) on proliferation and apoptosis ofhuman umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Subjects and Methods: HUVECs were treated with differentconcentrations of ApoG2. The survival rate of HUVECs were determined by MTT assay. Utrastructural changesof HUVECs were assessed with transmission electron microscopy. Apoptosis in HUVECs was analyzed by flowcytometry and cell migration by Boyden chamber assay. Matrigel assays were used to quantify the development oftube-like networks. Results: ApoG2 significantly inhibited HUVEC growth even at 24 h (P<0.05). The inhibitoryeffect of ApoG2 is more obvious as the concentration and the culture time increased (P<0.05). These resultsindicate that ApoG2 inhibits the proliferation of HUVECs in a time- and concentration-dependent manner withincrease of the apoptosis rate. Besides, ApoG2 reduced the formation of total pseudotubule length and networkbranches of HUVECs. Conclusions: The results suggest that ApoG2 inhibits angiogenesis of HUVECs by growthinhibition and apoptosis induction.     

shRNA靶向PAX6对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默人类配对盒基因（PAX6）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 根据GenBank数据库中PAX6序列,设计、合成互补并特异性编码其 shRNA序列的寡核苷酸,克隆至线性化pSUPER. puro质粒载体中,将pSuper. puro PAX6 shRNA质粒（转染组）和阴性对照质粒pSuper. puro luciferase shRNA（阴性对照组）分别转染人MCF-7细胞,建立稳定低表达PAX6的MCF-7细胞株,同时设未行转染的MCF-7细胞为空白对照组。经实时定量PCR验证后,噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染后的细胞凋亡和细胞周期情况,采用Western blotting检测各组转染96 h后的EMT相关标记分子（E-钙粘蛋白、纤连蛋白和波形蛋白）水平。结果 转染组的PAX6水平均低于阴性对照组和空白对照组（P＜0.05）;与其余两组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bax、Bad mRNA水平均升高,而抑制凋亡基因Bcl-2 mRNA水平降低,且细胞周期的G0/G1期细胞比例升高,但S期和G2/M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;转染组的钙粘蛋白水平升高,而纤连蛋白和波形蛋白水平均降低,与其余两组的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 通过shRNA抑制PAX6基因表达可抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对EMT过程有一定抑制效果,为乳腺癌的基因沉默靶向治疗提供了依据。     

Crosstalk between H1975 tumor cells and platelets to induce the proliferation,migration and tube formation of vascular endothelial cells

Activated platelets (PLTs) participate in the regulation of tumor angiogenesis, and tumors can activate PLTs. Whether co-culture of lung carcinoma with PLTs improves the function of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) requires further investigation. The present study aimed to investigate the impact of H1975 cell crosstalk with PLTs on the proliferation, migration and tube formation of HUVECs. Following generation of cell-derived supernatants and construction of the co-culture system, Cell Counting Kit-8, flow cytometry, transmission electron microscopy and a meter for epithelial measurement were performed to detect the proliferative ability of HUVECs. Furthermore, the wound healing and Transwell migration assays were performed to detect the migratory ability of HUVECs. A tube formation assay was performed to assess angiogenesis, ELISA was applied to detect the content of vascular endothelial growth factor (VEGF) and western blotting was carried out to measure the expression levels of VEGF receptor 2 (VEGFR2) in HUVECs. Compared with single-cultured HUVECs (control), co-culture with H1975 cells and PLTs (Exp_HP) improved cell proliferation, increased the proportion of cells in the S-phase, destroyed the cell ultrastructure and decreased transepithelial electrical resistance in HUVECs. In addition, a higher relative migration rate, greater number of migrated cells, stronger tube-forming ability and increased expression of VEGF and VEGFR2 were detected in the Exp_HP group compared with the control group. The properties of HUVECs in Exp_H (co-cultured with H1975 cells) were similar to those in Exp_HP, but significantly weaker. Taken together, the results of the present study suggest that tumor cells interacting with PLTs may play an important role in tumor angiogenesis by affecting or mediating changes in the properties of vascular endothelial cells (VECs).     

SALL4对白血病HL-60细胞放射敏感性影响研究

目的 探讨下调SALL4对白血病细胞放射敏感性影响,为提高白血病患者放射敏感性提供新思路。方法 人急性髓系白血病细胞株HL-60感染shRNA SALL4和shRNA control慢病毒记为Lv-shSALL4组和Lv-shNC组,用RT-PCR和蛋白印迹法检测细胞中SALL4水平,同时取感染后的细胞给予8Gy剂量照射处理记为Lv-shSALL4＋放射组、Lv-shNC＋放射组,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平。取Lv-shSALL4组和Lv-shNC组细胞,给予0、2、4、6、8Gy照射,细胞克隆形成实验测定放射增敏比。结果 Lv-shSALL4组细胞中SALL4水平低于Lv-shNC组(P<0.05)。细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高,与Lv-shNC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Lv-shSALL4＋放射组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高(P<0.05)。Lv-shSALL4组细胞放射增敏比为1.323。结论 下调SALL4增加白血病细胞放射敏感性,抑制白血病细胞增殖并诱导凋亡。