用套式RT—PCR法检测肝细胞癌中丙型肝炎病毒基因型

检测人肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ法常规检测ＨＣＣ组织和部分患者因清ＨＣＶ,再以巢工地ＨＣＶ阳性标本中５种ＨＣＶ基因型进行鉴别。地多数标本中ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ也进行了免疫互助 化和原位杂交检测。结果 ＨＣＶ组织中ＨＣＶ阳性率为５０％,与ＨＢＶ者,差异无显著性意义,两者重叠感染率３４％。在１０例血清ＨＣＶ一ＨＣＣ患者中,３例ＨＣＣ冰冻组织检出ＨＣＶ     

原发性肝细胞癌患者体内乙型肝炎病毒DNA检测

用聚合酶链反应技术对３５例乙型肝炎免疫指标全阴性的原发性肝细胞癌患者血清，外周血单核细胞及肝活检标本进行了乙型肝炎病毒ＤＮＡ检测。结果：血清，外周血单核细胞及肝活检标本事乙型肝炎病毒ＤＮＡ的阳性率分别为３４．２９％，６０．００％，６８．５７％。提示：乙型肝炎病毒ＤＮＡ在乙型肝炎免疫指标全阴的原发性肝细胞癌患者体内仍有相当高的分布；乙型肝炎病毒对原发性肝细胞癌有高致病性。     

用聚合酶链反应直接检测肝细胞癌组织中HBV DNA

介绍用肝细胞癌组织直接进行聚合酶链反应检测HBV DNA的方法。本法特异性强、灵敏度高,为肝细胞癌的病因学研究提供了新的实验手段。     

PCR技术用于检测肝细胞癌石蜡包埋肝组织中的HBV DNA

用多聚酶链反应(PCR)技术检测了16例肝细胞性肝癌(HCC)患者癌灶和癌旁双份组织石蜡包埋标本中的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。以C基因引物扩增HBV-DNA,32份标本中检出率71.87％。以新鲜冷冻肝标本作对照检出率81.25％,二者相比无显著性差别(X~=0.57,P>0.05)。以质粒提取HBV-DNA作灵敏度测定,PCR-EB可达10fg,PCR-SBH可达lag。应用非放射性的地高辛素标记探针作杂交灵敏度达~32P标记探针的水平。     

晚期原发性肝癌患者血清PCR－HBV DNA的意义

目的：为进一步研究ＨＢＶ感染与原发性肝细胞癌的关系．方法：ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ和抗－ＨＢｓ；ＰＣＲ检测血清ＨＢＶＤＮＡ．结果：３７例晚期原发性肝癌患者血清ＨＢ－ｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ阳性者分别为１７例（４５．９５％），４例（１０．８１％），１６例（４３．２４％）和９例（２４．３２％），而抗－ＨＢｓ全部阴性．聚合酶链式反应检测ＨＢＶＤＮＡ，１８例（４８．６９％）阳性，非常显著地高于ＨＢｅＡｇ检出率（Ｐ＜０．０１）．抗－ＨＢｅ阳性中有７例ＰＣＲ－ＨＢＶＤＮＡ阳性．ＨＢＶ总感染率８９．１９％．结论：提示原发性肝癌发生与ＨＢＶ感染有关．     

Nested PCR检测HBV DNA技术的建立与应用

本研究建立一种Nested PCR技术检测HBV DNA,即采用内外两对引物分别进行连续两次扩增,使检测极限由一次PCR的10~(-2)Pg提高到10~(-5)Pg;经~(32)P标记寡核苷酸探针作Southern转移杂交以及BgIⅡ作酶切分析证实两次扩增均为特异性扩增。通过抗-HBe阳性、单项抗一HBc阳性和单项抗-HBs阳性三种血清的HBV DNA的检测,表明该方法确能检出标准PCR所不能检出的极低水平的HBV感染,对提高乙型肝炎的诊断水平及更准确地评价药物疗效有重要意义。     

聚合酶链反应检测血清中HBV DNA的临床意义

我们开发了一种敏感又快速的方法,以检测低水平乙型肝炎病毒(HBV)感染。通过聚合酶链反应(PCR)检测了12例慢性肝炎和52例肝癌病人血清中的HBV DNA。将PCR分析结果与常规血清标志物相比较,并评价检测血清中HBV DNA的临床意义。     

多聚酶链反应检测乙型肝炎后肝硬化患者血清HBV－DNA及其意义

为观察乙型肝炎后肝硬化患者体内ＨＢＶ的复制状况，为抗病毒治疗提供依据，以减少盲目用药。应用多聚酶链反应，对２６例乙型肝炎后肝硬化患者检测了血清ＨＢＶ－ＤＮＡ存在状态。结果显示，活动性乙型肝炎后肝硬化９例，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性８例，阳性率８８．８８％，静止性乙型肝炎后肝硬化１７例，ＨＢＶ－ＤＮＡ脑性６例，阳性率３５．２９％。两组比较。血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率差异显著（Ｐ＜０．０１）。结果表明，应重点对活动性乙型肝炎后肝硬化患者进行抗病毒治疗。     

聚合酶链反应检测132例乙肝感染者HBVDNA

本文运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）．可检出极微量的ＨＢＶ感染者，它对乙肝发病机理的研究、判断患者病变活动和传染性以及判定抗病毒药物疗效均具有重要意义。     

应用聚合酶链反应制备HBV DNA生物素探针

通过聚合酶链反应将Bio-11-duTP掺入扩增的HBV DNA中,制备了长度为120bp的生物素探针,可检测到0.1pg的HBV DNA。PCR际记法简便迅速,特异性强,所用DNA量少且无需分离纯化,其标记探针得率高,活性强。     

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果。这一技术用以检测经常规DNA提取的127例HBsAg阳性血清,结果HBV DNA检出率达88％,其中HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为97％,抗HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为82％。     

用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移酶标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探针，用该探针证实扩增片段的特异性。检测宫颈癌标本４３例，阳性率为２５．６％（１１／４３），正常宫颈组织８例，阳性率为０。宫颈癌标本阳性率高于正常宫颈标本，提示ＨＣＭＶ与宫颈癌的发生有关。     

PCR检测婴儿肝炎综合征中巨细胞病毒感染

采用PCR技术对37例肝炎综合征患者进行了检测。结果表明,24例为HCMV阳性,占被检人数的64.9%,与已报导的资料相比,PCR方法的阳性检出率明显高于目前使用的其它方法.此外,灵敏性和特异性试验表明,HCMV—PCR方法足以能检测出0.1pg的HCMV的DNA,无非特异性带出现,因此,PCR技术具有高度敏感、特异性强、简单快速等优点,可以用于临床检测和诊断。     

用Nested聚合酶链反应检测嗜肺军团菌的实验研究

用Nested聚合酶链反应(Nested PCR)法检测嗜肺军团菌种。Nested PCR法所用的两对寡核苷酸引物按编码24 kDa嗜肺军团菌表面抗原的基团片段序列设计的。用此两对引物对实验的军团菌种和非军团菌种细菌DNA进行扩增,只有嗜肺军团菌种DNA被扩增,而其他军团菌种和非军团菌属细菌没有被扩增。第1步和第2步PCR分别检测到最小量为10pg和10 fg的靶DNA。对不同量的嗜肺军团菌配制成的痰标本进行检测,能检测到0.1cfu/ml的嗜肺军团菌,只需12h。这些结果显示Nested PCR法检测嗜肺军团菌特异性强,敏感性高。此方法为从临床标本和环境材料中早期、快速检测到嗜肺军团菌提供了有效的工具。