被动吸烟对帕金森病大鼠旋转行为和纹状体多巴胺含量的影响

目的：观察被动吸烟对帕金森病（PD）大鼠的影响,以验证流行病学研究的结论,为PD研制提供一新的线索。方法：用6－羟基多巴胺（6－OHDA）立体定向注入大鼠一侧黑质致密部和中脑被盖腹侧区建立侧侧PD模型,观察术前4周开始始予的被动吸烟（持续6周）和术后2周对成功模型给予的被动吸烟（持续2周）对阿朴吗啡诱发的旋转行为及纹状体DA含量的影响。结果：术前4周开始被动吸烟的大鼠旋转行为有减少趋势,受损侧纹状体DA含量较对照组升高,术后2周,成功模型给予的被动吸烟对PD大鼠的旋转行为及纹状体DA含量均无影响。结论;被动吸烟可减轻6－OHDA对黑质DNA能神经元的损伤。     

脑源性神经营养因子对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元 …

目的 观察脑源性神经营养因子对帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元的影响。方法 将６－羟基多巴胺用立体定向注入大鼠一侧中脑黑质制作ＰＤ大鼠模型,并在注入６－羟基多巴胺之间每天向预伤侧壳核区定位注入ＢＤＮＦ,采用酪氨酸羟化酶免疫组化方法及透视电镜等观察ＢＤＮＦ对黑质多巴胺能神经元的显微超微结构影响。结果 ＢＤＮＦ能改善６－羟基多巴胺造成的ＰＤ大鼠黑质多巴胺能神经元数目减少及超微结构影响。结论 ＢＤＮＦ     

双靶点注射6-OHDA建立帕金森病大鼠模型并提高成功率

目的建立大鼠帕金森病模型,观测其行为学、中脑黑质多巴胺能神经元及超微结构的变化。方法利用立体定向技术,注射6-OHDA至大鼠中脑黑质SNc和中脑腹侧被盖区VTA,于注射后2、4、6、8周观测阿朴吗啡诱导的大鼠旋转行为学变化;采用免疫组化染色检测TH的表达,了解中脑黑质多巴胺能阳性神经元变化;利用透射电镜了解黑质区超微结构的变化。结果所有大鼠进行阿朴吗啡诱导旋转行为测试,旋转圈数>7r/min,并且>210r/30min,为合格的PD大鼠模型。大鼠模型于第4、6和8周时,大鼠行为学变化较为恒定。第8周时,50只大鼠中出现32只大鼠大鼠旋转次数平均为11.5±1.2/分,造模成功率为64%。PD模型大鼠超微结构观察,黑质神经元数目明显减少,线粒体肿胀,粗面内质网囊性扩张、脱颗粒,髓鞘扩张。免疫组化检测,成功模型光镜下分别计数双侧黑质TH阳性神经元,损毁侧黑质TH阳性神经元占正常侧的3.0%,即毁损侧TH阳性神经元减少97.0%。结论利用立体定向技术,选择黑质和中脑腹侧被盖区等双靶点,可建立6-OHDA大鼠PD模型,具有明确病理变化,提高模型成功率。     

立体定向技术注射6-OHDA至内侧前脑束建立帕金森病大鼠模型

目的 建立大鼠帕金森病模型,观测其行为学和多巴胺能神经元的变化.方法 利用立体定向技术,注射6-OHDA至大鼠脑的内侧前脑束,于注射后2、4、6、8周观测阿朴吗啡诱导的大鼠旋转行为学变化;采用免疫组化染色检测TH的表达,了解中脑黑质多巴胺能阳性神经元变化.结果 所有大鼠分别于第2、4、6、8周的进行阿朴吗啡诱导旋转行为测试,67只大鼠中出现16只大鼠(23.8%)旋转圈数＞7r/min,并且＞210r/30min,为合格的PD大鼠模型.第8周时,大鼠旋转次数平均为10.48±1.91/分.免疫组化检测,成功模型光镜下分别计数双侧黑质TH阳性神经元,损毁侧黑质TH阳性神经元占正常侧的3.8%,即毁损侧TH阳性神经元减少96.2%.结论 利用立体定向技术,选择内侧前脑束为靶点,可建立6-OHDA大鼠PD模型.     

抗帕Ⅰ号方剂对帕金森病大鼠纹状体多巴胺受体的影响

目的探讨抗帕Ⅰ号方剂对帕金森病(PD)大鼠纹状体多巴胺D1(DR1)、D2受体(DR2)表达的影响.方法 6-羟基多巴胺损毁制备偏侧PD大鼠模型,PD大鼠分为4组,分别进行抗帕Ⅰ号方剂、左旋多巴甲酯/苄丝肼、左旋多巴甲酯/苄丝肼/抗帕Ⅰ号方剂和生理盐水灌胃治疗4周,观察大鼠行为学变化;RT-PCR检测纹状体DR1、DR2受体的表达.结果抗帕Ⅰ号方剂联合左旋多巴治疗使PD大鼠产生稳定的对侧旋转行为;左旋多巴治疗后使PD大鼠在盐酸去水吗啡诱发后产生逐步增加的对侧旋转行为;联合抗帕Ⅰ号方剂及左旋多巴治疗可使盐酸去水吗啡诱发的对侧旋转次数减少.联合左旋多巴及抗帕Ⅰ号方剂治疗后损毁侧纹状体DR1 mRNA表达较对照组、抗帕Ⅰ号方剂组增强(P<0.05),而DR2 mRNA表达较对照组、抗帕Ⅰ号方剂组减弱(P<0.05).结论联合抗帕Ⅰ号方剂及左旋多巴治疗可改善PD大鼠行为学,但单独应用抗帕Ⅰ号方剂对多巴胺受体表达无明显影响,且抗帕Ⅰ号方剂无明显受体激动剂的作用.     

鱼藤酮帕金森病大鼠模型建立的研究

目的探讨鱼藤酮帕金森病大鼠模型的建立方法.方法采用背部皮下注射鱼藤酮,然后观察大鼠的行为学及黑质-纹状体的酪氨酸羟化酶免疫活性变化、海马病理学变化.结果经过1～8周观察,鱼藤酮处理大鼠出现明显的行为学、黑质-纹状体酪氨酸羟化酶免疫活性变化,海马无明显病理学变化,模型显示出帕金森病的典型特征.结论背部皮下注射鱼藤酮的方法可成功制作帕金森病大鼠模型.     

6-羟基多巴胺致帕金森病模型大鼠步态的CatWalk定量分析

目的 探讨对单侧注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)致帕金森病模型大鼠步态进行CatWalk定量分析的可行性. 方法 24只雄性Wistar大鼠按完全随机数字表分为6-OHDA组(n=12)、假手术组(n=6)与对照组(n=6),其中6-OHDA组和假手术组采用立体定向手术将6-OHDA溶液和等量生理盐水分别注入大鼠的左侧内侧纵束,对照组仅行麻醉处理.造模前1周训练大鼠并采集行为学数据基线值.造模后3d、1周、2周对大鼠依次进行圆柱实验,再将大鼠置于CatWalk自动步态分析仪中,记录其步态变化,离线分析相关数据. 结果 圆柱实验结果显示:造模后3d、l周、2周时,与理论值50％比较,6-OHDA组大鼠右前肢的使用比例均较左前肢明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);对照组及假手术组大鼠右前肢使用比例无明显异常,差异无统计学意义(P＞0.05).CatWalk分析结果显示:对照组、假手术组大鼠造模后左、右肢体对比,各肢体的造模前、造模后对比中各指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).6-OHDA组大鼠左、右肢体对比中,右前肢的最大接触面积、爪印长度、爪印宽度和爪印面积较左前肢增加,左后肢的最大接触面积较右后肢增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);6-OHDA组大鼠各肢体的造模前、造模后对比中,左前肢的爪印长度、爪印宽度和爪印面积较造模前有所下降,右前肢的爪印面积、爪印长度和最大接触面积较造模前下降,在左后肢中仅爪印宽度下降,右后肢的最大接触面积、爪印长度、爪印宽度和爪印面积均较造模前减少,差异均有统计学差异(P＜0.05). 结论 CatWalk可对帕金森病模型大鼠步态的变化进行定量分析,其中最大接触面积可能是最佳参数之一,可为深入研究帕金森病提供有益参考.     

硫辛酸抑制帕金森病模型细胞铁聚积的实验研究

目的观察硫辛酸(LA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞铁代谢的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法确定6-OHDA最适造模浓度,筛选LA低、高保护浓度。实验分为正常对照组、模型组(6-OHDA 50μmol/L)、LA低剂量(0.001μmol/L)组和LA高剂量(0.1μmol/L)组。比色法测定细胞内MDA、铁含量,Western blot检测铁代谢相关蛋白DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2水平,实时荧光定量PCR分析DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2的mRNA表达。结果 (1)与对照组相比,模型组细胞活力明显下降(P<0.01),MDA、铁含量显著增加(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白及mRNA水平明显上调(P<0.01)。(2)与模型组相比,LA低、高剂量组细胞活力均上升(P<0.05,P<0.01),MDA、铁含量均显著减少(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白及mRNA水平均下调(P<0.05,P<0.01)。(3)与LA低剂量组相比,LA高剂量组MDA、铁含量减少(P<0.05),DMT1(+IRE)、IRP1蛋白及mRNA水平降低(P<0.05,P<0.01);而LA低剂量组与LA高剂量组相比,两组的IRP2蛋白及mRNA表达差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论 LA对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能是通过抑制IRP/IRE途径下调6-OHDA诱导的DMT1(+IRE)上升,从而减少细胞对铁离子的吸收,减轻铁聚集引起的氧化应激对细胞的损伤。     

提高帕金森病动物模型制作成功率的方法学探讨及模型综合评价

目的探讨提高6-OHDA帕金森病(PD)大鼠模型制作成功率的方法,并对模型进行综合评价。方法取SD大鼠90只,将6-OHDA立体定向注射于左侧黑质区及中脑腹侧被盖,观察大鼠的行为、黑质抗氧化指标、线粒体呼吸链及黑质细胞形态学的变化。结果①经阿朴吗啡诱导后共筛选出成功模型64只,成功率为71%;②模型大鼠黑质区ROS、MDA水平均明显升高,而GSH-Px活性则明显降低;③模型大鼠黑质区存在线粒体呼吸链功能障碍;④免疫组化发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少(P<0.001);⑤电镜观察发现模型大鼠黑质细胞同时存在凋亡、变性和坏死样改变。结论应用本方法可较快建立稳定的成功率较高的PD大鼠模型,该方法是通过增强氧化应激、干扰线粒体呼吸链功能、诱导凋亡甚至引发坏死等不同机制损毁多巴胺能神经元的,同PD的发病机制基本一致。     

镁对帕金森病大鼠黑质多巴胺神经元的影响

目的观察镁对帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺神经元影响及其作用机制。方法应用6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备偏侧PD大鼠模型后分为硫酸镁组、美多巴组、混合组(硫酸镁+美多巴)和对照组(生理盐水),并给予相应药物灌胃治疗28d。观察治疗后各组大鼠旋转行为的变化;免疫组化法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量;生化法测定损毁侧纹状体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;逆转录聚合酶链反应检测损毁侧黑质caspase-3 mRNA表达;Western Blot法检测核因子(NF)-кBP65水平。结果治疗后仅混合组出现较稳定的向对侧的旋转行为;TH阳性神经元数混合组较其他各组明显增加(均P<0.05);与对照组和美多巴组比较,硫酸镁组和混合组SOD、GSH-Px活性显著增高,MDA、caspase-3 mRNA、NF-кBP65水平显著降低(均P<0.05);硫酸镁组与混合组间差异无统计学意义。结论镁及美多巴联合治疗可提高PD模型脑内多巴胺神经元存活、降低氧化应激损伤、减少神经元凋亡,改善PD大鼠症状。     

帕金森病大鼠模型神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的实验研究

目的 观察研究帕金森病(PD)大鼠模型纹状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元，探讨一氧化氮(NO)在PD发病机制中所起作用。方法 应用立体定向技术建立6-OHDA毁损的大鼠PD模型，通过多巴胺受体激动剂阿扑吗啡(APO)测试大鼠旋转行为，免疫组化方法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元和纹状体nNOS阳性神经元的变化。结果 大鼠6-OHDA损毁侧黑质TH阳性神经元数目较对侧明显减少，双侧纹状体nNOS阳性神经元数目无显著差异。结论 6-OHDA对TH阳性神经元有损伤作用，而NOS阳性神经元对其具有抵抗作用。NO可能参与了PD发病机制。     

一氧化氮与帕金森病小鼠模型神经损害的研究

目的　研究一氧化氮（ＮＯ） 在帕金森病（ＰＤ）小鼠模型神经损害中的作用。方法　用比色分析、高效液相色谱电化学及免疫组化法检测１甲基４苯基四氢吡啶（ＭＰＴＰ）和７硝基吲唑（７ＮＩ）对Ｃ５７ＢＬ小鼠纹状体一氧化氮合酶（ＮＯＳ） 活性,多巴胺（ＤＡ）、二羟基苯乙酸（ＤＯＰＡＣ）、高香草酸（ＨＶＡ） 水平和酪氨酸羟化酶（ＴＨ） 免疫阳性神经纤维的影响。结果　注射ＭＰＴＰ后Ｃ５７ＢＬ小鼠纹状体ＮＯＳ活性增加,７ＮＩ能明显抑制ＭＰＴＰ引起的ＮＯＳ活性的升高（ 分别为０ ．９３ ±０．２４ 和０．５４ ±０．１６,ｎｍｏｌ·ｍｉｎ－１·ｇ－１ 组织,Ｐ＜０．０１） 。７ＮＩ能明显减轻ＭＰＴＰ引起的Ｃ５７ＢＬ小鼠纹状体ＤＡ（ 分别为０ ．８ ±０ ．２ 和６．８±０．５,μｇ／ｇ 组织,Ｐ＜０．０１） 、ＤＰＯＡＣ（ 分别为０．３ ±０．１ 和０ ．９ ±０ ．３ ,μｇ／ｇ 组织,Ｐ＜ ０ ．０１）、ＨＶＡ（分别为０．４±０．２ 和０．９ ±０ ．２,μｇ／ｇ 湿组织,Ｐ＜ ０．０１） 的降低及ＴＨ 阳性神经纤维损害。结论神经元来源的ＮＯ 参与了ＭＰＴＰ的毒性机制,神经元型ＮＯＳ抑制剂可能有益于ＰＤ的治疗。     

Rat model of Parkinson's disease with bilateral motor abnormalities, reversible with levodopa, and dyskinesias.

Parkinson's disease (PD) is characterized by the bilateral degeneration of the midbrain dopamine-containing neurons with the most severe lesion in the posterolateral part of the substantia nigra pars compacta (SNpc). In humans, such lesions lead to specific motor abnormalities (i.e., akinesia, rigidity, and tremor) that are greatly improved by levodopa treatment. After a few years, the beneficial effect of the treatment is frequently offset by the development of dyskinesias. To improve treatment strategies, an animal model showing most of the histological and clinical characteristics of the human disease is mandatory. Ten rats received a bilateral injection of small doses of 6-OHDA in the medial forebrain bundle (MFB) and were compared with five sham-lesioned rats. The 6-OHDA-lesioned rats progressively developed abnormal motor behavior (assessed by the stepping test) compared with the sham-lesioned rats. The lesioned rats greatly improved under levodopa treatment, but developed concomitant dyskinesias. All 6-OHDA-lesioned animals had bilateral partial lesions of the SNpc, with the most severe lesion being in its posterolateral part. There was a significant correlation between the severity of the dopaminergic cell loss and the severity of the levodopa-induced dyskinesias. These rats constitute an interesting model of PD, sharing some of the main characteristics of the human disease.     

Effects of simvastatin on the expression of inducible nitric oxide synthase and brain-derived neurotrophic factor in a lipopolysaccharide-induced rat model of Parkinson disease

Objective: To investigate the effects of simvastatin on the expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in the substantia nigra in a lipopolysaccharide (LPS)-induced rat model of Parkinson disease (PD), and to study the mechanisms underlying the neuroprotective effects of simvastatin in PD. Methods: The LPS-PD model was established by injection of LPS (5 mg/mL, 2.0 μL) into the right substantia nigra compacta (SNC). Rats in the sham-operated group received saline. The simvastatin treatment group was intraperitoneally administered simvastatin (5 mg/kg, 2.0 μL) at 1 h before, and daily for 14 days after surgery, while the sham-operated and LPS-model groups received saline. Iba-1-positive cells and tyrosine hydroxylase (TH), as well as iNOS and BDNF in the SNC were detected by immunohistochemistry and Western blotting, respectively. The effect of simvastatin in the PD model was also examined in behavioral tests. Results: The LPS-model group exhibited typical animal PD behaviors. Compared with the control group, the LPS-model group exhibited a decreased number of DA neurons (p < 0.01) in the SNC, as well as increases in the Iba-1-positive cell number and iNOS expression (p < 0.05), while BDNF expression was downregulated (p < 0.01). These effects were inhibited by simvastatin treatment (p < 0.05). Conclusion: Simvastatin mediates a protective effect on dopaminergic neurons in the SNC in the LPS-PD model, possibly by promoting neuronal repair and regeneration, and by inhibiting oxidative stress, thus improving substantia nigra function.     

帕金森病患者认知功能障碍与抑郁临床分析

目的探讨帕金森病(PD)患者的认知功能障碍及抑郁的特点及关系。方法对50例PD患者和42例对照组进行认知功能及抑郁评定和分析。结果 PD组同对照组相比,简易精神状况检查(MiniMental State Examination,MMSE)及蒙特利尔认知评估(Montreal Cognitive Assessment,MOCA)量表各因子分,除语言因子分外均有显著性差异(P<0.05),汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)均分和抑郁自评量表(Self-rating Depression Scale,SDS)均分均有显著性差异(P<0.05),抑郁严重程度与认知功能损害成正相关(r=0.438)。结论 PD患者存在认知功能障碍与抑郁,抑郁可能是导致认知功能下降的重要因素。     

Memory consolidation and inducible nitric oxide synthase expression during different sleep stages in Parkinson disease

BackgroundParkinson disease (PD) is a neurodegenerative disease characterized by motor and nonmotor dysfunctions, which include sleep disturbances. Rapid eye movement (REM) sleep is associated with numerous physiologic changes such as memory consolidation. Compelling evidence suggests that nitric oxide (NO) is crucial to both sleep regulation and memory consolidation. In our study, we explored changes in biologic molecules during various sleep stages and the effects of sleep on memory consolidation in PD.MethodsTen PD patients and 14 volunteers without PD participated in our study. The gene expression of inducible NO synthase (iNOS) in all sleep stages was measured using realtime polymerase chain reaction (PCR) based on polysomnography (PSG)-guided peripheral blood sampling. In addition, the efficiency of memory consolidation during the sleep of the participants was measured using the Wechsler Memory Scale, third edition (WMS-III).ResultsThe iNOS expression increased in all sleep stages among the PD patients compared to the control participants, in whom iNOS expression decreased during REM sleep. Regarding memory consolidation, the performance of the controls in logic memory and the patients in visual reproduction tasks improved after sleep.ConclusionsThe iNOS synthase expression was different from control participants among PD patients, and the expression was dissimilar in various sleep stages. Sleep might enhance memory consolidation and there are different memory consolidation profiles between PD and control participants demonstrating distinct memory consolidation profiles.     

共聚物-1对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨共聚物-1(Cop-1)免疫或致敏淋巴细胞移植对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺(DA)神经元的保护作用。方法选用雄性C57BL/6J小鼠随机分为Cop-1/BSA免疫组、Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组、MPTP模型组和正常对照组。Cop-1/BSA免疫组在注射MPTP之前10天接受Cop-1/BSA抗原免疫;Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组动物在MPTP末次注射后,立即接受Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植;MPTP模型组动物仅接受MPTP注射;正常对照组动物仅接受生理盐水注射。MPTP末次注射7天后处死动物,取脑。酪氨酸羟化酶免疫组化及体视学方法定量分析黑质DA神经元数。结果 MPTP注射显著地减少了模型动物黑质DA神经元数量。Cop-1免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植明显增加了MPTP模型动物黑质DA神经元数,对黑质DA神经元有保护作用。BSA免疫或BSA致敏淋巴细胞移植则没有表现出这种保护作用。结论在C57BL/6J小鼠,Cop-1免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植可有效对抗MPTP毒性,保护黑质DA神经元。     

一氧化氮在迟发性神经元坏死中与程序性细胞死亡关系的研究

本文采用分子生物学方法，观察了ＮＯＳｍＲＮＡ在Ｗｉｓｔａｒ大鼠ＤＮＤ模型中的表达，对ＮＯ与ＤＮＤ模型中ＰＣＤ的关系进行了研究。结果发现：ＮＯＳｍＲＮＡ在正常组织中即存在，缺血期可能是表达高峰期。提示：ＮＯ在ＤＮＤ过程中可能是启动ＰＣＤ死亡基因，导致选择性易损神经细胞发生ＰＣＤ的重要外在因素之一。