银染单链构象多态性技术检测结核杆菌rpoB基因突变

目的探讨分子生物学方法在临床标本结核分枝杆菌利福平（ＲＦＰ）耐药性评估中的应用价值。方法设计针对ｒｐｏＢ基因１８３ｂｐ扩增引物,运用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲＳＳＣＰ）银染色方法,检测了４５株结核杆菌临床分离株,并对其中部分菌株进一步做了ＤＮＡ序列分析。结果以药敏试验结果为对照,有１６株ＲＦＰ敏感株及２６株ＲＦＰ耐药株经ＳＣＰ方法得到检测,阳性占９３．３％,特异性１００％。对部分菌株１８３ｂｐ片断测序结果显示,ＲＦＰ敏感株无ｒｐｏＢ基因突变,耐药株均发生碱基突变,分别导致编码５３１及５２６位点的氨基酸改变。结论银染ＰＣＲＳＣＰ方法具有简便,快速,准确的特点,提高敏感性,可以对临床标本结核杆菌利福平耐药突变进行鉴定。序列分析证明结核分枝杆菌利福平耐药菌株有ｒｐｏＢ基因突变。     

银染单链构象多态性技术检测结核杆菌rpoB基因突变

目的 探讨分子生物学方法在临床标本结核分枝杆菌利福平（ＲＦＰ）耐药性评估中的应用价值。方法 设计针对ｒｐｏＢ基因１８３ｂｐ扩增引物,运用聚合酶链反应－单链橡象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色方法,检测了４５株结核杆菌临床分离株,并对其中部分菌株进一步做了ＤＮＡ序列分析。结果 以药敏试验结果对照,有１６株ＲＦＰ敏感株为２６株ＲＦＰ耐药株经ＳＳＣＰ方法得到检测,阳性占９３．３％,特异性００％。对部     

结核分枝杆菌利福平耐药基因的检测

以药物敏感试验为标准，应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析方法对６８例利福平耐药菌株和２０例利福平敏感菌株进行测定，结果８８例结核分枝杆菌均扩增出目标ＤＮＡ条带，１０例非结核分枝杆菌和８例非分枝杆菌未出现目标ＤＮＡ条带，所用引物扩增ｒｐｏＢ基因２１５ｂｐ片段为结核分枝杆菌复合群异性的。     

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率张捷，李小英，寇丽筠各种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床标本的结核分枝杆菌（ＭＴＢ）已被国内外公认是一个快速可靠的检测方法。我们应用ＰＣＲ方法和杂交技术期间发现尚有许多问题有待探讨。如应用该法对临床１８２份...     

聚合酶链反应检测纤维支气管镜毛刷标本在肺结核诊断中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对１１０例纤维支气管镜（纤支镜）毛刷标本进行结核菌脱氧核糖核酸（ＴＢ－ＤＮＡ）检测，以评价ＰＣＲ－ＴＢ－ＤＮＡ在肺结核诊断中的应用价值。１对象和方法１．１标本来源所有毛刷标本均来自住院患者，共１１０例，其中肺结核患者５...     

应用聚合酶链反应-微孔板反相杂交技术检测结核分枝杆菌

近年来,应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测结核分枝杆菌（结核菌）的方法已被广泛应用于临床,其灵敏、快速、简便等优点得到公认［１］。但是由于受诸多因素的影响,检测结果容易出现假阳性及假阴性,给临床诊断带来困难。我们采用特异性结核菌探针,通过微孔板反相杂...     

用重叠延伸聚合酶链反应制备鸭乙型肝炎病毒基因点突变

目的制备含鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前核心区终止密码突变的基因片段，以对此基因突变作有关生物学研究。方法用重叠延伸聚合酶链反应（ＯＥ－ＰＣＲ）制备含此人工定向点突变的基因片段；用不对称聚合酶链反应（ａｓｙ－ＰＣＲ）制备单链ＤＮＡ模板作测序。结果凝胶电泳显示ＯＥ－ＰＣＲ产物与克隆ＤＨＢＶＤＮＡ酶切片段位置一致，测序证实该点突变存在。结论用ＯＥ－ＰＣＲ作人工定向基因突变，不需要克隆制备单链模板及筛选阳性克隆，２天内即可出结果，较传统方法简便、快速、有效。     

结核-聚合酶链反应在诊断结核性胸腔积液中的价值

目的：阐明结核－聚合酶链反应（ＴＢ－ＰＣＲ）在诊断结核性胸腔积液中的作用。方法：以胸膜活检病理结果为标准，总结了１１８例胸腔积液ＴＢ－ＰＣＲ的检测结果，并与结核菌涂片，培养两种方法进行对比，结果：ＴＢ－ＰＣＲ，涂片，培养三种方法的阳性率分别为３３％，０和５％，前者高于后两者（Ｐ〈０．００１），但ＴＢ－ＰＣＲ的假阴性率较高（６７％），结论：用ＴＢ－ＰＣＲ法诊断结核性胸腔积液的价值有限，最好做胸膜活检     

用PCR技术检测痰液中结核菌的研究

对１８８例肺结核人的痰标本进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＴＢ－ＤＮＡ，并同时行痰直接涂片糖结核菌，其中７２例痰标本做了结核菌培养，结果提示：ＰＣＲ阳性率为５２．６６％（９９／１８８），直接涂片阳性率为２３．４％（４４／１８８），培养阳性率为１２．５％（９／７２）。表明ＰＣＲ特异性高，重复性好，敏感性强，与临床符合率高。我们的试验结果证实，ＰＣＲ可作为肺结核早期，快速的诊断方法，尤其适用于菌阴肺结核     

结核分枝杆菌四种检测方法的比较研究

结核分枝杆菌四种检测方法的比较研究陈东科张秀珍我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法、４６０ＴＢ自动检测系统快速培养法（ＢＡＣＴＥＣ法）、改良罗氏培养法（Ｌ－Ｊ法）、金胺－酚染色法４种检测方法同时检测１１５份临床患者标本中的结核分枝杆菌，并对结果进行了分析...     

PCR直接测序法分析结核分枝杆菌katG基因突变

为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因突变情况，研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直测序法分析９２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，２３株药物敏感体中，２１株ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ分析正常，２株异常。３６株耐非ＩＮＨ药物的分离株中，２０株ｋａｔＧ基因ＳＳＣ正常，１６株异常。３３株耐ＩＮＨ分     

结核分枝杆菌链霉素耐药分离株rpsL基因突变的检测

目的 探讨结核分枝杆菌（结核菌）对链霉素（Ｓｍ）产生耐药性的分子机制,建立直接快速检测结核菌Ｓｍ药物敏感性的试验方法。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染分析技术检测３２例结核菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因。结果 以结核菌标准株（Ｈ３７Ｒｖ）为对照,３２株结核菌临床分离株中,１０株Ｓｍ敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常,２２株Ｓｍ耐药株中,１６株（７２．７％）的ｒｐｓＬ     

耐多药结核分枝杆菌KatG及rpoB基因变异的研究

目的用聚合酶链反应（PCR）一直接测序法检测肺结核患者临床痰分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变：了解耐药分子机制及探索痰标本结核分枝杆菌耐异烟肼（INH）、利福平（RFP）直接检测的可行性。方法对47例耐INH、RFP的结核分枝杆菌临床痰分离株行PCR一直接测序法检测KatG及rpoB基因突变。结果47例耐INH、RFP分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变阳性分别为29／47（61．7％）、43／47（91．5％），两者同时突变26例（55．3％）。结论PCR一直接测序法敏感、特异，可快速检测结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变，适合于临床肺结核患者痰标本耐药性的快速检测。     

分枝杆菌菌体超声抗原用于ELISA检测血清结核抗体的效果

本文报道了不同类群分枝杆菌菌体超声抗原，用于ＥＬＩＳＡ检测血清结核抗体的效果。发现人型结核菌菌体超声抗原对结核病患者血清抗体的阳性检出率最低，为２８％￣４２％，而淋巴分枝杆菌菌体超声抗原（Ｂ６ｂ）阳性检出率最高，达７２％。Ｒ６ｂ抗原用于肺癌血清结核抗体检测，假阳性率１．９％。Ｂ６ｂ抗原用于结核病血清学诊断和用于结核病与肺癌的鉴别诊断，其效果均优于ＰＰＤ抗原，且易于制备、性能稳定可靠。     

分析结核病耐喹诺酮(gyrA)基因变化的规律

目的研究结核分枝杆菌gyrA基因突变的规律。方法通过聚合酶链反应-单链构象多态性（（PCR-SS-CP）技术鉴定156株临床分离株，确定为结核分枝杆菌的菌种，并进一步分析gyrA基因突变的情况。结果以结核分枝杆菌标准株为对照，147株临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。29株药物敏感株的gyrA基因SSCP图谱泳动均无异常；59株耐喹诺酮类药临床分离株中30株异常，占50．8％。结论结核分枝杆菌耐药与gyrA基因突变有关，且在药敏实验高、低浓度区均可发生。     

结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因检测芯片的研究

目的建立用于检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因突变的基因芯片，并与基因测序和常规药物敏感性试验进行比较，探讨其使用价值。方法根据结核分枝杆菌katG基因突变的规律，设计不同的探针，制备可检测katG基因突变的芯片，并且同时检测药物敏感株和耐药株的katG的变异情况。结果结核分枝杆菌临床分离株共137株，至少耐1种抗结核药物共97株（70．8％）。耐异烟肼的比例为32．8％（45／137）。敏感株katG基因扩增阳性率为100％。耐INH菌株katG的阳性率为88．9％（40／45）。PCR检测katG阳性率为91．1％（41／45）。耐INH菌株katG的缺失率为8．9％。katG315位密码子的突变依次为AAC（32．5％，13／40），ACC（15．0％，6／40），ACA（10．0％，4／40）。ATC（5．0％，2／40）和AGC（5．0％，2／40）。基因芯片检测、药物敏感性试验和基因测序的结果一致。结论本研究建立的检测结核菌katG基因突变的基因芯片技术敏感性高，特异性强，可用于结核菌的快速药物敏感性试验评价。     

用聚合酶链反应检测胸液结核杆菌的临床价值

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测５３例结核性胸液，并与涂片镜检及培养方法对比。ＰＣＲ检测胸液结核菌阳性率达６９．８％，明显高于涂片镜检７．５％及培养５．７％，Ｐ〈０．００５。表明ＰＣＲ是快速检测胸液结核菌的好方法。     

PCR检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸

ＰＣＲ检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸杨朝国陈川①张明清②（四川省卫生管理干部学院，成都６１００４１）关键词结核分枝杆菌核酸外周血聚合酶链反应检测结核分枝杆菌核酸的几种ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均不相同〔１～３〕，用痰样品制备ＤＮＡ较麻烦，且常常是ＰＣ...     

分子生物学方法检测结核杆菌对利福平耐药性研究进展

近年对结核杆菌耐药机制的研究表明，ｒｐｏＢ基因是利福平耐药相关基因，耐药株通常发生特定位点基因突变，因此可以通过突变有无而评估其利福平耐药性，本文对这方面做简要综述。     

再生障碍性贫血患者的载脂蛋白B,E基因多态性分析

我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，研究２３例再生障碍性贫血（再障）患者载脂蛋白Ｂ，Ｅ（ＡｐｏＢ，Ｅ）基因限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）。比较再障患者与正常人的ＡｐｏＢ基因ＸｂａⅠ和ＥｃｏＲⅠ酶切位点ＲＦＬＰｓ的差异及ＡｐｏＥ基因ＨｈａⅠ酶切位点...