抗B型葡葡球菌肠毒素(SEB)单克隆抗体的特性鉴定及其应用

SEB为金黄色葡萄球菌产生的一种分子量为28.5kD单肽链毒性蛋白质。其性质稳定,易于大量生产和制成气溶胶撒布,故被列为重要的生物性战剂。SEB除可引起食物中毒外,近年发现还是一种强有力的促分裂原,具有广泛地免疫调节作用。 为了深入评价SEB的有关特性,我们在以BALB/c小鼠制备出抗SEB McAb的基础上,对已获得的6株抗SEB McAb(S1、S2、D1、3D6、B4和F7)作了较系统的鉴定。通过McAb相加试验及ELISA竞争抑制试验表明,6株抗SEB McAb具有相同的表位特异性;它们在间接ELISA试     

三种简便ELISA法分析单克隆抗体表位特异性的比较

作者采用单克隆抗体(McAb)相加试验、竞争抑制法以及双抗体夹心法3种简便的ELISA,分析抗甲胎蛋白(AFP)的McAb识别表位的特异性,获得一致的结果。证实4株抗AFP的McAb中(B1、B8、F11和E12),可分别识别两种不同的表位,B1     

细胞融合技术有关因素的进一步探讨

单克隆抗体(McAb)研制中,细胞融合技术为一随机过程,难免受到操作者主观因素和某些客观因素的影响。我们在制备抗4种血清型的葡萄球菌肠毒素(SEA.SEB,SEC1和SED)McAb过程中,有目的地对促融剂、溶液pH值、融台过程的温度及时间控制等环节进行了对比观察和进一步探讨。 1 促融剂及溶液pH值的比较 促融剂为聚乙二醇(PEG),进口的两家产品(FLAKE,MW 1500:MERCK,MW4000)。试验中,在固定45％PEG溶液于pH 8.2和细胞     

小鼠杂交瘤腹水、实体瘤及血清中单抗滴度观察

<正> 单克隆抗体(McAb)的生产常规都是将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱发其产生腹水而获得。但在制备腹水的过程中,常可见到小鼠腹腔生长成大量实体瘤而影响腹水的产生。为了能及时获得所需的McAb,我们在制备抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)McAb腹水的过程中,比较了实体瘤与相应鼠腹水和血清中所含特异性McAb的滴度。     

应用单克隆抗体分析甲状腺球蛋白的抗原性

应用自制的10种抗人甲状腺球蛋白(HTg)单克隆抗体(McAb)对HTg 进行抗原性分析。7种McAb同时结合人和狗的甲状腺球蛋白(Tg),3种 McAb仅结合 HTg。根据竞争结合抑制试验的结果,可将McAb 分成反应性不同的5个组,其中8种 McAb对2-ME 处理的HTg的结合力显著下降,2种 McAb对 SDS 解聚及热变性HTg的结合力下降。Graves′病,桥本氏甲状腺炎等抗HTg自身抗体可抑制6种McAb对HTg的结合。这些结果提示:1.HTg分子上至少存在着5个抗原区域,一些抗原决定簇决定着种属特异性,另一些可能为哺乳动物共有。2.抗HTg McAb可以识别依赖二硫键的抗原决定簇。3.与抗HTg自身抗体反应的一些抗原决定簇,可能分布在一定的抗原区域内。     

抗人外周淋巴结归位受体同源物单克隆抗体(Leu 8)抑制B细胞分化而不抑制B细胞增殖

Leu 8分子是一种鼠MEL-14外周淋巴结归位受体人的同源物,表达在大多数循环的T 细胞和B 细胞。通过抗Leu 8 McAb 对B细胞分化和增殖的影响研究发现,抗Leu 8McAb 明显地抑制由SAC(Staph.A cow-anl)+IL-2(10u/ml)刺激高密度B 细胞Ig 的产生,抑制程度与所加入McAb 浓度相关,在312～625ng/ml 时,只能抑制IgM产生最大量的5%～70%,表明抗Leu 8McAb 不抑制Leu 8~-B 细胞Ig 的合成。这种抑制作用不能被加入外源性的Th 纠胞、     

单克隆抗体SC13A和SC3A在乳腺疾病中的免疫组化研究

本文以免疫组化法分别研究了McAb SC 13A和SC 3A与134例12种不同组织学类型乳腺疾病的反应性。结果显示,这2株McAb与乳腺癌的阳性反应率分别为89.5％和94.7％,其中强阳性各占68.5％和76.3％;反应范围>50％的分别为52.6％和72.3％。这2株McAb的反应结果相似(P>0.05)。在乳腺良性病变中,其阳性率分别为22.4％和48.3％,后者明显高于前者,与乳腺癌比较的差异均有非常显著意义(P<0.01)。表明这2株McAb识别的抗原在乳腺癌中均有较高的表达,但在良性病变中亦有一定的表达,为其进一步深入研究提供了一种新而有用的标志物。     

葡萄球菌肠毒素B突变体(K172E)的制备和抗肿瘤活性分析

目的 :制备葡萄球菌B型肠毒素 (SEB)突变体 ,观察其抗肿瘤活性变化。方法 :将诱导表达的SEB突变体重组蛋白包涵体进行变性复性和分离纯化 ,并对其肿瘤抑制活性与野生型SEB进行比较。观察突变体蛋白的抑瘤效果。结果 :建立了可行的包涵体复性条件和纯化方法 ,获得的突变体蛋白具有明显的抗肿瘤作用 ,其抑瘤活性比野生型SEB至少高 10倍。结论 :获得的突变体SEB K172E的抗肿瘤效果经体外实验证实优于野生型SEB ,有可能成为一种较具潜力的抗肿瘤药物     

刀豆凝集素单克隆抗体特性分析和初步应用

建立了一株能分泌抗刀豆凝集素(ConA)单克隆抗体(McAb)的细胞株-CA2。ELISA证实所得 CA2 McAb仅与 ConA有反应,而与菜豆凝集素(PHA)、美洲商陆(PWM)、花生凝集素(PNA)、扁豆凝集素(LcA)以及牛血清白蛋白(BSA)都无交叉反应。免疫印迹试验进一步证实该McAb 只能与 ConA 形成免疫沉淀线。该McAb 能抑制 ConA对RLc-802细胞的凝集作用,竞争抑制试验显示α-甲基甘露糖、果糖不能抑制 CA2 McAb与 ConA 的结合,提示它可能是针对 ConA蛋白结合点部位抗原决定簇的 McAb。应用该McAb证实了急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt_4、CEM和B淋巴母细胞CCRF-sb以及转化的扁桃腺淋巴细胞表面膜存在有分子量大小不同的 ConA受体,提示同是ConA受体,可能具有不同的生物学功能。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ、单克隆抗体介导ADCC效应的探讨

本文用HSV-1SM44株感染BHK细胞,经放射性同位素~(51)Cr标记制备靶细胞,以正常小鼠脾细胞为效应细胞,应用5株抗HSV McAb,建立了McAb介导ADCC-~(51)Cr释放试验的测定方法,对McAb介导的ADCC效应测定的有关试验条件做了选择,确定了最适工作条件。ADCC测定结果表明,5株抗HSV McAb介导ADCC的活性不同,McAb 1A12,2A8,1G8无ADCC活性;而1D10和2C5 2株McAb 1:10稀释时的~(51)Cr释放率分别为27.09和25.07％,进一步稀释至10~(-2)或10~(-3)时,这2株McAb仍有ADCC活性。结果提示,不同的HSV抗原决定簇诱导产生的抗体,在介导ADCC免疫保护作用上是有差异的。并为McAb用于临床治疗HSV感染的可能性提供了实验资料。     

抗利尿激素单克隆抗体的制备及初步应用

作者应用B淋巴细胞杂交瘤技术,成功地建立了分泌抗抗利尿激素(ADH)的McAb细胞株,所获的3株细胞分泌的McAb分别为IgG1,IgG2a,IgG2b。其诱生腹水滴度可达1×10~(-5)～5×10~(-5),灵敏度为2.5ng/ml。抗体亲和力K值在(3～4)×10~(-9)L/M之间,受温度影响明显。McAb与11种神经肽进行竞争抑制试验,均无交叉反应。静脉注射McAb可使新西兰兔尿量明显增加。用免疫组化的方法对大鼠下丘脑神经细胞进     

抗人IL-5单抗的制备、特性及其在ELISA中的应用(文摘)

IL-5是一种对于不同的靶细胞具有不同免疫调节活性的细胞因子,它在B细胞以及其他造血细胞(如T细胞和嗜酸性粒细胞)的生长和分化过程中起着重要的作用。Harada(1987)和Schumacher等(1988)曾报道抗小鼠IL-5的大鼠单克隆抗体(McAb)与人IL-5有交叉反应性。本文报告抗人IL-5的小鼠McAb的制备。这种小鼠McAb可用于免     

抗人尿激酶单克隆抗体制备和鉴定

用人高分子量尿激酶(HMW-UK)为抗原,通过杂交瘤技术获得了两株阳性杂交瘤细胞(2B8、3A2)。采用葡萄球菌 A 蛋白(SPA)亲和层析或 Water's650快速蛋白分离系统纯化抗 UK 单克隆抗体(McAb).3A2McAb 为 IgG 1亚类,特异地识别 HMW-UK 和低分子量 LMW-UK,抑制 UK 活性,表明3A2McAb 所作用的位点为 UK 的 B 链,即活性中心。EIA 测定3A2McAb 与 UK 的亲和常数为8.43×10~8M~(-1)。2B_8McAb 亦为IgG_(?)亚类,特异地识别 HMW-UK 及其氨基端1～135氨基酸片段(ATF),不抑制活性,EIA 测定2B_8McAb 与UK 的亲和常数为2.8×10~9M~(-1)。2B_8McAb 可用于导向溶栓的研究以及 UK 与其受体间反应的研究。     

抗独特型单克隆抗体疫苗保护BALB/c小鼠防御致死性塞姆利基森林病毒的感染(文摘)

抗独特型单克隆抗体(McAb)具有病毒抗原“内影像”的特点可从被开发成为一种抗病毒疫苗。本文作者应用一种能与抗塞姆利基森林病毒(SFV Semliki forest Virus)E_2膜蛋白抗原位点结合的McAb U M1.13,SFV免疫小鼠制备出2种抗独特型McAb(Ab_2)(1.13 A 112和1.13 A321)。Ig亚类鉴定分别为IgG2a和IgG1。应用EIA检测两个抗独特型McAb均具有阻挡McAbU M 1.13中和SFV的能力。     

ABO血型McAb取代常规人血清血型试剂的可行性探讨

为了获得可用于大量细胞培养生产血型单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,本文在7次细胞融合中,建立了35种分泌抗A、抗B McAb的细胞株,并对其细胞培养上清抗体效价≥1:128的6种McAb进行特性分析和临床验证,实验结果表明,这些细胞具有工业生产血型 McAb的潜力,本文对所得McAb替代现用人血清血型试剂的可行性进行探讨。     

B细胞系肿瘤细胞表面标记与临床预后的关系

以血研所制备的B细胞系列McAb和抗成熟B细胞McAb(HI43,HI47,HI49)及抗淋巴-浆细胞标志的McAb(HIT2)检测10例B细胞系肿瘤。同时以McAb OKT3,OKT4,OKT8(抗T细胞组),S36-3A1,4-3B11,789-E6(抗B细胞组)及CD10(抗浆细胞、     

产毒性大肠杆菌菌毛(F_(41))单克隆抗体体内被动传递保护作用的研究

产毒性大肠杆菌(ETEC)F_(41)~ 菌株20 LD_(50)喂饲感染BALB/c新生乳鼠,在感染前、后3h,给母鼠尾静脉注射1∶10或1∶100稀释的抗F_(41)单克隆抗体(McAb),观察McAb对感染新生乳鼠的传递被动保护作用。结果发现,感染前McAb 1∶10的保护率为100％,1∶100的保护率为11.5％;感染后McAb 1∶10的保护率为51.7％,1∶100的保护率为4.1％。这表明传递被动保护作用是有效果的,保护效果与McAb的注射剂量和注射时间密切相关。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠,测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明,被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)的保护作用,其中3株有明显的保护作用,并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。     

生物素-抗生物素抗原斑点试验在检测疟疾抗原上的应用

应用生物素-抗生物素系统(Biotin-Avidin System,BAS)的生物放大作用,建立了生物素-抗生物素抗原斑点试验(ABC-AST),并采用多株抗疟原虫红内期单克隆抗体(McAb),以增加试验的敏感性,明显提高了染色斑点的阳性强度。用多株抗疟原虫 McAb获得的抗原斑点的颜色明显深于单株 McAb,而与多克隆抗体染色效果相似。 本试验应用多株 McAb为反应剂的 ABC-AST检测92例镜检查见原虫的间日疟病人血清,阳性率为94.57％,AST 为86.96％;对42例镜检原虫密度小于0.01％的疟疾病人血清AST 法仅能查出76.19％,而ABC-AST法能查出92.86％,明显地提高了检出率。健康人血清的 ABC-AST和 AST假阳性率分别为4.35％和6.09％(P>0.05)。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠，测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明，被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素莹克隆抗体(McAb)的保护作用，其中3株有明显的保护作用．并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。