肺炎嗜衣原体热休克蛋白10促炎症作用及其机制的初步研究

目的探讨肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)热休克蛋白(heat shock protein,HSP)10(CHSP10)诱导人单核细胞分泌炎症因子的作用及Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2、TLR4与此作用的相关性。方法以去内毒素活性的不同质量浓度CHSP10(0.5、1、5、10、20、30μg/ml)刺激THP-1细胞0、6、12、24、36、48、60 h,检测蛋白未处理组、加热处理组、去蛋白处理组中IL-1β及IL-6水平;用CHSP10刺激C3H系野生型(C3H/HeN)和TLR4缺陷型(C3H/HeJ)小鼠腹腔巨噬细胞,分别检测IL-1β及IL-6水平;用CHSP10刺激被抗TLR2/TLR4抗体处理的THP-1细胞,检测IL-1β、IL-6的变化。结果 CHSP10可诱导THP-1细胞产生炎症因子IL-1β、IL-6;CHSP10诱生C3H系野生型小鼠细胞分泌的炎症因子明显高于TLR4缺陷型小鼠细胞;用TLR2和/或TLR4抗体封闭后,CHSP10诱生的IL-1β、IL-6不同程度减少。结论 CHSP10可能作为炎症相关蛋白参与了Cpn对宿主细胞的致炎作用;并且TLR2及TLR4在该炎症刺激信号的传递过程中发挥一定的作用。     

雌二醇通过与雌激素受体β结合抑制骨关节炎滑膜细胞的NF-κB通路发挥抗炎作用

目的探讨雌二醇在骨关节炎病程中对滑膜细胞产生抗炎作用的机制。方法分离并鉴定滑膜细胞,利用免疫荧光染色观察滑膜细胞表达雌激素受体β(ERβ)的情况;而后对滑膜细胞进行分组:空白对照组,10 ng/m L白细胞介素1β(IL-1β)处理组、雌二醇处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L的雌二醇培养)、雌二醇联合雌激素受体阻断剂四氢大麻酚(THC)处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L雌二醇和10-5mol/L THC),各组处理36 h。实时定量PCR检测滑膜细胞中核因子κB抑制蛋白α(IκBα)和IL-6的mRNA水平,Western blot法检测滑膜细胞中IκBα和IL-6的蛋白水平。结果骨关节炎滑膜细胞中有ERβ表达;IL-1β组IL-6的mRNA和蛋白水平表达均增高;IκBα蛋白水平降低,而mRNA水平升高,同时磷酸化IκBα蛋白水平升高;与IL-1β组相比,IL-1β联合雌二醇组,IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平下降。用IL-1β、雌二醇、雌激素受体阻断剂三者联合组,则可见IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平较IL-1β处理组无明显变化。结论雌二醇通过结合ERβ抑制NF-κB通路激活从而发挥抗炎作用。     

CPSIT_p7通过激活JNK/ERK信号通路诱导宿主细胞炎症

目的初步探讨鹦鹉热嗜衣原体蛋白CPSIT_p7对宿主细胞炎症反应的调节作用及其分子机制。方法佛波酯(PMA)处理THP-1细胞过夜,诱导其分化为贴壁的巨噬细胞,之后用CPSIT_p7蛋白刺激贴壁细胞,或先用30μmol/L ERK抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB202190分别预处理贴壁细胞,再用CPSIT_p7蛋白处理贴壁细胞;Western blot检测ERK、JNK和p38磷酸化水平,ELISA检测各种炎症因子的表达水平。结果 0~10μg/ml CPSIT_p7蛋白刺激PMA诱导的THP-1细胞24 h后,随着CPSIT_p7质量浓度升高,IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α的含量呈剂量依赖性增加;10μg/ml的CPSIT_p7处理细胞0、6、12、24和36 h,在24 h时IL-6、IL-8及IL-1β表达水平达到高峰,而TNF-α在12 h就达到高峰;CPSIT_p7蛋白处理细胞后其ERK和JNK磷酸化水平显著升高,p38磷酸化水平改变不明显;JNK和ERK抑制剂能明显降低CPSIT_p7蛋白诱导的IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α表达。结论 CPSIT_p7通过JNK/MAPKs和ERK/MAPKs信号传导途径诱导THP-1产生IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α炎症因子,与p38/MAPKs信号传导通路无关。     

白细胞介素12对耐药结核大鼠模型的影响

目的观察、评价白细胞介素12(IL-12)对耐药结核大鼠模型的脏器菌落变化和细胞因子水平的影响。方法将60只SD雌性大鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株,每只10~6 CFU,制成耐药结核大鼠模型,随机分为对照组和IL-12组,每组30只。给予PBS或IL-12治疗7 d,ELISA法检测血清IFN-γ水平、流式细胞术行T细胞亚群检测和平板计数法测定器官菌落计数,观察治疗后生存率。结果 IL-12组大鼠1只死亡,肺、肝、脾菌落数分别为(254±98)×10~5、(5±2)×10~5和(16±4)×10~5 CFU/ml,IFN-γ(1125±378)pg/ml;PBS组10只死亡,肺、肝、脾菌落数分别为(682±304)×10~5、(28±17)×10~5和(108±35)×10~5 CFU/ml,IFN-γ(532±198)pg/ml,两组比较差异有显著性。淋巴细胞亚群测定显示IL-12促进Th1细胞反应,改变了Th1/Th2平衡,两组比较差异有显著性。结论 IL-12诱导IFN-γ产生,促进Th1细胞反应,改变了Th1/Th2平衡,对结核分枝杆菌感染大鼠产生保护效应。     

IL-6通过诱导lncTCF7表达促进甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮-间充质转化、迁移和侵袭

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)通过诱导长链非编码RNA lnc TCF7表达对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮-间充质转化(EMT)、迁移和侵袭能力的影响。方法:以0、5、10、20和50μg/L的IL-6作用于TPC-1细胞24 h或以50μg/L的IL-6作用于TPC-1细胞0、6、12和24 h后,RT-qPCR检测IL-6对TPC-1细胞中lnc TCF7表达的影响。以50μg/L的IL-6处理TPC-1细胞24 h后,Western blot检测IL-6对TPC-1细胞中E-cadherin和vim-entin蛋白表达的影响。建立lnc TCF7过表达的TPC-1细胞株,Western blot和Transwell小室实验检测过表达lnc TCF7对TPC-1细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。敲减lnc TCF7的表达并给予50μg/L的IL-6处理后,观察lnc TCF7对IL-6处理后的TPC-1细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。结果:IL-6可呈剂量和时间依赖性地诱导TPC-1细胞中lnc TCF7的表达(P 0.05)。过表达lnc TCF7可下调TPC-1细胞中E-cadherin表达,上调vimentin表达,增强细胞的迁移和侵袭能力(P 0.05)。IL-6可使TPC-1细胞中E-cadherin表达降低,vimentin、Snail和Slug表达升高,同时,增强细胞的迁移和侵袭能力,增大细胞间隙;敲减lnc TCF7表达能够明显抑制IL-6引起的上述变化。结论:IL-6可通过诱导lnc TCF7表达促进甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的EMT、迁移和侵袭。     

IL-2对中子照射后肠上皮细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的:观察中子照射对体外培养的IEC-6细胞生长的影响及IL-2对其损伤后增殖和恢复的作用,并进一步探讨IL-2调节受照射肠上皮细胞生长的相关机制。方法:单独用IL-2(1×105U/L)或同时施加JAK1激酶阻断剂(A77-1726)处理受4Gy中子照射的IEC-6细胞,并于照后10、15、30min和1、3、6、12、24、48及72h,用MTT比色法和流式细胞术检测受照射后IEC-6细胞的增殖活力和死亡方式的改变。以免疫细胞化学染色和Western blot检测IEC-6细胞上IL-2Rβ的表达和JAK1活化情况。结果:4Gy中子照射后24h,IEC-6细胞的增殖活力明显降低;而IL-2处理组该细胞的增殖活力有显著提高(P<0.05)。受中子照射的IEC-6细胞经IL-2作用24h,其凋亡率明显降低(P<0.05),而坏死率变化不明显。以IL-2刺激中子照射的IEC-6细胞后,于10及15min可见JAK1发生明显磷酸化活化,24h时IL-2Rβ的表达明显增多。同时应用A77-1726和IL-2处理受中子照射的IEC-6细胞后,其增殖活力明显低于单纯IL-2处理组。结论:IL-2可促进受中子照射的IEC-6细胞增殖,具有抗辐射作用。IL-2Rβ和JAK1活化参与了IL-2对中子损伤的IEC-6细胞生长的调控。     

IL-16通过促进巨噬细胞的M1型极化加重葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病

目的研究白细胞介素16(IL-16)在炎症性肠病(IBD)发生发展过程中的作用并且明确其参与IBD发病的调控机制。方法采用7周龄野生型C57BL/6(WT)和IL-16敲除(IL-16~(-/-))雌性小鼠,分为WT对照组、WT葡聚糖硫酸钠(DSS)处理组、IL-16~(-/-)对照组和IL-16~(-/-)DSS处理组。DSS模型组给予含25 g/L DSS的饮水7 d,建立IBD模型,对照组小鼠给予正常饮水,建模期间记录小鼠体质量绘制体质量变化曲线。7 d后,解剖分离小鼠全结肠,反转录PCR检测结肠组织IL-16 mRNA水平,ELISA检测结肠组织IL-16蛋白水平,免疫荧光技术检测结肠组织IL-16的表达和定位。HE染色检测小鼠结肠病理损伤,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测结肠组织细胞凋亡,流式细胞术检测腹腔细胞中巨噬细胞的数量和极化情况(F4/80、CD86),免疫组织化学染色法检测结肠组织中巨噬细胞的分布,反转录PCR分别检测结肠组织IL-6、IL-12 mRNA水平,ELISA检测IL-6、IL-12蛋白水平。结果 DSS诱导后,结肠组织高表达IL-16。与WT DSS处理组相比,IL-16~(-/-)DSS处理组小鼠体质量变化较小,结肠组织损伤较轻,凋亡细胞显著减少,IL-16~(-/-)小鼠腹腔或结肠组织中巨噬细胞显著减少,巨噬细胞向M1亚型的极化水平明显减弱,其标志性炎性因子IL-6、IL-12的水平显著降低。结论 IL-16可通过促进巨噬细胞的M1型极化加重DSS诱导的炎症性肠病。     

一种高度敏感的改良的IL—1检测方法

采用CTLL-2检测IL-1诱导小鼠胸腺瘤细胞系EL_4产生IL-2活性,建立了一种间接检测IL-1的方法。通过对多种影响因素进行探讨,选择了较适的诱导血清浓度,细胞浓度,诱导时间和转移诱导上清稀释度,从而使检测IL-1的敏感性达10~(-3)～10~(-4)U/ml(2.5～25×10~(-4)Pg/ml,约为小鼠胸腺细胞检测方法的10~2～10~3倍),整个检测流程可在40小时内完成。若用CTLL-2和EL_4细胞同时培养的一步法检测,敏感性约为10~(-1)U/ml,但30小时内可完成检测。此法不受高浓度rHuTNF-α、rHuTNF-β、rHuIL-6干扰,IL-2、ConA、PHA、LPS和SEB对检测系统只有较弱的影响,但A23187可明显地干扰检测系统。因此,本方法可用于基础和临床研究过程中不同来源的IL-1生物学活性检测。     

lncRNA SNHG1调控miR-5195-3p抑制IL-6诱导的胃癌细胞增殖和转移北大核心CSCD

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG1调控miR-5195-3p抑制IL-6诱导的胃癌细胞增殖和转移促进作用的机制。方法:以胃癌细胞HGC-27为研究对象,将细胞分为Control组(不做任何处理)、IL-6组(50 ng/ml的IL-6处理细胞)、IL-6+si-NC组(转染si-NC,用IL-6处理细胞)、IL-6+si-SNHG1组(转染si-SNHG1,用IL-6处理细胞)、IL-6+si-SNHG1+anti-miRNC组(共转染si-SNHG1和anti-miR-NC,用IL-6处理细胞)、IL-6+si-SNHG1+anti-miR-5195-3p组(共转染si-SNHG1和anti-miR-5195-3p,用IL-6处理细胞)。采用qRT-PCR法检测SNHG1、miR-5195-3p表达水平;MTT法检测细胞活性;Western blot法检测Ki-67、p21、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2蛋白表达;Transwell法检测迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测SNHG1和miR-5195-3p靶向关系。结果:IL-6组内SNHG1表达水平、细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki-67、N-cadherin、MMP-2蛋白表达明显高于Control组,p21、E-cadherin蛋白表达、miR-5195-3p表达水平明显低于Control组。IL-6+si-SNHG1表达水平、细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki-67、N-cadherin、MMP-2蛋白表达明显低于IL-6+si-NC组,p21、E-cadherin蛋白表达、miR-5195-3p表达水平明显高于IL-6+si-NC组。SNHG1靶向调控miR-5195-3p的表达,抑制miR-5195-3p可以逆转下调SNHG1对IL-6诱导胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论:SNHG1可能通过靶向负调控miR-5195-3p的表达抑制IL-6诱导的胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

右美托咪定对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及其机制

目的探讨右美托咪定(DEX)改善软骨细胞损伤是否与PI3K/AKT信号通路有关。方法将体外培养的人软骨细胞分为5组:对照组(正常培养),IL-1β组(给予10 ng/ml IL-1β培养24 h),IL-1β+DEX组(以100 nmol/L DEX和10 ng/ml IL-1β共同培养24 h),IL-1β+IGF-1组(以50 ng/ml PI3K/AKT信号通路激动剂IGF-1和10 ng/ml IL-1β共同培养24 h),IL-1β+DEX+IGF-1组(以10 ng/ml IL-1β、100 nmol/L DEX和50 ng/ml IGF-1共同培养24 h)。采用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清液中IL-6和TNF-α含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中Aggrecan、Collagen II和MMP13 mRNA表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,比色法检测细胞中Caspase-3活性,Western blotting检测细胞中AKT、p-AKT、Bcl-2、Caspase-3和Bax蛋白表达水平。结果与对照组比较,给予IL-1β刺激后软骨细胞存活率、细胞中...     

应用7TD1细胞系建立重组人白细胞介素11的检测方法

白细胞介素１１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１１，ＩＬ－１１）是一种具有广泛生物学活性的细胞因子。本文应用ＩＬ－６依赖的小鼠杂交瘤细胞系７ＴＤ１建立了检测重组人白细胞介素１１（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩＬ－１１，ｒｈＩＬ－１１）的方法。实验结果表明，７ＴＤ１细胞系对ＩＬ－１１具有良好的反应性和剂量依赖关系。我们将这种方法应用于本实验室对ｒｈＩＬ－１１的检测，取得了良好的效果。     

IL—6对小鼠（B—杂交瘤）7TD1细胞凋亡的调控作用

小鼠Ｂ－杂交瘤７ＴＤ１细胞的生长依赖于ＩＬ－６的存在。本研究对有或无ＩＬ－６条件下，对７ＴＤ１细胞的生物学行为加以分析。结果发现：１．细胞在缺乏ＩＬ－６时，生长停滞并出现细胞凋亡的典型特征；２．ＤＮＡ核酸酶抑制剂ＡＴＡ可有效防止因ＩＬ－６缺乏所致的凋亡；３．ＲＮＡ合成抑制剂ＣＨＸ能充分抑制ＩＬ－６对７ＴＤ１的生物效应，从而使细胞步入凋亡。本研究提示，ＩＬ－６通过抑制７ＴＤ１内部持续存在的细胞死亡程     

Ras/MAPK/NF-IL-6信号途径在IL-6促7TD1细胞增殖中的作用

为探讨IL 6促进 7TD1细胞增殖的机制 ,本研究采用凝胶阻滞电泳方法比较IL 6对核因子STAT3(代表JAK STATs通路 )、NF IL 6 (代表Ras/MAPK/NF IL 6通路 )的激活方式 ,以反义寡核苷酸 (ASODNs)阻断IL 6对核因子的激活 ,检测ASODNs对IL 6效应的影响 ,并采用MEK特异性抑制剂PD0 980 5 9阻断Ras/MAPK通路的激活 ,观测Ras/MAPK通路的功能意义。结果发现STAT3与NF IL 6都可被低剂量IL 6激活 ,但NF IL 6激活后持续的时间比STAT3长。STAT3ASODN对IL 6效应的影响很弱 ,而NF IL 6ASODN可显著拮抗IL 6的促增殖作用。PD0 980 5 9的作用同NF IL 6ASODN相似。这些结果说明在 7TD1细胞中 ,Ras/MAPK/NF IL 6途径介导IL 6的促增殖信号。     

Identification of two groups of smoldering multiple myeloma patients who are either high or low producers of interleukin-1.

Interleukin-1beta (IL-1beta) is abnormally expressed by the plasma cells obtained from myeloma patients, and it is a potent inducer of the important myeloma growth factor, IL-6. We investigated whether levels of IL-1beta biologic activity might distinguish different groups of patients with smoldering multiple myeloma (SMM). We measured the ability of IL-6 production by bone marrow stromal cells to serve as a surrogate marker for IL-1beta biologic activity. Using this IL-1beta bioassay, we found that it is sensitive at < 1 pg/ml of recombinant IL-1beta and that IL-1beta biologic activity is detectable with either mature or pro-IL-1beta-transduced myeloma cell lines. Patients with active myeloma induced quantitatively higher levels of stromal cell IL-6 production when compared with those with monoclonal gammopathy of undetermined significance (MGUS). The bioassay distinguished two groups of SMM patients, those who were high producers, similar to patients with active MM, and those who were low producers, comparable to MGUS patients. IL-1 antagonists inhibited the paracrine IL-6 production by > or = 90% in the majority of patients with an elevated IL-6 level. Based on such studies, it may be possible to predict patients that will progress to active MM and to delay or prevent this progression with IL-1 antagonists.     

多发性骨髓瘤患者IL－1、IL－6测定及相关性研究

以ＥＬ４＋ＣＴＬＬ－２及７ＴＤ１细胞株增殖法分别检测ＩＬ－１和ＩＬ－６，发现多发性骨髓瘤患者ＰＢＭＣ及骨髓瘤细胞培养上清中ＩＬ－１与ＩＬ－６水平均高于正常对照，且ＩＬ－１和ＩＬ－６水平变化呈平行相关，基因重组ＩＬ－１α和β可剂量依赖性增强骨髓瘤细胞产生ＩＬ－６，提示ＩＬ－１可诱导人类多发性骨髓瘤细胞产生ＩＬ－６，进而刺激瘤细胞增殖。     

Production of interleukin-1 beta, interleukin-6 and tumor necrosis factor-alpha by a rat corneal epithelial cell line

Production of interleukin (IL)-1 beta, IL-6 and tumor necrosis factor (TNF)-alpha by rat corneal epithelial cells in response to lipopolysaccharide and phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) was tested. Supernatants from rat corneal epithelial cells treated with lipopolysaccharide and PMA were collected after 6, 24 and 48 h and tested with enzyme-linked immunosorbent assay for IL-1 beta, IL-6 and TNF-alpha. The activity of TNF-alpha was additionally confirmed with bioassay on L929 cells. It was found that control groups did not produce significant levels of either cytokine. However, after stimulation with lipopolysaccharide, cells produced mainly IL-6, whereas after PMA they produced mainly TNF-alpha. IL-6 levels 24 and 48 h after PMA stimulation were also elevated, which could have been caused by the presence of TNF-alpha. Production of IL-1 beta in all groups was very low and remained within the test sensitivity range. These results show that the rat corneal epithelial cell line produces inflammatory cytokines in response to proinflammatory mediators. For this reason, it could be used for measuring the effects of irritants on the cornea.     

The murine T cell line CT6 provides a novel bioassay for interleukin-7

Like interleukin (IL)?2 and IL-4, IL-7 can act as a growth factor for activated T lymphocytes. Upon screening a panel of growth factor-dependent T cell lines, we found that only the cell line CT6 responded to IL-7, indeed as vigorously as to IL-2. Obviously, these findings challenge the validity of previous results on IL-2 production obtained using the CT6 cell line. However, they also demonstrate a novel and sensitive system for the bioassay of IL-7. The ability of the surveyed T cell lines to proliferate to IL-7 corresponded with the expression of IL-7 receptors (IL-7R) on the cell surface. The murine IL-7R on CT6 was shown to bind IL-7 with dual affinity and was visualized as an affinity cross-linked complex of 93 kDa. This IL-7R appears similar to that seen on murine splenic T cells and on 70Z/3, the pre-B cell line from which the murine IL-7R was cloned.