溴氰菊酯对大鼠脑细胞DNA的损伤作用

目的 研究溴氰菊酯（ＤＭ）对大鼠脑细胞ＤＮＡ的损伤作用。方法 用流式细胞仪观察了ＤＭ处理后大鼠脑组织ＤＮＡ片段化的发生情况,用荧光染色体法观察了ＤＭ作用后大鼠分离脑细胞核的形态变化。结果 用流式细胞仪进行检测,发现ＤＭ可以使大鼠脑组织皮质,海马和小脑部位ＤＮＡ片段化的细胞数明显增加,同时ＤＭ可以使分离的脑细胞ＤＮＡ受到损伤,细胞核出现染色质浓缩,边比胚整齐,裂或环状等类似凋亡的形态学改变,结论 Ｄ     

氯化甲基汞对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响

本文用Hewish和Burgoyne法分离纯化大鼠脑细胞核,采用脑细胞核缺口翻译分析法,探讨孕鼠于妊娠器官发生期,经腹腔连续给予5天氯化甲基汞(2mg/kg体重)后,对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响。实验结果表明,接触氯化甲基汞组大鼠脑细胞核,分别经DNase 1和EcoR 1核酸内切酶消解后,进行核缺口翻译测定,生后3天大鼠脑细胞核,分别经两种酶处理后,其~3H—dAMP掺入量均明显低于相应未接触氯化甲基汞对照组。氯化甲基汞对大鼠发育过程中脑染色质结构的影响,可能与胎、幼鼠对甲基汞神经毒性的易感有密切关系。     

Effects of methylmercury chloride on the brain chromatin structure in rats at various developing stages

妊娠７～１１ｄ的孕鼠，经腹腔连续注入氯化甲基汞（２ｍｇ／ｋｇ体重），采用Ｈｅｗｉｓｈ和Ｂｕｒｇｏｙｎｅ法分离纯化不同发育阶段新生大鼠的脑细胞核，来探讨氯化甲基汞对其脑染色质结构的影响。接触或不接触氯化甲基汞的大鼠脑细胞核分别经ＤＮａｓｅ１和ＥｃｏＲ１核酸内切酶消化后进行缺口翻译。结果接触氯化甲基汞生后３ｄ的大鼠脑细胞核３Ｈ－ｄＡＭＰ的掺入量明显低于相应未接触氯化甲基汞的对照组（Ｐ＜０．０５）。我们认为氯化甲基汞对大鼠发育过程中脑染色质结构的影响可能与胎、幼鼠对甲基汞神经毒性的易感有密切关系。     

抗衰延寿方对青,老年大鼠肝细胞核转录活性的影响

本文研究抗衰延寿方对青、老年大鼠肝细胞核转录活性、染色质DNaseI消化敏感性及染色质化学组分的影响。结果证明:青年大鼠肝细胞核染色质DNaseI消化敏感性和肝细胞核非组蛋白染色体蛋白含量均明显的高于老年大鼠(P<0.01)。青年大鼠转录活性高于老年大鼠9.7％。服用抗衰延寿方后,青、老年大鼠肝细胞核转录活性、肝细胞核染色质DNasI消化敏感性均明显提高,而非组蛋白染色体蛋白含量无改变。     

不同龄大鼠大脑神经细胞核染色质10nm和30nm纤维核小体排布特征分析

目的：观察不同年龄大鼠大脑神经细胞核染色质１０ｎｍ和３０ｎｍ纤维核小体排布特征，探讨老化过程导致大脑神经细胞核转录活性衰退的分子机制。方法：选用微球菌核酸酶（ＭＣＮ）为染色质结构识别探针，经蔗糖密度梯度离心、凝胶电泳，可显示不同龄大鼠大脑染色质结构特征的变化。结果：幼年鼠、成年鼠和老年鼠大脑染色质１０ｎｍ纤维核小体重复长度分别保持在（１７６±４）、（１７５±６）和（１７８±７）ｂｐ水平上；而３０ｎｍ抗酶解寡聚体核小体数目为：酶解３０％染色质时，分别是（３９±０．４７）、（４２±０．２６）和（４６±０．０２）；酶解５０％染色质时，则是（１８±０．１２）、（２１±０．４１）和（２６±０．２７）。结论：大鼠大脑细胞核１０ｎｍ染色质纤维核小体重复长度不受老化过程影响；３０ｎｍ纤维抗酶解寡聚体大小与年龄呈正相关，提示大鼠老化过程大脑染色质构象发生不利于ＭＣＮ酶解的变化，这可能是老化导致转录功能衰退的重要原因之一     

30例人生殖道疣的超微结构研究

本实验用透射电镜观察了5例宫颈湿疣、25例外阴湿疣的超微结构,研究结果表明:生殖道疣病变影响上皮全层,其形态特点是细胞核染色质凝集深染成致密团块,核外形欠规整,细胞内层胞质围绕细胞核形成一透明带。凹空细胞首先见于副基底层,至中层出现典型凹空细胞特点,延续至上皮表层。细胞核内可见大量染色质之间粒、染色质周围颗粒和核小体。以上结构及凹空细胞的出现是人乳头瘤病毒(HPV)感染生殖道上皮的特征性形态学改变。作者认为除湿疣中出现典型的凹空细胞外,生殖道疣细胞核内出现大量的染色质之间颗粒、染色质周围颗粒及核小体与HPV感染有关。     

家兔脑染色质蛋白的分部及其组份分析

本文用2.2M蔗糖液一次超速离心获得纯净的脑细胞精核。脑细胞核的产率为51.47％。兔脑染色质中蛋白质组份用0.14M氯化钠、0.2N盐酸、酸性氯仿—甲醇及苯酚分别抽提,可获得0.14M氯化钠可溶性核蛋白、组蛋白、非组蛋白及磷酸化非组蛋白。脑组织中非组蛋白、非组蛋白/DNA比率均低于肝脏组织。这种差异可能说明染色质非组蛋白的器官特异性。     

血黏度增高大鼠血清对脑细胞的毒性作用

目的探讨血黏度增高（HBV）大鼠血清致脑细胞钙超载及死亡的毒性作用。方法高分子右旋糖酐制作HBV动物模型，HBV持续不同时间的大鼠血清为干预因素，分别干预原代培养大鼠脑细胞，激光共聚焦显微技术观察脑细胞内游离钙离子变化及致脑细胞死亡情况。结果HBV1—5d的大鼠血清干预脑细胞内游离钙离子荧光强度30S后达到高峰，荧光强度及其持续时间与HBV的持续时间呈正相关，并出现碘化丙啶着色的细胞核，其数量随HBV的持续时间而增多。结论右旋糖酐性HBV大鼠血清含有致体外培养脑细胞毒性因素，持续钙超载是导致脑细胞死亡的机制之一。     

细胞遗传学的基本知识及其在妇产科的应用(续)

细胞遗传学检查法一、性染色质检查法 (一) X染色质及其检查法 1.X染色质 1949年Barr和Bertram在雌猫的神经节细胞核内首先发现有一个性染色质小体。1953年Barr和Moore、Graham发现在人体细胞如皮肤细胞、口腔粘膜细胞中,于间期细胞核有用孚根(Feulgen)染色的浓染颗粒,约1微米大小,边缘清楚,位于核膜内侧,呈平凸状、三角形、扁圆形或卵圆形,称性染色质(X—小体、巴氏小体)。如查100个细胞(必须具备的条件是染色清淅,核膜清楚,核无缺损,网状核,染色质匀细,周     

不同龄大鼠脑神经元细胞核的纯化及其性质的比较

枉研究采用蔗糖法从不同龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠大脑皮质纯化制备神经元细胞核，并对其性质进行了比较研究。结果显示：以此法制备的神经元细胞核形态、结构均正常，而核产率随老化过程有减少趋势：三种ＲＮＡ聚合酶、染色质非组蛋白和ＲＮＡ含量随年龄增加而降低，但组蛋白含量不受老化因素影响。     

细胞核单一种类非组蛋白B2的提取

作者报道了一种提取细胞核单一种类染色质非组蛋白Ｂ２的简化方法。在获得核内酚溶性非组蛋白后经ＣＭ－２３羧甲基纤维素核进行离子交换层析。收集结合非组蛋白并通过双向电泳加以分离，切下胶内Ｂ２点蛋白于缓冲液浸泡抽提，离心获取上清。继用丙酮低温沉淀Ｂ２蛋白。     

衰老人胚肺成纤维细胞核及染色质的体外转录活性

研究人胚肺成纤维细胞（简称2BS）核及染色质体外转录活性与代龄的关系。方法：用γ-~(32)PATP及~3H-UTP参入法测定衰老2BS细胞核及染色质的转录活性。结果：（1）衰老2BS细胞核的转录起始能力较年轻的下降44％（P＜0.01）；（2）衰老和年轻2BS细胞核内不与染色质结合的RNA聚合酶（RNP）转录活性无差异（P＞0．05），而与染色质结合的RNA聚合酶转录活性则随增龄明显下降（P＜0．01）；（3）衰老2BS染色质体外转录活性较年轻2BS下降58％（P＜0．01），对DNaseⅠ的敏感性也有所降低。结论：衰老2BS细胞核染色质结构的改变可能是转录活性下降的原因。     

大鼠肝癌染色质非组蛋白的免疫鉴定

用细胞核免疫荧光、免疫过氧化物酶标、对流免疫电泳、免疫电泳、双向免疫扩散及火箭免疫电泳六种免疫鉴定法对肝癌染色质的免疫特性进行鉴定。经正常肝细胞核反复吸收过的抗肝癌染色质Ig能与肝癌染色质起阳性反应,而与正常肝染色质不起免疫反应。 超离心分离的肝癌染色质非组蛋白仍能与抗肝癌染色质Ig作用,起阳性反应;而正常肝非组蛋白、组蛋白及肝癌组蛋白与抗肝癌染色质Ig作用,均起阴性反应。同时见到在抗肝癌染色质Ig与全染色质抽取液间出现二条沉淀线,而与肝癌染色质非组蛋白作用,只有一条沉淀线。实验结果证明,三甲基奶油黄(3′-MeDAB)诱发的大鼠肝癌细胞,具有免疫特异性的染色质,这种特异性是由其染色质非组蛋白引起的。     

染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立

目的提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuclear assemblyprotein-1)及ACF(ATP-utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系。方法在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测。结果获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP-1和ACF;建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功。结论利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础。     

大鼠糖尿病早期视网膜超微结构变化

目的　探讨大鼠糖尿病视网膜病变 (DR)早期视网膜毛细血管及视细胞 (视感受器 )的病变规律。方法　选择健康成年Wistar大鼠 ,腹腔内注射链脲佐菌素 (STZ)诱导大鼠糖尿病 ,在透射电镜下观察DR早期视网膜血管及视细胞的超微结构改变。结果　病程 1月组 ,周细胞和内皮细胞核异染色质边集 ,视杆细胞膜盘模糊不清 ,间隙略有扩大 ;病程 3月组 ,上述改变加重 ,毛细血管扩张、基底膜增厚 ,视杆细胞核固缩、异染色质浓集 ;病程 6月组 ,上述改变更加严重 ,但毛细血管由扩张转为狭窄、变形 ,甚至闭塞。结论　大鼠DR早期出现视网膜毛细血管和视感受器超微结构的改变 ,并有随病程逐渐加重的趋势     

不同龄大鼠大脑神经细胞核染色质10nm和30nm纤维核小体排布 …

观察不同年龄大鼠大脑神经细胞核染色质１０ｎｍ和３０ｎｍ纤维小体排布特征，探讨老化过程导致大脑神经细胞核渌活性衰退的分子机制。     

滑膜细胞凋亡在胶原诱导性关节炎大鼠发病机制中的意义

目的研究滑膜细胞凋亡在胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠发病机制中的作用。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为造模组（20只）、正常对照组（10只,简称正常组）;造模组采用牛Ⅱ型胶原诱导建立CIA模型,造模成功后随机选取10只作为模型组。观察4周后,取各组滑膜标本,采用苏木素-伊红（HE）染色评价滑膜炎性细胞浸润及增生情况,并运用透射电镜、流式细胞术及细胞凋亡原位检测试剂（TUNEL）法检测滑膜细胞凋亡。结果HE病理结果显示：模型组的滑膜炎性细胞浸润和增生程度积分均较正常组显著增加（P〈0．01）。透射电镜检测结果显示：正常组可见滑膜细胞核膜皱缩,核染色质分布不均匀;模型组可见滑膜细胞呈梭形,细胞膜皱缩,细胞体积变小与邻近细胞分离,核内见染色质浓缩。流式细胞术、TUNEL法检测结果显示：模型组大鼠滑膜细胞凋亡率和凋亡指数均较正常组明显降低（P〈0．05或0．01）。结论CIA大鼠滑膜细胞增殖、滑膜细胞凋亡减少可能是导致CIA的发病机制之一。     

人胃癌细胞核染色质的制备及ELISA检测

本文建立了人胃癌细胞核染色质的制备方法，并应用ELISA方法对比分析了人胃癌细胞及正常人胃粘膜细胞核染色质的免疫反应，抗人胃癌细胞核染色质抗血清能与人胃癌细胞染色质产生强免疫反应，而与正常人胃粘膜细胞染色质反应甚低。     

衰老人胚肺成纤维细胞核及染色质的体外转录活性

目的：研究人胚肺成纤维细胞（简称２ＢＳ）核及染色质体外转录活性与代龄的关系。方法：用γ－＾３２Ｐ ＡＴＰ及＾３Ｈ－ＵＴＰ参入法测定衰老２ＢＳ细胞核及染色质的转录活性。结果：（１）衰老２ＢＳ细胞核的转录起始能力较年轻的下降４４％（Ｐ〈０．０１）；（２）衰老和年轻２ＢＳ细胞核内不与染色质结合的ＲＮＡ聚合酶（ＲＮＰ）转录活性无差异（Ｐ〉０．０５），而与染色质结合的ＲＮＡ聚合酶转录活性则随增龄明显下降（Ｐ     

细胞核内骨架及其与RNA的关系

(一)用DGD包埋的电镜技术同多种生化抽提技术相结合,观察到HeLa细胞核内呈现出以中间纤维为主的非染色质的基层——骨架系统,进一步证实这个核内骨架系统与细胞的RNA具有紧密的联结关系,并说明它不是rRNA。(二)经腺病毒(核内DNA病毒)感染后的细胞核内,染色质先趋边化,继而