栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

[目的] 探讨栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制。[方法] 体外培养H9C2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。实验分为正常对照组,缺氧/复氧模型组,栀子苷预处理组。分光光度法测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化物歧化酶(SOD)活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果] 与模型组比较,栀子苷预处理组能明显减少心肌细胞CK、LDH的漏出量,提高SOD活力,降低MDA含量,同时提高心肌细胞的存活率,减少心肌细胞的凋亡。[结论] 栀子苷预处理对H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与增强心肌抗氧化能力、清除氧自由基以及抑制心肌细胞凋亡有关。     

利多卡因预处理对H9c2心肌细胞缺氧复氧性损伤的保护作用

目的 探讨不同梯度浓度利多卡因预处理对缺氧复氧(H/R)引起的心肌细胞损伤是否具有保护作用。方法 实验随机分为7组：正常对照组(NC组)、缺氧复氧损伤对照组(HR组);利多卡因预处理组（LP组）,根据利多卡因的不同浓度对分为LP1（1μmol/L）、LP2（2.5μmol/L）、LP3（5μmol/L）、LP4（10μmol/L）、LP5（20μmol/L）组,每组6孔。心肌细胞损伤程度以心肌细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)活性来表示,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果 与NC组比较,HR组细胞活力显著减弱,LDH释放量显著增加,并且MDA含量增多,SOD活性降低;与HR组比较,L2~5组细胞活力显著增强,LDH释放量显著降低;并且MDA含量下降,SOD活性增强;且细胞活力强弱的变化与LDH释放量、MDA含量呈负相关,与SOD活性呈正相关（P均<0.01）。细胞活力的增强与利多卡因浓度的增加呈正相关,与LDH释放量和MDA含量减呈负相关（均P <0.05）。结论 利多卡因可能通过抑制心肌细胞脂质过氧化,呈浓度依赖性地减轻心肌细胞的缺氧复氧损伤。     

6-姜酚预处理对乏氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用

  目的  探讨6-姜酚（6-G）预处理是否能够减轻乏氧/复氧（H/R）诱导的H9C2细胞损伤及相关机制。  方法  采用常规方法制备心肌细胞H/R体外模型〔H9C2细胞加入经氮气饱和后的乏氧液后放于培养箱,通入混合气体（体积分数1%O₂,5%CO₂,94%N₂）作用15 min,培养3 h后取出细胞,置于常氧培养箱（37 ℃,体积分数5%CO₂）进行复氧培养1 h〕。在建立心肌细胞H/R体外模型前给予6-G预处理,采用MTT法测定细胞活力,并筛选6-G干预下细胞活力最大的6-G质量浓度进行后续实验。采用DCFH-DA荧光探针检测6-G预处理对H9C2氧化应激水平的影响,荧光显微镜以及流式细胞仪观察细胞内氧化应激的作用。Western blot法检测H/R诱导细胞炎症反应因子中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）表达的变化。  结果  与H/R组相比,6-G+H/R组细胞活力从 50 μg/mL 6-G 组开始上升,200 μg/mL 6-G时细胞活力最大,后续实验选6-G干预质量浓度为200 μg/mL。与对照组相比,200 μg/mL 6-G组活性氧（ROS）含量无明显变化（P>0.05）,ROS荧光波峰未见明显迁移,H/R组ROS的含量升高,差异有统计学意义（P<0.05）,ROS荧光波峰向右侧迁移,与H/R组相比,6-G+H/R组ROS含量降低,差异有统计学意义（P<0.05）,ROS荧光波峰向左侧回移。与对照组相比,6-G组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达无明显变化（P>0.05）;H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与H/R组相比,6-G+H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）。  结论  6-G预处理能够减轻H/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。     

丙烯醛对缺氧复氧H9c2心肌细胞损伤的影响及机制初探

目的研究丙烯醛对缺氧复氧H9c2心肌细胞损伤的影响,并探讨其促凋亡作用机理。方法建立H9c2心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型,分为正常对照组、丙烯醛组(ACR)、缺氧复氧组(H/R)、丙烯醛+缺氧复氧组(ACR+H/R)。用10μmol/L丙烯醛预处理H9c2心肌细胞30min后2h缺氧16h复氧,采用MTT法检测细胞存活率,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色检测细胞核凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白cytochrome c(cyt c)、caspase 9和caspase 3的表达水平。结果与H/R组相比,ACR+H/R组H9c2细胞存活率下降、凋亡增加(P<0.05),cyt c的线粒体蛋白表达水平下调、细胞浆蛋白表达水平上调,caspase 9和caspase 3蛋白表达水平下调并出现明显裂解蛋白。结论作为一种来源于人类生活环境的心血管毒物,丙烯醛能加剧缺氧复氧H9c2心肌细胞的损伤,可能与cyt c由线粒体释放到细胞浆、激活caspase级联反应导致线粒体功能损伤有关。     

硫酸镁对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究硫酸镁对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法 采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧／复氧损伤模型,实验分为五组：正常对照组、缺氧／复氧损伤模型组、缺氧／复氧损伤＋MgSO4（2．2、4．0、7．2mmol／L）组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定细胞内SOD活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内MDA含量,MTT染色法测定心肌细胞活力并测定培养液中LDH含量的变化。结果 硫酸镁能显著提高细胞内SOD的活性,降低MDA、LDH的含量并可提高心肌细胞的活力。结论 硫酸镁具有明显的抗缺氧／复氧损伤、保护心肌细胞的作用。     

丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究

目的 观察丹酚酸B(Sal B)对H9c2心肌细胞缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 首先构建H9c2心肌细胞缺氧复氧模型,采用噻唑蓝(MTT)法研究丹酚酸B与H9c2心肌细胞活力的量效关系,确定丹酚酸B的保护作用,给药方式为预给药.实验分为正常对照组、丹酚酸B组、模型组(H/R组)、H/R+丹酚酸B组,分别检测各组乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧簇(ROS)以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的含量变化.Western印迹检测添加丹酚酸B对Akt磷酸化的影响,添加Akt抑制剂LY294002加以比较.结果 与正常对照组相比较,模型组LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px以及CAT含量水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B能够显著提高SOD、GSH-Px以及CAT含量水平(P<0.05),显著降低LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平(P<0.05).Western印迹结果显示与正常对照组相比较,模型组Akt磷酸化水平显著降低(P<0.001),相对于模型组丹酚酸B能够显著提高Akt的磷酸化水平(P<0.01),而这种保护作用能被LY294002所阻断(P<0.01).结论 丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/Akt)通路相关.     

葛根素对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究葛根素对培养SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的拮抗作用。方法:葛根素(50和100mg/L)预处理24h后作用于乳鼠心肌细胞A/R损伤模型,运用MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养液中LDH和细胞内SOD活性及MDA含量。运用流式细胞术Annexin V-PI双染法测定细胞凋亡变化。结果:与A/R模型组比较,葛根素明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量;同时降低细胞的凋亡率。结论:葛根素对A/R损伤心肌细胞具有保护作用,其机制可能与清除自由基的产生有关。     

Maresin 1激活Nrf2信号通路减轻低氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨Maresin 1(MaR1)对低氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响和作用机制。方法 培养小鼠HL-1心肌细胞,采用低氧孵育6 h和复氧12 h来构建低氧/复氧细胞模型。小鼠HL-1心肌细胞分为常氧对照组(常氧培养18 h)、低氧/复氧组(低氧培养6 h,然后复氧处理12 h)、低氧/复氧+溶剂组(加入溶剂对照二甲基亚砜预处理30 min后,进行低氧/复氧处理)、低氧/复氧+MaR1组(加入50 nmol/L的MaR1预处理30 min后,进行低氧/复氧处理)和低氧/复氧+MaR1+ML385组(加入50 nmol/L的MaR1和5μmol/L的ML385预处理30 min后,进行低氧/复氧处理)。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)方法检测细胞存活率。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)细胞毒性检测试剂盒检测细胞损伤。TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。活性氧(reactive oxygen species, ROS)试剂盒法检测ROS水平。丙二醛(malondialdehyde, MDA)试剂盒法检测MDA含量...     

大豆苷元对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的观察大豆苷元对乳鼠心肌细胞损伤的影响并探讨其机理。方法体外培养乳鼠心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型,测定细胞存活率、上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量。结果大豆苷元10~160μmol/L均能提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率和用MTT法测得的A570 nm值(P<0.01);抑制缺氧/复氧损伤引起心肌细胞的LDH和CK释放;减少MDA的生成,提高SOD的活性,抑制NOS活性,降低NO水平(P<0.05,P<0.01)。结论大豆苷元对乳鼠缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用。     

二氯乙酸对肥大心肌细胞缺氧复氧的抗凋亡作用

目的研究缺氧复氧损伤诱导体外培养新生大鼠的肥大心肌细胞凋亡及干预糖代谢对此过程的作用.方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)诱导其肥大,分4组:一组于3%O2、5%CO2、92%N2的培养箱中培养12、24、36 h,再恢复正常条件培养4 h,造成缺氧复氧损伤的肥大心肌细胞模型;另三组加入二氯乙酸盐(dichloroacetate, DCA)分别使其终浓度为10-3、10-4、 10-5 mmol/L,再缺氧复氧相同时间;电镜观察肥大心肌细胞及凋亡细胞的超微结构变化;Hochest33342/PI荧光染色识别凋亡细胞;TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征,并记数凋亡心肌细胞数,检测心肌细胞凋亡率.结果肥大心肌细胞在缺氧12、24和36 h后复氧4 h,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞,凋亡率分别为:(19.99±4.88)%,(22.66±5.08)%和(24.47±5.74)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-3mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别为(16.5±3.24)%, (9.7±3.52)%和(22.5±3.41)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-4mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(17.4±3.72)%, (20.6±3.94)%和(23.5±3.76)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-5mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(18.4±3.44)%, (21.3±3.77)%和(23.8±3.73)%.结论缺氧引起的心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高;缺氧复氧较单纯缺氧肥大心肌细胞凋亡率增加; DCA对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞凋亡有抑制作用.     

比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤的影响

目的研究比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用,并探讨该作用的机制。方法对大鼠心肌细 胞株（H9c2）进行缺氧复氧（6 h/2 h）,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,将H9c2细胞随机分成4组：正常对照组（control组）、缺 氧/复氧组（H/R组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理组（H/R+B组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组（H/ R+B+LY组）;分别采用MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡、ROS水平,Western免疫印迹法检测心肌 细胞p-AKT及p-GSK3β蛋白表达情况。结果与正常组相比,H/R组细胞活力下降,细胞凋亡率增加、ROS水平升高;经比索洛 尔预处理后,细胞活力明显提高,细胞凋亡率下降、活性氧水平降低,p-AKT/GAPDH、p-GSK3β/GAPDGH显著提高,而加入 PI3K/AKT阻滞剂LY294002后比索洛尔的保护作用消失。结论比索洛尔能减少缺氧/复氧所引起的氧化应激,对心肌细胞具 有明显的保护作用,其作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平,减少ROS产生,增加细胞 的活性实现的。     

模拟睡眠呼吸暂停缺氧/再氧合对小鼠心肾超微结构的影响

目的模拟睡眠呼吸暂停慢性缺氧/再氧合探索其对心脏、肾脏超微结构影响。方法自制慢性缺氧/再氧合小鼠模型:通过控制程序调控箱内氧浓度,使得每一间断性缺氧循环时间为2min,氧浓度循环于(21.72±0.545)%与(6.84±0.467)%之间。ICR小鼠分对照组、模拟对照组、实验组,每组各10只。将实验组小鼠置于间断性缺氧箱中,每天8h,连续30d后进行取心尖部及肾皮质部行透射电镜检查。结果①心脏超微结构改变:对照组及空气对照组心肌细胞结构无异常所见。实验组10例均存在不同程度、不同形式的超微结构的改变:有8/10可见不同程度的心肌间质增宽、胶原增生,其中6例同时见毛细血管内皮细胞凋亡;6/10小鼠心脏可见心肌细胞核凋亡改变;6/10小鼠心肌细胞线粒体肿胀,嵴分离,电子密度明显下降,部分嵴破坏。3/10例小鼠心肌细胞内水肿,肌原纤维溶解;1/10例表现心肌细胞肌浆网扩张。②肾脏超微结构改变:对照组均未见异常改变。实验组所有10例均有不同程度的肾小球上皮细胞足突融合、电子致密物质增加;而对照组也有2例可见类似改变。8/10例的实验组可见不同程度的系膜区增宽、5/10例有系膜细胞及基质增生;这种改变也见于3/10例的对照组。8/10例实验组小鼠发现肾小管上皮水肿,呈细胞电子密度下降改变。同时9/10例实验组小鼠见肾小管上皮细胞次级溶酶体明显增多。结论研究发现慢性缺氧/再氧合可引起心肌细胞凋亡、心肌间质增生及胶原化等损害;可引起肾小球上皮细胞足突融合、肾小管上皮次级溶酶体增多等改变。     

曲美他嗪对肥大心肌细胞缺氧复氧的抗凋亡作用

目的研究缺氧复氧损伤诱导体外培养的新生大鼠的肥大心肌细胞凋亡及干预脂代谢对此过程的作用。方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ诱导其肥大,分4组,第1组于3%O2、5%CO29、2%N2的三气培养箱中培养12、24、36h,再恢复正常条件培养4h,造成缺氧复氧损伤的肥大心肌细胞模型;第2组加入曲美他嗪(trimetazidine,TMZ)使其终浓度为0.2mM;第3组加入曲美他嗪,使其终浓度为1.0mM;第4组加入曲美他嗪盐,使其终浓度为5.0mM;4组均缺氧复氧相同时间。电镜观察肥大心肌细胞及凋亡细胞的超微结构变化;Hochest33342/PI荧光染色识别凋亡细胞;TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征,并计数凋亡心肌细胞数,检测心肌细胞凋亡率。结果肥大心肌细胞在缺氧12、24、36h后复氧4h,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞,凋亡率分别为:(19.99±4.88)%、(22.66±5.08)%和(24.47±5.74)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36h后加入TMZ 0.2mM再复氧4h,检测其凋亡率分别为(19.6±3.02)%(、22.5±3.17)%和(23.7±3.34)%;肥大细胞缺氧培养12、24、36h后加入TMZ 1.0mM再复氧4h,检测其凋亡率分别为(18.6±2.91)%、(20.3±3.02)%和(21.8±2.86))%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36h后加入TMZ 5.0mM再复氧4h,检测其凋亡率分别为(14.6±2.67)%、(17.3±2.71)%和(20.3±3.28)%。结论缺氧引起的心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而呈增高趋势;缺氧复氧较单纯缺氧肥大心肌细胞凋亡率增加;TMZ对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞凋亡有抑制作用。     

Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的：探讨 Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法培养 H9C2心肌细胞并建立心肌细胞缺氧(21 h)/复氧(6 h)模型。细胞随机分成4组：对照组,缺氧/复氧组(H/ R 组),缺氧/复氧+ Ghrelin 组(H/ R +G 组),缺氧/复氧+ Ghrelin +生长激素促分泌素受体(GH-SR)-siRNA 组(H/ R + G + G-siRNA 组);采用 siRNA 干扰技术阻断 Ghrelin 受体 GHSR 的表达以及 Hoechst 33258染色剂和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot 法检测各组凋亡相关蛋白表达情况。结果 GHSR 存在于正常H9C2心肌细胞中,GHSR-siRNA 可以显著抑制 H9C2心肌细胞中 GHSR 的表达。与 H/ R 组相比,在 H/ R + G 组中缺氧/复氧损伤所导致心肌细胞的凋亡率明显下降(P <0．05),B淋巴细胞瘤-2蛋白/ Bcl-2相关 X 蛋白(Bcl-2/ Bax)比率明显上调(P <0．05),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达水平被显著抑制(P <0．05)。而与 H/ R + G组相比,H/ R + G + G-siRNA 组心肌细胞凋亡率增加( P <0．05),Bcl-2/ Bax 比率显著下降(P <0．05),caspase-3表达上调(P <0．05)。结论 Ghrelin 具有减轻缺氧/复氧所引起的心肌细胞损伤、抑制心肌细胞凋亡的作用。     

促红细胞生成素对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的:观察促红细胞生成素(eryrthropoietin,EP)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响及其相关机制探讨.方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立H/R模型.心肌细胞随机分为4组:①H/R组缺氧2 h,复氧4 h;②EP组在缺氧前1 h予EP(10 U/ml),随即缺氧2 h,复氧4 h;③Wortmannin EP组(W EP) 在EP预处理前30 min予3-磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3-K)特异性阻断剂Wortmannin(100 nmol/L);④正常对照组流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blot法检测心肌细胞EP受体表达和p-AKt/AKt比值.结果:EP可明显降低缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,并明显增强SD乳鼠心肌细胞p-AKt/AKt比值;而Wortmannin减弱了EP的抗细胞凋亡作用,显著降低了p-AKt/AKt比值.结论:细胞凋亡参与了心肌缺氧/复氧损伤;EP可减少缺氧/复氧引起的SD乳鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与EP激活PI-3K/AKt信号通路有关.     

Notch信号通路经ROCK2对缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨Notch信号通路经ROCK2对大鼠心肌细胞缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞的凋亡影响。方法选择SD大鼠乳鼠180只,分为6组,检测Hes1的表达、心肌细胞活力、心肌细胞乳酸脱氢酶释放情况、心肌细胞凋亡情况以及NICD、Bcl2、Caspase3以及Hes1表达水平。结果 SI/R组OD值相比对照组明显下降(P0.05);Jagged1+SI/R组与SI/R组、对照组对比,存在明显差异(P0.05);Jagged+DAPT+SI/R组OD值与Jagged1+SI/R组对比,存在明显差异(P0.05);Jagged1组、DAPT组OD值与对照组对比,均未见显著差异(P0.05)。SI/R组、Jagged1+SI/R组、Jagged+DAPT+SI/R组的LDH释放率、细胞凋亡率相比对照组均有明显上升(P0.05);SI/R组、Jagged1+SI/R组、Jagged+DAPT+SI/R组经处理后的Notch1、Hes1、Bcl2均有显著下降,而Caspase3表达显著上升(P0.05)。结论 Notch信号通路在心肌缺血/再灌注的过程中发挥着重要调控作用,对诱导H9c2心肌细胞凋亡具有重要影响,且激活Notch信号通路能起到抗缺血/再灌注损伤的效果。     

MiR-873对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的：探讨微小RNA(micro RNA,miR)-873在心肌细胞缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤中的作 用及其相关机制。方法：采用体外培养大鼠H9c2心肌细胞构建H/R模型,并转染miR-873模拟物(mimic),实验分为对 照组、H/R组、阴性对照组及miR-873 mimic组。Real-time PCR检测各组miR-873的表达水平;蛋白质印迹法检测egl-9 家庭缺氧诱导因子3(egl-9 family hypoxia inducible factor 3,Egln3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2 相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达水平;ELISA试剂盒以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinecontaining, aspartate-specific proteases-3,caspase-3)活性检测试剂盒分别用来检测细胞凋亡和caspase-3活性;采用双荧 光素酶报告基因系统检测miR-873对Egln3的作用靶点,并将实验分为阴性对照组、携带野生型(wild type,WT)报告 基因的Egln3 3'-非编码区(3'-untranslated regions,3'-UTR)组(WT组)和携带突变型(mutant type,MUT)报告基因的Egln3 3'-UTR组(MUT组)。为进一步检测Egln3对miR-873 mimic作用的影响,实验构建了Egln3过表达细胞,并将其分为H/R 组、H/R+miR-873 mimic组、H/R+pcDNA3-Egln3(pcEgln3)组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组。结果：与对照组相比, H/R组中miR-873表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,miR-873 mimic组中H9c2心肌细胞凋亡 和caspase-3活性下降,Bax/Bcl-2比值下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);荧光素酶活性检测结果表明：与阴性对 照组相比,WT组荧光素酶活性显著下调,差异有统计学意义(P<0.05),而MUT组荧光素酶活性无明显变化,差异无 统计学意义(P>0.05)。过表达实验结果表明：与H/R组相比,miR-873 mimic组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值均显著下降(均 P<0.05);与miR-873 mimic组相比较,H/R+pcEgln3组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值显著上 调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论：MiR-873通过靶向作用于Egln3而抑制H/R心肌细胞凋亡。