茵陈有效成分6,7-二甲氧基香豆素在白鼠体内主要代谢产物的研究

目的研究茵陈有效成分6,7-二甲氧基香豆素在白鼠体内主要代谢产物,寻求机体对此类药物的转化规律.方法取健康雄性wistar白鼠,收集空白血样,空白尿样,空白粪样,用导管收集空白胆汁之后,灌胃给予茵陈有效成分6,7-二甲氧基香豆素1%吐温溶液,采集0～3 h内血样,0～10 h尿样、粪样和胆汁样品,进行HPLC分析测定.结果经对动物服药前后的血样、尿样及胆汁进行色谱分析,发现两个主要代谢产物M1和M2,代谢物M1和M2的含量占生物样品中代谢物总量的80%以上,且代谢物M1和M2化学结构很相似.结论茵陈有效成分6,7-二甲氧基香豆素在体内的代谢产物主要以Ⅱ相代谢产物(硫酸酯结合物)形式存在.且代谢产物M1和M2为同分异构体.     

6,7-二甲氧基香豆素在大鼠体内主要代谢产物的研究

目的:通过对6,7-二甲氧基香豆素在大鼠体内药物动力学的研究,初步推测该物质的代谢途径.方法:采用HPLC分析方法.结果:6,7-二甲氧基香豆素在体内的代谢产物主要以Ⅱ相代谢产物(硫酸酯结合物)形式存在.且代谢产物M1和M2为同分异构体.分别是在6位或7位甲氧基脱甲基并结合一分子H2SO4的硫酸酯结合物.     

7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基异黄酮的全合成

目的:化学全合成金雀异黄素衍生物7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基异黄酮。方法:以间苯三酚和对甲氧基苯乙腈为原料,经Hoesch反应、増碳环合反应得到异黄酮母核,再经二氟甲醚化、甲醚化得到目标产物。结果:目标化合物及中间体的结构均经核磁共振氢谱确证,总收率15.6%。结论:该合成路线较短,操作简单,成本较低,适合工业化生产。     

5,6-二甲氧基吲哚的合成工艺改进

对5，6-二甲氧基吲哚的合成工艺进行了改进。以3，4-二甲氧基苯甲醛为起始原料，经过烷基化、硝化、环合反应，合成5，6-二甲氧基吲哚。该方法简单，原料易得，收率为28．4％，适合于工业生产。     

N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐合成工艺改进

目的：简便高效地合成N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐。方法：以5-甲氧基色胺为原料,依次经过取代,成盐反应,合成了N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐。结果：合成总收率达到了76%,经红外光谱、核磁共振氢谱分析确证目标化合物结构。结论：本合成方法具有较高的实用性和可操作性,适合于大量制备N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐。     

湿生扁蕾中1,7-二羟基-3,8-二甲氧基(口山)酮对照品的制备

目的 研究湿生扁蕾中对照品1,7-二羟基-3,8-二甲氧基口(山)酮的制备方法.方法 湿生扁蕾药材用乙醇提取,从乙醇提取物中分离、制备对照品,采用紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱对其进行结构鉴定.结果 所得对照品用归一化法定量,质量分数大于98％.结论 该对照品可作为控制湿生扁蕾质量的指标成分.     

2-甲氧基雌二醇的大鼠在体胃肠吸收特性

目的:探讨2.甲氧基雌二醇(2-ME)的大鼠在体胃肠吸收特性.方法:建立大鼠在体胃肠吸收模型,采用高效液相色谱法测定胃肠灌注液中2-ME质量浓度的变化,分析2-ME的在体吸收特性.结果:2-ME在大鼠胃、小肠各段及结肠巾均可被吸收,但吸收百分率和吸收速率随药物质量浓度的增加而降低,存在吸收饱和现象.结论:2-ME口服给...     

7-(6,8-二取代香豆素-3-甲酰胺)头孢菌素的合成

以6,8-二取代香豆素-13-羧酸为侧链酸,用酰氯法与7-ADCA、7-ACA、7-ACT、7-ACD缩合,合成了15个6,8-二取代香豆素-3-甲酰胺头孢菌素衍生物(Ⅵ)。经葡聚糖凝胶Sephade LH20和离心薄层层析分离精制,得到纯品。初步的体外抑菌试验结果表明,化合物Ⅵ_4、Ⅵ_6、Ⅵ_8、Ⅵ_(11)、Ⅵ_(15)对金黄色葡萄球菌26003和八叠球菌有中度和中度以上的抑菌作用。     

5,7-二甲氧基黄酮通过线粒体途径诱导人肺癌A549细胞凋亡

目的 探讨5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyflavone,5,7-DMF)诱导人肺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定5,7-DMF对A549细胞活性的抑制作用;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;JC-1探针流式细胞术分析线粒体跨膜电位;Western Blotting法分析线粒体细胞色素c的释放和Bax蛋白表达.结果 5,7-DMF抑制人肺癌A549细胞活性,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10μmol/L的5,7-DMF作用A549细胞6、12和24h后,其凋亡率分别为(6.58±0.65)％、(16.70±1.85)％和(28.60±3.52)％.JC-1探针流式细胞术分析表明,5,7-DMF能降低'A549细胞线粒体跨膜电位.Western Blotting法分析证实,5,7-DMF能促进线粒体细胞色素c的释放和上调Bax蛋白表达.结论 5,7-DMF具有诱导A549细胞凋亡的作用,其作用机制与激活线粒体诱导凋亡途径有关.     

1-(α-萘甲基)-2-甲基-6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐的化学研究和降压作用

粉防己碱有较好的钙拮抗作用,临床上已试用于治疗高血压,为简化结构,将粉防己碱还原裂解,以裂解产物为先导物,设计合成了一系列取代的四氢异喹啉衍生物,其中86040经药效学研究表明,静注或口服给药,对正常和高血压大鼠都有降压作用,本文还探讨了86040构象对活性的可能影响。     

FITC labeling of human insulin and transport of FITC-insulin conjugates through MDCK cell monolayer

Fluorescein isothiocyanate-labeled insulin (FITC-insulin) has been widely used for bioanalytical applications. Due to the high cost of commercial FITC-insulin and tedious labeling procedures described in the literature, there is still a need to develop a cost effective, reliable and quick labeling method for insulin. The purpose of the present work was to develop a quick and affordable method for FITC labeling of human insulin and to determine the effect of different conjugations of FITC to human insulin on its permeability through the MDCK cell monolayer. FITC labeling of insulin gives mono-, di- or tri-conjugates depending on the reaction time and the molar ratio of FITC:insulin. Mono-conjugate with unlabeled insulin, mixture of di- and tri-conjugate, and tri-conjugate with very little amount of di-conjugate were synthesized in less than 4 h. Degree of conjugation had an effect on the permeability of insulin through the MDCK cell monolayer. Mono-conjugate had higher permeability than the unlabeled insulin due to increase in partition coefficient. However, tri-conjugate showed lower permeability than the unlabeled insulin due to the increase in molecular weight.     

流感病毒对MDCK细胞核转录因子表达的影响

目的研究流感病毒刺激对体外培养的MDCK细胞核转录因子表达的影响，探讨流感病毒损伤细胞的分子学机制。方法体外培养获得MDCK细胞，分别用NF-κB免疫组化方法和TransAM P65试剂盒测定血凝滴度1：64的A型流感病毒H1N1和H3N2两种亚型、B型流感病毒、紫外线照射灭活的B型流感病毒NF-κB蛋白表达和活性的动态变化。以细胞激活剂佛波酯刺激后的MDCK细胞为阳性对照，以等量生理盐水为阴性对照。结果各组细胞加入不同的流感病毒后，与对照组相比，细胞免疫组化显示NF-κB随流感病毒作用相同时间后结果出现明显差异；各组相比，B型流感病毒作用72h对NF-κB的激活作用最明显，而A型两种亚型之间无显著差异。TransAM P65试剂盒测定也得出相同的结果。结论流感病毒可激活体外培养MDCK细胞的核转录因子，且这种作用随时间而增强。     

羟基积雪草苷在大鼠肠内吸收的研究

目的 研究羟基积雪草苷在大鼠肠段各段的吸收特征,探究其在肠道的吸收机制,为设计药物的剂型和给药途径提供理论基础。方法 利用大鼠在体循环肠灌流模型和方法,探明羟基积雪草苷的肠道吸收部位和吸收特征,以及不同表面活性剂对其肠吸收的影响。结果/b> 羟基积雪草苷在大鼠小肠段吸收强于大肠段,其吸收速率回肠＞空肠≥十二指肠＞结肠。而不同浓度的羟基积雪草苷溶液回肠吸收率和吸收速率常数无显著差异。在3种不同表面活性剂中,聚山梨酯-80对羟基积雪草苷的回肠吸收具有显著的促进作用。结论 羟基积雪草苷的肠吸收主要集中在小肠中段,且吸收机制推测为被动扩散,表面活性剂聚山梨酯-80可以促进其回肠吸收。     

甘氨酸改善缺氧性MDCK细胞损伤的作用依赖于ERK1/2、Akt及p38MAPK信号通路

目的:建立犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞缺氧模型,进一步阐明甘氨酸对缺氧细胞增殖活性的影响及其作用机制?方法:将MDCK细胞置于体积分数为95% N2和5% CO2的有机玻璃调节性密闭容器中,分别培养24?36?48?72 或84 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测甘氨酸对缺氧性损伤MDCK细胞增殖活性的影响?将MDCK细胞分为正常组?缺氧组和甘氨酸处理组,加药后孵育1?2 或3 h后,收集细胞总蛋白,用Western blot检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase 1 and 2,ERK1/2)?p38MAPK和Akt的磷酸化活性?结果:在所观察的所有缺氧时段内,MDCK细胞MTT活性均较正常对照组明显下降(P < 0.01)?加入甘氨酸后,缺氧24?36或48 h后细胞的增殖能力比缺氧组有明显增强,差异有统计学意义?在缺氧72 或84 h后,甘氨酸未能显示明显的保护作用?缺氧时ERK1/2和Akt的磷酸化活性明显降低,p38MAPK的磷酸化活性明显增高?将甘氨酸加入到缺氧细胞中,ERK1/2和Akt又重新被激活,p38MAPK被抑制?结论:甘氨酸可保护MDCK细胞免于早期缺氧性损伤,该作用可能通过激活ERK1/2和Akt,抑制p38MAPK而实现?     

RNA干扰对流感病毒NP和PA基因表达及病毒增殖的抑制

目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对流感病毒NP或/和PA基因的siRNA抑制NP或/和PA基因的表达及抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖. 方法: 分别构建针对NP,PA及同时干扰NP和PA的三种siRNA表达质粒pEGFP/NP,pGenesil/PA和pEGFP/NP PA,转染MDCK后,H5N1亚型流感病毒感染细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测NP及PA蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点检测细胞培养上清中的血凝值(HA),观察siRNA抑制流感病毒增殖的能力. 结果: 荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达65.0%. 蛋白质印迹结果表明,重组质粒pEGFP/NP和pEGFP/NP PA均能抑制NP蛋白在MDCK细胞内的表达,两者的抑制率分别为64.5%和69.6%. 半定量RT-PCR检测到pEGFP/NP质粒在MDCK细胞内对NP基因的转录抑制率为66.0%;pGenesil/PA质粒对PA基因的转录抑制率为63.0%;pEGFP/NP PA质粒对NP和PA基因的转录同时抑制率,分别为71.4%和69.3%. 而对照质粒pEGFP/HK对NP或/和PA基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用. HA结果表明,三种质粒均能抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖,以pEGFP6/NP PA的作用最为显著,它们抑制流感病毒增殖的能力分别为87.0%,75.0%和96.9%. 结论: NP或/和PA基因的siRNA质粒可明显抑制NP或/和PA基因的转录和表达,并有效地抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖.     

芍药苷在Caco-2细胞模型中吸收机制的研究

目的 研究芍药苷在Caco-2细胞模型中的吸收机制.方法 用Caco-2细胞单层模型研究芍药苷的双向转运,考察时间、药物质量浓度对芍药苷吸收的影响.采用高效液相色谱法检测芍药苷质量浓度,计算其表观渗透系数(Papp).结果 芍药苷在Caco-2细胞模型中,从单层细胞层顶端到基底端的转运与基底端到顶端的转运大致相同;随着芍药苷质量浓度的增加,顶端到基底端方向的吸收量近似线性增加,基底端到顶端方向的分泌量近似线性增加.结论 芍药苷在Caco-2细胞模型中吸收主要是被动转运.     

流感监测中流感病毒优势株在犬肾细胞系（MDCK）细胞模型中竞争性复制的意义

 【摘要】目的 通过流感病毒优势株在犬肾细胞系（Madin Daby canine kidney cells,MDCK)细胞中竞争性复制,探讨季节性流感流行株感染、复制能力强弱对主导流行株的贡献。方法 在对2011年至2012年上海市闵行区季节性流感监测中,监测到流感样病例775例,确诊流感病例119例。选取2012年1月至2月流感病例中分离的3株B型和3株A/H3N2亚型流感流行株,两两交叉配对成9组,共同感染MDCK,细胞培养上清液抽提核酸,mRT-PCR扩增特异性产物。 结果 有7组共感染组合中A/H3N2 (210 bp)电泳条带逐渐变强、B型条带(390 bp)逐渐变弱至第3代完全消失,2组中A/H3N2与B的条带至第3代均明亮。 结论 流感病毒共感染竞争性复制结果与当时人群流感监测中优势株转换相符。该方法为探讨可能引起主导流行株在人群中变迁的原因提供了研究思路。     

HPLC测定复方维A酸脂质体中蒿酮的含量和包封率

目的:建立复方维A酸脂质体中蒿酮的含量和包封率测定的高效液相色谱(High performance liquidchromatography,HPLC)法.方法:色谱柱:迪马KromasilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(75:25);检测波长:242 nm;柱温:30℃;流速:0.8 m...     

稳定期COPD患者肺膜弥散和肺毛细血管床容量的改变

目的研究不同病程慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺弥散功能的改变,探讨肺泡毛细血管膜弥散能力(Dm)与肺毛细血管床容量(Vc)对COPD病情评估的意义。方法对38例稳定期COPD患者和35例健康者测定静息状态下的肺通气功能和弥散功能,观察各项肺功能参数的变化情况。结果COPD组的第一秒用力呼气容积(FEV1)占预计值百分比、FEV1/用力肺活量(FVC)、最大通气量(MVV)占预计值百分比等参数从Ⅰ级开始较对照组明显下降;肺一氧化碳弥散量(DLCO)、每升肺泡容积DLCO(DLCO/VA)、Dm以及Vc等参数则从Ⅱ级开始较对照组明显下降;Ⅰ级患者Dm较对照组下降,但Vc有增高(均P<0.05)。结论在COPD早期,尽管DLCO值在正常范围,但膜弥散已有损害,随着病情的进展,Dm和Vc同时减低,DLCO下降的速度明显加快。Dm及Vc是弥散功能重要和敏感的指标,可反映肺组织的结构和病理生理改变,有重要的临床应用价值。     

Caco-2 细胞单层模型中熊果酸摄取转运机制的研究

目的 研究熊果酸在 Caco-2 细胞单层模型中的吸收转运机制。方法 利用人源结肠腺癌细胞系 Caco-2 细胞单层模型研究熊果酸在有或无 P-糖蛋白专属性抑制维拉帕米存在时,评价其双向转运特征,并考察时间、药物浓度、体系温度以及培养介质 pH 值对 Caco-2 细胞摄取熊果酸的影响。采用高效液相色谱-紫外检测法对熊果酸进行定量分析,计算其表现渗透系数 (Papp)。结果 浓度在 10～40 μmol/L 内,Caco-2 细胞对熊果酸摄取量呈线性增加。双向转运研究发现加入 P糖蛋白专属性抑制剂维拉帕米后,其 Papp 发生显著改变,表观渗透率由 3.445 下降至 1.386。结论 熊果酸在 Caco2 细胞模型的吸收转运机制以被动转运为主,P-糖蛋白参与主动转运的过程。