重症肌无力动物模型的建立

实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型与重症肌无力(MG)患者在临床症状、电生理、生物化学、超微结构形态学、免疫学、生物效应及药效上颇为相似。研究EAMG动物的发病机制对MG发病机制的探索具有十分重要的意义。此文就EAMG的各种诱导方法及评定标准进行综述。     

干扰素-α及其在重症肌无力治疗中的应用(综述)

重症肌无力 (MG)是T细胞依赖、抗体介导的自身免疫性疾病。寻找一种副反应少、疗效好、特异性抑制免疫系统的治疗方法势在必行。IFN α是其中一种具有多种生物学效应的细胞因子 ,具有较强的免疫双向调节作用。近来在治疗实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)及MG的研究中显示有效。本文就IFN α的分子结构特点、生物学作用及其在EAMG动物和MG患者中的临床应用等方面作一综述。     

鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段免疫Lewis鼠诱导实验性重症肌无力模型

重症肌无力(MG)是一种主要累及神经肌肉接头突触后膜乙酰胆碱受体,由乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)介导的自身免疫性疾病[1]。实验性重症肌无力(EAMG)在临床表现及免疫发病机制上类似人类MG,因此被用于MG发病机制及防治方法的基础研究。经典的EAMG模型是由电鳗电器管中提取的AchR免疫易感鼠诱导而成,但获得足够量纯化的AchR较为困难,国内尤是如此。近几十年来研究者们一直尝试用人工合成的肽段作为免疫原诱导EAMG,但效果均不理想。本实验尝试用鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段(R97-116)复制EAMG模型,希望为国内MG的基础研究提供…     

环孢菌素治疗重症肌无力

环孢菌素(Ciclosporin)是一种新的免疫抑制剂,已成功地用于预防各种器官移植术后的排斥反应.很少有人知道此药在自身免疫性疾病如重症肌无力(MG)的作用.然而,在实验性自身免疫性MG(EAMG)中,最近有人报道在原发性免疫接种作用时给予环孢菌素显示对EAMG的临床表现具有     

细胞因子在实验性自身免疫性重症肌无力发生机制中的作用(综述)

重症肌无力（MG）及其动物模型实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）是自身免疫性疾病，研究表明细胞因子在EAMG的发生及发展过程中有重要作用。并可为MG的研究提供有益的启示，本文就近年来研究较多并在EAMG发生机制中有重要作用的部分细胞因子（干扰素-α、干扰素-γ，白细胞介素-12和白细胞介素-4）做一综述。     

设计耐受原并用鼻黏膜耐受治疗EAMG的方法学研究

目的　设计特异性耐受原 ,通过其鼻黏膜耐受治疗对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)发病过程的影响 ,以探讨该疗法在模型应用中的可行性。方法　用 Lewis大鼠建立 EAMG模型 ,选取双类似物作为耐受原在致敏同时给予鼻黏膜耐受治疗 ,动态观察大鼠体重及临床评分改变。结果　虽然治疗组大鼠发病率不降低 ,但是在 EAMG急性期和慢性期 ,其临床症状均较对照组减轻 (P <0 .0 5 )。结论　用双类似物鼻黏膜耐受可以达到治疗 EAMG的目的 ,其结果为抗原特异性治疗重症肌无力 (MG)和其他自身免疫性疾病 (AID)提供了依据。     

苏木醇提物治疗小鼠实验性重症肌无力的研究

目的观察苏木对重症肌无力的治疗效果。方法采用乙酰胆碱受体(AChR)加等量福氏佐剂多次免疫小鼠，复制实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠模型，将EAMG小鼠随机分为EAMG治疗组及EAMG对照组，治疗组胃内注入苏木醇提物，对照组给予等量生理盐水，治疗4周，观察治疗前后小鼠体重、游泳时间和临床评分变化。结果治疗前治疗组及EAMG对照组小鼠较佐剂对照组及正常对照组小鼠体重减轻、游泳时间缩短、临床评分增高，其差异具有显著性，但EAMG治疗组与EAMG对照组之间比较无显著性差异；治疗后EAMG治疗组症状明显改善，小鼠体重增加、游泳时间延长、临床评分降低，与EAMG对照组比较有显著性差异。结论苏木能明显缓解EAMG小鼠的肌无力症状，促进其功能恢复，是治疗重症肌无力的有效药物。     

重症肌无力被动转移动物模型的研究

目的 :探讨血清阳性 (SPMG)和阴性重症肌无力 (SNMG)被动转移动物模型 (P EAMG)的异同。方法 :用ELISA法将重症肌无力 (MG)患者分为SNMG和SPMG两组 ,然后分别用两组患者血清制作P EAMG ,观察两组小鼠的临床表现、电生理及神经肌接头(NMJ)的改变。结果 :SPMG和SNMG组小鼠均表现出明显的肌无力症状 ,低频重复电刺激出现明显衰减反应 ,但SNMG组小鼠肌无力症状较SPMG组明显为轻 ,SPMG和SNMG组小鼠NMJ处棕黄色沉积物明显减少、变细短。结论 :SNMG和SPMG均是自身抗体介导的自身免疫性疾病 ,但两者不完全相同     

白细胞介素-12对实验性自身免疫性重症肌无力耐受的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-12对未成熟树突状细胞(iDC)诱导实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)耐受的影响。方法采用乙酰胆碱受体(AChR)负载的iDC接种Lewis大鼠,IL-12组大鼠在接种DC的同时和次日分别给予重组大鼠白细胞介素-12(rrIL-12)腹腔注射,200 ng/次。3周后以AChR和完全福氏佐剂(CFA)进行免疫,观察免疫7周后大鼠重症肌无力(MG)相关指标的改变。结果接种AChR负载的iDC的大鼠和健康大鼠经AChR和CFA免疫后MG相关指标无明显改变;而经IL-12干预的大鼠和EAMG对照组大鼠均产生明显的MG症状,重复电刺激出现明显衰减,血清AChR抗体滴度明显增高,神经肌肉接头呈现典型的MG样改变。结论 IL-12可阻止AChR负载的iDC诱导EAMG耐受,提示DC功能异常和IL-12可能在MG异常免疫反应的启动机制中具有重要作用。     

重症肌无力动物模型的建立及应用

<正>重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种T细胞依赖B细胞介导的自身免疫病,主要以乙酰胆碱受体介导的自身免疫性神经肌肉接头传递障碍为特点[1]。实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)代表一种研究人类疾病发病机制与开发疾病相关免疫治疗方法的优良模型。首次关于重症肌无力模型的报道要追溯至30年前,当时Patrick等[2]提出由电鳗电器官纯化得到的     

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠CD28/CTLA-4:B7表达水平的研究

目的探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)CD28/CTLA4B7的表达水平。方法健康、雌性Lewis大鼠24只,随机分为正常组、EAMG组、完全福(氏)佐剂(CFA)对照组。EAMG组大鼠分别于足垫、腹部及背部皮下多点注射丁(氏)双鳍电鳐电器官乙酰胆碱受体蛋白乳剂1mL,第4周再次注射上述乳剂免疫大鼠。CFA对照组只接受等量的CFA皮下注射。初次免疫后7周分离PBMC,应用RTPCR和流式细胞术分析方法,分别进行CD28、CTLA4mRNA及B71、B72蛋白表达水平检测。结果(1)正常组大鼠PBMCCD28、CTLA4mRNA表达水平较低,尤其CTLA4mRNA仅有极少量表达;前二者在EAMG组大鼠表达水平均明显增加(P<0001),而正常组和CFA对照组之间表达水平差异无显著性(P>005)。(2)正常大鼠B71、B72在PBMC上仅少量表达而EAMG组表达明显增加(P<0001),正常组与CFA对照组比较差异均无显著性(P>005)。结论EAMG大鼠存在PBMCCD28/CTLA4B7协同刺激分子的表达异常,CD28/CTLA4B7共刺激通路可能参与了机体异常免疫反应的诱导与维持,在重症肌无力(MG)的发生过程中发挥重要作用。     

GSTM3 mRNA在重症肌无力患者胸腺组织中的表达

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶m3(GSTM3mRNA在重症肌无力患者及正常人胸腺组织中的表达情况.方法 利用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法定量分析GSTM3 mRNA在重症肌无力胸腺与正常胸腺组织中的表达水平.结果 GSTM3 mRNA在重症肌无力患者和正常人胸腺组织中的表达水平分别为0.67±0.10和0.58±0.05,两者比较差异有统计学意义(P<0.01.结论 GSTM3 mRNA在MG胸腺组织中高表达,可能与MG的发生、发展密切相关.     

乙酰胆碱受体诱导实验性自身免疫性重症肌无力模型的建立

目的采用纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors,AChR)免疫大鼠和小鼠以建立实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)动物模型。方法以亲和层析法从电鳐电器官提取和纯化AChR,并用其免疫接种Lewis大鼠和C57BL/6小鼠,观察接种动物的临床症状、电生理变化以及AChR抗体产生的情况。结果动物模型临床肌无力症状、翻转悬挂时间(小鼠,P<0.05)、重复神经电刺激(repetitive nerve stimulation,RNS)动作电位衰减率、抗体吸光度(P<0.05)及新斯的明试验均为阳性或有统计学意义。结论纯化电器官AChR作为免疫原,成功诱导产生EAMG动物模型。Lewis大鼠和C57BL/6小鼠均对AChR免疫易感而产生EAMG表现,7~8周龄的C57BL/6更易诱导出类似人类MG表现的EAMG。     

双重修饰肽配基抑制重症肌无力机制的研究进展

重症肌无力（myasthenia gravis，MG）是一种乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor，AChR）介导的、细胞免疫及补体参与的神经肌肉接头处传递障碍的自身免疫性疾病，实验性自身免疫性MG（EAMG）是其公认的动物模型。已知自身抗体在MG的发病机制中具有重要作用，但不少研究表明T细胞在MG的发病中同样起着重要作用。     

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠T淋巴细胞IFN-γ-iNOS-NO通路的研究

目的 探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠T淋巴细胞干扰素-γ(IFN-γ)-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-一氧化氮(NO)通路的表达水平.方法 将大鼠随机分为EAMG组、正常对照组、完全弗氏佐剂(CFA)对照组.EAMG组大鼠分别于足垫、腹部及背部皮下多点注射丁氏双鳍电鳐的电器官乙酰胆碱受体(AChR)蛋白乳剂共1 ml,第4周再次注射上述乳剂;CFA对照组在相应时间、用相同的方法注射等量CFA;初次注射7周后,分离各组大鼠脾脏T淋巴细胞,体外培养48 h后取上清液分别应用酶联免疫吸附试验和Griess试剂法,检测IFN-γ和NO水平.结果 IFN-γ含量EAMG组为(81.68±10.23)pg/ml,正常对照组为(29.20±5.41)pg/ml,CFA对照组为(31.54±6.12)pg/ml;NO含量EAMG组为(23.68±7.13)μmol/L,正常对照组为(9.05±2.11)μmol/L,CFA对照组为(10.21±2.67)μmol/L;EAMG组IFN-γ和NO水平显著高于正常对照组和CFA对照组(均P＜0.01);正常对照组和CFA对照组间差异无统计学意义.结论 EAMG大鼠T淋巴细胞IFN-γ和NO分泌明显提高;T淋巴细胞IFN-γ-iNOS-NO通路异常可能与MG发病有关.     

以咽喉部肌无力为首发表现的儿童重症肌无力六例

目的 提高临床医师对儿童期以咽喉部肌无力起病的重症肌无力(MG)临床表现的认识水平,做到及时诊断和个体化治疗.方法 分析6例以咽喉部肌无力为主要表现的儿童期MG的诊断、鉴别诊断及治疗过程.结果 在诊断儿童期MG明确后,给予规范治疗,病情迅速好转.结论 以吞咽困难、构音障碍等咽喉肌病变表现为MG唯一或主要起病症状时,应尽...     

激发型CD40单克隆抗体对实验性自身免疫性重症肌无力耐受的影响

目的 探讨激发型CD40单克隆抗体(CD40mAb)对未成熟树突状细胞(iDC)诱导实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)耐受的影响. 方法 20只Lewis大鼠按照随机数字表法分为正常组、EAMG对照组、耐受组和CD40mAb组,每组5只.耐受组和CD40mAb组每只大鼠于背部皮下分4点分别注射总量为1 mL的乙酰胆碱受体(AChR)+iDC,其中CD40mAb组每只大鼠在接种iDC的同时和次日分别给予CD40mAb腹腔注射,0.5mg/次.EAMG对照组注射1 mL无血清培养基.正常组不做任何处理.3周后用AChR和完全弗氏佐剂(CFA)免疫,观察免疫7周后重症肌无力(MG)相关指标的改变. 结果 耐受组大鼠和正常组大鼠一样,用AChR和CFA免疫后,MG相关指标无明显改变;而CD40mAb组大鼠和EAMG对照组一样,产生了明显的MG症状,重复电刺激出现明显衰减,血清AChRab滴度明显增高,神经肌肉接头呈现典型的MG样改变. 结论 激发型CD40mAb可阻止AChR负载的iDC诱导EAMG耐受,提示iDC功能异常可能与MG异常免疫反应的启动密切相关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of agonist CD40 monoclonal antibody (CD40mAb) on the tolerance of experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) induced by immature dendritic cells (iDCs). Methods Lewis rats were equally randomized into normal group,EAMG group, tolerance group and CD40mAb treatment group (n=5). Rats in the tolerance group and CD40mAb treatment group were vaccinated with AChR pulsed iDCs; and rats in the CD40mAb treatment group were intraperitoneally injected CD40mAb at a dosage of 0.5 mg once when performing the vaccination and on the 2rd d of vaccination. One mL serum-free medium was given to the rats in the EAMG group; normal group did not receive any treatment. Three weeks after that, rats in the above 4 groups were immunized with AChR and complete Freund's adjuvant (CFA). Seven weeks after the immunization, the corresponding indexes of MG were observed: behavioral assessment was performed and electromyogram was employed to detect the repetitive nerve stimulation on these rats; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine the level of AChRab; the pathological changes of neuromuscular junction were also detected. Results Just as the rats in the normal group, the rats in the tolerance group did not have significant changes in any of the corresponding indexes of MG after being immunized with AChR and CFA. In contrast, rats in both EAMG group and CD40mAb treatment group showed typical changes in the corresponding indexes of MG: their electromyogram wave amplitude obviously attenuated; the level of serum AChRab increased and neuromuscular junction appeared as a typical damage of MG. Conclusion Agonist CD40mAb could abrogate the tolerance of EAMG induced by AChR pulsed iDCs, suggesting that the dysfunction of DCs is related to the priming of abnormal immune of MG.     

苏木醇提取物对自身免疫性重症肌无力小鼠淋巴细胞功能影响的实验研究

目的采用中药苏木醇提取物治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠,观察其T淋巴细胞和B淋巴细胞功能的变化情况,探讨苏木治疗重症肌无力的作用机制。方法80只昆明小鼠被随机分为EAMG治疗组(20只)、EAMG对照组(20只)、佐剂对照组(20只)和正常对照组(20只)。采用乙酰胆碱受体(AChR)加完全福氏佐剂(CFA)的方法多次免疫小鼠,复制实验性自身免疫性重症肌无力小鼠模型;佐剂对照组模型制备成功后仅予完全福氏佐剂。所有小鼠均于末次免疫后7～14d行游泳试验和肌电图检查,进行模型鉴定。EAMG治疗组小鼠于末次免疫后第15天起,每天胃内灌注苏木醇提取物0.2ml/只,EAMG对照组、佐剂对照组及正常对照组胃内灌注等量生理盐水,连续给予4周后处死小鼠,应用MTT比色法检测T淋巴细胞和B淋巴细胞转化功能。结果(1)EAMG对照组小鼠的T淋巴细胞吸光度差值为(0.257±0.025),较佐剂对照组(0.147±0.022)及正常对照组(0.154±0.017)明显增高(P<0.01);EAMG治疗组小鼠的吸光度差值为(0.174±0.040),较EAMG对照组明显降低(P<0.01),但仍高于佐剂对照组和正常对照组(P<0.05);佐剂对照组与正常对照组相比,差异无显著性意义(P>0.05)。(2)EAMG对照组小鼠的B淋巴细胞吸光度差值(0.789±0.101)较佐剂对照组(0.502±0.125)及正常对照组(0.493±0.09)明显增高(P<0.01);EAMG治疗组小鼠的吸光度差值为(0.590±0.120),较EAMG对照组明显降低(P<0.01),但仍高于佐剂对照组及正常对照组(P<0.05);佐剂对照组与正常对照组间相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论苏木具有下调实验性自身免疫性重症肌无力小鼠淋巴细胞功能,抑制N2乙酰胆碱受体抗原诱导特异性免疫反应。     

鼻粘膜耐受对实验性重症肌无力大鼠胸腺Fas、BCL-2表达的影响

目的 探讨实验性重症肌无力大鼠经鼻粘膜耐受处理后胸腺淋巴细胞Fas及BCL-2的表达及其免疫耐受的发生机制.方法 将实验大鼠随机分为对照组、EAMG组及耐受组.将EAMG组及耐受组大鼠采用Ra97-116肽段多点皮下注射法制备成EAMG大鼠模型后,再将耐受组大鼠经鼻腔滴注Rα97-116(V108A)行免疫耐受处理,10 d后评估疗效,并采用TUNEL法计数对照组、EAMG组及耐受组大鼠胸腺淋巴细胞阳性凋亡细胞数和免疫组化法检测3组大鼠胸腺淋巴细胞FAS及BCL-2的表达.结果 Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受处理能明显改善EAMG大鼠的肌无力症状,增加其体重及降低AChR抗体滴度.EAMG组大鼠胸腺凋亡细胞效较对照组显著减少,而耐受组大鼠则较EAMG组明显增加,3组间差异具有显著的统计学意义(F=114.15,P<0.01).3组大鼠胸腺细胞FAS的表达也具有统计学差异性(X2=16.48,p<0.05),EAMG组大鼠胸腺细胞FAS表达较对照组显著下调,而耐受组表达增加.EAMG绀胸腺细胞中BCL-2高表达,而耐受组表达量下降,3组之间存在统计学差异(X2=15.82,P<0.05).结论 Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受能明显减轻EAMG大鼠肌无力症状,其自身反应性淋巴细胞的凋亡可能与鼻粘膜耐受的作用机制有关.     

双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力的免疫机制

目的　用双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力 ( EAMG)大鼠 ,探讨其对机体免疫机制的影响。方法　建立 Lewis大鼠的 EAMG模型 ,在致敏同时 ( A组 )及缓解期第 1天 ( B组 )给予双类似物 3 0 0μg/只。动态评估大鼠临床症状 ,检测外周血 ( PB) ACh R-Ab( Ig G)含量 ,检测急、慢性期 PB单个核细胞 ( MNC)及致敏第 5 0天淋巴结、脾 MNC中的 CD4+ CD2 5 + 细胞数改变。结果　治疗组大鼠临床症状减轻 ;治疗组及对照组大鼠 PB中特异性 ACh R-Ab( Ig G)含量随病程延续而增加 ,但在致敏后第 5及第 7周 ,A、B组特异性 Ig G抗体含量比各自对照组显著减低 ( P <0 .0 5 ) ;双类似物鼻黏膜耐受治疗后 ,EAMG大鼠 PB MNC中的 CD4+ 细胞数减少 ( P<0 .0 5 ) ,CD4+ CD2 5 +细胞数相对增加 ( P<0 .0 5 ) ;A、B组淋巴结和脾 MNC中 CD4+细胞数减少( P<0 .0 5 ) ,CD4+ CD2 5 +细胞数只在 B组相对增加 ( P <0 .0 5 )。结论　双类似物鼻黏膜耐受治疗病情进展中的 EAMG有效 ;伴随临床症状缓解 ,治疗组大鼠 ACh R-Ab( Ig G)含量减少且免疫调节性 CD4+ CD2 5 +细胞数相对增多 ;双类似物治疗 EAMG的可行性为抗原特异性治疗重症肌无力 ( MG)和其他自身免疫性疾病 ( AID)提供了依据。