紫杉醇诱导急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡机制的研究

目的研究急性胰腺炎时紫杉醇诱导大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的机制。方法利用胆胰管内注射脱氧胆酸钠的方法建立急性胰腺炎大鼠模型 ,并向腹腔内注射紫杉醇以诱导胰腺腺泡细胞凋亡。利用免疫组化法研究胰腺腺泡细胞凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax、Fas、FasL及 p5 3表达的变化。结果急性胰腺炎时大鼠胰腺腺泡细胞中Bax(2 5 0 6± 94 2 )、Fas(2 79± 15 0 )和 p5 3(180± 5 6 )的表达增加 ,Bcl 2 (79± 4 2 )表达无明显变化 ,而FasL只表达于急性胰腺炎时胰腺间质浸润的炎性细胞中。结论急性胰腺炎时紫杉醇诱导的大鼠胰腺腺泡细胞凋亡与Bax、Fas/FasL系统以及p5 3蛋白有关。     

急性胰腺炎与胰腺腺泡细胞凋亡的关系

目的：研究急性胰腺炎严重程度与胰腺泡细胞凋亡的关系。方法：建立不同严重程度的急性胰腺炎大鼠模型，通过原位末端标记法定量检测胰腺腺泡细胞凋亡率。结果：单纯水肿性胰腺炎时极少有腺泡细胞凋亡。出血坏死性胰腺炎时有腺泡细胞凋亡，且随着出血坏死程度的加重，腺泡细胞的凋亡先较快地增加后逐渐减少，细胞坏死则逐渐增多。结论：在急性单纯水肿性胰腺炎时极少有腺泡细胞凋亡。急性胰腺炎的严重程度与腺泡细胞的凋亡率在程度较轻的急性出血坏死性胰腺炎时呈正相关，而在程度较重的急性出血坏死性胰腺炎时则呈负相关。     

中性粒细胞对大鼠急性重症胰腺炎胰腺腺泡凋亡的作用

目的探讨中性粒细胞在大鼠急性重症胰腺炎时对胰腺的病理损害及对胰腺腺泡凋亡的作用。方法氨甲蝶呤（MTX）腹腔注射制成大鼠低中性粒细胞模型，然后以脱氧胆酸胰胆管注射诱发急性重症胰腺炎，造模后0、3、6、9、24、48、72h随机分批处死动物，按各时间点检测胰腺组织髓过氧化物酶活性（MPO），血清淀粉酶，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的DUPT末端标记染色（TUNEL）和电镜技术检测胰腺腺泡凋亡情况，胰腺组织的病理学检查。结果实验组MPO在造模24h开始明显低于对照组（P〈0．01），胰腺组织的病理损害程度也较对照组轻。两组胰腺腺泡凋亡在造模3和6h均仅出现少量凋亡，在24和48h显著增多，以后逐渐下降；实验组胰腺腺泡凋亡指数明显高于对照组胰腺腺泡凋亡指数（P〈0．01）。结论适当地降低外周血的中性粒细胞水平能够增加胰腺腺泡凋亡，从而减轻急性重症胰腺炎时胰腺的病理损害程度。     

胰腺腺泡细胞凋亡在大鼠急性胰腺炎病程中的作用及凋亡调控基因的表达

目的: 探讨胰腺腺泡细胞凋亡及凋亡调控基因--Bax的表达情况及其与急性胰腺炎严重度的关系. 方法: 在胰胆管共同通道内逆行注射不同浓度的脱氧胆酸钠,制备不同重症程度的急性胰腺炎模型.24只SD大鼠随机分为对照组(假手术组)、APⅠ组(0.75%剂量组)和APⅡ组(1.5%剂量组).分别于造模后6小时处死各组存活大鼠.用TUNEL法分析腺泡细胞凋亡情况,用免疫组化及WesternBlotting检测Bax的表达情况. 结果: APⅠ组大鼠较APⅡ组胰腺坏死减少、出血减轻,血清淀粉酶、IL-6和IL-8水平明显下降;病变程度轻的APⅠ组大鼠腺泡细胞凋亡指数比病变程度重的APⅡ组高(6.36±2.41vs2.34±1.15,P<0.05);正常腺泡细胞Bax的表达弱;产生急性胰腺炎时,腺泡细胞Bax的表达增强,病变程度轻的大鼠腺泡细胞Bax表达水平较病变程度重的强,与二者凋亡指数的差别相一致. 结论: 产生急性胰腺炎时,腺泡细胞凋亡与其病情严重程度呈负相关,腺泡细胞凋亡在急性期是一种保护现象;Bax的表达水平与腺泡细胞凋亡指数呈正相关,与胰腺炎的病变程度呈负相关.     

大黄素对大鼠重症胰腺炎TNFα、IL-6及胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的 :探讨大黄素治疗重症急性胰腺炎 (SAP)的作用机理。 方法 :用胰胆管内逆行注射去氧胆酸钠法制作大鼠SAP模型 ,随机分为对照组、SAP组、大黄素治疗组 ,动态测定术后 0h、6h、12h各组血清TNFα及IL - 6浓度 ,并取胰组织作病理学检查 ,同时应用TUNEL技术分析大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的变化。 结果 :发现大黄素给药后 6h及 12h时血清TNFα、IL - 6水平明显降低 ,腹水量减少 ,胰组织病变程度改善 ;术后 6hSAP组胰腺腺泡细胞凋亡指数为 (3 92± 0 94 ) ,大黄素治疗组为(2 6 5 0± 6 72 ) ,两组比较 ,P <0 0 5。 结论 :大黄素可明显抑制大鼠胰酶及TNFα、IL - 6的释放 ,并且诱导已受损的不可恢复的腺泡细胞凋亡 ,从而改善大鼠重症胰腺炎的病情发展。     

区域动脉灌注5-FU诱导大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡及Caspase-3表达

目的 探讨区域动脉灌注（regional arterial infusion,RAI）5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）胰腺腺泡细胞凋亡的影响及其对急性胰腺炎的治疗作用。方法 18只健康成年SD大鼠随机分成3组：对照组（C组）、急性胰腺炎组（AP组）和5-FU治疗组（5-FU组）。各组均行胃左动脉置管,AP组和5-FU组以大剂量雨蛙素（每小时腹腔注射50 μg/kg,连续6 h）诱导建立大鼠急性胰腺炎模型,对照组注射同等剂量的生理盐水。5-FU组在第一次腹腔注射雨蛙素1 h后立即区域动脉灌注5-FU（40 mg/kg）治疗,C组和AP组区域动脉灌注等量的生理盐水。建模成功后3 h取标本并处死大鼠,检测血淀粉酶浓度,RT-PCR法检测胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平,胰腺标本送病理学检查,Western blotting法检测胰腺组cleaved Caspase-3的蛋白表达,同时TUNEL法检测大鼠胰腺腺泡细胞凋亡情况。结果 与AP组比较,5-FU组血淀粉酶浓度明显降低（P＜0.05）;胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6  mRNA表达水平下降（P＜0.05）;胰腺组织病理学改变减轻;胰腺组织cleaved Caspase-3的蛋白表达增加;胰腺腺泡细胞凋亡增加（P＜0.05）。结论 区域动脉灌注5-FU对大鼠急性胰腺炎有改善作用,其作用机制可能与诱导胰腺腺泡细胞凋亡有关。     

青蒿素诱导急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿素（artemisinin）对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的影响,并了解是否减轻急性胰腺炎严重程度。方法腹腔内注射雨蛙素（cerulein）诱导大鼠胰腺炎模型建立,设正常对照组、胰腺炎组及青蒿素组,通过原位末端标记（TUNEL）法检测各组胰腺组织中腺泡细胞的凋亡指数,并用分光光度法检测髓过氧化物酶（MPO）活性。采用两步酶消化法分离正常大鼠胰腺腺泡细胞,离体分组培养,采用丫碇橙（AO）染色及caspase-3活性的检测,评估青蒿素对胰腺腺泡细胞凋亡的影响,并检测各组培养液中的乳酸脱氢酶（LDH）及淀粉酶（AMS）活性,评估胰腺腺泡细胞酶的释放。结果在体实验中,青蒿素组与胰腺炎组比较,胰腺腺泡细胞凋亡指数明显增高（P〈0.05）,MPO活性明显减低（P〈0.05）。体外实验中,青蒿素组胰腺腺泡细胞凋亡指数及caspase-3活性较胰腺炎组明显增高（P〈0.05）,培养液中的LDH和AMS活性也明显降低（P〈0.05）。结论青蒿素可促进大鼠急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡,减少胰酶释放及中性粒细胞激活,可减轻急性胰腺炎严重程度。     

急性重症胰腺炎大鼠细胞凋亡的研究

目的　研究急性重症胰腺炎 (SAP)中细胞凋亡现象及bcl 2与rnkp 1基因对SAP中细胞凋亡的影响。方法　将 3 6只Wistar大鼠随机分为 6组 ,即正常对照组、SAP模型制作后 1、2、4、8、16h组。利用原位末端标记法和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡小体及凋亡梯形。采用定量逆转录聚合酶链式反应检测凋亡调控基因bcl 2、rnkp 1基因mRNA转录水平。 结果　模型制作后 2h组即可检出凋亡小体及梯形 ,4h组凋亡小体明显增多至高峰并出现规整的凋亡梯形。胰腺组织bcl 2基因mRNA表达水平 2h组达高峰 0 .87± 0 .11,并于 8、16h组降至正常。各组中脾细胞rnkp 1基因mRNA表达水平于 8h组可见增高 0 .5 4± 0 .17,16h组达高峰 0 .63± 0 .0 9。结论　大鼠SAP的发病过程中 ,同时存在细胞坏死和凋亡。细胞凋亡现象可能具有保护与加重损害的双重作用。rnkp 1和胰蛋白酶原编码基因活性区的同源性可能是急性重症胰腺炎晚期病情不可逆转的因素之一。     

茵陈承气汤对大鼠急性出血坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡及调控基因的影响

目的 :研究茵陈承气汤对大鼠急性出血坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡及调控基因Bax表达水平的影响。 方法 :胰胆管内注射去氧胆酸钠制备大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型 ,随机分为对照组 ,模型组 ,中药 (茵陈承气汤 )治疗组 ,观察各组大鼠胰腺组织病理学、血清淀粉酶、IL - 6、IL - 8的变化 ,应用TUNEL法分析急性胰腺炎时胰腺腺泡细胞凋亡情况 ,WesternBlotting检测凋亡调控基因 -Bax的表达情况。 结果 :中药组大鼠血清淀粉酶 ,IL - 6、IL - 8水平较模型组低 ,病情明显改善 ,两组差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;模型组凋亡指数为 2 34± 1 15 ,中药组为 11 5 2± 3 41,P <0 0 1;模型组Bax的表达水平为 96 8± 2 76 ,中药组为 1331± 112 ,P <0 0 1。 结论 :茵陈承气汤可能通过上调促凋亡基因Bax的表达水平 ,诱导已受损的腺泡细胞发生凋亡 ,减轻腺泡细胞坏死 ,减少胰酶及炎性介质的释放 ,从而有利于防止急性胰腺炎的病理损害恶化     

紫杉醇诱导胰腺腺泡细胞凋亡与减轻急性胰腺炎严重度的研究

我们比较了几种临床常用的化疗药物，发现紫杉醇具有较强的诱导胰腺腺泡上皮细胞凋亡的能力。但是，其能否应用于急性胰腺炎时诱导胰腺腺泡细胞凋亡从而减轻胰腺炎的严重度则未见报道，现将本研究结果报告如下。     

大鼠急性胰腺炎胰腺细胞凋亡改变的实验研究的实验研究

目的 :了解急性胰腺炎 (AP)发病过程中胰腺腺泡细胞凋亡情况。方法 :将 48只SD大鼠随机分为两组 (胰腺炎组和假手术组 ) ,每组 2 4只。经十二直肠行胆胰管逆行加压注射 4%牛磺胆酸钠 ,诱导大鼠AP模型 ,于术后 3小时、6小时、12小时和 2 4小时分批处死动物 ,应用末端脱氧核苷酸转换酶 (TdT)介导的末端标记 (TUNEL)方法检测胰腺组织中的腺泡细胞凋亡。结果 :假手术组胰腺组织中存在极少量的凋亡细胞 ,数量相对恒定 ,与时间无关 ;胰腺炎组术后病变加重 ,胰腺凋亡细胞明显增多 ,3小时、6小时、12小时凋亡指数均明显高于假手术组 (P <0 .0 1) ,术后 2 4小时接近假手术组水平。结论 :急性胰腺炎胰腺存在腺泡细胞凋亡的改变 ,胰腺细胞凋亡可能是急性胰腺炎病变过程中的一个重要特征     

早期应用维生素E对急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡和胰腺组织病变的影响

目的:探讨早期应用维生素E(Vit.E)对急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺细胞凋亡和胰腺组织病变的影响.方法:将SD大鼠72只随机分为对照组、AP组和Vit.E治疗组,每组24只.经十二指肠行胆胰管逆行加压注射4%的牛磺胆酸钠,诱导大鼠AP模型.于术后3 h、6 h、12 h和24 h采取断颈方法分批处死动物,应用末端脱氧核苷酸转换酶(TdT)介导的原位末端标记(TUNEL)法检测胰腺细胞凋亡情况,观察各组胰腺组织的病理切片并进行组织病理学评分.结果:AP组和Vit.E治疗组术后胰腺凋亡细胞明显增多,两组在3 h和6 h的凋亡指数均无明显差异(P>0.05),而Vit.E治疗组在12 h和24 h的凋亡指数显著高于对应时相的AP组(12 h,P<0.05;24 h,P<0.01);与AP组比较,Vit.E治疗组胰腺组织病变较轻,12 h和24 h的胰腺组织病理学评分明显低于AP组(12 h,P<0.05;24 h,P<0.01).结论:早期应用抗氧化剂Vit.E能够有效地减轻AP胰腺病变的严重程度,而胰腺细胞凋亡可能是介导此过程的一个重要病理、生理改变.     

急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡与胰腺炎症细胞的关系

目的: 探讨急性胰腺炎(AP)胰腺细胞凋亡的可能机制.方法: 胆胰管逆行加压注射4%的牛磺胆酸钠诱导大鼠AP,建立模型,应用末端脱氧核苷酸转换酶(TdT)介导的原位末端标记(TUNEL)法检测术后3h、6 h和12 h胰腺细胞凋亡情况,并对胰腺炎症细胞进行分类记教.结果: 胰腺炎组术后6 h胰腺凋亡细胞显著高于3 h和12 h(3 h P<0.05,12 h P<0.01);白细胞进行性增多,6 h巨噬细胞百分比明显高于3 h和12h(3 h P<0.05,12 h P<0.01),中性粒细胞百分比显著低于3 h和12 h(3 h P<0.05,12 h P<0.01).结论: AP胰腺细胞凋亡可能与炎症细胞的不同种类有关.     

金纳多对重症胰腺炎时细胞凋亡的影响

目的 探讨金纳多(ginaton)对急性重症胰腺炎(ASP)胰腺细胞凋亡的影响。方法将138只SD大鼠分为假手术(SO)组,ASP组和治疗组。以胆胰管内逆行注射5％牛磺胆酸钠溶液复制大鼠ASP模型,动态检测血小板活化因子(PAF)含量,观察胰腺病理变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL法)检测胰腺细胞凋亡,免疫组织化学检测凋亡调控基因B淋巴细胞瘤/白血病-2(bcl-2)和c-myc蛋白的表达。结果 治疗组与ASP组比较,PAF含量明显下降,胰腺病理损害程度减轻。TUNEL:ASP组凋亡指数于术后3h达高峰,治疗组3、6 h凋亡指数明显下降(P<0.05)。与SO组比较,ASP组bcl-2表达明显增多(P<0.01),治疗组3 h的bcl-2表达较ASP组同时相点上调(P<0.05);ASP组较SO组c-myc表达增多(P<0.01),并于术后6 h达高峰,治疗组3、12 h的c-myc表达虽有增高,但差异无显著性(P>0.05)。结论 金纳多对ASP大鼠胰腺有良好的防治作用,能减轻胰腺病理损害,其抑制细胞凋亡可能与其上调凋亡调控基因bcl-2的表达有关。     

肝细胞生长因子对实验性急性胰腺炎细胞凋亡作用的研究

目的:观察外源性肝细胞生长因子(HGF)对小鼠轻症实验性急性胰腺炎的炎症反应及胰腺细胞凋亡的作用。方法:以雨蛙肽腹腔注射诱发小鼠轻症实验性急性胰腺炎。第1组以盐水腹腔注射作为对照,第2、3及4组每小时腹腔注射雨蛙肽诱发急性胰腺炎;第3组在造模前及造模中两次皮下注射重组人肝细胞生长因子(rhHGF);第4组同时皮下注射rhHGF及其单抗。观察HGF对炎症反应的干预作用及对腺泡细胞凋亡的影响。结果:炎症小鼠予每公斤体重4、20μgrhHGF时,与单纯炎症组相比,血清淀粉酶、脂肪酶下降,胰腺组织学炎症评分减少,胰腺腺泡细胞TUNEL凋亡指数增加,caspase3活性增强。予每公斤体重4或20μgrhHGF时,其效应无显著性差异。同时予rhHGF单抗的小鼠,上述指标与单纯炎症组相比差异无显著性。结论:HGF能减轻雨蛙肽诱导的小鼠轻症实验性急性胰腺炎。HGF单抗能消除HGF的生物学作用。HGF可以促进急性胰腺炎时腺泡细胞的凋亡,这可能是其保护胰腺的作用机制之一。     

大鼠急性胰腺炎细胞凋亡与Notch-1表达关系的研究

目的探讨大鼠急性胰腺炎时Notch-1的表达及其与胰腺细胞凋亡的关系。方法用不同浓度的牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射分别建立急性轻型胰腺炎（MAP）及急性重型胰腺炎模型（SAP），采用TUNEL、Westernblot以及实时定量PCR的方法分别检测不同类型急性胰腺炎在不同时相的细胞凋亡指数、Notch-1蛋白以及Notch-lmRNA的表达水平变化。结果MAP组在建模后4～24h内细胞凋亡指数均明显升高，但各时点之间细胞凋亡指数相差不大；SAP组在建模4h后细胞凋亡指数最高，其后逐渐下降，两组之间细胞凋亡指数有显著性差异。建模后4h开始，各时点SAP组和MAP组的Notch1表达均有上升，但在SAP组的Notch-l表达明显高于MAP组，两组之间相比有显著差异；MAP组Notch-l表达的峰值时问是建模后12h，而SAP组Notch-1表达的峰值时间是建模后8h。结论不同类型急性胰腺炎细胞凋亡指数及Notch1的表达均有明显差异，Notch-1的过度表达可能通过抑制细胞凋亡而加重急性胰腺炎的病情。     

Pancreatic fistula and postoperative pancreatitis after pancreatoduodenectomy for pancreatic cancer

The most serious complication after pancreatoduodenectomy (PD) is pancreatic fistula (PF) type C, either as a consequence or independently from postoperative pancreatitis (PP). Differentiating between these two types of complications is often very difficult, if not impossible. The most significant factor in early diagnosis of PP after PD is an abrupt change in clinical status. In our retrospective study we also observed significantly higher levels of serum concentrations of CRP and AMS comparing to PF without PP. Based on our findings, CT scan is not beneficial in the early diagnosis of PP. Meantime PF type C is indication to operative revision with mostly drainage procedure which is obviously not much technically demanding, there are no definite guidelines on how to proceed in PP. Therefore the surgeon’s experience determines not only whether PP will be diagnosed early enough and will be differentiated from PF without PP, but also whether a completion pancreatectomy will be performed in indicated cases.     

铅致大鼠睾丸细胞凋亡的实验研究及临床意义

目的探讨铅致大鼠睾丸生精细胞凋亡及其机制。方法40只成年雄性Wistar大鼠随机均分为4组:对照组,低、中、高剂量实验组。实验组分别腹腔注射醋酸铅5、10、20mg/kg体重,对照组注射等体积生理盐水,3周后手术取睾丸,用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(Tunel法)及免疫组化技术检测睾丸组织生精细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果3周后,中、高剂量组细胞凋亡及Bax基因表达较对照组差异有显著性(P<0.01),低剂量组较对照组无显著性。3个实验组的Bcl-2基因表达较对照组差异有显著性,且各组间亦有显著性(P<0.01)。结论铅负荷至一定程度时可致大鼠生精细胞凋亡,且呈一定量效关系,这种作用可能与Bcl-2基因低表达和Bax基因高表达有关。