褪黑素对重症急性胰腺炎的保护作用

目的 探讨褪黑素(melatonin,MT)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA表达的影响及可能机制.方法 54只SD大鼠随机分成假手术(SO)组、重症急性胰腺炎(SAP)组以及MT干预SAP(MS)组,每组18只.通过胰胆管逆行注射3.5%脱氧胆酸钠方法 制备大鼠SAP模型,MS组制造模型前30 min腹腔注射MT.收集各模型组3 h、6 h、12 h标本,观察胰腺组织,检测胰腺组织细胞凋亡.实时定量(real-time)PCR分析胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表达.结果 SAP组和MS组胰腺组织损伤较SO组严重.与SAP组相比,在3 h、6 h、12 h各时点MS组胰腺病理损伤明显减轻,细胞凋亡指数下降(P<0.05),胰腺组织中Smac/DIABLO mRNA表达下调(P<0.05),XIAP mRNA表达上调(P<0.05).结论 MT能明显改善SAP胰腺组织损伤,对急性胰腺炎有保护作用;这可能与调节Smac/DIABLO、XIAPmRNA的表达有关.     

大鼠急性胰腺炎胰腺细胞凋亡改变的实验研究

目的: 了解急性胰腺炎(AP)发病过程中胰腺腺泡细胞凋亡情况. 方法: 将48只SD大鼠随机分为两组(胰腺炎组和假手术组),每组24只.经十二直肠行胆胰管逆行加压注射4%牛磺胆酸钠,诱导大鼠AP模型,于术后3小时、6小时、12小时和24小时分批处死动物,应用末端脱氧核苷酸转换酶(TdT)介导的末端标记(TUNEL)方法检测胰腺组织中的腺泡细胞凋亡. 结果: 假手术组胰腺组织中存在极少量的凋亡细胞,数量相对恒定,与时间无关;胰腺炎组术后病变加重,胰腺凋亡细胞明显增多,3小时、6小时、12小时凋亡指数均明显高于假手术组([WTBXP<0.01),术后24小时接近假手术组水平. 结论: 急性胰腺炎胰腺存在腺泡细胞凋亡的改变,胰腺细胞凋亡可能是急性胰腺炎病变过程中的一个重要特征.     

胰腺腺泡细胞凋亡在大鼠急性胰腺炎病程中的作用及凋亡调控基因的表达

目的: 探讨胰腺腺泡细胞凋亡及凋亡调控基因--Bax的表达情况及其与急性胰腺炎严重度的关系. 方法: 在胰胆管共同通道内逆行注射不同浓度的脱氧胆酸钠,制备不同重症程度的急性胰腺炎模型.24只SD大鼠随机分为对照组(假手术组)、APⅠ组(0.75%剂量组)和APⅡ组(1.5%剂量组).分别于造模后6小时处死各组存活大鼠.用TUNEL法分析腺泡细胞凋亡情况,用免疫组化及WesternBlotting检测Bax的表达情况. 结果: APⅠ组大鼠较APⅡ组胰腺坏死减少、出血减轻,血清淀粉酶、IL-6和IL-8水平明显下降;病变程度轻的APⅠ组大鼠腺泡细胞凋亡指数比病变程度重的APⅡ组高(6.36±2.41vs2.34±1.15,P<0.05);正常腺泡细胞Bax的表达弱;产生急性胰腺炎时,腺泡细胞Bax的表达增强,病变程度轻的大鼠腺泡细胞Bax表达水平较病变程度重的强,与二者凋亡指数的差别相一致. 结论: 产生急性胰腺炎时,腺泡细胞凋亡与其病情严重程度呈负相关,腺泡细胞凋亡在急性期是一种保护现象;Bax的表达水平与腺泡细胞凋亡指数呈正相关,与胰腺炎的病变程度呈负相关.     

大鼠急性胰腺炎胰腺细胞凋亡改变的实验研究的实验研究

目的 :了解急性胰腺炎 (AP)发病过程中胰腺腺泡细胞凋亡情况。方法 :将 48只SD大鼠随机分为两组 (胰腺炎组和假手术组 ) ,每组 2 4只。经十二直肠行胆胰管逆行加压注射 4%牛磺胆酸钠 ,诱导大鼠AP模型 ,于术后 3小时、6小时、12小时和 2 4小时分批处死动物 ,应用末端脱氧核苷酸转换酶 (TdT)介导的末端标记 (TUNEL)方法检测胰腺组织中的腺泡细胞凋亡。结果 :假手术组胰腺组织中存在极少量的凋亡细胞 ,数量相对恒定 ,与时间无关 ;胰腺炎组术后病变加重 ,胰腺凋亡细胞明显增多 ,3小时、6小时、12小时凋亡指数均明显高于假手术组 (P <0 .0 1) ,术后 2 4小时接近假手术组水平。结论 :急性胰腺炎胰腺存在腺泡细胞凋亡的改变 ,胰腺细胞凋亡可能是急性胰腺炎病变过程中的一个重要特征     

急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡与胰腺炎症细胞的关系

目的: 探讨急性胰腺炎(AP)胰腺细胞凋亡的可能机制.方法: 胆胰管逆行加压注射4%的牛磺胆酸钠诱导大鼠AP,建立模型,应用末端脱氧核苷酸转换酶(TdT)介导的原位末端标记(TUNEL)法检测术后3h、6 h和12 h胰腺细胞凋亡情况,并对胰腺炎症细胞进行分类记教.结果: 胰腺炎组术后6 h胰腺凋亡细胞显著高于3 h和12 h(3 h P<0.05,12 h P<0.01);白细胞进行性增多,6 h巨噬细胞百分比明显高于3 h和12h(3 h P<0.05,12 h P<0.01),中性粒细胞百分比显著低于3 h和12 h(3 h P<0.05,12 h P<0.01).结论: AP胰腺细胞凋亡可能与炎症细胞的不同种类有关.     

细胞凋亡在急性胰腺炎发病中的作用及川芎嗪对其影响

目的:探讨细胞凋亡在急性胰腺炎发病机制中的作用,了解川芎嗪在急性胰腺炎中对细胞凋亡的影响.方法:经十二指肠胆胰管逆行加压注射5%牛磺胆酸钠,诱导大鼠胰腺炎模型并建立对照组、治疗组,通过病理评分和TUNEL法检测三组胰腺组织的病理形态和胰腺细胞的凋亡指数.结果:胰腺炎在早期以细胞凋亡为主,病变程度轻;晚期以细胞坏死为主,病变程度重;诱导细胞凋亡有利于胰腺炎的预后.川芎嗪可促进AP胰腺腺泡细胞的凋亡.结论:通过诱导细胞凋亡可以减轻胰腺炎的病变程度,但具有一定的时间性.川芎嗪具有活血化瘀、抗血小板凝血、扩张小动脉、疏通微循环的作用,可通过促进AP腺泡细胞凋亡而改善AP的病理进程.     

丹参保护大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的机制

目的 探讨丹参对大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的保护作用及机制. 方法 建立SD大鼠同种异位全胰十二指肠移植模型,供体胰腺分别用肝素平衡盐液或肝素平衡盐液添加丹参进行低温(0℃~4℃)灌注保存60 min.光镜、电镜观察术后再灌注12 h胰腺腺泡细胞结构改变,测定血清中脂肪酶、淀粉酶及胰腺组织的细胞凋亡指数,应用免疫组化染色检测Bcl-2,Bax蛋白表达. 结果 丹参组胰腺组织结构损伤明显轻于对照组,血清中脂肪酶、淀粉酶明显低于对照组;对照组凋亡指数明显大于正常组(P<0.01),丹参组凋亡指数明显小于对照组(P<0.01);丹参组Bcl-2蛋白表达明显高于对照组(P<0.01),Bax蛋白表达明显低于对照组(P<0.01). 结论 丹参可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤起保护作用.     

青蒿素诱导急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿素（artemisinin）对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的影响,并了解是否减轻急性胰腺炎严重程度。方法腹腔内注射雨蛙素（cerulein）诱导大鼠胰腺炎模型建立,设正常对照组、胰腺炎组及青蒿素组,通过原位末端标记（TUNEL）法检测各组胰腺组织中腺泡细胞的凋亡指数,并用分光光度法检测髓过氧化物酶（MPO）活性。采用两步酶消化法分离正常大鼠胰腺腺泡细胞,离体分组培养,采用丫碇橙（AO）染色及caspase-3活性的检测,评估青蒿素对胰腺腺泡细胞凋亡的影响,并检测各组培养液中的乳酸脱氢酶（LDH）及淀粉酶（AMS）活性,评估胰腺腺泡细胞酶的释放。结果在体实验中,青蒿素组与胰腺炎组比较,胰腺腺泡细胞凋亡指数明显增高（P〈0.05）,MPO活性明显减低（P〈0.05）。体外实验中,青蒿素组胰腺腺泡细胞凋亡指数及caspase-3活性较胰腺炎组明显增高（P〈0.05）,培养液中的LDH和AMS活性也明显降低（P〈0.05）。结论青蒿素可促进大鼠急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡,减少胰酶释放及中性粒细胞激活,可减轻急性胰腺炎严重程度。     

大黄素对大鼠急性胰腺炎的治疗作用

目的 探讨大黄素诱导细胞凋亡对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的治疗作用.方法 45只SD大鼠分为对照组、胰腺炎组、治疗组,每组15只.观察胰腺组织内腺泡细胞凋亡指数、NF-κB mRNA、Bax mRNA、外周血中中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophii,PMN)凋亡指数及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3、caspase-8)的变化情况.结果 与胰腺炎组比较,治疗组腺泡细胞和PMN凋亡指数及胰腺组织内NF-κB mRNA、Bax mRNA、PMN caspase-3与caspase-8表达均明显增加(F=853.199,327.126,143.586,48.857,231.750,96.552,P＜0.05).治疗组中,胰腺组织病理学评分与胰腺腺泡细胞凋亡指数、PMN凋亡指数均呈负相关(r=-0.96,-0.94,P＜0.05);胰腺腺泡细胞凋亡指数与胰腺组织内NF-κB mRNA、Bax mRNA表达呈正相关(r=0.73,0.76,P＜0.05);胰腺组织内NF-κB mRNA与Bax mRNA表达呈正相关(r=0.94,P＜0.05);PMN凋亡指数与PMN caspase-3、caspase-8表达均呈正相关(r=0.99,0.99,P＜0.05).结论 大黄素能有效治疗AP,其机制是通过Bax途径诱导胰腺腺泡细胞凋亡,并通过caspase途径来诱导外周血中PMN凋亡,从而明显减轻AP病情程度.     

紫杉醇诱导急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡机制的研究

目的研究急性胰腺炎时紫杉醇诱导大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的机制。方法利用胆胰管内注射脱氧胆酸钠的方法建立急性胰腺炎大鼠模型 ,并向腹腔内注射紫杉醇以诱导胰腺腺泡细胞凋亡。利用免疫组化法研究胰腺腺泡细胞凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax、Fas、FasL及 p5 3表达的变化。结果急性胰腺炎时大鼠胰腺腺泡细胞中Bax(2 5 0 6± 94 2 )、Fas(2 79± 15 0 )和 p5 3(180± 5 6 )的表达增加 ,Bcl 2 (79± 4 2 )表达无明显变化 ,而FasL只表达于急性胰腺炎时胰腺间质浸润的炎性细胞中。结论急性胰腺炎时紫杉醇诱导的大鼠胰腺腺泡细胞凋亡与Bax、Fas/FasL系统以及p5 3蛋白有关。     

Diminished lung injury with vascular adhesion molecule-1 blockade in choline-deficient ethionine diet-induced pancreatitis

BACKGROUND: Lung injury in severe acute pancreatitis is mediated by infiltrating leukocytes. Our laboratory has previously demonstrated that acute lung injury in acute pancreatitis results in an up-regulation of vascular adhesion molecule-1 (VCAM-1) cell surface receptor expression on pulmonary vascular endothelium and neutrophil sequestration. The objective of this study was to determine whether blocking expression of VCAM-1 in acute pancreatitis would modify acute pulmonary injury. METHODS: Young female mice were fed a choline-deficient ethionine (CDE) supplemented diet to induce acute pancreatitis. After initiation of the diet, one group (acute pancreatitis treated [n = 18]) was treated with blocking doses (2.35 mg/kg) of monoclonal anti-VCAM-1 receptor antibody (Ab) at 48, 96, and 120 hours. A second group (acute pancreatitis treated control [n = 5]) was treated with a similar dose of an isotypic control for VCAM-1 (nonbinding Ab) at the same time points. A third group (acute pancreatitis untreated [n = 12]) received a CDE diet, and a fourth group (control [n = 11]) received standard food with no Ab treatment. All animals were killed at 144 hours. The dual radiolabeled monoclonal Ab method was used to quantitate VCAM-1 cell surface expression in lung tissue. Lung injury was assessed histologically, and apoptosis was detected by transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling assay. Pulmonary leukocyte sequestration was determined by myeloperoxidase (MPO) assay and CD18 staining. RESULTS: Pulmonary VCAM-1 cell surface expression was significantly increased in animals with acute pancreatitis when compared to controls (P <.001) and was reduced to near control levels in acute pancreatitis treated animals. On histologic examination, treated animals with acute pancreatitis exhibited significantly less lung injury and apoptosis than did untreated animals with acute pancreatitis. Leukocyte sequestration and MPO activity were significantly reduced in the treated animals with pancreatitis compared to untreated animals with pancreatitis (P <.0001) or acute pancreatitis treated controls (P <.03). CONCLUSIONS: Blocking VCAM-1 on pulmonary vascular endothelium decreases leukocyte adherence and recruitment into the lung, hence reducing lung injury in severe acute pancreatitis. Clinically, VCAM-1 antagonism may be an important adjunct to evolving therapy for distant organ injury in severe acute pancreatitis.     

乌司他丁对重症急性胰腺炎大鼠肾脏细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法60只大鼠随机均分为假手术组、SAP组和UTI组,大鼠SAP模型采用5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射法建立。于建模后6h及14h时测定血Cr及BUN,于光镜及电镜下观察肾组织病理变化,TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,SABC免疫组化染色法测定肾脏组织bcl-2基因的蛋白表达。结果SAP组光、电镜下见肾脏组织损害明显,血Cr、BUN、肾脏细胞凋亡指数和bcl-2表达均高于假手术组(P<0.05,P<0.01),且除bcl-2表达外,均随病程延长逐渐升高(P<0.05);经UTI治疗后,光、电镜下见肾脏组织损害减轻,血Cr、BUN和肾脏细胞凋亡指数较SAP组明显下降(P<0.05),而bcl-2表达增强(P<0.05)。肾脏细胞凋亡指数与血BUN和Cr均呈正相关(r=0.807,P<0.05;r=0.812,P<0.05)。结论UTI对肾功能的保护作用可能部分是通过调节凋亡相关基因bcl-2的表达从而影响细胞凋亡实现的。     

细胞凋亡在实验性急性胰腺炎发病中的作用

目的　探讨细胞凋亡在急性胰腺炎发病机制中的作用 ,了解川芎嗪在AP中对细胞凋亡的影响。方法　实验动物随机分为 3组 :( 1)AP组 ;( 2 )对照组 ;( 3 )治疗组。通过病理评分和TUNEL法检测 3组胰腺组织的病理形态和胰腺细胞的凋亡指数。结果　胰腺炎早期以细胞凋亡为主 ,病变程度轻 ;晚期以细胞坏死为主 ,病变程度重 ;诱导细胞凋亡有利于减轻胰腺炎病情。结论　通过诱导细胞凋亡可以减轻胰腺炎的病变程度 ,但具有一定的时间性     

早期应用维生素E对急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡和胰腺组织病变的影响

目的:探讨早期应用维生素E(Vit.E)对急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺细胞凋亡和胰腺组织病变的影响.方法:将SD大鼠72只随机分为对照组、AP组和Vit.E治疗组,每组24只.经十二指肠行胆胰管逆行加压注射4%的牛磺胆酸钠,诱导大鼠AP模型.于术后3 h、6 h、12 h和24 h采取断颈方法分批处死动物,应用末端脱氧核苷酸转换酶(TdT)介导的原位末端标记(TUNEL)法检测胰腺细胞凋亡情况,观察各组胰腺组织的病理切片并进行组织病理学评分.结果:AP组和Vit.E治疗组术后胰腺凋亡细胞明显增多,两组在3 h和6 h的凋亡指数均无明显差异(P>0.05),而Vit.E治疗组在12 h和24 h的凋亡指数显著高于对应时相的AP组(12 h,P<0.05;24 h,P<0.01);与AP组比较,Vit.E治疗组胰腺组织病变较轻,12 h和24 h的胰腺组织病理学评分明显低于AP组(12 h,P<0.05;24 h,P<0.01).结论:早期应用抗氧化剂Vit.E能够有效地减轻AP胰腺病变的严重程度,而胰腺细胞凋亡可能是介导此过程的一个重要病理、生理改变.     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠急性坏死性胰腺炎胰腺损伤的影响

目的 探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)胰腺损伤与核因子-κB(NF-κB)活化、胰腺细胞凋亡的关系及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对胰腺损伤的影响.方法 33只Wistar大鼠分为正常对照、盐水对照和胰腺炎组.以3.5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管制作ANP模型,于造模前、后1 h应用NAC,12 h后取材,采用凝胶电泳迁移率实验测定胰腺组织NF-κB活性、改良TUNEL法检测细胞凋亡.同时观察血淀粉酶、脂肪酶、胰腺组织湿/干重比率及病理改变. 结果盐水对照组NF-κB活性很低(2.00±0.33),胰腺炎组NF-κB明显活化(6.03±0.41),造模前使用NAC抑制NF-κB活性(3.28±0.42),降低淀粉酶及胰腺湿/干重比率,促进胰腺细胞凋亡(P<0.05).NF-κB活化与凋亡呈负相关(r=-0.96,P<0.01),与胰腺损伤病理呈正相关(r=0.63,P<0.01);胰腺损伤病理分级与凋亡呈负相关(r=-0.98,P<0.01).结论 NAC可能通过抑制胰腺NF-κB活化、促进胰腺细胞凋亡,减轻胰腺损伤.     

组织蛋白酶B在急性胰腺炎发病中的作用探讨

为探讨组织蛋白酶Ｂ在急性胰腺炎（ＡＰ）发病中的作用，对１１只急性水肿性胰腺炎犬和１２只急性出血坏死性胰腺炎犬（ＡＨＮＰ）的胰腺腺泡细胞内组织蛋白酶Ｂ的分布情况进行了检测，并与７只正常犬进行比较。结果：实验犬ＡＰ早期即有胰腺腺泡细胞内组织蛋白酶Ｂ的再分布现象，ＡＨＮＰ犬尤为明显（Ｐ＜０．０１）。由此表明，组织蛋白酶Ｂ在ＡＰ的发病中具有一定的作用     

胆囊结石合并轻中度胰腺炎行腹腔镜胆囊切除术的手术时机探讨

目的:评价胆囊结石伴轻中度急性胰腺炎发病48 h内行腹腔镜胆囊切除术(LC)的临床疗效及安全性。方法:选择2014年1月至2016年6月收治的84例胆囊结石合并急性胰腺炎患者,按手术实施时间将患者分为对照组(延期手术,n=26)与观察组(早期手术,n=58)。对比两组术中出血量、手术时间、总住院时间、术后进食时间、术后下床活动时间、术后并发症发生率、复发情况,术后第1天、第3天、第7天对比两组ALT、AST、血淀粉酶水平。结果:两组均顺利完成LC,无一例中转开腹。观察组总住院时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组胰腺炎复发率为15.38%,观察组为3.45%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组手术时间、术中出血量及术后并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者术后第1天、第3天、第7天血淀粉酶、ALT、AST水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胆囊结石合并轻中度胰腺炎发病48 h内行LC可有效缩短住院时间,降低术后胰腺炎复发率,并不加重肝功能损害或改变胰腺炎的恢复进程,是安全、可行的。     

STAT3在急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能障碍中的作用

目的　研究重症胰腺炎(SAP)时大鼠肠上皮细胞凋亡、氧化损伤及凋亡相关蛋白的激活情况。方法　Wistar大鼠4 8只,分为S(假手术)组、C(对照)组、A(急性胰腺炎)组、N(抗氧化剂)组,A组、N组采用胆胰管内逆行注入5 %牛磺胆酸钠诱导大鼠SAP模型,C组注入生理盐水。术后3h、2 4h分批处死大鼠,取胰腺组织行HE染色明确胰腺炎程度;留取血浆检测D 乳酸水平;刮取小肠黏膜检测丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XO)水平;小肠组织增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色;小肠组织TUNEL染色及黏膜DNA琼脂糖凝胶电泳;提取小肠黏膜蛋白行Westernblot检测Bcl 2、Bax、p STAT3表达水平。结果　A组术后3h血浆D 乳酸含量、肠上皮细胞凋亡增加,2 4h最显著(P <0 . 0 1) ,D 乳酸含量、凋亡指数分别为(3 6. 1±0 . 98) μg/ml、(4 5. 3±1. 95 ) % ,二者正相关(r =0 . 5 74 ,P <0 . 0 1) ;A组术后3h氧化应激水平高于其他各组,小肠黏膜MDA含量及XO活力分别为(4 .85±1 .0 5 )nmol/mg、(18. 1±3 .0 3)U/g ;A组术后3h肠黏膜Bax、p STAT3表达增加,2 4h最明显,二者存在相关性(r=0 . 5 91,P <0 .0 1)。结论　急性重症胰腺炎大鼠肠上皮氧化应激导致的细胞凋亡是肠黏膜通透性增加的机制之一;氧化应激可能通过激活STAT3信号传导通路调控凋亡相关蛋白的