通过外显子组测序对1例孤独症谱系障碍患者的致病基因分析

目的 应用外显子测序技术对1例孤独症谱系障碍的男童进行外显子组测序分析,寻找致病基因。方法 选择1例就读于自闭症特殊学校的5岁男童,收集其临床资料,提取外周静脉血DNA,应用Nimblegen外显子序列捕获芯片及高通量测序技术对外显子区域进行测序。结果 通过全外显子组捕获测序发现了非同义突变11 309个,移码突变365个,同义突变23 075个,其中发现有4个基因的突变已有文献报道可能与孤独症谱系障碍的发病有关,这4个基因包括PTEN、AFF2、LAMB1、NRCAM。结论 应用外显子组捕获测序对该例孤独症谱系障碍的男童进行测序分析显示,大量单核苷酸多态性可能与该病的发生有关,也进一步证实了PTEN、AFF2、LAMB1、NRCAM这4个基因可能与孤独症谱系障碍的发生有关,有待进一步大样本研究及实验室研究验证其在孤独症谱系障碍发病中的具体机制。     

早发性卵巢功能不全与DNA损伤修复、减数分裂相关基因的研究进展

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)是一种女性常见的内分泌疾病,该疾病不仅可以导致骨质疏松、心血管疾病和月经异常,还严重影响育龄期女性的生育能力.随着全外显子组和基因组测序的快速发展,研究发现POI的致病因素与减数分裂及DNA损伤修复过程中的多种基因有关.了解PO...     

婴幼儿尘螨严重过敏症的遗传学初步研究

目的 对14例0岁～4岁婴幼儿尘螨严重过敏症进行全外显子组测序，探讨其可能的遗传学致病因素。方法 对14例患儿进行全外显子组测序，对相关变异位点进行Sanger测序验证。通过文献及数据库查找，筛选与过敏性疾病相关的基因集，并在外显子组水平、疾病相关基因集水平比较患者组和对照组的变异负荷。结果 通过对受检者进行遗传病相关基因测序、生物信息学分析、遗传分析(遗传模式包括常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X/Y连锁)及结合临床表型的综合分析，未检测到与受检者临床表型相关的已知或可能具有临床意义的基因变异。与对照组相比，患者组在外显子组及2个过敏性疾病相关基因集范围内的功能缺失性变异和罕见非同义有害变异负荷均无显著差异。结论 过敏性疾病有明显遗传倾向，但全外显子测序结果显示未发现重复的变异基因，使得对于和过敏有关的基因需要进一步深入细致的研究。     

靶向捕获高通量测序技术在遗传性疾病分子诊疗中的应用

目的应用靶向捕获高通量测序技术对常见遗传性疾病进行基因突变分析,为患者及家庭提供基因诊断的依据。方法对1例神经纤维瘤家系和1个脊椎骨骺发育不良的家系应用高通量测序技术进行相关基因检测。结果在神经纤维瘤患者中检测到符合临床提示的致病性基因突变,NF1基因第16内含子c. 1845+1_1845+5delGTAAG,脊椎骨骺发育不良的家系中检测到TRAPPC2基因第5外显子c. 271_275delCAAGA半合子致病突变。Sanger测序的验证结果与高通量测序一致。结论靶向捕获高通量测序技术可以在基因组水平对一些遗传性疾病进行分子诊断,评估预后,并为患者及亲属提供遗传咨询,预测再发风险以及提供产前诊断。     

应用全外显子组测序发现1例肺型BHD综合征家系FLCN基因c.1579＿1580insA位点变异

目的 应用全外显子组测序对1例遗传性肺囊肿家系进行遗传基因研究。方法 遴选出2018年8月—2021年8月我科临床上发现的具有家族聚集现象的肺囊肿家系,对家系成员进行全外显子组测序确定候选基因,并通过生物信息分析、遗传变异解读及Sanger测序验证分析该基因的致病性。结果 共纳入1例肺囊肿家系,在家系先证者检出FLCN基因c.1579＿1580insA位点变异,对其阳性家系成员采用Sanger测序验证,同样检出相同基因变异,经生物信息学分析及ACMG指南致病性评级显示检出变异可分类为致病性的基因变异。结论 该家系肺囊肿的病因为FLCN基因c.1579＿1580insA位点变异;应用全外显子组测序能够快速发现罕见遗传疾病的致病基因,建议临床上若出现不明原因肺囊肿,应进行全外显子组测序检测以明确是否存在遗传因素,从而进一步辅助临床诊断,研究为后期肺囊肿的临床诊疗指南的制定提供了借鉴内容。     

非综合征型唇腭裂病因学研究进展

非综合征型唇腭裂是人类最常见的结构性出生缺陷,对患儿、家庭和社会均造成沉重负担。由于致病机制复杂,到目前为止病因尚未完全阐明。全基因组关联研究有效地发现了多个新的易感基因位点,但由于GWAS只对常见SNPs进行研究,未检测罕见变异与疾病的关联,且未考虑基因的生物学功能,因此并不能完全解释疾病的遗传度。通路分析和外显子组测序研究能够在一定程度上弥补全基因组关联研究的不足,有望为解决复杂疾病的病因学问题提供有效方案。     

X连锁显性遗传性肾炎一家系相关基因排除定位分析

目的 研究我国X连锁显性遗传性肾炎一家系(又名Alport综合征，Alport’s syndrome，AS)编码Ⅳ型胶原α5链的COIAA5基因突变特点。方法 提取35例现存家系成员基因组DNA，根据COIAA5基因中与外显子相邻的内舍子序列设计引物．分别作DNA聚合酶链式反应(PCR)，将该基因所有51个外显子扩增。以琼脂搪凝胶电泳鉴定产物，作单链构象多态性(SSCP)分析检测PCR产物，对迁移率异常者进行DNA直接测序。结果 PCR-SSCP分析发现17个外显子PCR产物单链DNA迁移率异常。通过DNA直接测序发现9个外显子可疑突变，但反向测序均未能证实。结论 该家系COIAA5基因外显子未发生突变。其突变可能发生在该基因内含子或其它致病基因。     

ATRX新致病性变异致X连锁智力低下家系分析

目的：分析一个α地中海贫血X连锁智力障碍(ATR-X)综合征家系的致病基因突变。方法：对该ATR-X综合征家系先证者进行全外显子组测序,通过生物信息学分析筛选候选的致病基因突变位点,利用聚合酶链反应(PCR)和Sanger测序验证该家族成员的致病突变位点。结果：全外显子组测序发现先证者的X染色体ATRX基因存在半合子变异(c.161₁62del, p.Ser54Ter),家系成员Sanger测序结果表明该变异在家系中符合遗传共分离规律。结论：ATRX基因c.161₁62del变异为引起该家系ATR-X综合征的遗传学因素。     

迟发性鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症1例的OTC基因变异分析

目的：对1例迟发型鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症(OTCD)患儿的临床特点及OTC基因变异进行分析,提高对鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症的认识。方法：对2023年2月20日本院收治的1例OTCD患儿及父母外周血样,采用高通量测序的方法进行全外显子测序(WES),对候选致病变异进行Sanger测序验证及生物信息学分析变异蛋白结构。结果：患儿OTC基因第4外显子存在c.356G>A(p.Gly119Asp)变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异相关指南,判定为可能致病性变异(PM1+PM2＿Supporting+PP3＿Strong),在多个正常人群数据库的频率为0,采用Sanger测序技术对先证者及其父母OTC基因变异验证。先证者的变异经一代测序技术证实,生母携带此杂合变异。结论：OTC基因变异可能是此例迟发型OTCD患儿的遗传学病因。c.356G>A的发现丰富了OTC基因的变异谱。提示基因检测在代谢疾病中的重要性。     

HRM技术在掌跖角化病KRT9基因致病突变检测中的应用

目的:建立一种低成本、高通量、简便易行、准确可靠的检测掌跖角化病致病突变的方法。方法:应用高分辨率熔解曲线(HRM)方法检测掌跖角化病患者KRT9基因第一外显子突变情况,并与测序结果进行比较。结果:HRM方法能准确区分野生型和杂合型致病突变536TC、548AG,测序结果与HRM结果完全一致。结论:HRM方法能简单快速、准确经济地检测KRT9基因突变,能用于掌跖角化病患者的大样本临床初筛。     

1例编码细胞色素b558的gp91phox亚基氨基酸错义突变导致的X-连锁慢性肉芽肿病家系研究

目的 对1例X-连锁慢性肉芽肿病（X-CGD）家系进行临床表型和基因突变分析，揭示X-CGD的发病机制。方法 根据患儿临床症状、体征及四唑氮蓝试验（NBT）分析诊断，采集家系成员外周血抽提基因组DNA，扩增CYBB基因并检测基因突变。结果 ①NBT显示，患儿未刺激组、大肠埃希杆菌内毒素刺激组及佛波乙酸酯刺激组中，中性粒细胞NBT还原率为0，患儿母亲的分别为4％，10％，25％。患儿父亲分别为2％，97％，97％，结合患儿临床症状、体征初步确诊为X-CGD；②基因突变分析显示，先证者位于Xp21．1编码NADPH细胞色素b558的gp91^phox亚基的CYBB基因第9外显子第949位的碱基由T突变为A，由此引起编码序列第312个氨基酸错义突变为Met312Lys，患儿母亲及姐姐均存在同位点基因突变，但患儿父亲CYBB基因无突变，证实该错义突变来源于母系。结论 CYBB基因氨基酸错义突变，是引起该家系X-CGD的原因。     

苯并a芘致人k-ras基因DNA损伤位点检测

目的 探索苯并a芘对k-ras基因的DNA损伤位点.方法 苯并a芘(AaP)染毒细胞提取基因DNA,采用依赖随机化末端连接物PCR(PCPCR)进行核酸杂交及产物测序.结果 BaP染毒剂量200 μmol/L检测到比-kras外显子2短的一条清晰的杂交条带;测序结果表明,linker与k-ras外显于2的第67位碱基C发生连接.结论 BaP可引起k-ras外显子2发生损伤,损伤位点在第66位碱基T,该损伤位点可能是其致癌作用靶点.     

PCR-SSCP技术检测矽肺合并肺癌癌组织p53基因突变的研究

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法对３６例矽肺患者的石蜡包埋的原发性肺癌组织ｐ５３基因第５、７、８外显子进行了检测，检出突变１５例。突变在第５、７、８外显子上都有发生，但以第８外显子上发现的阳性突变最多。对肿瘤类型和ｐ５３基因突变的关系进行了分析，发现矽肺病例肺腺癌ｐ５３基因阳性突变率最高，为５３．９％，高于普通型肺癌（３３．０％）。进一步对其中１例样本进行核苷酸序列直接测定，结果显示第５外显子非突变热点区的第１４４位密码子核苷酸由ＣＡＧ突变为ＡＡＧ，氨基酸由谷氨酰胺突变为赖氨酸，以上结果与非职业肺癌明显不同，提示ｐ５３基因突变在矽肺病例肺癌发生中起着重要作用，可能与矽尘作业环境中含有的某些化学致癌物有关。     

遗传性耳聋患者的SLC26A4基因热点突变检测

目的:对29个常染色体隐性遗传性耳聋家系的42例重度~极重度耳聋患者及父母进行SLC26A4基因的exon7+8、exon10与exon19测序,探讨耳聋患者的病因及热点突变的临床作用和意义。方法:收集29个常染色体隐性遗传性耳聋家系的临床资料,对患者进行纯音电测听检查、声阻抗检测、听觉脑干听觉诱发电位检查;应用聚合酶链反应(PCR)和直接测序法,对29个耳聋家系中的42例患者及家系成员和正常对照组105例进行SLC26A4 exon7+8、exon10与exon19基因检测。结果:SLC26A4基因突变热点中发现2种突变,即IVS7-2A>G和T410M。一家系患者中出现IVS7-2A>G纯合性突变,该患者为极重度感音神经性耳聋;两家系患者发生IVS7-2A>G杂合性突变,其中一家系患者伴随T410M杂合性突变,该患者为极重度感音神经性耳聋,另一家系未伴随其他突变。结论:SLC26A4基因IVS7-2A>G纯合性突变及IVS7-2A>G杂合性突变伴随T410M杂合性突变均可导致耳聋。     

胎儿脑灰质异位合并FLNA基因突变病例报告

报告1例产前超声联合胎儿颅脑磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）诊断胎儿脑灰质异位合并细丝蛋白A（filamin A,FLNA）基因突变的病例。患者超声检测结果显示侧脑室外壁凹凸不平,颅后窝池宽,透明隔间腔略窄,小脑延髓池轻度增宽。MRI诊断结果为胎儿脑灰质异位合并大枕大池。羊水穿刺获得脱落细胞,采用全外显子测序和基因拷贝数变异（copy number variations,CNV）分析,显示与脑灰质异位疾病相关的FLNA基因外显子出现缺失,其为可能导致脑灰质异位的致病基因。因此,超声结合胎儿颅脑MRI能有效提高脑灰质异位的诊断率,其中染色体检查可筛查出部分致病原因,并对下次妊娠提供帮助。该病例可丰富临床医生对胎儿大脑灰质异位的产前超声检查、合并畸形、临床表现等的认识。     

妊娠期糖尿病肝细胞核因子1a外显子7基因多态性与血浆胰岛素水平的相关性

目的了解妊娠期糖尿病孕妇肝细胞核因子1a外显子7基因变异与血浆胰岛素水平的相关性。方法分析妊娠期糖尿病与正常人的肝细胞核因子1a外显子7基因变异,测定相应血浆胰岛素水平,统计分析它们之间的关系。结果妊娠期糖尿病孕妇肝细胞核因子1a第7号外显子中密码子459的CTG变为CTA,CTG变为TTG,密码子487位AGC变为AAC。这变化为一种多态性。多态性纯合子的血浆胰岛素水平偏低。结论肝细胞核因子1a外显子7基因多态性纯合子孕妇胰岛素分泌水平偏低,提示HNF-1a外显子7基因的多态性改变可能与妊娠期糖尿病的发病有关系。     

Molecular genetic study of medullary thyroid cancer

Around 25% of medullary thyroid carcinoma (MTC) cases are familial and follow an autosomal dominant mode of inheritance. In these cases, MTC is part of an inherited cancer syndrome that has three distinct forms: MEN2A, MEN2B and familial MTC (FMTC). MEN2A is the most frequent syndrome, followed by FMTC and MEN2B. In 95% of MEN2A families and 85% of FMTC families, the germ-line missense mutations underlying the disease affect one of the five cysteine codons of the extracellular domain of the RET proto-oncogene. The mutated codons are 609, 611, 618 and 620 in exon 10, and 634 in exon 11. The most frequent mutations (80% in MEN2A, and 50% in FMTC) occur in codon 634. In our laboratory, the mutations of the codon 634 was detected by two independent methods: DNA sequencing and restriction fragment length polymorphism with polymerase chain reaction (PCR-RFLP). We have so far examined 105 persons at risk and found 19 positive cases. A positive genetic diagnosis allows preventive thyroidectomy, with a resultant cause-specific survival similar to that for the general population. In the event of a negative result, the family members of the affected proband are relieved of the physical and emotional consequences of the disease and the follow-up procedures. We plan to screen all 240 known Hungarian MTC patients and their relatives.     

帕金森病Parkin,LRRK 2基因序列变异研究

目的 探讨散发性早发性帕金森病患者遗传易感基因突变的形式和分布及易感基因突变在PD发病中的可能作用.方法 病例组由23例散发性早发帕金森患者组成,10例对照组.以基因组DNA为模板,扩增Parkin基因的第1、4、6号外显子和LRRK 2基因的第31号外显子.观察PCR产物测序后的突变情况.结果 发现样本中存在突变以及单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP).在一例患者Parkin基因Exon6上发现735ntT→C,对应的密码子TGT212CGT,翻译的氨基酸C212R,国内罕有报道.另一例患者Parkin基因Exon6上发现突变833ntG→C,导致第244密码子同义突变.结论 Parkin基因外显子4、6的突变可能是我国散发性早发PD患者的致病原因之一.     

AIS大家系的AR突变效应分析

目的：分析雄性激素不敏感综合征（AIS）大家系的AR突变效应。方法：从AIS患者外周血中将基因组DNA提取出来,以特异的引物聚合酶联反应（PCR）扩张雄激素受体（AR）基因,单链构象多态性分析（SSCP）扩增产物,将突变的外显子筛选出来,然后对其直接进行PCR产物测序。结果：所选取的8例人员中,有2例AIS患者缺失AR基因2号外显子,其余6例存在外显子电泳条带,经过基因测序,发现其符合正常AR基因。结论：本研究方法简便实用,在临床诊断和研究AIS中具有极为有益的应用。