雌激素对软骨细胞胶原表型表达的影响

目的 :观察雌激素对体外培养兔关节软骨细胞胶原表型表达的影响。方法 :体外培养雌兔关节软骨细胞 ,随机分为A、B两组 ,A组中加入 1 7β -雌二醇 0mol/L、1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L、1 0 - 8mol/L、1 0 - 9mol/L、1 0 - 10 mol/L、1 0 - 11mol/L、1 0 - 12 mol/L干预 72小时 ;B组先用 1 0ng/mlIL - 1 β干预 2 4小时 ,随后分别加入 0mol/L、1 0 - 6 mol/L～ 1 0 - 12 mol/L 1 7β -雌二醇作用 72小时。采用RT-PCR方法观察软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表达。结果 :1 0 - 6 mol/L雌二醇或单用IL - 1 β均抑制正常软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达 ,低浓度雌二醇 (1 0 - 11、1 0 - 12 mol/L)能够对抗IL - 1 β的抑制作用 ;所有软骨细胞均未表达Ⅲ型胶原mRNA ;几乎所有浓度雌二醇 (1 0 - 12 mol/L除外 )均诱导软骨细胞表达Ⅰ型胶原。结论 :雌激素对关节软骨细胞胶原表型表达的调控作用随其浓度变化而不同。对变性软骨细胞而言 ,低于生理浓度的雌激素 (1 0 - 12 mol/L)对维持其胶原表型最适宜。     

黄芪对过氧化损伤软骨细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响

目的：观察黄芪（astragalus）对体外关节软骨细胞过氧化损伤中细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响。方法：原代培养兔膝关节软骨细胞,采用Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光法进行鉴定,分为正常组、过氧化氢损伤对照组（损伤组）和过氧化氢损伤＋黄芪干预组（黄芪组）。损伤组采用终浓度为0．2mmol／L的过氧化氢制造体外软骨细胞过氧化损伤模型,黄芪组将终浓度分别为0．02、0．1、0．5g／L的黄芪在过氧化氖损伤前60min加入。测定各组细胞活力（MTT法）、细胞凋亡率（流式细胞术）、Bim蛋白含量（免疫组化染色）、培养上清LDH活性（紫外分光光度法）。结果：与正常组比较,损伤组细胞活力显著降低,细胞凋亡率增加,Bim蛋白表达增加,培养上清LDH活性显著上升。黄芪组与损伤组比较,细胞活力显著升高,细胞凋亡率下降,Bim蛋白表达降低,培养上清LDH活性显著下降。结论：黄芪能降低细胞凋亡率和Bim蛋白的表达,抵抗过氧化氢造成的体外软骨细胞过氧化损伤。     

人关节软骨细胞的永生化及其表型的诱导

目的 用基因转染技术使人关节软骨细胞（HACs)向永生化转化，通过诱导使永生化软骨细胞的表型得到维持。方法 利用编码人类乳头瘤病毒16型E7基因片段（HPV16E7）的逆转录病毒表达载体pLXSN转染HACs，挑取转化细胞克隆并扩大增殖，继用核型分析，克隆形成实验，裸鼠致瘤实验检测转化特性，Nutridoma-sp及抗坏血酸盐无血清诱导培养基诱导并维持转化软骨细胞的Ⅱ型胶原表型。结果 HACs被HPV16E7成功转化，目前传代已达50代，转化的HACs为良性转化，诱导培养基能够使转化软骨细胞的Ⅱ型胶原合成增加并维持在正常水平。结论 HPV16E7能够使HACs良性转化并长期培养经诱导后转化软骨细胞的Ⅱ型胶原表型能够得到很好维持。     

运动训练及中医疗法对关节软骨GAG和软骨细胞形态影响的研究

采用计算机图形处理技术对非周期大强度训练后兔膝关节软骨糖胺多糖 (GAG)含量和软骨细胞形态做半定量和定量分析。结果表明 ,训练对软骨GAG和细胞形态有明显影响 ,而中医恢复疗法对这些影响有一定的的恢复作用     

行气消肿类中药对体外培养的软骨细胞代谢的影响

采用家兔关节软骨细胞体外培养的方法，观察４种中药黄柏、木香、续断和骨碎补不同浓度对培养的软骨细胞的影响，并采用同位素示踪观察软骨细胞ＤＮＡ、胶原和蛋白多糖的合成变化。结果显示，所有４种中药的不同浓度对软骨细胞ＤＮＡ合成均起抑制作用，除低浓度木香溶液外，对胶原合成亦呈抑制作用，１％和５％的黄柏和骨碎补对蛋白多糖合成有促进作用。认识培养软骨细胞对４种中药的特殊反应，为正确使用这些药物提供了新的参考依据。     

实验性关节软骨蛋白多糖降解的MRI研究

研究ＭＲＩ检测早期软骨退变的可能性及其表现。材料与方法：选用健康家犬１２只，在右侧膝关节腔内注射０．２ｍｌ木瓜蛋白酶溶液，可逆性地降解软骨内蛋白多糖基质，建立早期软骨退变的动物模型。在注药前及注药后２４，２８小时及７２小时行双侧膝关节矢状面Ｔ１ＷＩ，ＰＤＷ和Ｔ２ＷＩ成像检查，并取关节软骨组织作蛋白多糖含量测定和组织学检查。     

成纤维细胞生长因子对关节软骨细胞转化生长因子β1作用的免？…

观察成纤维细胞生长因子对培养兔关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。方法培养１月龄新兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入成纤维细胞生长因子１００ｎｇ／ｍｌ，铺灌后收集细胞，作关节软骨细胞转化生长因子β１常规及电镜免疫组织化学观察。     

藻酸盐凝胶三维培养条件下牛胰岛素-转铁蛋白-硒钠对兔关节软骨细胞表型的影响

目的 探讨牛胰岛素一转铁蛋白-硒钠(ITS)对藻酸盐凝胶三维培养条件下兔关节软骨细胞表型的影响. 方法 分离培养兔关节软骨细胞,将单层培养的P2代细胞接种于藻酸盐凝胶中,分别在DMEM培养液中加入10%胎牛血清(FBS).0.2%FBS+1%ITS、1%ITS即设为FBS组、ITS/FBS组,ITS组行DNA、蛋白聚糖(GAG)含量测定及组织化学检测. 结果 软骨细胞在藻酸盐凝胶中始终保持球形样外观,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性.3组GAG合成无显著性差异(P＞0.05).培养的第6天ITS组DNA含量低于FBS组(P＜0.05),第12天低于ITS/FBS组和FBS组(P＜0.05). 结论 ITS可促进藻酸盐凝胶中软骨细胞的增殖,并保持其表型.     

骨形态发生蛋白信号在软骨细胞的传导

骨形态发生蛋白（bone morphogenetic proteins，BMPs）是转化生长因子（transforming growth factor-β，TGF-β）超家族的成员，在骨与软骨生长发育的各种局部调节因子中，它们可能是最重要的软骨细胞成熟与分化的调节因子。笔者主要对BMP信号系统中BMP-Smads通路在软骨细胞不同水平的传导及作用机制进行综述。     

抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对体外培养关节软骨细胞代谢的影响

采用关节软骨细胞培养和同位素标记的方法观察抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对软骨细胞代谢的影响,结果示抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对家兔关节软骨细胞DNA和胶原合成都有明显的抑制作用,认为抗Ⅲ型胶原抗体可能协同抗Ⅱ型胶原抗体参与关节软骨损伤的自家免疫反应。     

应用自体血清培养大鼠关节软骨细胞生物学行为研究

目的:比较自体血清与胎牛血清体外培养大鼠关节软骨细胞生物学行为的差异。方法:分离培养雄性8周Sprague-Dawley(SD)大鼠软骨细胞,分别在5%、10%自体血清和10%胎牛血清中进行单层传代培养,采用光镜观察细胞形态变化,绘制生长曲线评估细胞增殖速度,通过甲苯胺蓝染色,Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色以及流式细胞仪分析细胞CD26、CD44及Ⅰ、Ⅱ型胶原表达以检测软骨细胞生物学行为的变化。结果:(1)在培养3代内,原代培养的软骨细胞形态呈多角形,而3代培养的细胞都为梭形,三组无明显差别;(2)5%自体血清培养的细胞的生长速度与10%胎牛血清培养的细胞接近,10%自体血清培养的软骨细胞的生长速度快于前两组;(3)甲苯胺蓝染色结果证明三组细胞均随传代数增加酸性粘多糖蛋白分泌量下降,且10%胎牛血清组比10%和5%自体血清培养组下降更明显,而10%与5%自体血清培养组之间无明显差异;(4)免疫组化染色和流式细胞仪检测结果表明10%与5%自体血清培养的软骨细胞Ⅱ型胶原表达高于10%胎牛血清培养的细胞(P<0.05),10%与5%自体血清组无显著性差异(P>0.05);随体外培养时间延长,三组细胞合成的Ⅱ型胶原均逐渐减少,Ⅰ型胶原表达逐渐增多。(5)流式细胞仪观察显示三组CD26表达虽有增加但无显著性差异,CD44表达均随传代数增加而逐渐增加,且在1、3代细胞之间具有显著性差异(P<0.05)。在3种培养条件下,相同代数的软骨细胞CD26和CD44表达无显著性差异。结论:本研究发现10%自体血清培养大鼠软骨细胞生长速度快,且仍可以较好保持细胞表型,推测在可能条件下使用浓度较高的自体血清可以缩短体外培养时间而达到较多细胞保持表型的目的。     

骨关节病关节软骨细胞癌基因表达及其相互关系

为了探索骨关节病在分子水平上的发病机理,观察了骨关节病的关节软骨细胞的癌基因表达及其相互关系.采用免疫组化方法,原位检测骨关节病关节软骨细胞的癌基因(p53、p16、bcl-2、erbB-2,C-myc),以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并观察其相互关系.结果发现,正常软骨细胞对数种癌基因呈弱阳性表达,骨关节病关节软骨细胞中的这些癌基因表达信号增强且阳性表达细胞数明显增多,erbB-2和bcl-2的阳性表达有同步关联.提示多种癌基因表达,可能与骨关节病的发病密切相关,但其中许多问题尚待进一步研究.     

Fresh osteochondral allografttransplantation for articular cartilage defects

Fresh osteochondral allografts represent an effective solution for treatment of isolated cartilage defects. The key tosuccessful allograft transplantation is cell viability, with current methods of storage up to 42 days while maintaining acceptable levels of cell viability. Ongoing research and investigations into ways of extending storage time will result in greater availability of osteochondral allografts and pave the road for use of this technique in other joints (ie, shoulder, elbow, wrist, and talus). This article describes the indications, preoperative planning, operative technique, and postoperative care for this procedure.     

运用双重免疫组织化学方法研究骨性关节炎关节软骨细胞的胶原表型

目的 :研究原发性骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)关节软骨中软骨细胞的胶原表型。方法 :运用抗Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体 ,对OA关节软骨标本分别进行Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原双重免疫组织化学染色。结果 :在原发性OA关节软骨的深层和钙化层软骨细胞中 ,存在Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原的共同分布现象。同一个簇聚软骨细胞团中不同细胞的胶原表型也各不相同。结论 :原发性OA关节软骨细胞在疾病环境中发生进一步分化 ,在不同的分化阶段细胞的胶原表型不同 ,其中早期肥大软骨细胞能够同时合成Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原。     

Autologous chondrocyte implantation: complex defects and combined procedures

The treatment of cartilage lesions is often difficult and challenging in the young, complex knee. It is not uncommon to find these lesions associated with complicating factors such as the lesions being uncontained, the presence of bony deficiency, or the involvement of multiple lesions. This chapter presents different approaches and techniques to help manage these surgical complications and outlines the importance of understanding the predisposing factors associated with chondral lesions and degradation. It addresses when and how to manage malalignment, joint instability, and inadequate meniscal function when using a cellular treatment option to treat the chondral lesion. The key to managing these complex cases is to make sure that all joint pathologies are addressed, ensuring that an environment conducive to a successful repair is created.     

Treatment of patellofemoralarticular cartilage injuries with autologous chondrocyte implantation

Autologous chondrocyte implantation (ACI) has successfully been used to repair chondral injuries of the knee. Articular cartilage defects of the patella and trochlea represent a class of cartilage lesions of the knee that have recently been considered an increasing indication for treatment with ACI. These lesions often differ from condyae lesions, having a different etiology and coexisting pathologic conditions in the knee associated with them. Patellar and trochlear cartilage lesions are often associated with patellofemoral maltracking. To obtain good results with these cartilage injuries with ACI, it is essential to address the underlying maltracking issues. Additionally, the contours of the patellar and trochlear cartilage differ from that of the condyles, requiring a modification in the standard technique of periosteal attachment used with condylar lesions. Although results of treating trochlear lesions with ACI have shown good results, the initial reports of treating patellar lesions with ACI were diminished compared to condylar lesions. Recognizing and treating the coexisting pathologic conditions and carefully modifying the standard technique of periosteal attachment has resulted in improved results.     

大鼠骺板软骨细胞P物质的表达

研究P物质 (substanceP ,SP)在不同年龄大鼠骺板软骨细胞中的表达。对 2、4、8、12、16、2 4、30周龄大鼠的胫骨骺板进行免疫组化染色并结合计算机图象分析技术对SP基因表达进行定位与半定量分析。结果发现 ,2周龄大鼠骺板软骨细胞各个区域均未见SP表达 ,4、8、12、16、2 4、30周龄大鼠骺板静止及增殖期软骨细胞未见SP免疫阳性染色 ,肥大区及钙化区软骨细胞可见SP阳性表达 ,其表达强度从 4周龄始随年龄的增长而增强 ,到 12周龄时达峰值 ,16周龄始SP阳性表达强度随年龄增长而逐渐下降 ,30周龄则偶见SP表达。本研究证实生长板肥大区软骨细胞可以表达SP ,SP的表达强度与骨龄有关     

Three-dimensional delayed gadolinium-enhanced MRI of cartilage (dGEMRIC) for in vivo evaluation of reparative cartilage after matrix-associated autologous chondrocyte transplantation at 3.0T: Preliminary results

PURPOSE: To use a 3D gradient-echo (GRE) sequence with two flip angles for delayed gadolinium-enhanced MRI of cartilage (dGEMRIC) to evaluate relative glycosaminoglycan content of repair tissue after matrix-associated autologous chondrocyte transplantation (MACT). MATERIALS AND METHODS: In a phantom study, T1-mapping based on a 3D-GRE sequence with different flip angle combinations was compared with a standard inversion recovery (IR) sequence at 3.0T. Fifteen patients were examined after MACT in the knee at "3-13 months" (group I) and "19-42 months" (group II). The delta relaxation rate (deltaR1) calculated for repair tissue and normal hyaline cartilage was measured and mean values were compared in different postoperative intervals using analysis of variance. RESULTS: The flip angle combination 35/10 degrees provided the best agreement with IR sequence for short and long T1 values. The mean deltaR1 for repair tissue was 2.49 versus 1.04 at the intact control site in group I and 1.90 compared with 0.81 in group II. Differences from repair tissue to control sites showed statistically significance for both groups; no significant difference was found between groups. CONCLUSION: The 3D dual flip angle dGEMRIC technique optimized for cartilage imaging is comparable to standard T1 IR technique for T1 mapping. Furthermore, the preliminary in vivo study demonstrates the feasibility of the technique in the evaluation of MACT patients.     

硅橡胶植入对关节软骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的观察植入硅橡胶对兔关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法18只成年新西兰大白兔,每只动物右膝为实验组,在膝关节滑车处植入硅橡胶;左膝为对照组,膝关节滑车处造成关节软骨缺损后不植入硅橡胶.分别于术后4周、24周和48周取材,采用原位杂交的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,同时运用免疫组织化学的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白的合成.结果实验组中关节软骨可见Ⅱ型前胶原mRNA和胶原蛋白的稳定表达.Ⅰ型前胶原mRNA从术后4周起即有表达,且随时间延长而表达增加.但Ⅰ型胶原染色仅在24周时方开始呈现阳性.Ⅲ型前胶原的mRNA则在各期均未探测到,但从24周起Ⅲ型胶原染色呈阳性.对照组关节软骨在术后4周时即可见到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白同时表达,且对照组中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白表达均呈减少趋势.结论(1)前胶原mRNA的表达早于胶原分泌.Ⅰ型前胶原mRNA表达在实验组中比对照组晚,而且实验组中Ⅰ型前胶原mRNA的表达时间较长,容易观察到阳性的表达信号,所以Ⅰ型前胶原mRNA可以成为早期骨关节炎(OA)的分子标志物.(2)Ⅲ型前胶原mRNA由于表达时间可能较短,所以即使在实验组有Ⅲ型胶原蛋白分泌,但不易查到有Ⅲ型前胶原mRNA的表达,因此Ⅲ型前胶原mRNA不是一个合适的早期OA的分子标志物.(3)硅橡胶植入对关节软骨的胶原合成有一定影响,但对关节软骨的影响小于对照组.硅橡胶植入修补关节软骨缺损可延缓骨关节炎的发病过程.