铜绿假单胞菌外毒素A基因的克隆与原核表达

为建立铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A(Exotoxin A,ETA)的原核表达方法,采用PCR技术扩eta基因,将其插入pET-28a载体构建重组质粒pET-28a-eta,并对重组质粒进行双酶切、PCR及测序鉴定。转入BL21(DE3)中诱导表达,检测目的蛋白大小及反应原性,然后进行表达条件的优化及其表达形式检测。结果表明,所扩增eta基因大小为1917 bp,与GeneBank参比序列一致性在98.70%;蛋白分析表明,rETA大小为74 KDa,具有和天然毒素相似的反应原性。目的基因在37℃、0.6 mmol/LIPTG诱导3 h获得最佳表达。该蛋白在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主。该研究为进一步开展ETA的批量纯化提供了前提条件。     

铜绿假单胞菌外毒素A表达载体的构建及可溶性表达

目的 实现铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因的可溶性表达。方法 用基因重组技术构建pMAL-PEA原核分泌型表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,然后利用直链淀粉树脂对表达蛋白进行亲和层析纯化。结果 酶切鉴定及测序结果表明pMAL-P2X载体上成功地插入了PEA全基因。用IPTG诱导目的基因表达,表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的20％。表达产物经超声处理后,80％的融合蛋白存在于上清液中,说明实现了PEA的可溶性表达。表达的融合蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳,显示为一条蛋白带,分子量约为112kD。结论成功地对PEA全基因进行了可溶性表达和纯化,获得了稳定表达的工程菌,为深入研究：PEA的致病机制和制备用于免疫导向治疗的重组毒素奠定了基础。     

免疫低下患者感染的防治研究近况

免疫低下或免疫失调(immunocompromiseddis-eases,ICD)[1]患者是感染的易感人群,近20年来已引起人们的关注[2]。作者就ICD的防治研究近况作一综述。1　ICD概念免疫低下或免疫失调是指先天或后天获得的免疫低下的一类综合征[1,2],包括:(1)免疫缺陷综合征:如艾滋病(AIDS)患者,其T细胞受人类免疫缺陷病毒(HIV)攻击、破坏而减少;(2)肿瘤患者:其免疫监视、抑制和杀伤功能低下;(3)糖尿病患者:其中性粒细胞和巨噬细胞吞噬、杀菌功能降低;(4)免疫抑制剂治疗患者:经放疗、化疗或环孢菌素、硫唑嘌呤、泼尼松治疗后;(5)长期使用广谱抗生素患者:…     

CTLA—4在防治自身免疫性疾病上的作用

CTLA－4和CD28的结构相似,与抗原提呈细胞（APC）表面B7分子[B7－1（CD80）,B7－2（CD86）]有很高的亲和力,主要与抗原提呈细胞表面B7－1分子形成受体／配体对,相互作用可以抑制T细胞的增殖、活化,起着负性共刺激分子的作用,以维持机体淋巴细胞动态平衡,防止自身反应性T细胞过度激活,从而在防治自身免疫性疾病方面起重要作用。     

腺苷通路在肿瘤免疫中的作用研究进展

肿瘤可通过多种机制逃避机体免疫系统的识别和杀伤.腺苷通路在肿瘤免疫逃逸过程中扮演着重要角色.腺苷由胞外三磷酸腺苷(ATP)在CD39和CD73两种外核酸酶的作用下产生,经与腺苷受体[主要为腺苷A2A受体(A2AR)]结合而发挥效应.在肿瘤微环境中,腺苷通路被过度激活可诱导免疫抑制信号,促进肿瘤的发生和发展.该文对腺苷通...     

免疫调节剂在细菌感染治疗中的应用

目前虽然许多广谱强效的抗菌药物相继问世,但严重的细菌或真菌感染仍继续威胁着患者。这不仅是由于致病菌的耐药性变迁问题,而且与患者自身的免疫状态受损有关。抗菌药物对细菌感染的治疗固然重要,但最终清除致病菌还要靠机体的免疫系统。近年来国内外学者对免疫治疗药物产生了较大的兴趣,试图在抗菌药物治疗中,同时伍用免疫调节剂,旨在提高抗感染疗效。虽然该领域的研究尚不成熟,但已取得了较多的成果。     

微波仪在免疫组织化学中的应用

微波 (ＭＷ)辅助修复抗原技术在组织病理学的应用日趋广泛。我们将微波技术引入ＳＰ法中 ,并应用 4种抗体进行常规免疫组化标记 ,与标准ＳＰ法、ＭＷ -ＡＢＣ法对照。结果显示其是一种快捷而有效的方法 ,报告如下。1　材料与方法1.1　组织标本 :为本科 1980～ 1996年活检确诊胶质瘤存档蜡块 ,标本均经 10 %福尔马林固定 ,常规 4μｍ连续切片 ,附贴于涂有多聚 -Ｌ -赖氨酸的玻片上备用。1.2　试剂 :Ｐ16、Ｒｂ、ＥＧＦＲ、ＣｙｃｌｉｎＤ1及ＳＰ试剂盒 ,均为美国ＭａｘｉｍＢｉｏｔｅｃｈ公司产品 ;多聚 -Ｌ -赖氨酸购自福州迈新生物技术公司…     

胎儿颌下腺内嗜铬粒蛋白A的免疫组织化学观察

目的对人胎儿颌下腺组织中嗜铬粒蛋白A(CGA)进行定性和定位观察,以探讨其功能属性。方法采用HE染色法和免疫组织化学ABC法。结果胎儿颌下腺导管上皮细胞呈CGA免疫反应性,阳性反应产物均匀分布于细胞质中,细胞核呈阴性;胎儿颌下腺小叶间结缔组织中,副交感神经节内的神经元胞体呈CGA免疫反应阳性,由胞体发出细长突起,与邻近神经元关系密切。结论胎儿颌下腺中含有CGA,提示颌下腺可能具有神经内分泌细胞属性;CGA可能对胎儿颌下腺的功能成熟及其多种生物活性肽的发生发育起一定作用。     

化学发光免疫分析在肿瘤标志物检测中的应用

简要介绍了肿瘤标志物的一般概念及化学发光免疫分析的原理，综述了近年来化学发光免疫分析在主要的肿瘤标志物检测中的应用进展，并对化学发光免疫分析研究肿瘤标志物今后的发展提出展望。     

环孢素A放射受体测定法的研究

环孢素Ａ(ＣｓＡ)是一种广泛应用的免疫抑制剂,主要用于抑制脏器移植后的排斥反应。然而ＣｓＡ在小剂量应用的无效抑制与大剂量应用导致的肝、肾毒性等毒副作用之间所存在的“冶疗间隙”十分狭窄[1],因此,在临床应用时必须经常监测血中ＣｓＡ的浓度,以合理用药。我们利用ＣｓＡ的受体即亲环素Ａ(ＣｙＰＡ)能在体外与ＣｓＡ结合的特性,建立了ＣｓＡ的放射受体测定法(ＲＲＡ),结果表明方法的重复性、灵敏度、稳定性与健全性等技术指标均较理想,有良好的应用前景。材料与方法1重组人ＣｓＡ受体(ｒｈＣｙＰＡ)的制备。ｒｈＣｙＰＡ为本实验室利…     

小剂量环孢素A在肾移植中的应用

对37例次肾移植应用小剂量CSA，结果表明，小剂量CSA可以达到中、大剂量的提高移植肾的存活率、减少排斥反应、降低死亡率的治疗效果，又可减少CSA肾肝的毒副作用。小剂量CSA对轻度肝功异常及老人肾移植病人尤为适宜。     

化学发光免疫分析在肿瘤标志物检测中的应用

简要介绍了肿瘤标志物的一般概念及化学发光免疫分析的原理,综述了近年来化学发光免疫分析在主要的肿瘤标志物检测中的应用进展,并对化学发光免疫分析研究肿瘤标志物今后的发展提出展望。     

S100A2在喉鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的研究S100A2蛋白在喉鳞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,lscc）中蛋白表达的情况,探讨其在喉鳞癌发生、发展、浸润转移中的作用。方法收集40例泸州医学院附属医院耳鼻咽喉-头颈外科2005年1月至2007年5月手术切除经病理诊断证实为喉鳞癌（LSCC）患者病理组织石蜡标本作为实验组,另取40例同期手术切除经病理证实无肿瘤浸润的癌旁喉粘膜组织标本作为对照组。所有石蜡标本按4μm连续切片2张,其中1张HE染色,另外1张用免疫组织化学染色SP法检测S100A2蛋白的表     

免疫比浊法在糖尿病肾脏功能检测中的应用

目的:探讨免疫比浊法在糖尿病肾病肾脏功能检测中的应用情况.方法:将我院收治的64例糖尿病肾病患者作为观察组,入院行健康体检50例患者作为对照组,分别采用全自动生化分析仪检测BUN及Scr.采用免疫透射比浊法检测mALB,采用乳胶增强散射免疫比浊法检测Cys-C.分析两组检测指标在糖尿病肾病中的诊断价值.结果:观察组mALB、Csy-C浓度显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),观察组BUN、Scr浓度与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).Cys-C联合mALB阳性率显著高于其他指标,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:采用Cys-C联合mALB检测可显著提高早期肾功能损害的检出率,利于糖尿病肾病的早期预防和治疗,值得临床推广应用.     

抑制素免疫在家畜繁殖中的应用的研究进展

抑制素是一种主要由性腺分泌的糖蛋白激素，本文首先论述了抑制素的特性、免疫原性及抑制素免疫的机制，并就抑制素免疫在家畜繁殖中的应用及这种疫苗与其它疫苗进行了比较。     

流式免疫分型在多发性骨髓瘤诊治中的应用进展

流式免疫分型作为血液系统肿瘤的一个重要的辅助检查手段,目前在多发性骨髓瘤（MM）的诊断,预后评估及微小残留病检测方面的价值,已经被越来越多的学者认同,本文就将在MM的免疫表型特点,在临床中的应用进展作一个综述。