缺氧诱导因子1α的表达对HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的观察缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对HepG2细胞增殖相关CyclinD1、CyclinA基因与凋亡相关Survivin、Bcl-2基因的影响。方法对Tet—on基因表达系统调控的缺氧诱导因子1α转染入HepG2细胞,用不同质量浓度的强力霉素对受强力霉素调控、稳定表达HIF—1α的HepG2^Tet-on进行凋亡诱导,检测肝癌细胞的凋亡和HIF-1α、CyclinD1、CyclinA、Survivin、Bcl-2的基因表达。结果终浓度分别为0、0．1、1、5mg／L的对HIFHepG2^Tet-on进行细胞凋亡诱导,细胞凋亡率分别为56．4％±7．8％、42．7％±4．9％、31．5％±6．1％、19．7％±4．5％;随着强力霉素浓度的增加,HIF-1α、CyclinD1、CyclinA、Survivin、Bcl-2基因表达水平增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIF-1α基因在体外可以促进HepG2细胞的增殖,抑制其凋亡,而且随着HIF—1α基因表达水平的增加作用不断增强,这可能与HIF-1α诱导CyclinD1、CyclinA、Survivin、Bcl-2基因表达有关。     

常氧条件下调控表达缺氧诱导因子1α对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨在体外常氧条件下,诱导表达缺氧诱导因子1d（HIF-1α）对肝癌细胞（HepG2）增殖及侵袭能力的影响。方法利用Tet—on基因调控系统构建能诱导表达HIF-1α的HepG2^Tet-on-HIF-1α“细胞系;常氧条件下,噻唑兰法检测HIF-1α对细胞增殖、黏附能力的影响,Transwell法检测其对HepG2细胞侵袭能力的影响。结果常氧条件下,强力霉素（1μg／m1）可诱导HepG2^Tet-on-HIF-1α“细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达增加;增殖实验中,Dox（＋）组与Dox（一）组各时段吸光度A490nm值无差异（P〉0．05）;黏附实验中,Dox（＋）组的A490nm值明显高于Dox（-）组（P=0．008）;Dox（＋）组侵袭细胞数[（37．6114-8．424）个]明显高于Dox（-）组[（25．3334-8．117）个]（P〈0．01）。结论Tet—on基因调控系统可上调HIF-1α mRNA的转录并增加其蛋白的表达;常氧条件下,HIF-1α不影响HepG2细胞的增殖,但明显增加其黏附和侵袭能力。     

Tet-on基因表达系统调控HIF-1α表达对肝癌细胞增殖的影响

目的 探讨HIF-1α表达对肝癌细胞增殖和细胞周期的影响.方法 利用Tet-on基因表达系统调控肝癌细胞系HepG2中HIF-1α的表达,检测细胞周期和细胞增殖的变化.结果 酶切和DNA测序证实Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE-HIF-1α构建成功.获得了受强力霉素调控、稳定表达HIF-1α的肝癌细胞.随着强力霉素浓度增加,hiF-1α基因表达增加,HIF-1α在体外明显增加HepG2细胞增殖活性;G0/G1期细胞指数减少,细胞增殖指数增多.RT-PCR检测结果表明,随着HIF-1α基因表达增加,Cyclin A mRNA表达增加(P＜0.001),Cyclin D1和Cyclin E mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 HIF-1α基因在体外可以通过HIF-1α表达水平的增加而促进肝癌细胞增殖活性,通过CyclinA表达增加缩短了肝癌细胞增殖周期.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对结肠癌细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的影响。方法HCT-116细胞经10μg／L和100μg／L重组人类TRAIL蛋白处理后,应用荧光实时定量PCR和试剂盒测定凋亡相关基因（Bcl-2、Bad、caspase-3和-8）和炎性反应相关基因（TNF—α,IL-1β,COX-2）的表达水平。结果经10μg几和100μg／L重组人类TRAIL蛋白孵育处理24h后．HCT-116细胞的凋亡率分别为27．4％和45．9％。同时抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bad以及凋亡指示基因caspase-3和caspase-8的表达均显著上调。且100μg／L组的上调幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。TRAIL蛋白处理后,炎性反应相关基因TNF-α,IL-1β,COX-2的表达亦显著上升．且100μg／L处理组的上升幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。结论TRAIL重组蛋白能够诱导结肠癌细胞凋亡以及炎性反应的发生。     

丹参酮ⅡA抑制人胆管癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810的生长抑制及诱导凋亡作用。方法分别采用（0～10μg／ml）的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72h后,通过MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、投射电镜检测细胞凋亡;流式细胞术（FCM）定量检测5μg／ml丹参酮ⅡA作用不同时间后的细胞凋亡率。结果丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长。1～10μg／ml丹参酮ⅡA作用72h后,胆管癌细胞出现细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体出现等特征性的形态学改变。5μg／ml浓度作用12、24、36、48、72h后的细胞凋亡率分别为（2．31±0．15）％、（3．02±0．36）％、（3．86±0．44）％,（6．75±0．60）％和（20．62±1．76）％与对照组（1．08±0．14）％比较均具有显著差异。结论在体外丹参酮ⅡA能够诱导人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810凋亡,这可能是丹参酮ⅡA抑制其生长的机制。     

核酶基因抑制肝癌细胞低氧诱导因子-1α表达的实验研究

目的探讨靶向HIF-1α核酶基因对肝癌细胞HIF-1α表达的调控。方法采用脂质体介导的方法，将靶向HIF-1α核酶基因真核表达载体转染肝癌细胞Hep3B2，并予低氧条件诱导。于转染后48h采用Western Blotting检测Hep3B2细胞中HIF-1α蛋白的表达水平；荧光报告基因方法检测HIF-1转录活性。结果Hep3B2细胞低氧诱导后，HIF-1α蛋白表达水平、HIF-1转录活性增高（1．0±0．02），转染核酶基因400μmol／L后48h，Hep3B2细胞低氧诱导的HIF-1α蛋白表达水平明显下降，HIF-1转录活性下调（0．12±0．025，P〈0．05）。结论核酶基因可特异性抑制低氧诱导的肝癌细胞HIF-1α表达，降低其转录活性。     

Tet-on基因表达系统反应质粒P~(TRE-HIF-1α)的构建和表达鉴定

目的克隆和构建携带人低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的Tet-on基因表达系统反应质粒P^TRE-HIF-1α。方法以缺氧的肝癌细胞株HepG2总RNA为模板，进行RT-巢式PCR，获得HIF-1α的cDNA，克隆人Tet-on基因表达系统反应质粒P^TRE2hyg，酶切重组子鉴定。将构建好的P^TRE-HIF-1α用脂质体法转入HepG2^Tet-on细胞，在强力霉素的作用下，用RT-PCR及Western blot法鉴定重组质粒的表达。结果扩增出HIF-1α的eDNA测序结果与Genbank记载完全一致，并成功克隆人P^TRE2hyg，将反应质粒P^TRE-HIF-1α转入HepG2^Tet-on细胞，可以完整有效表达HIF-1α且受强力霉素的调控。结论成功克隆和构建携带HIF-1α基因的Tet-on基因表达系统反应质粒P^TRE-HIF-1α，并证明其表达能在HepG2^Tet-on细胞中受强力霉素调控。     

HIF-2α对PDCD5的调节及其对肝癌细胞凋亡影响的研究

目的研究缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在肝癌组织中的表达,探讨其对凋亡蛋白PDCD5及肝癌细胞凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测60例原发性肝癌及癌旁组织中HIF-2α的表达,分析HIF-2α的表达同肝癌临床参数的关系。MTT法检测肝癌细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡。Real-time PCR检测基因表达水平。Western Blot检测蛋白表达水平。结果 HIF-2α在肝癌组织中的表达明显低于其在癌旁组织中的表达,且HIF-2α的异常表达和肝癌的大小呈负相关(P0.05)。转染HIF-2α表达质粒后肝癌细胞中PDCD5表达水平升高(P0.05),肝癌细胞凋亡增加,干扰HIF-2α表达后肝癌细胞中PDCD5表达水平降低(P0.05),肝癌细胞凋亡减少。转染PDCD5表达载体后肝癌细胞凋亡增加。结论 HIF-2α在肝癌的低表达异常可能是肝癌发生、发展的推动因素之一;HIF-2α可通过上调PDCD5的表达促进肝癌细胞产生凋亡。     

落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇信号通路的影响

目的探讨落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（PI-3K／PKB）信号传导通路的影响。方法分离BALB／C小鼠心肌细胞（2×10s／m1）和C57BL／6小鼠的脾细胞（1×10^6／ml），前者作刺激细胞，后者作反应细胞，进行混合细胞培养，建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分4组：对照组，心肌细胞与脾细胞混合培养；3个实验组在对照组基础上，落新妇甙组加入落新妇甙（15μg/ml）；落新妇甙加P13K激动剂组加入落新妇甙（15μg/ml）和P13K激动剂IL-8（20μg/ml）；落新妇甙加P13K抑制剂组加入落新妇甙（15μg／ml）和P13K抑制剂LY294002（20μmol／L）。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。Western blot法检测T细胞P13K和Bcl-2蛋白表达情况。RT-PCR法检测T细胞PKB mRNA表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组[（74．2±11．7）％对（34．2±9．6）％，P〈0．01]，P13K、PKB、Bcl-2表达显著低于对照组（P〈0．01）。落新妇甙加P13K抑制剂组T细胞凋亡指数显著高于落新妇甙组，P13K、PKB、Bcl-2显著低于落新妇甙组（P〈0．01）。落新妇甙加P13K激动剂组T细胞凋亡指数和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论落新妇甙诱导心脏移植效应性T细胞凋亡与其抑制PI-3K／PKB信号通路有关。     

BAK基因过表达对膀胱癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制

目的：探讨BAK基因过表达对膀胱癌的诱导凋亡效应及机制。方法：脂质体介导BAK基因转染膀胱癌EJ细胞1－7d后，逆转录聚合酶链反应检测BAK基因表达，细胞计数法检测癌细胞生长活性，DNA Ladder法、吖啶橙－溴化乙锭荧光染色法及原位末端转移酶标记技术检测癌细胞凋亡，免疫组织化学法检测癌细胞Caspase-3、Bcl-2,p53表达。结果：转染1－7d后，癌细胞BAK基因表达显著增强（P＜0．01），体外生长抑制20．66％－35．58％（P＜0．01），部分癌细胞呈现凋亡形态学变化，凋亡率为18．0％－20．6％（P＜0．01），癌细胞Caspase-3表达增强6．6倍（P＜0．01）Bcl．2和P53表达差异无显著性（P＞0．05）。结论：BAK基因表达能显著诱导膀胱癌细胞凋亡，其中Caspase-3激活是其作用机制之一。     

缺氧诱导对人结肠癌SW480细胞缺氧诱导因子-1α和Survivin基因表达的影响

目的 构建缺氧诱导模型和观察缺氧对人结肠癌SW480细胞系缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Survivin基因表达的影响。方法 利用氯化钴（CoCl2）构建缺氧诱导模型；利用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分别测定CoCl2缺氧诱导与SW480细胞HIF—1α和Survivin基因mRNA表达的时效关系（0、2、4、8、24h）和量效关系（0、50、100、150、200／μmol／L）。结果HIF-1α和Survivin基因mRNA表达与氯化钴浓度呈明显的剂量依赖关系；HIF-1α基因表达随诱导时间的延长而逐渐增强，4h亚组出现一个表达高峰，Survivin基因在缺氧诱导4h呈现表达最高峰；HIF-1α与survivin基因mRNA的表达在缺氧诱导量效关系（r=0．521，P＜0．05）和时效关系（r=0．693，P＜0．05）中均呈显著正相关。结论 缺氧可以诱导HIF—1α和Survivin基因的表达增加；HIF—1α与Survivin基因的表达均呈显著相关，提示Survivin基因可能与HIF—1α存在某种调控关系并在缺氧抗凋亡机制中发挥作用。     

茶多酚诱导膀胱癌T24细胞凋亡及上调PTEN表达

目的 探讨茶多酚（TP）抑制膀胱癌细胞生长的可能分子机制。方法 采用MTT法和流式细胞术，观察膀胱癌细胞系T24经不同浓度TP处理后细胞生长及PTEN蛋白表达的改变。结果TP以剂量依赖的方式抑制膀胱癌细胞的生长，加入0、50、100、200、400μg／mL TP的T24细胞抑制率分别为0％、11．2％、33.4％、36．9％、67．5％。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰，癌细胞出现凋亡，凋亡率分别为6．8％、25．1％、28．6％、36．6％、41．1％；同时，随TP作用浓度的增加，G／S阻滞细胞逐渐增多，细胞分裂增殖指数（PI）降低；而细胞PTEN蛋白表达水平由（37.66±0．49）逐渐增加至（163．92±3．36）（P〈0．01）。结论 TP对T24细胞生长具有抑制作用，其机制可能是通过上调PTEN蛋白表达影响细胞周期和诱导细胞凋亡。     

基质细胞衍生因子-1α对人前列腺癌PC-3细胞系失巢凋亡的影响

目的：探讨基质细胞衍生因子-lα（stromal cell-derived factor-lα,SDF-lα）对人前列腺癌PC-3细胞失巢凋亡的影响。方法：悬浮培养诱导细胞失巢凋亡,使用0μg／L、50μg／L、100μg／L的SDF-1α作用于悬浮培养的PC-3细胞;天后,采用CCK8法检测PC-3细胞增殖活性变化;Western-blot方法检测促凋亡蛋白Bmf及抗凋亡蛋白Bcl-xl表达变化。结果：PC-3细胞悬浮培养3天后,细胞存活率为（25．19±0．43）％,提示大部分悬浮培养的细胞发生失巢凋亡;50μg／L、100μg／L的SDF-α处理后,与对照组相比,细胞存活率提高,分别为（37．60±6．24）％（P〈0．05）和（33．66±5．51）％（P〉0．05）;悬浮培养的PC-3细胞经SDF-lα处理后,其促凋亡蛋白Bmf表达减低;抗凋亡蛋白Bcl-xl表达增高。结论：SDF-lα可抑制人前列腺癌PC-3细胞发生失巢凋亡,其机制可能与下调Bmf和上调Bcl-xl蛋白表达相关。     

沉默缺氧诱导因子-1α对肝癌细胞化疗敏感性影响及相关机理的研究

目的观察应用短发夹RNA（shRNA）沉默缺氧诱导因子（HIF）-1α对肝癌细胞化疗敏感性的影响并探讨其相关机理。方法脂质体包裹HIF-1ashRNA表达载体（pshRNA-HIF-1α）转染到肝癌细胞HepG2细胞中，G418筛选，建立稳定的HIF-1α沉默的细胞系，并以转染空白质粒（pHK）作对照。逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测沉默HIF-1α后HIF-1amRNA和多药耐药基因1（mdrl）mRNA变化；免疫印迹（Western blot）检测细胞HIF-1α及P-糖蛋白（Dgp）的变化。CoCl2模拟缺氧环境下，MTT和流式细胞术检测不同剂量的化疗药物（阿霉素）在HIF-1α沉默后对细胞生长抑制率和凋亡率的影响。结果pshRNA—HIF-1α转染细胞后HIF-1α干扰率在mRNA水平和蛋白水平分别为82．18％和75．51％。沉默HIF-1α后细胞mdrl mRNA和P-gp表达显著降低（P〈0．05），生长抑制率和凋亡率明显增高（P〈0．05）。结论shRNA沉默HepG2细胞HIF-1α可以通过下调mdrlmRNA和Dgp表达逆转肝癌化疗耐药，增强肝癌细胞对化疗的敏感性；可通过沉默HIF-1α作为肝癌基因治疗的一种新途径。     

TRAIL基因与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因(TRAIL)和顺铂联合应用对人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞的生长抑制和凋亡的诱导作用。方法 将重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞，通过电镜、MTT比色法、RT-PCR及流式细胞仪方法，观察和分析其对RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞作用的效果，并与联合应用顺铂的效果进行对比，分析其作用机制。结果MTY法显示顺铂浓度为1．0μg／ml、5．0μg／ml和10．0μg／ml对RD细胞生长的抑制率分别为9．8％、23．4％和43．8％；按MOI值1000转染腺病毒Ad／GT-TRAIL对RD细胞生长的抑制率为41．2％，再联合Ad/PGK-GV16后，生长抑制率上升到52．5％；Ad／GT-TRAIL联合Ad／PGK-GV16再加用顺铂后的生长抑制率为72．7％。顺铂作用3d后的凋亡率为7．41％；Ad／GT-TRAIL联合Ad／PGK-GV16作用3d后的凋亡率为12．95％；Ad／GT-TRAIL联合Ad／PGK-GV16再加用顺铂作用3d后的凋亡率为23．24％，而1640对照组的凋亡率为2．19％。顺铂作用后，细胞的cFLIP mRNA表达下调，与细胞凋亡增加的改变相一致。结论 Ad／GT-TRAIL能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡，从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长，联合应用顺铂后能显著提高疗效。     

抑制蛋白激酶Cα活性增加TNF-α对小鼠肝癌细胞毒性的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)及联合蛋白激酶Cα (protein kinase C alpha,PKC-α)抑制剂Go6976对小鼠肝癌(H22)细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的H22细胞分成两组,每组分四部分,一组仅以不同浓度的TNF-α(0,20、40、60 ng／ml)处理,另一组TNF-α处理同时以Go6976(4．6 nmol／ml)抑制PKC-α活性,分别于4 h,8 h,16 h采用流式细胞仪检测小鼠肝癌细胞的凋亡率,Western blotting方法检测PKC—α和磷酸化PKC-α蛋白的表达情况。结果 TNF-α(0、20、40、60 ng／ml)处理H22细胞4 h,细胞凋亡率分别为2．44％±0．31％、 1．80％±0．32％、2．73％±0．14％、3．05％±0．78％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达无显著改变;同时用 TNF-α和Go6976处理H22细胞,凋亡率、PKC-α和磷酸化PKC-α的表达与单独使用TNF-α的结果相似。TNF-α处理8 h,细胞凋亡率分别为2．11％±0．43％、1．83％±0．31％、3．40％±0．47％、6．05％± 0．78％,PKC-α及磷酸化PKC-α的表达随TNF—α浓度增加而上调;TNF—α处理同时抑制PKC-α活性,细胞凋亡率显著升高,分别为2．90％±0．39％、7．76％±0．35％、11．43％±1．05％、12．96％± 2．44％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达相应下调。仅以TNF-α处理或TNF—α处理同时抑制PKC-α活性16 h,其结果与8 h的结果基本一致;于Go6976抑制细胞PKC-α活性组,TNF-α60 ng／ml时细胞凋亡率较TNF-α40 ng／ml时有所下降,但坏死细胞的比例却明显升高。结论 TNF-α上调PKC—α和磷酸化PKC-α表达;抑制PKC-α活性,显著增加TNF-α对H22细胞的细胞毒性。     

复方仙贞汤抑制成骨细胞凋亡的实验研究

目的 观察不同浓度的复方仙贞汤对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡的影响。方法 TNF-α培养液诱导体外培养成骨细胞凋亡后，分别加入不同浓度的复方仙贞汤，用流式细胞仪检测其对成骨细胞的凋亡率。结果 复方仙贞汤1μg／ml组和500μg/ml组细胞凋亡率明显降低，与模型组和空白对照组相比，差异非常显著，其中1μg/ml组作用更强。500μg／ml可能是通过影响成骨细胞周期中的G0-G1和S期而达到抑制凋亡作用的，而1μg／ml组还能增加G2-M期成骨细胞。结论 复方仙贞汤能抑制TNF—α诱导的成骨细胞凋亡，以低浓度(1μg／ml)抑制作用较好。     

中药癌痛克对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡作用及机制研究

目的通过观察不同浓度癌痛克对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的作用，以及在相应状态下细胞内视网膜母细胞瘤（Rb）基因相对表达量的改变，探讨中药癌痛克的抗胃癌作用机制。方法以不同浓度癌痛克作用SGC-7901细胞，CCK-8检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率细胞周期，RT—PCR方法检测细胞内Bcl-2基因表达变化。结果2～50μg／ml癌痛克可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡，其抑制及诱导凋亡效应呈浓度依赖性；细胞周期分析处于G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，Rb基因mRNA表达上调。结论中药癌痛克可通过抑制SGC-7901细胞增殖或诱导其凋亡，且其机制可能通过上调Rb基因表达途径使细胞阻滞在G1期，进而诱导细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯联合化疗药物对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合化疗药物对乳腺癌细胞增殖的抑制作用，并初步探讨其机制。方法人乳腺癌细胞Bcap-37以VES联合化疗药物刺激24h和36h，VES浓度为10μg／mL和20μg／mL，化疗药5-FU和MMc及环磷酰胺的浓度分别为16．9μg／mL，33．8μg／mL；1μg／mL，3．3μg／mL及100μg／mL，300μg／mL，以M1Tr法测定对细胞增殖的抑制作用，以流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞表面Fas表达。结果VES联合化疗药物对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用。流式细胞仪分析细胞周期，Bcap-37细胞的自然凋亡率为0．7％，20μg／mLVES作用24h后凋亡率为19．2％，5-FU和丝裂霉素及环磷酰胺3种化疗药物作用后的凋亡率分别为16．2％，16．7％。12．3％。VES与3种化疗药物合用后的凋亡率分别为40．3％，44．8％，39．6％。VES联合化疗药物作用后乳腺癌细胞表面Fas表达显著增强。结论VES联合化疗药物对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用，其机制可能与细胞表面Fas表达上调有关。     

人可溶性TRAIL蛋白诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 初步观察并探讨人重组可溶性TRAIL蛋白诱导MG-63骨肉瘤细胞凋亡的作用，并通过实验初步探讨TRAIL对肿瘤细胞的选择性杀伤作用。方法 MTT法测定TRAIL对MG-63细胞、MRC-5人肺二倍体细胞及L-02人肝细胞的抑制率；电镜观察与FACS分析TRAIL蛋白诱导MG-63骨肉瘤细胞凋亡的作用；用RT-PCR检测TRAIL受体在MG-63骨肉瘤细胞、MRC-5人肺二倍体细胞及L-02人肝细胞上的表达，并初步分析TRAIL诱导MG-63骨肉瘤细胞凋亡的机制。结果 MTT还原试验表明：作用24h后500ng/ml TRAIL的抑制率为10.1％，1μg/ml TRAIL的抑制率为24.3％，2μg/ml TRAIL的抑制率为50.6％，5μg／ml TRAIL的抑制率为95％以上，其半数抑制浓度为2μg/ml。而TRAIL对MRC-5人肺二倍体细胞株及L-02人肝细胞株无明显作用。细胞形态学观察显示：MG-63骨肉瘤细胞经TRAIL作用3～8h后即有部分细胞开始变小、变圆，24h后大量细胞变圆、脱落，漂浮于培养液中。透射电镜可观察到核固缩，染色质浓聚于核膜形成新月状小体。流式细胞仪检测显示2μg／ml的TRAIL处理MG-63骨肉瘤细胞6h，即可在二倍体峰前出现较明显的凋亡峰。结论 人可溶性TRAIL蛋白可以迅速地选择性杀伤MG-63骨肉瘤细胞，具有潜在的临床应用价值。