百里醌抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

目的探讨百里醌对体外膀胱癌细胞株BIU-87生长的影响及其机制。方法百里醌单独作用人膀胱癌细胞株BIU-87及预处理NF-κB激活剂TPA后百里醌再作用BIU-87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测膀胱癌细胞质中IκBα蛋白表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞株BIU-87生长,并明显诱导细胞凋亡;预处理TPA可显著削弱百里醌对BIU-87细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;百里醌干预后膀胱癌细胞质中IκBα的表达明显上调。结论百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞生长,并诱导细胞凋亡,该作用可能通过促进其胞质中IκBα的表达而实现。     

PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性影响的研究

目的研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响。方法将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞（pBp-PTEN-BIU87）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞（pBp-BIU87）和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素MMC（1、10和100g/mL）、康朴赛星（0.25、2.5和25g/mL）和吡柔比星（2、20和200g/mL）的抑制率和敏感性的变化。结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达。PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物抑制率和敏感性明显提高,对吡柔比星和康朴赛星的药物抑制率和敏感性无明显变化。结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对某些抗癌药物的敏感性,作用的强弱取决于药物的作用机制。     

膀胱癌耐药细胞株MDR_1基因表达水平的检测

为探讨膀胱癌耐药细胞亚系BIU-87PR的耐药机理，我们在体外用阿霉素诱导，建立了人膀胱癌耐药细胞株，应用MDR1cDNA探针检测了该细胞株MDR1基因的表达情况，RNA斑点杂交结果表明：膀胱癌亲代细胞株BIU-87为阴性，而BIU-87PR耐药细胞株呈阳性。因其杂交信号的强度明显低于小鼠肾组织MDR1mRNA的杂交强度，说明BIU-87细胞在阿霉素诱导下，MDR1基因有了低度表达。这将为指导腔内化疗的用药和提高疗效提供重要的理论依据。〔中华泌尿外科杂志，1994；15（2）：83〕膀胱癌耐药细胞株MDR_1基因表达水平的检测@赵军@鲁功成@关中宏…     

RNA干扰靶向Survivin促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的研究

目的针对凋亡抑制因子Survivin应用RNA干扰技术（RNA interference,RNA）i抑制膀胱癌细胞株BIU-87细胞内源性Survivin基因的表达进而促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡.方法构建重组质粒pshRNA-survivin1、pshRNA-surv-ivin2和pshRNA-survivin 3并转染BIU-87细胞株,应用免疫组化法检测细胞中Survivin蛋白的表达,通过噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞生长增殖抑制率,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果重组质粒转染BIU-87细胞后,Survivin蛋白表达明显下调,细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑.结论膀胱癌细胞高表达Survivin,RNA干扰特异性抑制Survivin表达,可以促进膀胱癌细胞凋亡和增殖活性明显下降.     

芹菜素诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡及机制的研究

目的:探讨芹菜素(Apigenin)在体外诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的作用及其机制.方法:MTT法测定不同浓度芹菜素作用后BIU-87细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞周期情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术观察芹菜素作用后细胞的凋亡情况;RT-PCR法检测Survivin mRNA表达的变化;免疫细胞化学SP法检测Survivin和Caspase-3蛋白表达的变化.结果:①MTT法证实芹菜素能明显抑制膀胱癌细胞株BIU-87的生长.②22.03 μmol/L芹菜素作用72 h后,流式细胞仪检测发现芹菜素可使BIU87细胞阻滞在G2/M期;流式细胞术双染法检测细胞凋亡显示:芹菜素可使BIU-87细胞发生凋亡.③RT-PCR检测发现芹菜素可使BIU-87细胞Survin mRNA表达显著减少(P<0.05),免疫细胞化学SP法检测显示Survivin蛋白表达亦显著减少(P<0.05),Caspase-3蛋白表达则明显增加(P<0.01).结论:芹菜素在体外可抑制BIU-87细胞增殖,诱导其发生凋亡.芹菜素诱导BIU-87细胞发生凋亡的生物学效应可能与Survivin的表达下降,Saspase-3的表达上升有关.     

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和多药耐药相关蛋白基因在膀胱癌中的表达及相关性分析

为探讨γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)及多药耐药相关蛋白(MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系,应用逆转录多聚酶链式反应(Rt-PCR)技术检测了32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上γ-GCS亚单位γ-GCSh、γ-GCS1以及MRPs家族成员MRP1和MRP2的mRNA的表达,并以β-actin mRNA为内对照半定量进行相关分析.结果显示:γ-GCSh、γ-GCSl、MRP1和MRP2mRNA在癌组织的平均相对表达水平均高于其在正常粘膜的表达;γ-GCSh和MRP1在化疗复发病例的癌组织的平均表达水平明显高于在未接受过任何化疗的初发病例,同时显示两者在癌组织的表达具有较强的相关性(r=0.786,P＜0.01).提示:正常细胞的恶性化可上调γ-GCS和MRPs的表达;膀胱癌临床化疗耐药的形成与γ-GCSh和MRP1的过表达密切相关,两者的相关性表达提示两者之间可能存在共同的调节机制.     

改良型TAT-VP3融合蛋白对膀胱癌BIU-87细胞Bcl-2和Survivin表达的影响

目的 探讨应用改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞后,对肿瘤细胞的抑制效应,及对Bcl-2和Survivin表达的影响,为以后对改良型TAT-VP3融合蛋白的进一步研究提供实验基础.方法 运用MTT比色法检测BIU-87细胞的生长抑制率.利用不同浓度的改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞,24 h,48 h,72 h,运用实时荧光定量酶链聚合反应(QPCR)检测Bcl-2和Survivin mRNA的表达变化.运用不同浓度的改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞,24 h后蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测Bcl-2和Survivin蛋白的表达情况.结果 改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞后,肿瘤细胞凋亡率与时间和剂量呈依赖关系(P＜0.05),Bcl-2和Survivin mRNA表达与时间和药物剂量呈依赖关系.不同浓度的改良型TAT-VP3融合蛋白作用24 h后,Bcl-2和Survivin蛋白表达与药物剂量呈依赖关系.结论 改良型TAT-VP3融合蛋白对膀胱癌BIU-87细胞具有一定的抑制作用,并对凋亡相关因子(Bcl-2和Survivin)的表达有影响.     

杨梅素诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡机制研究

目的:研究杨梅素(Myricetin)诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的机制.方法:培养人膀胱癌细胞株BIU-87,加入不同浓度杨梅素干扰,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化;并利用MTT及Hoechst 33258染色法检测杨梅素对膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的影响;后用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因survivin及caspase-3转录水平的改变,免疫印迹法检测survivin和caspase-3的表达情况.结果:杨梅素能诱导BIU-87细胞凋亡,并明显抑制survivin的转录和表达,同时对caspase-3有上调作用.结论:杨梅素能诱导膀胱癌细胞BIU-87凋亡,其机制与抑制survivin表达,上调caspase-3表达有关.     

黄连素抑制肺腺癌核转录因子-κB活性的影响及其与顺铂耐药关系研究

目的:观察黄连素对肺癌细胞中顺铂细胞毒性的影响并探讨其机制.方法:选用肺癌顺铂(CDDP)耐药细胞株A549/CDDP,四甲基偶氮唑蓝法测定药物对细胞存活率的影响,蛋白免疫印记法测定IκBα、p65的表达水平.并用p65 siRNA转染A549/CDDP细胞沉默p65的表达,而降低核转录因子(NF)-κB的活性.结果:CDDP耐药肺癌细胞A549/CDDP与敏感细胞A549相比,p65的表达水平显著升高,而IκBα的表达水平显著降低,p65 siRNA沉默A549/CDDP细胞p65的表达降低NF-κB的活性后能显著逆转CDDP耐药(P<0.01);20 μmol/L的黄连素能显著增加A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性,且5~20 μmol/L的黄连素能浓度依赖性地降低A549/CDDP细胞中p65的表达,但增加IκBα的表达(P<0.01).结论:黄连素通过抑制NF-κB的活性逆转肺腺癌细胞中CDDP耐药.     

粉防己碱逆转膀胱癌BIU-87/ADM的凋亡抗性及可能机制的研究

目的 探讨粉防己碱(Tet)逆转人膀胱癌耐阿霉素细胞株BIU-87/ADM的凋亡抗性及其可能机制.方法 将膀胱癌耐药株和敏感株分为对照组、粉防己碱组、阿霉素组和阿霉素联合粉防己碱组(n=6),其中阿霉素药物作用浓度为1.5 μg/ml,粉防己碱为1 μg/ml.应用AO/EB染色结合荧光显微镜技术检测细胞凋亡,JC-1...     

HepaCAM基因转染对膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨外源性肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)转染对人膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)表达的影响。方法使用脂质体2000转染法将携带野生型hepaCAM基因的质粒(pEGFPN2-hepaCAM)及空载质粒(pEGFPN2)转染人膀胱癌BIU-87细胞,建立稳定过表达hepaCAM基因的BIU-87细胞株。以转染空载质粒及未转染的BIU-87细胞株作为对照,采用MTT法检测各组细胞生长能力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hepaCAM、VEGF mRNA水平的变化,Western blot检测VEGF蛋白水平的变化。结果MTT实验示:hepaCAM基因转染(实验组)BIU-87细胞生长与空载体组和未处理组细胞比较明显受到抑制(P<0.05);hepaCAM基因在膀胱癌BIU-87细胞不表达,转染后hepaCAM mRNA明显增强(P<0.05);实验组VEGF mRNA表达(0.527±0.031)与未处理组(0.803±0.042)、空...     

人肝癌细胞株中FOXM1及NF-κB的表达及意义

目的 探讨不同肝癌细胞株中转录因子FOXM1（Forkhead Box M1）及核转录因子NF-κB（Nuclear factor kappa B）的表达强度及意义.方法采用Western blot、RT-PCR法,检测不同肝癌细胞株（QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721）中FOXM1及NF-κB在蛋白及mRNA水平的表达情况.结果 在3株肝癌细胞中FOXM1及NF-κB的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平差异均有统计学意义,细胞株（QGY-7703、BEL-7402）中FOXM1及NF-κB的表达同时都明显高表达于细胞株SMMC-7721.结论 肝癌细胞株中FOXM1蛋白及mRNA表达与NF-κB表达趋势一致,提示FOXM的表达可能与NF-κB的活化有关.     

低浓度二甲亚砜和第二信使调节剂混合物低温保存血小板的初步研究

目的:研究NF-κB"诱骗(decoy)"寡核苷酸(ODNs)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774.1细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:体外培养巨噬细胞,LPS刺激后脂质体转染NF-κB"decoy"ODNs,用硝酸还原酶法测定培养液中NO水平以及iNOS含量,RT-PCR观察细胞iNOS的mRNA表达变化.结果:NF-κB"decoy"ODNs可降低巨噬细胞培养体系LPS诱导的NO合成,阻断iNOS mRNA的表达;对照序列的ODNs和转染剂对NO、iNOS无明显影响.结论:NF-κB"decoy"ODNs可以抑制iNOS的活性,减少NO生成,可能与其特异性竞争抑制活化NF-κB结合位点有关.     

小檗胺对慢性粒细胞白血病细胞抑制作用的机制研究

目的:探讨小檗胺诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制.方法:体外培养K562细胞株细胞,经8 μg/ml小檗胺处理不同时间后用Western blot检测细胞内总NF-κB、核内NF-κB和IκBα、pIκBα、IKKα、A20蛋白表达.结果:随着小檗胺处理时间的延长,细胞内总NF-κB无变化,但核内的NF-κB表达下降,半定量比值从处理前的59.2%,随着作用时间的延长,逐步下降为31.4%,19.7%,4.1%,0%.同时出现pIκBα、IKKα表达下调,A20表达增高.结论:小檗胺通过NF-κB途径诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制,可能涉及抑制NF-κB的核转位和转激活,推测其作用与小檗胺降低K562细胞bcr-abl基因的表达有关.     

紫龙金逆转人膀胱癌细胞多药耐药研究

目的:研究中药紫龙金逆转人膀胱癌细胞多药耐药(Multidrug resistance,MDR)机理.方法:应用MTT法检测紫龙金的细胞杀伤作用,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax基因mRNA水平表达.结果:BIU-87/ADM细胞生存率为(98.00±1.48)％,加入紫龙金后(浓度分别...     

RNA干扰对膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株端粒酶活性及其增殖的影响

目的 探讨针对人端粒酶RNA(hTR) 及其催化亚基(hTERT) 的小干扰RNA (siRNA) 对膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87端粒酶活性及其增殖的影响. 方法 根据人TR mRNA和TERT mRNA的序列,分别设计合成3对不同的且能干扰TR和TERT基因表达的siRNA(TR-siRNA, TERT-siRNA),通过脂质体法将其转染膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株,采用荧光定量PCR分析TR、TERT mRNA 表达,TRAP-ELISA检测端粒酶活性,MTT 法检测细胞增殖. 结果 3对TERT-siRNA和3对TR-siRNA中,pRNAT-TERT-Ⅲ和pRNAT-TR-Ⅲ可以特异性抑制BIU-87细胞株中TERT和TR表达(分别减少67%和41%,P<0.05),且BIU-87细胞株的生长和端粒酶活性明显受到抑制. 结论 TR-siRNA和TERT-siRNA能特异且高效阻断各自基因表达,降低端粒酶活性,进而抑制BIU-87细胞的增殖.     

NF-κB基因沉默对人胃癌SGC7901细胞增殖影响及机制探讨

目的:研究NF-κB基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖及TFF3、ERK表达的影响。方法:应用脂质体法将靶向NF-κB的干扰RNA(si RNA)转染入胃癌细胞株SGC7901中。采用MTT法和流式细胞术法检测NF-κB基因沉默对SGC7901细胞的增殖抑制率和细胞凋亡情况,运用Real time PCR和Western blot免疫蛋白印迹法检测SGC7901细胞内TFF3、ERK的表达。结果:MTT法显示NF-κB基因沉默组癌细胞抑制率大于空白载体组和对照组(P0.01);流式细胞术法表明NF-κB基因沉默组细胞凋亡比例达12.60%,明显高于空白载体组和对照组(P0.01);RT-PCR和Western Blot检测示,经NF-κB基因沉默后,细胞内NF-κB、TFF3、ERK m RNA及蛋白表达量下降明显。结论:NF-κB基因沉默可抑制胃癌细胞的增殖并促进其凋亡。NF-κB基因作为胃癌治疗的分子靶点可能具有重要意义。     

和厚朴酚对U937/ADR细胞系耐药逆转作用及其机制研究

目的 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞U937阿霉素(ADR)耐药细胞系U937/ADR多药耐药逆转作用及其机制.方法 以大剂量(IC50)ADR短时间诱导方法 ,构建U937/ADR细胞系.以低浓度HNK(IC20)与不同化疗药物联合作用于U937/ADR细胞系,检测其对不同化疗药物耐药逆转倍数.罗丹明123检测药物外排功能;荧光定量PCR(FQ-PCR)和Western blotting检测不同浓度HNK对U937/ADR细胞系核转录因子-κB(NF-κB)和耐药相关基因MDR1及其蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响;ELISA法检测NF-κB亚单位p65(NF-κB p65)的DNA结合活性.结果 成功构建了白血病多药耐药细胞系U937/ADR,对ADR耐药指数为亲代U937细胞的11倍.6.5 μg/mL HNK可以逆转U937/ADR对ADR的耐药,逆转倍数为2.20倍.HNK能够浓度依赖性地下调U937/ADR细胞NF-κB、MDR1 mRNA和P-gp表达,抑制NF-κB p65的活性.结论 HNK能有效逆转U937/ADR多药耐药,其机制可能与抑制NF-κB p65活性、下调MDR1和P-gp表达有关.     

异搏定对膀胱癌耐药性的逆转研究

目的通过钙通道阻滞剂异搏定阻止抗癌药物从细胞内排出,探讨肿瘤细胞抗药性逆转的可能性。方法利用氮唑化合物(MTT)试验方法及高效液相色谱分析(HPLC)方法检测应用异搏定后肿瘤细胞对抗癌药物敏感性的改变。结果发现异搏定对膀胱癌敏感细胞(EJ)的生长无影响,而对膀胱癌耐药细胞(EJ-R)则随着异搏定质量浓度的增加,化疗药物的抗癌作用逐渐增强。结论异搏定通过阻滞钙通道,降低P-GP170排出抗癌药物的作用,使癌细胞内抗癌药物浓度得到保证,达到杀死肿瘤细胞的目的,即癌细胞抗药性得到逆转。     

反义NF-κBp65寡核苷酸对食管鳞癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响

目的:探讨反义NF-κB p65寡核苷酸对食管鳞癌细胞EC9706增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法:利用转染试剂KeyGenl介导将反义NF-κB p65寡核苷酸片段体外转染人人食管鳞癌EC9706细胞株.转染72 h后.应用RT-PCR、流式细胞术检测EC9706细胞中NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞增殖周期.以单纯转染试剂为阴性对照,未转染的EC9706细胞为空白对照.结果:转染72 h后,反义组EC9706细胞中NF-κB p65 mRNA的表达及蛋白标记率与阴性对照和空白对照组比较,下降明显.差异具有统计学意义(P<0.05);反义组EC9706细胞的增殖能力与阴性对照和空白对照组相比明显受抑,抑制率为15.0%;反义组EC9706凋亡细胞数较阴性对照、空白对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05);反义组G.期的EC9706细胞数较阴性对照、空白对照组升高,而S期细胞数较阴性对照、空白对照组降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论:特异性阻断NF-κB p65的转录.可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,参与细胞周期调控.NF-κB p65有望成为肿瘤基因治疗的靶点.