缺氧对神经细胞缺氧诱导因子—1αmRNA表达的影响

目的：提示在缺氧状态下神经细胞缺氧诱导因子－1α（HIF-1α）mRNA表达的时空规律。方法：对分离的新生SD大鼠在脑皮质神经细胞分别进行常规和缺氧培养,采用定量逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测神经细胞在不同缺氧时间HIF－1αmRNA的表达,结果：神经细胞在常氧下HIF－1αmRNA有极低的表达,在缺氧30min时表达显著上升,60min达到高峰,90min后逐渐下降。与对照组比较,各缺氧组HIF－1αmRNA的表达均有显著性差异（P＜0．01）。结论：神经细胞在缺氧早期HIF－1αmRNA表达有短暂、迅速的增加。     

缺氧诱导因子1表达抑制使缺氧-复氧的PC12细胞氧自由基生成增加

目的：研究：PC12细胞化学性缺氧-复氧以及缺氧诱导因子1α(HIF1α)反义寡核苷酸对HIF1α蛋白表达和氧自由基生成的影响。方法：制造化学缺氧-复氧模型，用含或不含氯化钴的DMEM培养液孵育PC12细胞。封闭HIF1α基因表达，用含HIF1α反义寡核苷酸和氯化钴的DMEM培养液孵育PC12细胞。HIF1α寡核苷酸进行同样处理和只用含氯化钴的DMEM培养液孵育PC12细胞作为对照。采用免疫细胞化学染色法检测HIF1α蛋白表达，并用激光共聚焦显微镜进行半定量。检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量，间接反映氧自由基的生成量。结果：与缺氧组相比，缺氧-复氧组复氧后HIF1α蛋白表达受到抑制，同时氧自由基生成增加。HIF1α反义寡核苷酸亦可抑制HIF1α蛋白表达和升高氧自由基水平。结论：抑制HIF1α的表达可导致氧自由基大量生成，加重缺氧-复氧PC12细胞的损伤。     

不同缺氧方法诱导BeWo细胞缺氧诱导因子1α表达的实验研究

【目的】探讨用于滋养细胞缺氧研究的缺氧方法及滋养细胞模型。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系,分4组培养:正常对照组、低氧浓度组、二氯化钴组和去铁敏组。培养4 8h后收集细胞,应用实时定量PCR方法,检测BeWo细胞HIF- 1αmRNA表达水平;应用Westernblot方法,检测BeWo细胞HIF -1α蛋白的表达水平。【结果】与正常对照组相比,低氧浓度组、二氯化钴组和去铁敏组的HIF- 1α蛋白和mRNA表达均明显升高;与低氧浓度组比较,二氯化钴组和去铁敏组HIF 1α蛋白和mRNA表达水平无明显差异。【结论】环境缺氧和细胞缺氧均可诱导BeWo细胞HIF 1α的表达,二氯化钴或去铁敏可以作为缺氧方法用于滋养细胞缺氧方面的研究,BeWo细胞也可作为一种细胞模型用于HIF -1α表达的研究。     

柴胡注射液对小鼠灌流肝脏缺氧复氧损伤的保护作用

采用小鼠离体肝灌流术在Krebs－Henseleit（K－H）灌流液中加入柴胡注射液，观察柴胡对肝缺氧（1h）复氧（1h）的影响。结果表明：柴胡组与缺氧组相比，光镜电镜下肝组织损伤较轻，且肝组织乳酸脱氢酶（LDH）漏出量显著减少，脏／体比、还原型谷胱甘肽（GSH）及黄嘌呤氧化酶（XOD）含量有显著性差异，丙二醇（MDA）生成延迟。揭示柴胡对小鼠离体灌流肝缺氧复氧损伤有明显拮抗作用，其机制与抑制氧自由基形成有关。     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的 :研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法 :新生 7日龄SD大鼠随机分为空白对照组 (n =12 )、假手术组 (n =12 )、缺氧缺血组 (HIBD组 ,n =15 )和缺氧预处理后缺氧缺血组 (HPC组 ,n =2 1) ,缺氧预处理组在行HIBD模型前 2 4h吸 8%浓度氧 3h。各组大鼠均于 14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化 ;采用末端脱氧核苷酸介导的X DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况 ;采用定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法测定大鼠脑组织HIF 1αmRNA的表达。结果 :HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻 ,HPC组大鼠脑组织HIF 1α基因的表达较HIBD组下降 ,HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论 :缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 ,减弱HIF 1αmRNA的表达 ,减少脑细胞凋亡     

聪圣胶囊对拟缺血再灌注大鼠原代培养皮层神经细胞的保护作用

目的：研究聪圣胶囊对大鼠原代培养皮层神经细胞拟缺血再灌注损伤的影响。方法：采用血清药理学和流式细胞仪的方法，观察聪圣胶囊含药血清对缺糖缺氧（3h）拟缺血再灌注（0，3，6，18h）损伤神经细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出及神经细胞凋亡率的影响。结果：聪圣胶囊含血清（2，4，8g/kg）可抑制缺糖-缺氧3h再灌（0，3，6和18h）引起的神经细胞内LDH的释放。降低缺糖-缺氧3h再灌18h导致的凋亡细胞率。结论：聪圣胶囊可减轻缺血性脑损伤。     

低氧诱导因子1α在肝癌细胞不同缺氧时间的表达情况及其与血管生成和细胞凋亡的关系

目的：为了探讨低氧诱导因子-α（Hypoxiainducible factor-α．HIF-h）在不同缺氧时间的肝癌细胞中的表达情况及其与血管生成和细胞I鼠亡的关系。方法；用氯化钴处理HepG2肝癌细胞模拟缺氧环境。用RT—PCR技术检测缺氧0．1，2,4．6，8h肝癌细胞中的HIF-1α,VEGF,bcl-2的表达。用western blot方法检测caspase-3蛋白的表达情况．。结果：细胞在氯化钴处理后4小时。HIF-1α．VEGF。bcl-2 mRNA达到高峰，随后下降；caspase-3蛋白的表达与前三者正好相反。结论：HIF-1a通过促进VEGF,bcl-2的表达。抑制caspase-3的表达，从而抑制肝癌细胞凋亡。且与缺氧程度有关。HIF-1α在肝癌的发生发展中发挥重要作用。     

GSH对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞中MDA、IL-1β和TNF-α的影响

目的：探讨还原型谷胱甘肽（GSH）对缺氧／复氧培养大鼠心肌细胞损伤后MDA、IL-1β和TNF-α的影响。方法：将原代培养的乳鼠心室肌细胞分为对照组、模型组和GSH组,GSH组缺氧、复氧前均给予160mg／L浓度GSH,缺氧2h,复氧1h。复氧1h后,用比色法检测丙二醛（MDA）含量,用RT-PCR法检测细胞内IL-1βmRNA和TNF-αmRNA水平。结果：与对照组相比,模型组MDA水平、IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达显著升高（P ＜ 0．01）。GSH预处理可以减轻MDA、IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的上调（P ＜ 0．01 vs 模型组）。MDA、IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达在各组间均呈正相关（P ＜ 0．05）。结论：在缺氧／复氧损伤的过程中,炎性细胞因子和氧自由基的作用相互联系,还原型谷胱甘肽能清除氧自由基,抑制IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的升高,从而保护缺氧／复氧损伤的心肌细胞。     

二氮嗪后处理对缺氧复氧成年大鼠心肌细胞保护作用的体外研究

目的研究线粒体ATP-敏感性钾通道（mitoKTP）开放剂二氮嗪（diazoxide,DZ）后处理对缺氧复氧成年大鼠心肌细胞的影响。方法体外培养原代成年大鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,随机分为5组：Normal组（在CO2培养箱中持续培养6h）;H／R组（缺氧3h复氧3h）;DZ组（缺氧3h复氧3h,在复氧5min时给予100mol／LDZ）;DZ＋5-羟葵酸盐（5-hydmxydecanoate,5-HD）组（缺氧3h复氧3h,在缺氧末给予100mol／L选择性mitoK。通道阻断剂5-HD,然后在复氧5min时给予100mol／LDZ）;5-HD组（缺氧3h复氧3h,在缺氧末给予100mol／L5-HD）。复氧3h末检测各组培养基中乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和丙二醛（MDA）含量,TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数、测定心肌细胞收缩幅度。结果与Normal组相比,其他4组培养基中LDH漏出量和MDA含量明显升高,心肌细胞凋亡指数也显著增高,心肌细胞收缩幅度降低（P〈0．05）;与H／R组比较,DZ后处理使培养基中LDH漏出量及MDA含量减少、心肌细胞凋亡指数降低,复氧后心肌细胞收缩幅度明显增高（P〈0．05）,但是缺氧末即刻给予5-HD可以逆转DZ的作用（P〈0．05）;5-HD组与H／R组相比各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Dz后处理可以通过开放mitoK。通道对缺氧复氧成年大鼠心肌细胞发挥保护作用。     

JNK介导的Bcl⁃2磷酸化调控神经细胞缺氧缺糖再复氧复糖所致的自噬性细胞死亡

目的：探讨自噬在神经细胞缺氧缺糖再复氧复糖损伤过程中的机制。方法：通过改良Takei和Endo的方法分离培养Sprague?Dawley大鼠皮层神经细胞并鉴定。培养至7 d后,将细胞随机分为4组,均培养细胞至0.5、2.0、6.0及12.0 h：①空白对照组;②实验组：即缺氧缺糖再复氧复糖组;③JNK抑制剂处理对照组：JNK特异性抑制剂SP600125处理神经细胞0.5 h;④JNK抑制剂预处理预处理+实验组：应用JNK特异性抑制剂SP600125预处理0.5 h后进行缺氧缺糖再复氧复糖。结果：噻唑蓝（MTT）结果示神经细胞的活性在实验组中随复氧复糖时间的延长而逐渐下降;JNK抑制剂预处理+实验组在12 h才出现明显降低（P < 0.05）。电镜结果表明：实验组在0.5 h及2.0 h时,神经细胞内可见大量自噬泡及自噬溶酶体形成,6 h时自噬泡数量短暂降低后,在12 h又可见新“自噬潮”和大量已排空的自噬泡;JNK抑制剂预处理+实验组中,自噬泡在0.5 h和2.0 h时大量形成,随后随着复氧复糖时间的延长而逐渐减少。实验组和JNK抑制剂预处理+实验组,LC3Ⅱ蛋白表达在6 h前无差异,均表现为先增高再降低;而实验组LC3Ⅱ蛋白表达量在12 h却再次增加,JNK抑制剂预处理+实验组则持续降低。实验组JNK、Bcl?2的磷酸化水平及Beclin?1的蛋白表达量均随着复氧复糖时间的延长而逐渐增加;而在JNK抑制剂预处理+实验组,仅在12 h时才增加（P < 0.05）。同时,Bcl?2/Beclin?1复合物在实验组呈逐渐分离的趋势,JNK抑制剂则明显抑制了这种分离。结论：JNK/ Bcl?2/ Beclin?1信号的调节可能是缺氧缺糖后复氧复糖诱导神经细胞自噬性细胞死亡的机制之一。     

缺氧诱导滋养细胞转化生长因子3β表达及机理的实验研究

【目的】探讨低氧对滋养细胞转化生长因子-3β(TGF- 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF -1)对TGF -3β表达的调控作用。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF- 1α反义组和HIF -1α正义组。HIF -1α反义组和HIF -1α正义组先加入HIF -1α寡核甘酸,常氧条件培养6h ,再低氧条件培养4 8h。4 8h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测TGF- 3β和HIF -1αmRNA表达水平,Westernblot方法检测TGF- 3β和HIF 1α蛋白表达水平。【结果】与正常对照组相比,缺氧组的HIF -1αmRNA和蛋白表达增加,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF- 1α正义组比较,HIF- 1α反义组HIF -1αmRNA和蛋白表达降低,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也下降。【结论】缺氧可以诱导滋养细胞TGF- 3β表达,并且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF 1调控。     

银杏叶提取物对缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bax基因表达的影响

为探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中 ,Bax基因的表达及银杏叶提取物 (EGB)对其的调节作用 ,用胎龄 1 6～ 1 7dWistar大鼠的大脑皮质神经细胞进行原代分离培养。采用原位末端标记法 (TUNEL)透射电镜技术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型 ,并应用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bax基因的表达。结果 :缺氧复氧可以使大鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡 ,随缺氧时间的延长 ,凋亡细胞数逐渐增多 ,至缺氧 8h ,复氧 1 8h达高峰 ,银杏叶提取物预保护可使凋亡细胞数减少 ;同时随着缺氧时间的延长 ,Bax基因表达逐渐增高 ,EGB可逆转缺氧复氧时Bax的表达。提示 :EGB对缺氧复氧时Bax的表达具有明显的抑制作用 ,这可能是EGB对抗缺氧复氧时胎鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡的机制之一。     

HIF-1α在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元necroptosis中的表达

目的 探讨低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）是否参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元necroptosis.方法 原代皮质神经元培养14天,予caspase抑制剂Z-VAD-FMK（20 μmol/L）预保护30 min,缺糖缺氧2 h,再灌注0、2、6、12、24、48 h,进行LDH测定;RT-PCR测HIF-1α RNA表达;Western blot检测总HIF-1α蛋白表达情况;分别提取细胞质和细胞核蛋白,Western blot分别检测胞质、胞核内HIF-1α蛋白表达情况.结果 caspase抑制剂Z-VAD-FMK预作用30 min、缺糖缺氧2 h、再灌注2 h后培养基中LDH增加（P＜0.05）,再灌注12 h达高峰;缺糖缺氧后HIF-1α RNA表达无变化（P＞0.05）;HIF-1α总蛋白表达增加（P＜0.05）,再灌注12 h达高峰;再灌注6 h时细胞质HIF-1α蛋白表达达高峰（P＜0.05）,随后降低;再灌注12 h时,细胞核HIF-1α蛋白表达达高峰（P＜0.05）,随后降低.结论 HIF-1α参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元necroptosis.     

低氧预处理对心脏成纤维细胞血红素氧化酶1基因表达的影响

目的：探讨离体培养的心脏成纤维细胞低氧预处理后血红紊氧化酶1（HO-1）mRNA的表达及其经时变化。方法：选用新生Wistar大鼠心脏进行成纤维细胞培养，给予低氧预处理（HPC）及低氧／复氧处理（H／R）。测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）浓度。自处理后心脏成纤维细胞提取总RNA并进行逆转录扩增合成cDNA。应用即时定量PCR对HO-1mRNA进行定量分析。结果：HPC后HPC组LDH浓度未见显著升高；经过H／R后，H／R组LDH浓度显著高于HPC组（P〈0．01）。HPC后HO-1mRNA表达迅速增加，30min时达到高峰，此后逐渐下降，24h基本恢复到基线水平。结论：新生大鼠心脏成纤维细胞低氧预处理可减少低氧／复氧对细胞的损伤，低氧预处理后HO-1mRNA被显著诱导，并在12h内维持较高水平，24h后基本恢复至基线水平。     

参麦注射液对小鼠大脑皮层神经细胞损伤的影响

目的　研究缺氧 /复氧对小鼠大脑皮层神经细胞的损伤及参麦注射液的保护作用。方法　取体外原代培养 6d的小鼠大脑皮层神经细胞 ,置于 95 %N2 和 5 %CO2 的缺氧罐中造成神经细胞不同时间的缺氧 /复氧。用神经细胞存活率及神经细胞线粒体活性来评价神经细胞活力 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)释放率作为评价损伤的指标 ,并进行形态学观察。结果　原代培养小鼠大脑皮层神经细胞缺氧 6h ,再给氧 1 8h后 ,神经细胞存活率及线粒体活性明显降低 (P均 <0 .0 1 ) ,LDH释放量显著增加 (P <0 .0 1 )。结论　参麦注射液可显著对抗缺氧 /复氧致小鼠大脑皮层神经细胞的损伤 ,浓度依赖性地抑制LDH释放量的增加 ,并能减轻细胞的形态学损伤。对大脑皮层神经细胞缺氧 /复氧性损伤具有保护作用     

缺氧对PC12细胞HIF-1／JAK2／NF—kB信号级联的影响

目的研究缺氧对PCI2细胞HIF-1／JAK2／NF-kB信号级联的影响。方法制备缺氧细胞模型,采用EMSA、半定量RT—PCR技术和Westernblot法检测JAK2、HIF-1α、HIF—1β基因mRNA和蛋白表达水平以及NF-kB活性。结果PC12细胞JAK2、HIF—1α、HIF—1βmRNA和蛋白在缺氧后表达增强,6h达到高峰,显著高于正常对照组;PC12细胞核内NF-kB活性在缺氧后6h达到高峰,12h下降。加入JAK2抑制剂AG490后缺氧6hNF—kB活性明显降低。结论缺氧能增强JAK2、HIF-1α、HIF-1β的表达。HIF-1能激活JAK2,对缺氧受损脑组织有保护作用。     

刺五加皂苷对化学诱导缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子-1α表达的影响及机制

目的探讨缺氧诱导因子（HIF）-1α在刺五加皂苷（ASS）对神经元缺氧保护中的作用及可能的调控机制。方法建立神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞分化和氯化钴诱导化学缺氧的神经元缺氧模型。采用Western blot和RT-PCR方法分别检测ASS对缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的基因转录、蛋白表达及ERK1/2磷酸化的影响。结果正常培养的PC12细胞几乎没有HIF-1α mRNA的转录和表达,氯化钴的处理可显著增加HIF-1α mRNA的转录和表达,ASS可进一步增加缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的转录和表达;ASS和NGF的预处理还可以增加磷酸化ERK1/2的表达。以上变化均有统计学意义（均P〈0.05）。ASS的上述作用与NGF作用的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论ASS对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞具有明显的保护作用,其作用可能与促进HIF-1α mRNA的转录和通过激活ERK1/2途径进而抑制HIF-1α降解从而增加其含量有关。     

人小肠上皮细胞缺氧复氧损伤的预防研究

应用原代培养人小肠上皮细胞（IEC），观察缺氧复氧（A／R）对体外培养人IEC的损伤作用。结果表明：A／R可使IEC细胞存活率下降和乳酸脱氨酶（LDH）漏出增加，二者呈显著的负相关，其变化程度与A／R时间有依从关系。在缺氧前或缺氧后复氧前联合应用超氧化物歧化酶和过氧化氢酶可减轻A／R诱发的细胞存活率下降和LDH漏出量增加，应用别嘌呤醇世有同样的保护作用。表明：人IEC在复氧时可产生超氧基并引起细胞损伤。     

缺氧诱导因子1α 在宫内缺氧缺血性脑损伤的胎鼠脑组织中的表达

 目的探讨宫内缺氧缺血性脑损伤后不同复氧时间胎鼠脑组织中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达规律。方法孕19 d Wistar大鼠36 只,随机分为对照组和8 个实验组,每组4 只。实验组建立宫内缺氧缺血性脑损伤动物模型后,分别于子宫恢复血供后0、0.5、2、4、8、12、24 及48 h 取胎鼠脑组织;对照组只暴露双侧子宫15 min 后,取胎鼠脑组织,应用免疫组织化学方法检测HIF鄄1琢蛋白的表达。结果实验组缺氧诱导因子1琢蛋白表达在术后8 h 明显升高,12 h 达到高峰,24 h 后明显下降。结论HIF鄄1琢在宫内缺氧缺血性脑损伤的胎鼠脑组织中的表达随着复氧时间的延长呈现先升高后降低的趋势。