筋膜软骨细胞修复关节软骨大面积缺损的实验研究

目的　探讨在筋膜上培养软骨细胞修复关节软骨大面积缺损的能力和生物特性。方法　将幼兔关节软骨消化、分离和传代后的软骨细胞在兔筋膜上培养 ,分别用培养后的新鲜、冻存筋膜软骨细胞和游离软骨细胞移植修复关节软骨大面积缺损。术后 6、12及 2 4周取材 ,通过大体标本、光学显微镜、扫描、透射电镜、放射自显影以及一氧化氮含量测定等方法进行观察。结果　分离后的关节软骨细胞在兔筋膜上生长代谢良好 ,冻存后的筋膜软骨细胞生物活性无损伤 ,移植后修复的关节软骨缺损在细胞形态、生物特性与正常关节软骨组织相同。结论　筋膜可以作为软骨细胞移植较为理想的载体 ,用其修复关节软骨大面积缺损是一种有效可行的方法。     

修复关节软骨大面积缺损的实验研究

目的 比较和评价筋膜软骨细胞和骨膜、关节软骨移植修复关节软骨大面积缺损的能力和生物特性。方法 用冻存和新鲜的异体筋膜上培养的软骨细胞、骨膜和关节软骨移植修复大面积关节软骨缺损,通过大体标本、光学显微镜、扫描和透射电镜、放射身显影、微量元素和柱层析氨基酸定量测定、一氧化氮含量测定等多种观察方法进行评价。结果 新鲜和冻存的筋膜软骨细胞移植在结构、形成新的软骨细胞能力、代谢活性方面均优于游离软骨细胞移植     

同种异体软骨移植修复关节软骨缺损实验研究

目的 采用兔膝关节软骨标本经打孔梯度降温冻存后行同种异体移植,研究打孔梯度降温冻存对兔关节软骨的影响及其修复关节软骨缺损的效果.方法 自16只2月龄新西兰白兔膝关节股骨髌面取分别取3块骨软骨移植物,随机分为3组.Ⅰ组为实验组,在软骨上以3 mm×3 mm矩阵打孔,Ⅱ、Ⅲ组为对照组,不打孔.分别将软骨标本置于二甲基亚砜冷冻保护溶液中,并经梯度降温至-80℃(Ⅰ、Ⅱ组)或直接置于-80℃(Ⅲ组)保存1周,复温后移植到成年兔相应膝关节部位.术后分批处死动物,通过对移植物的大体形态学、组织学、免疫组化染色光镜观察,研究各组移植物保存效果的差异.结果 Ⅰ、Ⅱ组光镜观察结果明显优于Ⅲ组;Ⅰ组与Ⅱ组结果差异不明显,但Ⅰ组对中间层软骨组织的保护明显加强.结论 关节软骨的梯度降温冷冻保存效果明显优于快速降温冷冻保存,且关节软骨打孔冷冻保存对深层软骨细胞有一定的保护作用,可提高软骨细胞存活率,延缓移植软骨组织的退变过程.     

细胞移植及软骨组织工程技术在关节软骨损伤临床应用进展

细胞移植和软骨组织工程技术是治疗关节软骨损伤的新方法,也是当今国内外关节骨科的研究热点。本文综述了国际上各种细胞移植和组织工程技术在关节软骨损伤临床的应用,包括软骨细胞移植技术、联合组织工程支架的软骨细胞移植技术和干细胞移植技术,着重介绍了各种技术的特点和临床应用现状及进展,以期为国内软骨损伤治疗技术选择提供思路。     

人脂肪组织体外冻存研究现状

自体脂肪移植对各种原因导致的软组织容量不足具有良好的效果,但移植脂肪最终的体积保持率难以预测,因此常需多次手术。脂肪组织冻存有望解决脂肪移植前需多次吸脂的问题。现通过总结脂肪组织冻存的损伤机制、目前常用的流程、冻存后效果的评估及临床应用,对目前研究中可能存在的不足进行分析,并对未来进行展望。     

冻存脂肪胶在面部自体脂肪移植中的应用

目的探讨冻存脂肪胶(stromal vascular fraction-gel,SVF-gel)技术在面部自体脂肪移植中的应用效果。方法自2018年12月至2020年1月,南方医科大学南方医院整形外科回顾了70例应用SVF-gel或补充短期或长期冻存SVF-gel进行面部自体脂肪移植的患者,其中17例行短期冻存SVF-gel填充,27例行长期冻存SVF-gel填充。结果 70例患者面部接受SVF-gel即刻填充手术(注射量30～55 ml)取得良好效果。短期冻存(1个月之内)与长期冻存(3～6个月)SVF-gel的补充注射都有效弥补即刻SVF-gel注射后的吸收,有效提高术后最终效果。结论冻存SVF-gel技术提供了一种简单、安全的方法,可进行多次填充,免去了患者二次脂肪抽吸术的痛苦,具有良好的临床应用前景。     

自体骨膜游离移植的实验研究--不同龄动物大块关节软骨缺损修复的比较

目的研究比较自体骨膜移植软骨再生修复不同龄动物大块关节软骨缺损。方法用52只不同龄家兔自体骨膜游离移植修复大块关节软骨缺损,比较移植骨膜生发层朝向关节腔与松质骨时再生软骨的差别。结果经不同时期肉眼和组织学检查证实,幼年兔和成年兔的骨膜移植都能生成软骨,修复大块关节软骨缺损。在成年兔骨膜再生的软骨与成年兔本身周围正常软骨的厚度、组织结构一样。移植骨膜生发层朝向关节腔与松质骨二者间再生软骨结果无明显差别。结论骨膜具有再生软骨的能力,可用来移植修复关节软骨的缺损。骨膜移植生发层不同朝向对软骨再生无明显影响。成年后骨膜移植修复关节软骨缺损能够生成与自身相适应的软骨。     

关节软骨和半月板组织碎块移植研究进展

关节软骨和半月板无血运区损伤后不能自然愈合,软骨组织碎块移植为之修复提供了新思路。体外和体内实验研究均证实,关节软骨及半月板无血运区切成碎块后细胞能有效地从碎块组织释放,与周围支架材料复合或直接导致组织修复。自体软骨植入系统（CAIS）及同种畀体幼年关节软骨碎块移植物（DeNovoNT）,已应用于,临床。该文就关节软骨及半月板组织碎块移植的基础研究及临床应用研究及其进展作一综述。     

关节软骨移植的实验与临床(文献综述)

关节软骨的再生能力有限,一经损害,修复困难。人工关节的应用使一些患者重新获得一个无痛的活动关节。但对于关节面部分缺损者,应用生物材料置换似乎更为合理。目前研究较多的是自体与异体关节软骨移植。目前大致有三种类型的关节移植:(1)吻合血管的异体半关节或全关节移植。据报道,此类移植尽管应用免疫抑制药,仍会由于免疫排斥而失败。(2)移植的关节(含大块     

超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞移植治疗大面积白癜风

目的:研究应用超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞的生物学活性及分析自体黑素细胞移植治疗大面积白癜风的疗效。方法:负压吸疱获取患者正常表皮片,Hu16培养基体外培养黑素细胞,应用超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞,检测黑素细胞的分裂时间(DOT)、黑素含量(M)、黑素制造量(MP)和树突数。受皮区应用超脉冲二氧化碳激光磨削去表皮后,以黑素细胞密度6～10×104个/cm2进行移植。所有患者均至少跟踪观察疗效6个月。结果:11例患者黑素细胞培养至第二代进行超低温液氮冷冻,15例患者黑素细胞培养至第三代进行冷冻,所有的26例患者冻存6、12和24个月复苏黑素细胞的生物学活性指标DOT、M、MP和树突数均与未冻存的细胞无明显差异。未冻存、冻存6、12和24个月的黑素细胞移植治疗的痊愈率为57.69%、61.54%、57.69%和53.85%,有效率为84.61%、88.46%、80.77%和80.77%。冻存6、12和24个月的黑素细胞移植的痊愈率和有效率与未冻存的黑素细胞移植的痊愈率和有效率均无显著性差异。结论:超低温液氮冷冻技术能很好的储存白癜风患者体外培养的黑素细胞,应用冻存复苏的黑素细胞自体移植治疗大面积白癜风皮损疗效确切。     

超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞移植治疗大面积白癜风

目的:研究应用超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞的生物学活性及分析自体黑素细胞移植治疗大面积白癜风的疗效。方法:负压吸疱获取患者正常表皮片,Hu16培养基体外培养黑素细胞,应用超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞,检测黑素细胞的分裂时间(DOT)、黑素含量(M)、黑素制造量(MP)和树突数。受皮区应用超脉冲二氧化碳激光磨削去表皮后,以黑素细胞密度6～10×104个/cm2进行移植。所有患者均至少跟踪观察疗效6个月。结果:11例患者黑素细胞培养至第二代进行超低温液氮冷冻,15例患者黑素细胞培养至第三代进行冷冻,所有的26例患者冻存6、12和24个月复苏黑素细胞的生物学活性指标DOT、M、MP和树突数均与未冻存的细胞无明显差异。未冻存、冻存6、12和24个月的黑素细胞移植治疗的痊愈率为57.69%、61.54%、57.69%和53.85%,有效率为84.61%、88.46%、80.77%和80.77%。冻存6、12和24个月的黑素细胞移植的痊愈率和有效率与未冻存的黑素细胞移植的痊愈率和有效率均无显著性差异。结论:超低温液氮冷冻技术能很好的储存白癜风患者体外培养的黑素细胞,应用冻存复苏的黑素细胞自体移植治疗大面积白癜风皮损疗效确切。     

筋膜蒂骨膜移植修复关节软骨缺损的实验研究

目的：应用筋膜蒂骨膜移植修复关节软骨缺损，观察骨膜在关节腔内再生关节软骨的情况，探讨骨膜再生软骨的机制。方法：用成年家兔２２只，在右侧膝关节造成胫骨关节面软骨缺损，行筋膜蒂骨膜移植；在左侧膝关节行游离骨膜移植，作为对照。观察方法包括形态学观察、Ｘ线和组织学检查。结果：实验组再生关节软骨的质与量均优于对照组。结论：筋膜蒂骨膜移植，由于有血液供应，能够再生关节软骨，修复关节软骨缺损。     

种子细胞库的建立及应用

目的 用细胞和生物材料体外培养、体内移植，修复骨及软骨的缺损。检测新药、新材料毒性实验，需要不同类型的种子细胞。为了防止细胞老化和污染，让实验具有科学性和可重复性，特别是软骨细胞培养，建立细胞库更有必要。方法 无菌取目的组织，用胶原配、胰蛋白酶加纱巾法原代培养，建立具有增殖能力强，无污染，长期冻存，复苏成功率高的细胞系。结果自建骨、骨膜、软骨、骨储、铺板软骨等20个细胞系。还收集了其他细胞系16个。为院内外35名研究生，98次复苏冻存细胞均获成功。结论 原代培养用酶消化加纱巾法分离成功率高。22次原代培养，20次成功建系。建立种子细胞库为科研教学提供了方便。既省时，又节约经费，具有良好的应用前景。     

种子细胞库的建立及应用

目的用细胞和生物材料体外培养、体内移植,修复骨及软骨的缺损.检测新药、新材料毒性实验,需要不同类型的种子细胞.为了防止细胞老化和污染,让实验具有科学性和可重复性,特别是软骨细胞培养,建立细胞库更有必要.方法无菌取目的组织,用胶原酶、胰蛋白酶加纱巾法原代培养,建立具有增殖能力强,无污染,长期冻存,复苏成功率高的细胞系.结果自建骨、骨膜、软骨、骨髓、骺板软骨等20个细胞系.还收集了其他细胞系16个.为院内外35名研究生,98次复苏冻存细胞均获成功.结论原代培养用酶消化加纱巾法分离成功率高.22次原代培养,20次成功建系.建立种子细胞库为科研教学提供了方便.既省时,又节约经费,具有良好的应用前景.     

同种异体指关节移植的基础研究与临床应用

目的 探讨同种异体关节移植在手外科应用的可行性,为该项技术的研究与应用提供相关的实验基础与临床经验.方法 参考国内外相关资料,结合我们在异体关节移植方面的基础与临床研究,就关节移植的免疫学、组织学、低温生物学、骨端的固定与骨愈合、关节软骨的保护与再生进行实验研究与临床探讨.结果 实验研究证实骨组织、骨膜组织、骨髓组织均有免疫原性,其中以骨髓组织为主.经低温冷冻处理后可以降低组织的免疫原性,移植后供体与自体骨可很好愈合.移植术后早期关节活动影响关节的营养与再生.在临床应用9例,中早期的结果是理性的,但一年以上的病例随访发现关节软骨发生退变,远期结果不甚理想.结论 实验研究与临床探索证实了在不用免疫抑制剂的情况下采用深低温冷冻处理异体关节移植,解决了关节骨移植免疫排斥的问题,骨端的可靠的内固定可以加速骨愈合并利于软骨的演变与再生,但随后软骨的退变与调控仍存在问题,需要进一步研究.     

关节软骨生物力学建模理论与试验方法研究进展

正关节软骨损伤后若不及时修复,继发的进行性、退行性改变最终会造成骨关节炎。临床上采取软骨移植、软骨细胞移植、微钻孔术、关节置换等手术治疗方法修复软骨组织~([1]),但这些方法存在一定程度的应用受限。组织工程支架置入修复软骨损伤具有良好的应用前景,但构建具有足够力学强度及各向异质性结构的工程化软骨仍是亟待解决的难题。对软骨组织的生物力学特性研究有助于探究关节软骨应力负荷下的力学行为,理解关节软骨宏观结构体的形态功能与力学参数关系,为软骨损伤修复提供力学理论支持。笔者就关节软骨生物     

关节软骨干/祖细胞治疗关节软骨缺损研究进展

关节软骨由于无血管、神经和淋巴管,损伤后自我修复能力极差。目前软骨损伤修复主要采用其他组织来源的间充质干细胞体外大量扩增或自体移植,然而体外扩增容易去分化,自体移植需要多次手术。理想的关节软骨修复要求新生软骨具有与原关节软骨相同的分层结构、生物特性及基质组分,并实现功能学恢复。激活内源性关节软骨干/祖细胞促进缺损部位自我修复或组织工程化软骨为软骨再生提供可能性。前期研究表明,关节软骨干/祖细胞在多个组织存在。该文对关节软骨干/祖细胞治疗关节软骨缺损研究进展作一综述。     

高压氧微重力培养提高冻存胰岛质量和移植效果的实验研究

目的 探讨胰岛冻存前后经高压氧细胞旋转培养系统(HORCCS)培养后移植入糖尿病大鼠能否提高胰岛移植的效果.方法 将分离纯化的大鼠胰岛分为:A.体外实验组:将各组大鼠胰岛经HORCCS培养或普通培养30 d,检测细胞内DNA和胰岛素含量,胰岛存活率,胰岛素分泌水平.B.胰岛移植实验组:将各组大鼠胰岛经HORCCS培养或普通培养7d,然后移植,观察移植受体血糖和胰岛素水平.电镜观察各胰岛移植实验组中培养7 d时的胰岛的超微结构改变.结果 经高压氧 RCCS培养14 d的胰岛存活率及胰岛素分泌水平高于普通培养组(P<0.05).移植了经HORCCS培养的胰岛后,受体血糖在移植后2周即恢复为正常值,并维持到移植后10周.全部受体维持正常血糖耐受曲线.电镜下可见经HORCCS培养后,冻存复苏胰岛表面形成微小的孔道.结论 胰岛冻存前后经高压氧RCCS培养后可以建立营养输送管道,不但有利于氧和营养物质的运输,更有利于胰岛内细胞的均匀一致的冻存,从而减少冻存对胰岛的损害,提高胰岛的分泌活性和成活率.     

微重力培养的新鲜和冻存胰岛联合移植治疗1型糖尿病

目的经微重力培养的新鲜和冻存胰岛联合移植提高1型糖尿病的治疗效果。方法将分离纯化的大鼠胰岛分为（1）体外实验组：实验组1．1：冻存的胰岛经微重力培养；实验组2．1：冻存的胰岛在普通培养基中培养；对照组1：新鲜大鼠胰岛经微重力培养。观察胰岛收获率和体外胰岛素分泌情况。（2）胰岛移植组：即将新鲜和冻存的胰岛经微重力或普通培养7d后分别移植入受体鼠体内，观察移植效果。结果经微重力培养的各组胰岛收获率、DNA含量和胰岛素含量高于普通组。普通培养组在培养后期胰岛素分泌明显下降，并且胰岛素刺激指数明显低于经微重力培养组（P〈0．05）。移植经过微重力培养的500 IEQ新鲜胰岛和1500 IEQ冻存胰岛在移植后1周内可达100％纠正糖尿病，全部受体维持正常血糖耐受曲线一直到观察结束。结论采用细胞内低温保存液（HTS）结合细胞冻存液（DMSO）对大鼠胰岛进行冻存前后经微重力培养可以明显提高胰岛冻存质量，是目前胰岛冻存的最佳选择。使经微重力培养的新鲜和冻存胰岛联合移植一次治愈糖尿病成为可能，并有效的节约了胰岛资源，提高了移植效果。     

关节软骨缺损修复方法及疗效

关节软骨缺损后自我修复能力很差,治疗方法如关节灌洗清理术、Pridie钻孔术、微骨折术、骨膜和软骨膜移植、骨软骨移植、细胞移植和组织工程化软骨修复等的疗效不一.骨软骨移植和细胞移植技术相对成熟且临床效果较好.组织工程化软骨修复是目前研究的热点且已逐步试用于临床,多重复合的仿生支架和携带细胞因子仍是研究重点,临床实际应用还有待观察.