哮喘CD4、CD8T细胞凋亡的变化

活化的Ｔ细胞通过分泌ＩＬ ３、ＩＬ ５、ＧＭ ＣＳＦ促进嗜酸性细胞(ＥＯＳ)的分化、活化、存活延长及气道内募集［１］,在哮喘气道炎症的发病中起重要的调控作用。本研究采用免疫细胞化学 (ＩＣＣ)Ｓ ＡＰ法与３＇末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记 (ＴＵＮＥＬ)双标染色 ,对哮喘豚鼠外周血ＣＤ４、ＣＤ８Ｔ细胞凋亡进行检测 ,观察哮喘Ｔ细胞亚群凋亡的变化。１材料与方法１．１主要试剂淋巴细胞分离液为上海试剂二厂产品。小鼠抗人ＣＤ４、ＣＤ８单克隆抗体及Ｔ淋巴细胞亚群检测试剂盒购自北京中山公司。卵蛋白 (ＯＡ)购自上海生化试…     

哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞Fas表达及药物的影响

目的：研究哮喘时嗜酸性粒细胞凋亡与Ｆａｓ表达的关系及药物地它们的影响。方法：应用地塞米松（ＤＭ）、雷公藤甲素及氨茶碱（ＡＭ）干预哮喘豚鼠,以ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡,以ＲＴ－ＰＣＲ及原位杂交检测ＦａｓｍＲＮＡ表达。结果：哮喘组Ｅｏｓ凋亡率较正常对照组显著降低。应用ＤＭ、ＴＰ、ＡＭ后均显著增加。正常豚鼠Ｅｏｓ可检测到ＦａｓｍＲＮＡ表达,不同Ｅｏｓ表达差异不显著。哮喘组ＦａｓｍＲＮＡ明显减少,以低密度     

雷公藤对哮喘豚鼠嗜酸性细胞凋亡及IL-5和GM-CSF mRNA表达的研究

目的：探讨雷公藤对哮喘豚鼠酸性细胞（Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ,Ｅｏｓ）凋亡及与白介素－５（ＩＬ－５）,粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ｍＲＮＡ表达的作用。方法：实验豚鼠分为哮喘组,雷公藤治疗组和下沉对照组,采用原位细胞凋亡（ＴＵＮＥＬ）和原位杂交技术分别检测豚鼠支气管肺泡灌洗涤中的Ｅｏｓ的凋亡率和肺组织ＩＬ－５,ＧＭ－ＣＳＦ ｍＲＮＡ的表达强度均显著高于处理和对照组,哮喘组ＢＡＬＦ中Ｅｏｓ     

雷公藤单体TZ93对人外周血单个核细胞表型的影响

研究雷公藤治疗系统性红斑狼疮的作用机制，以激活的正常外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）为细胞模型，应用 荧光激活细胞分类 仪（ＦＡＣＳ）分析以藤单体ＴＺ９３对ＰＢＭＣ细胞表型的影响。１０名正常女性的ＰＢＭＣ分成３组：Ｉ组ＰＢＭＣ，Ⅱ组ＰＢＭＣ＋ＰＨＡ，Ⅲ且ＰＢＭ＋ＰＨＡ＋ＴＺ９３，分别加入鼠抗入ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＮＫ抗体。结果：ＦＡＣＳ显示ＴＺ９３能显著抑制激活的ＰＢＭＣ中ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２     

抗CD3McAb诱导外周血单个核细胞活化增殖的观察

目的：观察抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖过程中的影响因素及抗ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）免疫学特性的变化。方法：采用ＭＴＴ法和苔盼蓝染色法，ＩＬ－２依赖细胞株（ＣＴＬＬ细胞）增殖实验、ＴＮＦ－α（双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法）试剂盒以及间接免疫荧光法检测ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性，ＩＬ－２，ＴＮＦ－α的产生及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ－２Ｒ等的表达。结果：     

哮喘患儿外周血淋巴细胞CD23分子表达和IgE水平相互关系探讨

目的：探讨哮喘患儿外周血淋巴细胞ＣＤ２３分子表达与ＩｇＥ水平相互关系。方法：用单克隆抗体结合ＡＰＡＡＰ桥联酶标技术和ＩＲＭＡ技术对６１例哮喘患儿外周血淋巴细胞ＣＤ２３分子表达和血清总ＩｇＥ水平进行研究测定。结果：哮喘组外周血单个核细胞和Ｂ细胞中ＣＤ２３＋细胞百分率明显高于正常对照组（Ｐ＜０．００１）；Ｂ细胞中ＣＤ２３＋细胞的比例高于外周血单个核细胞（Ｐ＜０．０１）；外源型哮喘与内源型相比，ＣＤ２３＋细胞百分率有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。哮喘组血清总ＩｇＥ水平明显高于对照组（Ｐ＜０．００１），以外源型哮喘升高为明显。哮喘患儿Ｂ细胞中ＣＤ２３＋细胞百分率与血清总ＩｇＥ水平之间显著正相关。结论：提示ＣＤ２３主要表达于活化的Ｂ细胞，并直接参与了ＩｇＥ介导的过敏性哮喘的发病。     

缓解期哮喘患者T细胞亚群变化与血清总IgE相关关系的研究

应用Ｔ淋巴细胞亚群单克隆抗体对缓解期内，外源性哮喘患者外周血Ｔ细胞亚群及血清总ＩｇＥ进行检测，结果提示：①缓解期哮喘患者外周血ＣＤ３±和ＣＤ４±细胞百分率与对照组相近，而ＣＤ８±细胞百分率低于对照组（Ｐ＜０．０１），ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值高于对照组（Ｐ＜０．０１）；②外源性哮喘组血清总ＩｇＥ含量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），并与ＣＤ８＋细胞百分率呈明显负相关（ｒ＝一０．７３３）。此结果说明缓解期哮喘患者存在着体内细胞免疫失衡，其可能与哮喘的发病机制有关。而外源性哮喘患者外周血ＩｇＥ增高可能与Ｔ细胞亚群的比例失衡有关。     

CD4分子对胸腺细胞发育的影响

本文应用小鼠体内注射抗Ｌ３Ｔ４ＭｃＡｂ封闭Ｔ细胞表现ＣＤ４分子，观察胸腺细胞数量及功能，结果显示：在一定抗Ｌ３Ｔ４ＭｃＡｂ剂量范围内，胸腺细胞总数与功能下降，胸腺双阳性细胞（ＤＰ），ＣＤ４单阳性细胞（ＣＤ４ＳＰ）数量下降，ＣＤ８单阳性细胞（ＣＤ８ＳＰ），数量增多。     

多发性硬化患者T淋巴细胞亚群的研究

采用间接免疫荧光染色加流式细胞术检测１８例多发性硬化（ＭＳ）活动期外周血及脑脊液中的Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８。结果表明，ＣＳＦ中ＣＤ４明显增高，ＣＤ８显著降低；ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８比值显著高于自身外周血，提示ＭＳ患者存在Ｔ细胞辅助免疫功能明显增强，免疫抑制功能明显缺陷。     

CD3 AK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤对患者免疫功能的影响

目的：探讨ＣＤ３ＡＫ细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的临床应用价值及对肿瘤患者免疫功能的影响。方法：利用桥联酶免疫法（ＡＰＡＡＰ法）和透射免疫浊度法对２８１例恶性肿瘤患者经ＣＤ３ＡＫ细胞悬液输注后进行外周血Ｔ细胞亚群和ＩｇＧ、ＩｇＭ及ＬｇＡ水平的检测和分析,并将各组治疗前、后的检测结果进行比较分析。结果：治疗后三组患者外周血中的ＣＤ３、ＣＤ４百分率、ＣＤ４／ＣＤ８比值及ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量较治疗前均     

模拟高原低压舱治疗对哮喘缓解期豚鼠血清皮质醇和CD4+T淋巴细胞的影响

目的探讨模拟高原缺氧条件治疗哮喘的机制,为临床应用模拟高原低压舱治疗儿童哮喘提供部分理论依据.方法采用10%卵蛋白(OA)致敏和5次1%OA诱发复制哮喘豚鼠动物模型,设立正常对照组、哮喘对照组和低压舱治疗组3组.利用模拟4 000m海拔高原条件的低压舱治疗干预,结束后3组均作血清皮质醇、支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)计数和低密度EOS(HEOS)百分率和外周血CD4 T淋巴细胞数量以及气道平滑肌张力的测定.结果 (1)正常对照组和低压舱治疗组的血清皮质醇含量均非常显著地高于哮喘对照组(P<0.01),且低压舱治疗组值与正常对照组无显著差异(P>0.05).(2)哮喘对照组和低压舱治疗组BALF中EOS绝对值及HEOS百分率均数均非常显著高于正常对照组,同时,低压舱治疗组非常显著低于哮喘对照组(P<0.01);(3)正常对照组和低压舱治疗组外周血CD4 T淋巴细胞数量明显低于哮喘对照组(P<0.01);(4)哮喘组气道平滑肌张力明显增高.结论低压舱治疗能使哮喘缓解期豚鼠血清皮质醇升高,抑制CD4 T淋巴细胞活化,从而使其BALF中EOS数和活化的EOS(HEOS)减少,降低气道平滑肌张力,有利于预防哮喘复发和减轻哮喘发作症状,在临床上有潜在的应用价值.     

平哮合剂对哮喘豚鼠气道T淋巴细胞凋亡的影响

目的 :通过动物实验观察平哮合剂的疗效并探讨其作用的分子机制。方法 :采用卵蛋白诱导的豚鼠哮喘模型以平哮合剂治疗 ,治疗 1周后 ,观察其对哮喘潜伏期的影响 ,并与氨茶碱治疗组进行比较。采用流式细胞仪分析豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中T淋巴细胞的凋亡率。结果 :平哮合剂能显著延长哮喘豚鼠的诱喘潜伏期 ,作用与氨茶碱相当 (P >0 0 5 )。哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞的凋亡率与正常组比较有显著性差异 (P <0 0 1 ) ,平哮合剂可显著提高哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞凋亡率。结论 :平哮合剂有明确的平喘作用 ,其途径之一可能是通过促进气道粘膜中淋巴细胞的凋亡而实现的。     

糖皮质激素对哮喘豚鼠气道T淋巴细胞凋亡的影响

摘要：目的探讨地塞米松减轻哮喘气道炎症的作用及其分子机制。方法采用卵白蛋白致敏法建立豚鼠哮喘模型，以定喘止咳片做药物对照，治疗1周后记录各组的诱喘潜伏期，并进行肺组织病理学检查，同时分离BALF液中T淋巴细胞采用流式细胞仪定量检测方法（FITC—AnnexinV／PI染色法）测定其凋亡率。结果地塞米松能显著延长哮喘豚鼠的诱喘潜伏期、减轻气道炎症、促进BALF中T淋巴细胞的凋亡，作用明显优于定喘止咳片（P〈O．05）。结论地塞米松有明确的抗炎平喘作用，促进气道T淋巴细胞凋亡可能为其主要的作用机制之一。     

CD3ε和5-氟尿嘧啶在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达

目的研究CD3ε分子与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法培养人T淋巴白血病细胞株JK,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体(200μg／ml)和／或5-FU(2．5μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率,并计算细胞死亡率;用瞬时转染野生型或突变型P53表达质粒的方法和Western印迹检测P53蛋白质的表达,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果在CD3ε和5-FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中,均伴随着P53蛋白质表达增加;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P53蛋白质表达显著增加;P53过表达可明显增加T淋巴细胞对5-FU的敏感性。结论抗CD3ε抗体和5-FU联合作用可显著提高P53蛋白质表达,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。     

孟鲁司特对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的作用及其机制

目的：观察孟鲁司特（MK）对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的影响并探讨其分子机制。方法：40只大鼠随机分为正常组、哮喘组、MK和地塞米松（DXM）组。采用卵蛋白（OVA）腹腔注射致敏并反复雾化吸入刺激建立大鼠哮喘模型，药物干预组管喂MK或腹腔注射DXM。采用双标记双染色的方法先标记CD4^ /CD8^ T淋巴细胞，然后用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，采用免疫组化的方法检测淋巴细胞Fas的表达。结果：哮喘大鼠外周血及肺组织中T淋巴细胞的凋亡率低于正常组大鼠，MK、DXM处理后，CD4^ /CD8^ T淋巴细胞凋亡率均明显升高，与哮喘组及正常组比较差异均具显著性（P＜0．01）。体外培养时MK呈剂量和时间依赖性促进OVA抗原刺激的外周血淋巴细胞Fas表达水平及凋亡，其中以CD4^ T淋巴细胞凋亡率和Fas表达的增加更为明显，与CD8^ T淋巴细胞比较差异具显著性（P＜0．05）。10^-6mol/L的MK可明显促进10^-4mol/L DXM对淋巴细胞凋亡的诱导作用。结论：MK可促进哮喘大鼠外周血及肺组织中CD4^ T淋巴细胞凋亡，该作用可能通过Fas途径介导。MK对DXM促淋巴细胞凋亡具有协同作用。     

吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症影响的研究

目的:研究吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症的影响,探讨肝素治疗哮喘的可能机制。方法:建立哮喘豚鼠模型,用肝素雾化吸入,观察支气管灌洗液(BALF)和支气管或细支气管壁的细胞成分变化。光镜和电镜下观察气道及肺组织病理变化。结果:肝素治疗组BALF中淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、上皮细胞较哮喘模型组有显著减少(P<0.01),在支气管或细支气管壁,肝素治疗组肥大细胞数显著高于哮喘模型组(P<0.01),嗜酸性粒细胞有显著下降(P<0.01),光镜和电镜下气道损伤减轻。结论:肝素可以抑制哮喘豚鼠气道炎症,减轻哮喘豚鼠气道炎症损伤。     

Influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells of asthmatic rats

Objective： To investigate the influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells（CD4^＋CD25^＋ Tr） of asthmatic rats, and elucidate the possible mechanism of Danshen Injection in treatment of asthma. Methods： 30 Wister rats were randomly divided into control group, asthma group and Danshen Injection treated group. Bronchoalveolar lavage fluids （BALF） were collected, and cytology studies were conducted. Lung tissues were obtained and pathologic analyses were done with hematoxylin and eosin stain （HE）. Flow cytometry was used to detect the CD4^＋CD25^＋ Tr ratio in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs）. Results： Total cell, the percentage of lymphocytes, neutrophils and eosinophils （Eos） in BALF of Danshen Injection-treated group were lower than that in asthma group （P〈0.05, P〈0.01）. Compared with asthma group, less infiltration of inflammatory cells in lung tissues was observed in Danshen Injection-treated group. CD4^＋CD25^＋ Tr of asthma group was lower than that of control and Danshen Injection treated group （P〈0.05）. Conclusion： Danshen Injection can suppress airway inflammation of asthmatic rats, probably by increasing the number of CD4^＋CD25^＋ Tr.     

雷公藤对致敏小鼠T细胞活化及其IL-5 mRNA表达的影响

目的　探讨致敏小鼠T淋巴细胞活化与IL 5mRNA表达间的关系及雷公藤内酯醇 (TP)的影响。方法　采用卵蛋白(OVA )致敏的方法建立模型 ;运用免疫细胞化学与原位杂交双染法 (ICC ISH)观察活化的T淋巴细胞 (CD2 5 )与IL 5mRNA表达的相关性及TP、地塞米松 (DM)的影响 ;同时就TP的作用与DM相比较。结果　致敏小鼠T淋巴细胞CD2 5与IL 5mRNA表达均显著高于正常对照组 (P <0 0 1)。CD2 5 IL 5mRNA双染结果显示 :CD2 5 + IL 5mRNA+ T淋巴细胞显著高于正常对照组 (P <0 0 1) ,CD2 5 - IL 5mRNA- T淋巴细胞显著低于正常对照组 (P <0 0 1) ,CD2 5 + IL 5mRNA- 及CD2 5 - IL 5mRNA+ T淋巴细胞与正常对照组间无显著差异(P >0 0 5 )。经TP、DM处理后 ,致敏小鼠T淋巴细胞CD2 5与IL 5mRNA表达均显著低于致敏组 (P <0 0 1)。CD2 5 IL 5mRNA双染结果显示 :CD2 5 + IL 5mRNA+ T淋巴细胞显著低于致敏组 (P <0 0 1) ,CD2 5 - IL 5mRNA- T淋巴细胞显著高于致敏组 (P <0 0 1) ,而CD2 5 + IL 5mRNA- 及CD2 5 - IL 5mRNA+ T淋巴细胞与致敏组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。TP组与DM组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　IL 5mRNA表达与T淋巴细胞活化关系密切。TP、DM抑制T淋巴细胞活化可能是其抑制IL 5产生的机制之     

异基因CD8+T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制

目的 研究异基因CD8+T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制.方法 磁珠分选正常人外周血CD8+T淋巴细胞,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)试剂盒检测异基因CD8+T淋巴细胞作用后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)凋亡率,RT-PCR检测蛋白酶激活受体1(PAR-1)mRNA表达,Western印迹检测内皮细胞PAR-1、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspage)-3表达.结果 HUVEC与HDMEC在基因和蛋白水平均有PAR-1表达.异基因CD8+T淋巴细胞作用24 h和48 h,HUVEC凋亡率分别为51.7%±4.1%和29.4%±3.3%,HDMEC凋亡率分别为28.9%±2.2%和15.2%±1.8%,均显著高于对照组(均P<0.01);SFLLRN(PAR-1激动剂)诱导两种内皮细胞凋亡的作用与异基因CD8+T淋巴细胞的差异无统计学意义(P>0.05).异基因CD8+T淋巴细胞作用后,HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达均高于对照组(均P<0.05),30 min时分别为对照组的9.8、6.3倍,Caspase-3裂解增加,峰值分别为对照组的5.1、4.3倍;SFLLRN作用后,HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达亦均高于对照组(均P<0.05),30 min时分别为对照组的9.8、6.3倍,Cagpase-3裂解增加,峰值分别为对照组的5.7、2.9倍.JNK磷酸化无明显变化.PAR-1抗体和p38MAPK抑制剂(SB203580)可显著降低异基因CD8+T淋巴细胞诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01).结论 异基因CD8+T淋巴细胞通过PAR-1途径引起细胞内p38MAPK激活、Cagpage-3裂解,从而诱导血管内皮细胞凋亡.     

内毒素肺损伤大鼠CD4+T细胞凋亡的变化及其作用探讨

目的观察外周血与支气管肺泡灌洗液(BALF)中CD4 T淋巴细胞凋亡变化,以进一步认识ALI的发生机理.方法静脉注射脂多糖制作大鼠内毒素肺损伤模型.分离、提纯外周血与BALF中 T淋巴细胞,抗大鼠CD4:FITC单克隆抗体标记后,通过流式细胞仪检测及荧光显微镜检查,观察外周血与BALF中CD4 T淋巴细胞凋亡变化.结果脂多糖(LPS)致伤后,外周血与BALF中CD4 T淋巴细胞进行性减少,与正常对照组比较差异非常显著,与该类细胞凋亡比例之间呈显著负相关关系,提示CD4 T细胞呈时间依赖性凋亡性减少.地塞米松(DEX)组与LPS组比较,CD4 T细胞比例及凋亡百分数无显著差异.结论 CD4 T细胞凋亡可能部分参与内毒素肺损伤的发生,DEX的治疗作用与CD4 T细胞凋亡可能无关.