新生大鼠窒息后肾组织Omi／HtrA2表达及Ucf-101干预效果

目的：探讨Omi／HtrA2在新生鼠窒息后肾组织的变化及Ucf-101的干预作用。方法：将72只7~10 d Wistar大鼠随机分为对照组、窒息组和Ucf-101组。窒息组和Ucf-101组大鼠制成常压窒息模型。在窒息30 min后复氧2、24、48 h时采用免疫组化法检测各组肾组织中Omi／HtrA2的表达。采用TUNEL法检测肾凋亡细胞的形态及数量变化。结果：窒息复氧后2 h Omi／HtrA2表达开始增强,于24 h达最高峰,随后有所下降。与窒息组相比,Ucf-101组各个时相点Omi／HtrA2的表达阳性率明显降低(P<0.01)。窒息复氧后2 h,肾组织开始出现肾小管上皮细胞凋亡,24 h凋亡细胞数达到高峰,而Ucf-101组各个时相点凋亡指数较窒息组均有明显减少。结论：新生大鼠窒息后肾组织Omi/HtrA2表达增强,参与肾损伤;Ucf-101可使Omi／HtrA2的表达下降,从而抑制肾小管上皮细胞凋亡。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：658-661］     

AT2受体诱导新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的 探讨AT_2受体在诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 通过取新生大鼠肾小管上皮细胞体外培养,传代后加入不同浓度AT_2受体兴奋剂CGP-42112A,在不同时间用流式细胞仪测定凋亡细胞比值,并结合TUNEL分析。结果CGP-42112A不同浓度加入细胞24h后,随着剂量的增大,凋亡细胞所占比值逐渐增加,与对照组比较均具有显著差异,P<0.001。10~(-5)M CGP-42112A作用于细胞,随着时间的延长,凋亡细胞所占比值逐渐增加,与对照组比较有显著差异,P<0.001。结论 AT_2受体可诱导新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡,凋亡细胞数与受体剂量正相关,与受体兴奋剂作用时间正相关。     

三七总皂苷对新生鼠窒息后脑细胞凋亡及凋亡蛋白Bax表达的影响

目的了解三七总皂苷(TPNS)对新生SD大鼠窒息后脑细胞凋亡及凋亡蛋白Bax表达的影响。方法出生7 d的SD大鼠88只,随机分为对照组(n=8),窒息+NS组(n=40),窒息+TPNS组(n=40)。将大鼠放入55 ml的磨口瓶中,瓶中放入5 g钠石灰,待新生鼠安静后,窒息+TPNS组及窒息+NS组塞紧瓶塞30 min,取出后复氧120 min,窒息后即刻分别腹腔注射TPNS 100 mg/kg、同等容积0.9%盐水,q 12 h重复腹腔注射,注射后放回母鼠身边继续喂养,分别于窒息后6 h、24 h、48 h、72 h、7 d处死;对照组放入55 ml的磨口瓶中30 min不塞瓶塞,取出后复氧120 min,放回母鼠身边继续喂养,6 h后全部处死。采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测脑细胞凋亡率,免疫组织化学法检测Bax蛋白的表达。结果窒息+NS组及窒息+TPNS组均可见凋亡细胞,明显高于对照组,窒息+NS组(除6 h外)凋亡细胞数明显高于窒息+TPNS组,差异均有统计学意义(P均<0.05);窒息+NS组及窒息+TPNS组Bax表达明显高于对照组,窒息+TPNS组Bax表达明显低于窒息+NS组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论细胞凋亡是窒息后脑损伤的主要表现形式,主要是通过凋亡蛋白Bax调节,TPNS可减少脑组织Bax的表达,减少凋亡细胞数目,对窒息所致的脑损伤有保护作用。     

新生儿窒息后血清诱导人肾小管细胞凋亡的作用

目的研究新生儿窒息后血清对人近曲肾小管上皮细胞(HK2)损伤的作用及其胞内信号传导机制。方法以人近曲肾小管上皮细胞(HK2)为研究对象,实验共分为对照组、窒息组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组。以20%血清浓度作为攻击浓度,采用流式细胞仪分别测定上述各组细胞的凋亡率。结果与对照组HK2细胞凋亡率[(13.3±1.70)%]相比,窒息组和PDTC干预组HK2细胞凋亡率[(46.73±3.68)%]和[(31.19±2.79)%]均增高,差异具有显著性意义(P均<0.001);与窒息组相比,PDTC干预组HK2细胞凋亡率降低,差异有显著性意义(P<0.001)。结论新生儿窒息后血清可诱导人HK2凋亡,其胞内信号机制涉及到NFκB活化。     

窒息对新生大鼠肾组织一氧化氮和一氧化氮合酶含量的影响

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)在窒息后肾损伤中的作用。方法Wistar新生大鼠48只,随机分为对照组、窒息后复氧2h组、24h组和48h组,制备常压窒息模型。窒息30min后在上述时间点处死动物,测定肾脏NOS和NO含量,并在光镜下对肾小管损伤程度进行评分。结果窒息复氧2h肾脏NOS和NO即显著升高,持续时间达24h,肾小管评分在窒息后24h和48h明显增高。结论NOS和NO在新生大鼠窒息后的肾损伤中起重要作用。     

黄芪注射液对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨黄芪注射液对新生儿窒息后血清攻击人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤模型的保护作用。方法以人HK-2为研究对象。实验共分为对照组、模型组和黄芪干预组。黄芪干预组设立5个质量浓度亚组，预处理24h。以200mL／L窒息血清作为攻击因素，观察不同质量浓度黄芪干预组间细胞形态学变化，LDH漏出率和细胞活力情况[四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）]。结果与对照组比较，模型组细胞形态发生改变，LDH漏出率增加、细胞活力降低，均具有显著性差异（Pa〈0．05）；与模型组比较，黄芪干预组细胞形态得到明显改善，LDH漏出率降低、细胞活力增加，均具有显著性差异（Pa〈0．05），5～40mg／L保护效应逐渐增加，40mg／L时保护效果最强，〉40mg／L时保护效应反而下降。结论黄芪注射液具有减轻窒息血清所致HK-2细胞损伤的作用。     

AT2受体诱导新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的探讨AT2受体在诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用.方法通过取新生大鼠肾小管上皮细胞体外培养,传代后加入不同浓度的AT2受体兴奋剂CGP-42112A,在不同时间用流式细胞仪测定凋亡细胞比值,并结合TUNEL分析.结果CGP-42112A不同浓度加入细胞24h后,随着剂量的增大,凋亡细胞所占比值逐渐增加,与对照组比较均具有显著差异,P＜0.001.10-5M CGP-42112A作用于细胞,随着时间的延长,凋亡细胞所占比值逐渐增加,与对照组比较有显著差异,P＜0.001.结论AT2受体可诱导新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡,凋亡细胞数与受体剂量正相关,与受体兴奋剂作用时间正相关.     

二氮嗪对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨二氮嗪对窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用.方法 以HK-2为研究对象,以200 mL/L新生儿窒息后血清作为攻击因素处理HK-2细胞.将HK-2细胞分为对照组、窒息组、二氮嗪组.对照组加入100 mL/L胎牛血清培养液;窒息组加入等量200 mL/L新生儿窒息后血清培养液;二氮嗪组将.二氮嗪加入等量200 mL/L新生儿窒息后血清培养液,使终浓度为100 μmol/L.倒置相差显微镜下观察HK-2细胞的形态学改变并照相,四甲基偶氮唑蓝比色法检测HK-2细胞活力,生物化学法检测细胞培养液LDH漏出率.结果 对照组细胞贴壁良好,呈铺路石样,为扁平的多角形,分裂相多,细胞排列紧密,连接成片,数量多.与对照组相比,窒息组细胞受损明显,形态改变,由典型的扁平多角形细胞变为不规则圆形或椭圆形,细胞间空隙加大,连接松散,细胞间可见较多细胞碎片;细胞活力下降,LDH漏出率增加(P<0.05).与窒息组相比,二氮嗪组细胞损伤状况明显得到改善,细胞生长状况明显好转,形态明显变好;细胞活力增加,LDH漏出率降低(P<0.05),但未恢复至对照组水平.结论 二氮嗪具有减轻窒息后血清诱导的HK-2损伤的作用.     

体外头孢曲松对人肾小管上皮细胞凋亡基因的影响

目的探讨头孢曲松对人肾小管上皮细胞凋亡基因的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞,以不同浓度头孢曲松刺激后,倒置显微镜观察人肾小管上皮细胞形态,荧光定量PCR法检测不同浓度头孢曲松作用下人肾小管上皮细胞中凋亡相关基因p53、bcl-2及c-Myc的相对表达量。结果以不同浓度的头孢曲松(0、20、40、80 mg/L)体外刺激人肾小管上皮细胞,光镜下细胞形态未见明显改变。p53、c-Myc和bcl-2三个基因相对表达量在不同浓度头孢曲松的组间差异有统计学意义(P均0.01)。与另外三组相比,80 mg/L组p53及c-Myc基因相对表达量升高,bcl-2基因相对表达量降低,差异有统计学意义(P均0.01);而0、20、40 mg/L三组间3个基因相对表达量的差异无统计学意义(P均0.05)。结论头孢曲松在较高血药浓度下导致人肾小管上皮细胞促凋亡基因的表达增加,抑制凋亡基因的表达降低,这可能是临床头孢曲松引起肾损伤的机制之一。     

促红细胞生成素对窒息新生大鼠心肌细胞凋亡及内质网应激相关蛋白的影响

目的：研究促红细胞生成素（EPO）对窒息新生大鼠心肌细胞凋亡及内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和C/EBP同源蛋白（CHOP）的影响。方法：120只新生7日龄Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组、窒息组和EPO组,每组40只。制备新生鼠常压窒息模型;EPO组于造模后立即给予rhEPO 500 U/mL（10 mL/kg）腹腔注射,其余两组接受同剂量的生理盐水。各组在造模完成后2 h、6 h、12 h、24 h和48 h分别取8只大鼠采集心脏血及心肌组织,测定血清心肌酶肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）水平,检测心肌细胞凋亡情况及心肌组织GRP78、CHOP蛋白的表达。结果：与假手术组和EPO组相比,窒息组各时间点血清心肌酶CK和LDH升高,凋亡细胞增多,GRP78、CHOP表达上调（P<0.01）;上述各指标在EPO组的表达水平亦高于假手术组（P<0.01）;窒息后24 h心肌组织CHOP蛋白与心肌细胞凋亡指数AI呈正相关（r=0.942,P<0.01）。结论：EPO可能通过调节内质网应激相关细胞因子GRP78、CHOP,减少心肌细胞凋亡从而发挥对新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的保护作用。     

发动相关蛋白在窒息新生儿血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤中的作用及重组人促红细胞生成素干预的影响

目的探讨发动相关蛋白1(Drp-1)在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤中的作用及重组人促红细胞生成素(rhEPO)干预的影响。方法将培养的HK-2细胞分为对照组、窒息组和rhEPO干预组,以新生儿重度窒息(Apgar评分<4分)后24 h血清(20%体积比)作为攻击因素。光镜下观察其线粒体形态变化,活细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,免疫组织化学检测其Drp-1表达,投射电子显微镜下观察其线粒体的形态变化。结果 1.HK-2细胞形态学变化:对照组及rhEPO干预组细胞生长良好,窒息组细胞发生凋亡相关改变。2.细胞活力变化:与对照组细胞活力(0.74±0.08)相比,窒息组细胞活力(0.41±0.06)明显降低,rhEPO干预组细胞活力(0.60±0.08)较窒息组好转,但未恢复至对照组水平(P<0.05)。3.免疫组织化学法测定Drp-1表达:与对照组(0.24±0.03)相比,窒息组细胞Drp-1表达(0.51±0.03)显著升高,rhEPO干预组(0.38±0.03)较窒息组降低,但未恢复至对照组水平(P<0.05)。4.线粒体形态变化:对照组和rhEPO干预组线粒体结构完整,可见线粒体嵴;窒息组线粒体嵴消失,膜肿胀,空泡变性。结论 rhEPO可减轻新生儿窒息后血清诱导的HK-2细胞凋亡,其机制可能是通过减少Drp-1的表达抑制线粒体的分裂而实现。     

尿酸上调肾小管上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶蛋白水平对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 观察不同水平尿酸对体外培养的肾小管上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)及活性氧簇(ROS)的影响,探讨尿酸损害肾小管上皮细胞的可能机制.方法 分离肾小管上皮细胞,将其分为对照组与尿酸干预组(尿酸干预组又分0.1、0.2、0.4、0.8 mmol·L<'1>4个亚组),每组重复6孔;紫外分光光度法测定肾小管上皮细胞内NADPH蛋白水平;光泽精化学发光法测定肾小管上皮细胞内超氧阴离子(O<,2>)生成量;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)与琼脂糖凝胶电泳法检测肾小管上皮细胞凋亡.结果 24 h后,0.1 mmol·L<'1>尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与O<,2>生成量较对照组仅轻微增高,0.2、0.4、0.8 mmol·L<'1>尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与O<,2>生成量均较对照组显著增高(P<,a><0.01).对照组细胞均未形成明显的DNA凋亡梯带,0.1、0.2、0.4、0.8 mmol·L<'-1>尿酸干预组均可见明显的DNA凋亡梯带,0.4、0.8 mmol·L<'-1>尿酸干预组DNA凋亡梯带较0.1、0.2 mmol·L<'-1>尿酸干预组更为明显.TUNEL结果显示:对照组,0.1、0.2、0.4、0.8 mmol·L<'-1>尿酸干预组的凋亡率分别为(17.5±1.0)‰、(72.4±12.4)‰、(136.8±13.4)‰、(328.7±32.6)‰、(427.2±51.5)‰,0.1、0.2、0.4、0.8 mmoi·L<'-1>尿酸干预组细胞凋亡率均明显高于对照组(P<,a><0.01),各尿酸干预组之间细胞凋亡率随着尿酸干预浓度的增高而增高;相关分析发现肾小管上皮细胞凋亡率与肾小管上皮细胞内NADPH酶蛋白水平及O<,2>生成量呈显著正相关(r=0.765、0.792,P<,a><0.01).结论 肾小管上皮细胞在持续高尿酸的作用下,可激活细胞内NADPH酶蛋白表达,释放O<,2>,启动氧化应激级联反应,使肾小管上皮细胞持续受损而导致肾小管上皮细胞凋亡增加.     

促红细胞生成素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织存活素表达及神经细胞凋亡的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠缺血侧脑组织存活素表达的影响及神经保护机制.方法 健康7日龄SD新生大鼠72只,随机分为假手术组(n=24)、对照组(n=24)及EPO治疗组(n=24).采用结扎左侧颈总动脉并吸入80 mL·L-1氧气2 h制作新生大鼠HIBD动物模型,造模后1 d、3 d、7 d和14 d取其脑组织标本,应用免疫组织化学法及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位末端标记法分别对存活素的表达和细胞凋亡指数(AI)进行检测.结果 与假手术组相比,对照组1 d、3 d、7 d和14 d缺血侧脑皮质存活素表达的吸光度值[(1.43±0.68) vs (0.13±0.03);(3.68±1.04) vs (1.69±0.19);(4.29±1.50) vs (0.36±0.05);(3.70±1.16) vs (0.98±0.26),Pa<0.01]及细胞AI值[(14.2±2.7)% vs (8.4±1.6)%;(16.5±3.5)% vs (1.4±1.1) %;(18.8±4.7)% vs (1.6±0.8)%;(8.2±3.1) % vs (2.2±1.7)%,Pa<0.01]均明显升高;与对照组相比,EPO治疗组1 d、3 d的存活素表达明显升高[( 3.38±1.30) vs (1.43±0.68);( 7.52±1.94) vs (3.68±1.04),Pa<0.05],细胞AI值1 d、3 d、7 d明显降低[( 9.8±2.1)% vs (14.2±2.7)%;( 9.6±2.9)% vs (16.5±3.5)%;(10.6±2.8)% vs (18.8±4.7)%,Pa<0.05].结论 EPO可通过促进抗凋亡因子存活素的表达而减少HIBD后的细胞凋亡,发挥其神经保护作用.     

早期干预对新生鼠脑神经生长相关蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨早期干预对正常新生大鼠神经生长相关蛋白(GAP-43)表达及细胞凋亡的影响。方法采用配对设计,30只正常新生鼠随机分为干预组与对照组,对干预组大鼠采用早期触摸14d,随后置于丰富环境14d的干预方式,对照组未予干预。通过免疫组织化学染色法和原位末端标记法(TUNEL染色)分别检测二组大鼠海马和额叶皮质GAP-43的表达情况和凋亡神经元数量。脑功能评估采用水迷宫测验。结果干预组大鼠额皮质和海马区神经元GAP-43免疫反应阳性反应较对照组显著增高(P<0.05),额皮质及海马区凋亡神经细胞中位数干预组(0;2.0个/HP)较对照组(1.0;6.5个/HP)明显减少(P<0.01)。水迷宫测试成绩干预[(5.71±1.73)次]明显优于对照组[(7.77±1.74)次](P<0.01)。结论促进GAP-43的表达和减少神经元凋亡,与早期干预促进脑发育与脑功能的机制有关。     

亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡和胱天蛋白酶-3活性的影响

目的探讨亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)活性的影响。方法7日龄SD大鼠分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤常温组(HIBD组)和缺氧缺血性脑损伤亚低温处理组(亚低温组)。HIBD组行左颈总动脉结扎后.吸入氧氮混合气持续2h;亚低温组将HIBD新生鼠维持于31-32℃亚低温8h。用TUNEL法和荧光四肽底物(ACDEVDAMC)法分别检测假手术组、HIBD组和亚低温组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平。结果与HIBD组比较,亚低温组和假手术组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平显著降低。结论亚低温可减弱新生鼠HIBDCaspase-3活性.抑制神经细胞的凋亡。     

新生儿窒息后血清在诱导人肾小管细胞损伤中的作用

目的研究窒息新生儿血清在诱导人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤中的作用。方法以HK-2为研究对象，实验分为15组：新生儿窒息后d1，d3，d7不同体积分数（2．5％，5.0％，10.0％、20．0％）血清处理HK-2细胞组，每个体数分数组均有相应的空白对照组。倒置相差显微镜下观察HK-2细胞的形态学变化，四唑盐（MTT）比色法检测HK-2细胞活力，生物化学法检测培养液中LDH漏出率。结果实验组细胞受损明显，形态改变，活细胞数量较空白对照组明显降低（P均〈0.05）；10.0％，20．0％血清组LDH漏出率较空白对照组明显升高（P均〈0.05），且以窒息后d1 20．0％组最为明显，差异具有显著性（P均〈0．05）。结论新生儿窒息后不同时间血清可诱导HK-2细胞损伤，以窒息后d1损伤最明显。此细胞模型的建立为进一步研究新生儿窒息后肾损伤的发病机制和防治提供实验基础。     

宫内感染和窒息联合作用对胎鼠脑损伤及细胞凋亡和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的了解宫内感染和窒息联合作用对胎鼠脑损伤、细胞凋亡程度和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达影响。方法妊娠18 d SD孕鼠随机分为4组:1.NS 假手术组;2.宫内感染组;3.宫内窒息组;4.宫内感染 宫内窒息组。于不同处理后72 h取胎鼠脑组织,分别进行HE染色、TUNEL和GFAP免疫组织化学镜检。结果宫内感染 窒息组较单纯宫内感染组或宫内窒息组细胞水肿程度、组织紊乱程度重。TUNEL和GFAP染色结果提示阳性细胞数在宫内感染 窒息组>宫内感染组、宫内窒息组>NS 假手术组,前3组与NS 假术组比较均有统计学差异(P=0),宫内感染 窒息组与单纯宫内感染组、宫内窒息组比较均有统计学差异(P=0)。结论宫内感染和窒息均可导致胎鼠脑损伤,宫内感染和窒息同时存在时能加重两者分别单独作用时的脑损伤程度,使凋亡和GFAP阳性细胞数目增加。