蒙花苷对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症损伤的影响

目的:在体外细胞水平上模拟血管内皮炎症损伤,探讨蒙花苷对血管内皮细胞炎症损伤的保护作用及其机制。方法:采用脂多糖(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(EA.hy926),加入不同浓度的蒙花苷处理,DAPI染色法测定EA.hy926与单核细胞(THP-1)的黏附能力,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1(IL-1)水平,Western blot法检测细胞中p38、JNK、ERK1/2、p-p38、p-JNK、p-ERK1/2、核因子-κB(NF-κB)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白表达。结果:蒙花苷(5、10、20mol/L)可显著抑制LPS诱导的EA.hy926与THP-1的细胞间黏附作用,减少EA.hy926分泌的炎性因子TNF-α和IL-1水平,降低细胞中JNK、ERK1/2、p-p38、p-JNK、p-ERK1/2、NF-κB和ICAM-1的蛋白表达。结论:蒙花苷可通过抑制NF-κB及其相关信号通路的活化来减少炎性黏附和炎性因子分泌,从而缓解LPS引起的血管内皮细胞炎症损伤。     

玉女煎对脂多糖诱导的BV2细胞炎性损伤的保护作用及机制研究

目的:研究玉女煎对脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法:利用LPS诱导BV2细胞炎性损伤模型,玉女煎处理细胞24 h,MTT法检测细胞凋亡,Griess法检测NO分泌,ELISA法检测IL-1β、IL-6及TNF-α分泌水平,Real-time PCR和Western blot分别检测iNOS和COX-2 mRNA及蛋白表达的变化。结果:与空白对照组相比,LPS刺激能显著降低BV2细胞存活率,诱导NO、IL-1β、IL-6及TNF-α的分泌,增加iNOS、COX-2 mRNA及蛋白的表达,促进NF-κB p65由细胞质进入细胞核。与LPS组相比,1、2 mg/mL玉女煎预处理BV2后,细胞存活率显著升高,NO、IL-1β及TNF-α分泌量显著下降;0.1、1、2 mg/mL玉女煎预处理可显著降低IL-6分泌、抑制iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达;2 mg/mL玉女煎预处理能明显抑制NF-κB p65由细胞质进入细胞核。结论:玉女煎可能通过抑制NF-κB活性,进而抑制炎症因子分泌及相关酶表达从而发挥抗LPS诱导的BV2细胞炎症作用。     

小钻木脂素类化合物戈米辛R的体外抗炎机制研究

目的 通过脂多糖(LPS)诱导活化小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7建立炎症模型,探讨小钻木脂素类化合物戈米辛R对炎症细胞增殖及炎症因子分泌的影响,评价其抗炎活性及机制。方法 采用MTT比色法检测经LPS诱导的RAW264.7细胞存活率并计算半数抑制浓度(IC₅₀);采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子含量;利用RT-PCR法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IκB-α、NF-κB p65的mRNA表达量;Western blot法检测细胞IκB-α及NF-κB p65蛋白表达量。结果 与LPS模型组比较,戈米辛R可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖;降低细胞分泌TNF-α、IL-1β及IL-6的含量;升高LPS所致降低的IκB-α mRNA的表达量同时降低LPS引起升高的TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA表达量;升高IκB-α并降低NF-κB p65的蛋白表达量,显示出良好的剂量依赖性,具有统计学差异(P<0.05)。结论 戈米辛R可通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA和NF-κB p65蛋白的表达,增加IκB-α mRNA和IκB-α蛋白的表达,减少致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的释放,从而发挥显著抗炎活性。     

基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖诱导脊髓星形胶质细胞凋亡的影响

目的:基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖(LPS)诱导的脊髓星形胶质细胞凋亡的影响。方法:从SD乳鼠脊髓中分离星形胶质细胞并鉴定。CCK-8法检测不同浓度八桂止痛散(2.5、5、10、20、40、80 mg/ml)对细胞存活的影响;随后分别设置对照组、LPS组、LPS+药物-L组、LPS+药物-M组、LPS+药物-H组、LPS+药物-H+Anisomycin组。CCK-8法、流式细胞术检测细胞存活、凋亡;ELISA法检测细胞中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测细胞中JNK、p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平;Western blot检测JNK/p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-κB p65 mRNA表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加...     

藿朴夏苓汤对HBZY-1细胞及DN大鼠NF-κB炎症通路的影响北大核心CSCD

目的研究藿朴夏苓汤(HPXLT)对体内外核转录因子-κB(NF-κB)炎症通路的影响,探讨HPXLT对糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法体外研究:采用脂多糖(LPS)刺激大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)及Hep G2细胞,观察HPXLT对细胞炎症因子包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量及p-p65蛋白表达的影响,以免疫荧光法观察Hep G2细胞的NF-кB p65转核作用。体内研究:采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg·kg^(-1))方法制备DN大鼠模型。将大鼠随机分为对照组,模型组,HPXLT高、中、低剂量组(2,1,0.5 g·kg^(-1))和格列本脲组(5 mg·kg^(-1)),连续灌胃给药6周。采用ELISA法测定细胞上清液或大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的水平;Western Blot法测定HBZY-1细胞或大鼠肾脏p65、p-p65、TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平。结果体外结果:与对照组比较,LPS组的p-p65蛋白表达显著增强,炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著升高(P<0.01);与LPS组比较,HPXLT各剂量组的p-p65蛋白表达水平显著下调,炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著降低(P<0.05,P<0.01);免疫荧光显示LPS诱导的炎症能促进NF-кB p65的转核,而HPXLT可显著抑制NF-кB p65转核作用。体内结果:与对照组比较,模型组大鼠血清的TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平及肾脏的IL-1β、TNF-α、p-p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清的TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子水平均显著降低(P<0.05,P<0.01),HPXLT高、中剂量组的IL-1β、TNF-α及p-p65蛋白表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01),各组之间的总NF-кB p65蛋白表达水平无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HPXLT可能通过抑制NF-κB炎症通路的表达,从而降低DN肾脏的炎症。     

藿朴夏苓汤对HBZY-1细胞及DN大鼠NF-κB炎症通路的影响

目的研究藿朴夏苓汤(HPXLT)对体内外核转录因子-κB(NF-κB)炎症通路的影响,探讨HPXLT对糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法体外研究:采用脂多糖(LPS)刺激大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)及Hep G2细胞,观察HPXLT对细胞炎症因子包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量及p-p65蛋白表达的影响,以免疫荧光法观察Hep G2细胞的NF-кB p65转核作用。体内研究:采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg·kg~(-1))方法制备DN大鼠模型。将大鼠随机分为对照组,模型组,HPXLT高、中、低剂量组(2,1,0.5 g·kg~(-1))和格列本脲组(5 mg·kg~(-1)),连续灌胃给药6周。采用ELISA法测定细胞上清液或大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的水平;Western Blot法测定HBZY-1细胞或大鼠肾脏p65、p-p65、TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平。结果体外结果:与对照组比较,LPS组的p-p65蛋白表达显著增强,炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著升高(P0.01);与LPS组比较,HPXLT各剂量组的p-p65蛋白表达水平显著下调,炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著降低(P0.05,P0.01);免疫荧光显示LPS诱导的炎症能促进NF-кB p65的转核,而HPXLT可显著抑制NF-кB p65转核作用。体内结果:与对照组比较,模型组大鼠血清的TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平及肾脏的IL-1β、TNF-α、p-p65蛋白表达水平均显著升高(P0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清的TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子水平均显著降低(P0.05,P0.01),HPXLT高、中剂量组的IL-1β、TNF-α及p-p65蛋白表达水平均明显下调(P0.05,P0.01),各组之间的总NF-кB p65蛋白表达水平无明显改变,差异无统计学意义(P0.05)。结论 HPXLT可能通过抑制NF-κB炎症通路的表达,从而降低DN肾脏的炎症。     

越鞠甘麦大枣汤对LPS诱导的BV2细胞损伤的保护作用机制研究

目的研究越鞠甘麦大枣汤(YG)对脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞损伤的保护作用。方法用LPS溶液建立BV2细胞损伤模型,制备YG无菌溶液,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞成活率,ELISA法测定各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-10(IL-10)的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定各组细胞内核因子-κB(NF-κB)p65,蛋白激酶B(AKT),磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果模型组细胞成活率下降,细胞外液中TNF-α,IL-1β的含量上升,而IL-10的含量没有显著变化;细胞内AKT,p-AKT,NF-κB(p65)蛋白表达水平提高;YG能提高LPS模型条件下的细胞成活率,使细胞外液中TNF-α,IL-1β,IL-10的含量均下降,细胞内AKT,p-AKT,NF-κB(p65)蛋白表达水平下降。结论 YG对LPS诱导的BV2细胞损伤具有保护作用。     

汉黄芩素对流感病毒感染肺泡巨噬细胞NF-κB核转位及表达的影响及机制

目的:探讨汉黄芩素对流感病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞( NR8383)中核转录因子-κB(NF-κB)核转位、表达的影响及与Toll样受体7(TLR7)介导的髓样分化因子88( MyD88)依赖性信号通路的关系.方法:流感病毒感染NR8383细胞1h后,加入含汉黄芩素的培养基(终质量浓度0.016 g · L-1),药物作用后6,12,24 h,RT-PCR检测TLR7,MyD88,NF-kB p65mRNA水平;4,6,24 h时,免疫组化法检测NF-κB p65核转位情况,并做半定量分析;24 h时,Western blot检测NF-κB p65表达水平.结果:汉黄芩素降低了流感病毒感染NR8383细胞后TLR7,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05),抑制了流感病毒感染后NF-κB p65的核转位及表达(P＜0.01).结论:汉黄芩素通过抑制TLR7介导的MyD88依赖性信号通路,抑制了NF-κB p65的核转位及表达,从而减轻流感感染中的炎症反应.     

大黄素对脂多糖诱导后巨噬细胞释放炎症因子的影响

目的:研究大黄素对脂多糖(Lipopolysacchride,LPS)诱导后巨噬细胞RAW264.7释放炎症因子的影响及其分子机制。方法:将细胞分为6组,空白组,LPS组和不同浓度(1μM,5μM,10μM,25μM)大黄素+LPS组,不同浓度的大黄素预处理细胞2 h后,再加入1μg/m L LPS刺激细胞,用ELISA法检测细胞上清液中的TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白水平,用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达,用Western-Blot检测核转录因子(NF-κB p65)的磷酸化。结果:LPS刺激后RAW264.7巨噬细胞炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的表达和分泌明显高于空白组,而给予大黄素的LPS组表达和分泌上述细胞因子明显降低,且呈剂量依赖性。LPS刺激后的细胞NF-κB p65磷酸化明显增强,而大黄素则能抑制NF-κB p65的磷酸化,且呈剂量依赖性。结论:大黄素能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子,降低mRNA的表达,其作用机制主要通过抑制NF-κB p65磷酸化的信号通路。     

基于TLR4/NF-κB通路探讨石斛多糖改善CSE诱导的人支气管上皮细胞炎性损伤

目的：探讨石斛多糖对香烟烟雾提取物(CSE)损伤的人支气管上皮细胞(16HBE)的炎症因子分泌及TLR4/NF-κB通路活性的影响。方法：体外培养16HBE细胞，设置空白组、CSE损伤组、CSE+石斛多糖组(100、200、400 mg·L^-1),CCK-8法检测细胞活力，显微镜观察细胞状态，酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-8、IL-1β、IL-4、IL-13、转化生长因子(TGF)-β含量，实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)及IL-4 mRNA的相对表达量，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测白细胞介素-4受体(IL-4R)、TLR4、髓系分化初级反应蛋白88(MyD88)、NF-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)及核蛋白NF-κB(NEs-NF-κB)蛋白相对表达量，免疫荧光法检测NF-κB核转位水平。结果：与空白组比较，CSE损伤组细胞存活率降低，细胞皱缩，细胞培养上清中IL-8、IL-1β、IL-4、IL-13、TGF...