霍山石斛最佳采收期研究

 目的：探索霍山石斛采收期的选优方法，确定其最佳采收期。方法：按不同治疗目的，对各种化学成分及生物量采用加权累加及指数相乘和累加平均的数学方法，对霍山石斛不同生长期的产量、质量及功效进行综合评价。结果：算得霍山石斛1年～4年茎的综合采收指数分别为3.65，4.73，5.43，4.90。结论：若兼顾不同的治疗目的和产量因素，霍山石斛的采收期以第3年秋季最佳。     

霍山石斛的研究进展

检索近50年来国内外有关霍山石斛的研究文献,并进行整理、分析、归纳.对霍山石斛的药用资源、活性及其成分的研究进展作一综述,为霍山石斛资源的可持续开发利用提供参考.霍山石斛多糖具有显著的提高机体免疫和抗白内障活性,但其野生资源濒危,人工抚育尚不成熟,药理活性的物质基础尚不清楚.如何实现霍山石斛资源的可持续发展,并阐明霍山石斛药理活性的物质基础应是今后研究的重点.     

霍山石斛商品质量研究现状和发展趋势

霍山石斛生长缓慢,药用价值较高,为珍稀名贵的石斛品种,深受消费者青睐。本文从本草考证、原植物考证、采收加工、化学成分和药理活性、质量标准等方面对霍山石斛进行了详细综述,对霍山石斛的研究和应用均具有重要意义。     

霍山三种石斛茎中抗氧化酶等活性物质的测定

 目的：测定霍山石斛茎中抗氧化酶等活性物质，探讨其合理的采收标准。方法：采用751GW紫外-可见分光光度计测定霍山三种石斛茎中SOD,CAT,POD酶活性;可溶性蛋白质含量及MDA的含量。结果：霍山石斛三年茎SOD,CAT,POD酶活性及可溶性蛋白质含量最高，抗氧化能力强；而铁皮石斛、铜皮石斛二年茎抗氧化能力最强，三年茎已衰老。结论：霍山石斛可采用“存三去四”的采收标准；而铁皮石斛、铜皮石斛则采用“存二去三”的采收标准。     

霍山石斛组织快繁中不同发育阶段多糖理化性质和免疫活性的比较研究

目的:从不同发育阶段的霍山石斛组织培养物中提取分离多糖,比较多糖的理化性质和免疫活性。方法:采用水提醇沉法提取多糖,阴离子交换层析法分离多糖,分光光度法、GC-MS、IR、荧光电泳分析多糖的理化性质,ELISA法测定多糖的免疫活性。结果:霍山石斛不同发育阶段培养物中多糖含量无显著差异,经阴离子交换层析均得到5种多糖组分,且都是由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成,IR和荧光电泳分析显示它们的化学结构特性无显著变化;体外实验表明,霍山石斛不同发育阶段培养物多糖具有相似的促进小鼠脾细胞产生IFN-γ和TNF-α的作用。结论:组织快繁中霍山石斛不同发育阶段培养物中多糖的理化性质和免疫活性无显著差异,表现出一定的稳定性。     

霍山石斛的本草考证

产于安徽省霍山县的霍山石斛,曾被错误地定名为铁皮石斛Dendrobium officinale和黄花石斛D.toseanse,其正确的种名应是1984年我国学者厘定的Dendrobium huoshanense Tang et Cheng。本种分布区狭,目前已濒临灭绝,而市场出售的几乎都是同属的其它植物。建议将霍山石斛列为保护对象,并开展栽培及繁殖研究。     

霍山石斛与铁皮石斛对比研究进展

本文主要通过整理分析霍山石斛和铁皮石斛的相关文献,基于鉴别、含量测定、指纹图谱、药理作用、综合开发利用等研究进展,概括霍山石斛和铁皮石斛研究的异同,为霍山石斛进一步开发研究提供参考。     

Box-Behnken法优化提取霍山石斛活性多糖的研究

目的:为获得较高的多糖提取率,本文探讨了霍山石斛多糖的提取工艺及多糖脱色方法。方法:研究了多糖提取过程中影响浸提的几个因素。包括提取温度、提取时间、料液比、提取次数和提取pH,并通过Box-Behnken法优化了工艺条件,建立了工艺模型。结果:当提取温度为69.4℃,pH值为5.9,料液比为1∶20,提取次数为2次,提取时间为1.57 h时,霍山石斛多糖提取率最高,达到0.1821 g/g。DEAE-52脱色法效果较佳,色素脱除率达到65.47%。结论:采用Box-Behnken法建立的多糖提取工艺模型能很好地预测实验结果,偏差1.6%。通过模型方程求得最佳工艺条件,多糖提取率高,脱色效果好。     

霍山石斛活性成分对肝脏疾病作用及其机制研究进展

霍山石斛Dendrobium huoshanense是我国的珍贵中药材,大量药理实验阐明霍山石斛在治疗肝脏疾病方面有显著疗效,从调节抗氧化水平、抑制炎症、抑制转化生长因子-β1和I、III胶原蛋白合成、减少肝脏脂质沉积等方面对肝脏疾病产生治疗作用。对霍山石斛化学成分和霍山石斛活性成分治疗肝脏疾病,如酒精性肝损伤、非酒精性肝损伤、化学性肝损伤、药物性肝损伤、肝纤维化的药理作用及其机制进行综述,为霍山石斛的资源利用和肝脏疾病的新药开发提供一定的理论基础。     

霍山石斛的资源及生物学特性

初步考察了安徽特产的珍稀中药霍山石斛Dendrobium huoshanense Tang et Cheng资源及生物学特性,了解到霍山石斛野生资源已濒临枯竭,并发现共生根菌是霍山石斛的营养生长和种子繁殖的重要因素。     

铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0. 02 mol·L~(-1)乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);检测波长250 nm;流速1. 0 mL·min~(-1);柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0. 4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290 nm;流速0. 8 mL·min~(-1);柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0. 15~3. 0,0. 075~2. 25μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率分别为99. 01%(RSD 2. 1%),101. 69%(RSD 2. 0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12. 75%~36. 40%,2. 93%~18. 39%,19. 23%~54. 58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14. 33%~29. 47%,6. 64%~15. 20%,25. 73%~44. 37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0. 020 8~0. 832 0μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率为101. 96%(RSD 1. 8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0. 053 2~0. 122 4 mg·g~(-1)(均值为0. 081 0 mg·g~(-1)),0. 040 3~0. 090 0 mg·g~(-1)(均值为0. 068 3 mg·g~(-1)),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0. 02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。     

霍山石斛内生真菌Fusarium lactis次生代谢产物研究

目的研究霍山石斛内生真菌Fusarium lactis的次生代谢产物。方法利用硅胶、Sephadex LH-20、反相、中压、高效液相制备等多种色谱法分离纯化,根据波谱方法对化合物进行结构鉴定。结果从霍山石斛内生真菌Fusarium lactis中分离得到21个化合物,分别鉴定为N-苯乙基乙酰胺(1)、1H-indole-3-carbaldehyde(2)、胸腺嘧啶(3)、尿嘧啶(4)、lignoren(5)、尿嘧啶核苷(6)、己六醇(7)、腺嘌呤核苷(8)、环-甘氨酸-(L)-脯氨酸(9)、环(D)-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸(10)、环(L)-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸(11)、2-pyrrolidinone(12)、N-methyl-2-pyrolidinone(13)、环(L)-4-羟基-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸(14)、brevianamide F(15)、3-甲基哌嗪-2,5-二酮(16)、7,8-dimethylbenzo[g]pteridine-2,4(1H,3H)-dione(17),环(L)-酪氨酸-(L)-苯丙氨酸(18)、啤酒甾醇(19)、大豆黄素(20)、赤藓糖醇(21)。结论所有化合物均为首次从霍山石斛内生真菌Fusariumlactis中分离得到。     

专利视角下霍山石斛产业链的SWOT分析

霍山石斛Dendrobium huoshanense为兰科石斛属多年生草本植物,具有强阴益精、补虚赢、壮筋骨之功效.基于PatSnap专利数据库,梳理霍山石斛近20年的专利数据,采用专利分析与SWOT分析相结合的方式,分析其产业链的现状与发展趋势,进而提出相应建议.霍山石斛专利申请数量保持高位增长,专利类型以发明申请为...     

不同生长年限霍山石斛高效液相指纹图谱研究

目的建立霍山石斛Dendrobium huoshanense的HPLC指纹图谱,同时测定不同生长年限霍山石斛中丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素含量,为霍山石斛药材质量的评价提供依据。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长240 nm,柱温30℃;将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1),对不同年限的霍山石斛样品进行相似度分析;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果。结果本方法建立的指纹图谱共有13个共有峰,指认了其中4个共有峰,分别为丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素;不同年限的栽培霍山石斛相似度结果小于0.900,不同年限的仿野生霍山石斛相似度结果大于0.900。结论HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够评价和鉴别不同年限的霍山石斛,为霍山石斛药材的采收、开发、评价等提供参考。     

铁皮石斛中的酚酸类及二氢黄酮类成分

 目的 研究铁皮石斛的化学成分。方法 利用硅胶、凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离,根据光谱数据和理化性质鉴定其结构。并利用1,1-苯基苦基苯肼（DPPH）自由基清除实验评价分得的化合物的抗氧化活性。结果 从铁皮石斛的脂溶性部位分离得到了15个酚性化合物及2个二氢黄酮类化合物,分别鉴定为：N-p-香豆酰酪胺(1),反-N-(4-羟基苯乙基)阿魏酸酰胺(2),二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯(3),二氢阿魏酰酪胺(4),4-羟基-N-[2-(4-羟基苯基)乙基]苯丙酰胺(5),丁香酸(6),丁香醛(7),香草酸(8),对羟基苯丙酸(9),对羟基桂皮酸(10),阿魏酸(11),对羟基苯甲酸(12),灯盏花苷II(13),二氢丁香苷(14),3, 5-二甲氧基-4-羟基苯基-1-O-β-D-葡萄糖苷(15),柚皮素(16)及3′, 5, 5′,7-四羟基二氢黄酮(17)。其中化合物2、3、4、6、11及17具有抗氧化活性,但均弱于阳性对照抗坏血酸的活性。结论 化合物1~17均为首次在铁皮石斛中分离得到,化合物的活性强弱与结构之间存在一定的相关性。     

铁皮石斛中一个新化合物

 目的 研究铁皮石斛的化学成分。方法 采用硅胶色谱法、HP₂MGL型大孔树脂色谱法、Sephadex LH-20、Sephadex G-25凝胶色谱法、RP-HPLC制备柱色谱法进行分离纯化,通过现代波谱技术进行结构鉴定。结果 鉴定了10个化合物,分别为2-甲氧基苯基-1-O-β-D-芹糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(1), 3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-芹糖-（1→2）-β-D-葡萄糖苷(2), leonuriside A（3）,(1′R)-1′-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙醇-4-O-β-D-葡萄糖苷（4）,左旋丁香脂素（5）,丁香脂素-4,4′-O-双-β-D-葡萄糖苷（6）,(+)-丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（7）,icariol A₂-4-O-β-D-glucopyranoside（8）,(+)-lyoniresinol-3a-O-β-D-glucopyranoside（9）,裂异落叶松脂醇（10）。结论 1为新化合物,2～4,6～10为首次从本属植物中发现,5为首次从本植物中发现。
     

霍山石斛微卫星标记的筛选及遗传多样性分析

目的:利用磁珠富集法构建霍山石斛的微卫星文库,用筛选出的微卫星引物对安徽霍山居群的24株野生霍山石斛进行遗传多样性分析.方法:根据链亲和素磁珠和生物素特异结合的特性,用3'端生物素标记的探针与两端连接已知序列人工接头的霍山石斛基因组DNA酶切片段杂交,杂交复合物结合到包被有链亲和素的磁珠上,洗脱并收集吸附在磁珠上的含有微卫星的片段.经过克隆和测序,再根据微卫星两侧的保守序列设计引物,最后利用从中筛选出的微卫星引物对霍山石斛居群进行遗传学分析.结果:本实验共筛选得到12对多态性位点丰富、带型清晰、重复性好的引物,并检测到65个等位基因,每个位点的等位基因数从2到8个不等,平均预期杂合度(HE)和平均观察杂合度(HO)分别为0.638,0.500.12个多态性位点的哈温平衡检测结果显示有2个位点显著偏离哈温平衡(P＜0.05),可能是由于存在无效等位基因.连锁不平衡检测结果表明有3对位点显著连锁不平衡(P＜0.05);结论:这些微卫星标记可以用于霍山石斛的居群遗传学分析.     

霍山石斛多糖的结构分析、生物活性研究进展及与不同种间多糖成分差异性分析

霍山石斛Dendrobium huoshanense作为一种名贵的滋补类中药,收载于《中国药典》2020年版。多糖为其主要活性成分之一,具有免疫调节、保肝、抗肿瘤、抗氧化和抗炎等药理活性。通过查阅国内外文献,基于中国知网及PubMed等中英文文献数据库分析当前研究现状及研究热点;总结霍山石斛多糖（Dendrobium huoshanense polysaccharide,DHP）的提取分离、结构解析及其生物活性;分析其多糖成分与其他常用石斛品种的差异性。以期更好地开发利用DHP,为DHP产品的深入开发与研究及质量标准完善提供参考和思路。     

叠鞘石斛联苄类化合物的大孔树脂纯化工艺优选及抗氧化活性考察

目的：优选叠鞘石斛联苄类化合物的大孔树脂纯化工艺条件并考察其体外抗氧化活性。方法：以静态饱和吸附量和洗脱率为指标,通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号。采用单因素试验考察上样液质量浓度、上样量、乙醇体积分数、洗脱剂用量、上样流速及洗脱流速对纯化工艺的影响,通过体外抗氧化试验考察联苄类化合物的体外抗氧化能力。结果：HPD-300型树脂纯化联苄类化合物的效果最好,其最佳纯化工艺条件为上样液质量浓度9.04 g·L^-1,上样量1.25 BV,上样流速0.5 mL·min^-1,加水和70%乙醇各5 BV以1.0 mL·min^-1的流速洗脱。纯化后联苄类化合物纯度达67.07%,较纯化前提高了4.25倍。联苄类化合物的纯化物和粗提物对超氧阴离子自由基的抗氧化活性以半数抑制浓度（IC₅₀）表示分别为0.408,0.985 g·L^-1,对羟自由基的IC₅₀依次为7.856,7.827 g·L^-1。结论：HPD-300型大孔吸附树脂对叠鞘石斛联苄类化合物的纯化效果较好,纯化物的体外抗氧化能力有所提高。