醋制商陆正丁醇部位降低肝肾毒性作用机制研究

目的 采用代谢组学的方法探究商陆Phytolacca acinosa醋制前后正丁醇部位肝肾毒性的差异及减毒作用机制。方法 采用UPLC-Q-TOF/MS的方法对商陆醋制前后正丁醇部位的成分变化进行研究。小鼠ig商陆生醋品正丁醇部位低、高剂量（27、54 mg/kg）28 d后,通过血清生化指标和病理切片评价商陆醋制前后的肝肾毒性差异;采用UPLC-Q-TOF/MS对血清进行数据采集;通过QI、HMDB及MetaboAnalyst 5.0寻找与商陆炮制减毒相关的差异代谢物及代谢通路。结果 商陆醋制后部分皂苷类成分含量下降显著,并能够明显降低生品导致的肝肾功能指标的异常升高。病理切片结果显示,与对照组比较,生品组的肝、肾组织病变明显;醋制后病变程度显著减轻。通路富集分析发现胆汁酸代谢可能与商陆醋制减毒密切相关;进一步对胆汁酸进行半定量分析发现,商陆醋制后能够改善生品导致的结合型胆汁酸含量的下降及次级胆汁酸含量的升高,从而改善胆汁酸代谢紊乱。结论 商陆生品具有肝肾毒性,醋制后皂苷类成分含量下降,毒性显著降低,其作用机制可能与改善胆汁酸代谢紊乱密切相关。     

商陆提取物醋制前后毒性作用的比较研究

目的:提取分离获得商陆的毒性成分,并比较其醋制前后毒性的变化.方法:采用黏膜刺激性反应、小鼠腹腔炎症模型及离体巨噬细胞释放NO模型,比较商陆毒性成分醋制前后的致炎毒性变化.结果:商陆毒性成分具有显著的致炎毒性,可导致家兔眼结膜水肿、小鼠腹腔渗出液中PGE2含量升高以及巨噬细胞释放NO含量升高;经醋制后,对家兔眼结膜刺激性减弱,使小鼠腹腔渗出液中PGE2含量降低、巨噬细胞释放NO含量降低.结论:醋制法能够降低商陆毒性成分的毒性作用.     

商陆正丁醇部位醋制前后肠道毒性变化研究

为探索商陆毒性部位炮制前后对肠道毒性变化的影响,提取分离获得了商陆正丁醇毒性部位,在整体动物模型水平,灌胃给药后观察小鼠肠道肿胀程度,测定小鼠肠道不同部位的含水量及粪便的含水量,考察商陆正丁醇部位炮制前后对腹泻及肠道肿胀的影响;在细胞水平,采用MTT法,测定肠细胞HT-29,IEC-6的IC50,比较醋制前后商陆正丁醇部位的毒性变化。结果显示商陆正丁醇部位能够导致肠道肿胀,表现为引起十二指肠、空肠的水肿,且可导致粪便含水量增加引起腹泻,可抑制肠细胞HT-29,IEC-6增殖,表明其具有肠细胞毒性,对HT-29细胞的IC5014.59 mg·L-1,IEC-6 IC5043.77 mg·L-1;经醋制,小鼠肠道肿胀程度显著减弱,肠道和粪便的含水量明显降低,对HT-29和IEC-6的抑制作用减轻,对HT-29细胞的IC5058.51 mg·L-1,IEC-6 IC5084.37 mg·L-1。由此可知,醋制法具有降低商陆正丁醇部位的毒性作用。     

商陆炮制方法的探讨

本文就商陆不同炮制品中商陆皂甙甲的定性,定量及利尿作用、毒性试验进行比较。结果表明,炮制对商陆皂甙甲成分有一定影响。醋制商陆含商陆皂甙甲低于生商陆,且毒性较低,并呈现较好的利尿作用,因此商陆以醋制为佳。     

商陆醋炙前后化学成分和药效比较

目的: 比较商陆醋炙前后化学成分和药效的变化情况。 方法: 按2010年版《中国药典》商陆项下醋炙法制备醋商陆。采用硫酸-香草醛比色法测定总皂苷含量;HPLC-ELSD测定商陆皂苷甲含量,色谱条件为Lichrospher-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相甲醇-0.4% 乙酸(65:35),流速1.0 mL·min^-1,柱温40 ℃,进样量20 μL,ELSD条件为漂移管温度90 ℃,载气流速2.5 L·min^-1。SD大鼠随机分成生理盐水组、阳性药组(氢氯噻嗪)、生商陆组和醋商陆组,以生理盐水形成盐水负荷模型,用大鼠代谢笼法观察大鼠0~5 h尿量;ICR小鼠随机分成生理盐水组、阳性药组(芒硝)、生商陆组和醋商陆组,采用墨汁推进法比较生商陆和醋商陆对小鼠小肠推进率的影响。 结果: 商陆经醋炙后总皂苷质量分数由1.66% 升至1.91%,商陆皂苷甲质量分数由0.64% 增至0.82%,大鼠排尿量增多,小鼠小肠推动作用减弱。 结论: 商陆醋炙后总皂苷和商陆皂苷甲含量均升高,泻下作用缓和,长于利尿逐水。     

商陆醋炙前后对动物黏膜刺激性比较研究

目的:研究商陆醋炙前后对动物黏膜刺激性的变化.方法:采用大鼠和小鼠胃肠道试验及家兔眼结膜刺激性试验,观察商陆醋炙前后对动物黏膜的刺激性变化.结果:经醋制后,商陆对动物黏膜的刺激性显著减弱.结论:醋制法能够降低商陆对动物黏膜的刺激性作用.     

HPLC-ELSD法测定商陆药材、饮片和醋商陆中商陆皂苷甲的含量

目的:比较各个产地的商陆药材、饮片及其炮制品醋商陆中的商陆皂苷甲的含量,为商陆及相关制品的质量控制提供含量测定方法,并做好2010版药典的修订工作。方法:运用高效液相色谱法,采用蒸发光散射检测器(ELSD)检测,对所收集的12个产地36个商陆及相关制品进行商陆皂苷甲的含量测定。结果:醋商陆中商陆皂苷甲含量显著高于商陆药材及饮片,商陆药材和饮片含量差异不大。结论:通过HPLC-ELSD对样品中商陆皂苷甲的含量测定可以有效地控制商陆的质量。     

醋炙法对商陆毒性和药效影响的实验研究

目的:研究商陆醋炙前后毒性和药效的变化情况。方法:按照2010版《中国药典》商陆项下炮制方法——醋炙法对商陆进行炮制,得炮制品醋商陆。给予小鼠单次不同剂量生、醋商陆煎液灌胃,3h后检测小鼠消化系统脏器改变情况。给予家兔不同浓度生商陆混悬液和15.0%醋商陆混悬液滴眼,检测药物对家兔眼结膜的刺激性强度。大鼠制作盐水负荷模型,分别给予同体积生理盐水、氢氯噻嗪和生商陆、醋商陆煎液灌胃后,比较各组5h总尿量。小鼠随机分组后分别灌胃同体积加入墨汁的生理盐水、10%芒硝溶液和生商陆、醋商陆煎液,15min后检测墨汁推进率。结果:单次30倍日用量(35.1g/kg)灌胃生商陆后,小鼠消化系统脏器病变率为66.7%,而醋商陆各剂量组未见明显病变。各剂量生商陆混悬液滴眼后,家兔均表现出充血、水肿、分泌物等眼结膜刺激性,有确切量效关系;等剂量生、醋商陆混悬液滴眼后,生商陆组眼结膜刺激性强于醋商陆组。大鼠灌胃生、醋商陆后,尿量均增加,高剂量醋商陆组尿量显著高于高剂量生商陆组。小鼠灌胃生、醋商陆后小肠墨汁推进率均明显高于生理盐水组,生商陆组明显高于醋商陆组。结论:醋炙法能够降低商陆对黏膜的刺激性,增强利尿功效,缓和泻下作用。     

商陆中商陆皂苷A的含量测定

目的:利用HPLC-ELSD测定不同产地商陆药材中商陆皂苷A的含量以控制其质量。方法:采用HPLC-ELSD含量测定法,Phenom enex Luna C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(68∶31∶1)为流动相。结果:商陆皂苷A在4.05~20.24μg呈线性,回收率为98.8%,RSD 1.4%。测定11个不同来源的药材,其商陆皂苷A的含量在0.32%~1.11%。结论:本法可快速、准确测定商陆药材中商陆皂苷A含量,可用于商陆药材的质量监控。     

商陆水溶性浸出物、商陆皂苷甲含量变异规律与优良种源筛选

目的:为商陆种质资源利用与优良品种选育提供依据。方法:收集全国主分布区商陆野生种质资源23份,考察其经纬度、海拔、农艺性状,用热浸法测定块根水溶性浸出物含量,用HPLC-ELSD法测定块根商陆皂苷甲含量,用DPS 6.55,Excel 2003软件进行单因素方差分析、相关性分析、主成分分析与聚类分析。结果:商陆不同种源间农艺性状存在显著差异(P0.05),其中福建、广西种源生长势好,植株高大,茎粗,叶片大而多狭长,块根产量高;不同种源间水溶性浸出物、商陆皂苷甲含量也存在显著差异(P0.05),2个成分变异规律相似,与种源地、经纬度、海拔、农艺性状存在相关性,其中陕西、浙江种源含量较高;与株高、茎粗、叶片长、叶片宽、叶柄长、块根纵径、块根横径、块根产量呈负相关关系,与根形指数、纬度、海拔呈正相关关系,与叶形指数、经度相关性较低;12个生长与成分性状指标可简化为5个主成分,累计贡献率达93.611 9%;23个种源可划分为5类。结论:高纬度、高海拔种植商陆有利于块根中水溶性浸出物与商陆皂苷甲含量积累;共筛选出5个农艺性状优良种源与4个高成分含量优良种源,可作为高产、优质商陆品种选育备选种质。     

商陆不同炮制品对大鼠的利尿作用及其对睾丸、肾脏水通道蛋白的调节作用

目的:研究商陆生品及不同炮制品的利尿作用,初步探究其利尿作用机制。方法:采用水负荷大鼠模型,将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组、商陆皂苷甲(Es A)组、生品组、不同炮制品(醋炙、醋煮、水煮、清蒸)组,每组10只。同时进行正常状态大鼠利尿实验,将70只SD大鼠随机分为空白组,Es A组,生品组及不同炮制品(醋炙、醋煮、水煮、清蒸)组,每组10只。各给药组的剂量分别为0.005,1.8,1.8,1.8,1.8,1.8 g·kg~(-1),通过给予水负荷模型大鼠及正常大鼠不同的药物,分别测定排尿量,并进行水负荷大鼠大鼠睾丸水通道蛋白9(AQP9)因子表达、肾组织AQP2和AQP4因子的表达试验及正常大鼠睾丸AQP9因子的表达试验。结果:综合6 h总尿量,Es A,商陆生品及不同炮制品均对水负荷大鼠表现出利尿作用;对于正常大鼠仅醋煮品表现出利尿作用。聚合酶链式反应(PCR)技术中对于水负荷大鼠,AQP2 mRNA表达均显著降低,AQP4和AQP9 mRNA表达大部分无显著变化;对于正常大鼠,醋煮组AQP9 mRNA表达显著降低,其余各组无显著变化。结论:商陆对于水负荷大鼠表现出利尿作用,但对正常大鼠利尿作用不明显;商陆的利尿作用可能与AQP2和AQP9 mRNA表达下降有关。     

醋商陆饮片的炮制工艺研究

目的确定醋商陆饮片的最佳炮制工艺。方法选择炒制温度、炒制时间和加醋量3个因素,采用L9(34)正交试验设计,以RP-HPLC法测定炮制品中活性成分商陆皂苷甲的量,以小鼠胃肠道试验评价刺激性毒性,通过多指标综合评分法优选醋商陆的炮制工艺。结果优选出的醋商陆炮制工艺为:加入30%醋拌匀,闷润至醋被吸尽,于120℃炒制30 min。结论优选出的醋商陆炮制工艺稳定可行,重现性好。     

京大戟醋制前后对斑马鱼胚胎心脏的毒性

目的:以模式生物斑马鱼胚胎为研究模型,考察京大戟醋制前后不同极性部位对心脏的毒性作用。方法:对受精后12 h发育正常的斑马鱼胚胎分别给予京大戟生品和醋制品的石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位提取物,观察受精后72 h药物对斑马鱼胚胎心脏发育和心脏功能的影响。结果:京大戟醋制前后不同极性部位对斑马鱼胚胎均具有心脏毒性,并呈一定的剂量相关性;其中石油醚部位和二氯甲烷部位的毒性作用较为明显,乙酸乙酯部位的毒性较弱;心脏毒性作用主要表现为心脏发育缓慢、心包水肿、心率降低、心脏细胞出现凋亡现象。与生品相应极性部位相比,相近剂量的京大戟醋制品同一极性部位的心脏毒性都有所下降。结论:京大戟对斑马鱼胚胎具有心脏毒性,醋制后毒性降低,可为进一步阐明京大戟醋制减毒的作用机制研究提供一定的实验依据。     

不同醋量醋煮对商陆毒性及药效的影响

目的：考察不同醋量对商陆毒性及药效的影响。方法：采用急性毒笥实验（测ＬＤ５０）,祛痰实验（工排泌法）及利尿实验（滤纸法）。结果：商陆醋陆醋制后毒性明显降低,。利尿作用所缓和;生品和３０％横亘煮品祛痰效果较好,而５０％,１００％醋量醋煮制同较生品差。结论：商陆以３０％醋煮制为佳。     

基于数据挖掘的弥漫型子宫腺肌病患者年龄分布及用药规律对比分析＊

目的 采用数据挖掘方法探析弥漫型子宫腺肌病的年龄分布及用药规律差异，以扩宽该病保守性治疗的思路。方法 收集弥漫型子宫腺肌病患者资料535例，处方数564个，中药信息11002条，影像学资料780条，采用Liquorice软件进行复杂网络分析。结果 发病年龄在40-49岁的患者最多，约占总患者人数的45.42%；弥漫型子宫腺肌病患者发病年龄在20-29岁的核心处方为：醋香附、醋延胡索、当归、川芎、白芍、蒲黄；30-39岁的核心处方为：醋香附、醋延胡索、当归、川芎、白芍、蒲黄、盐小茴香、益母草；40-49岁的核心处方为：醋香附、醋延胡索、当归、川芎、蒲黄、白芍、益母草、党参；50-55岁的核心处方为益母草、海螵蛸、党参、蒲黄、茜草、三七粉。结论 40-49岁为弥漫型子宫腺肌病的好发年龄段，且发病年龄呈现年轻化态势。治疗弥漫型子宫腺肌病应在活血化瘀的基础上，根据年龄症状表现的不同，佐以理气止痛、益气养血之法。寒凝血瘀者散寒祛瘀，热毒瘀结者清热解毒化瘀，以血瘀出血证为主者则应化瘀止血。     

产地加工与饮片炮制一体化对苦参饮片主要功效的影响

目的:比较产地加工与炮制一体化加工与传统方式加工苦参饮片的抗炎与解热作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀试验,观察2种苦参饮片水提物的抗炎消肿作用;采用酵母致热大鼠模型,比较2种苦参饮片水提物的解热作用。结果:与空白组比较,2种苦参饮片水提物均可降低小鼠耳肿胀度,但以一体化加工苦参饮片的抗炎消肿作用更为显著,各剂量组抑制率均40%。一体化加工苦参饮片3个剂量均能降低发热大鼠体温,且作用时间可持续4 h,解热作用优于传统加工的苦参饮片。一体化加工苦参饮片中槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱及氧化苦参碱等5种主要有效成分的含量均高于传统方式加工的苦参饮片,其总量约为传统苦参饮片的1.3倍。结论:一体化加工与传统加工方式生产的苦参饮片在抗炎及解热等主要功效方面具有较好的相似性,而且一体化加工方式从源头规范了苦参的饮片生产,在确保饮片质量的前提下缩短了生产周期,是一种值得推广应用的中药饮片生产模式。     

白芍炮制过程中的美拉德反应及芍药苷的变化

目的研究白芍炮制过程中美拉德反应的底物还原糖、产物5-羟甲基糠醛和芍药苷的变化规律,探索白芍炮制品的质量控制方法。方法采用HPLC测定生品和不同制品中的含量;采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定还原糖含量。结果5-羟甲基糠醛是白芍炮制后新增成分之一,其含量随炒制温度的增大而增多;还原糖的含量随炒制温度变化不大,但醋炙和酒炙能增加其含量。结论白芍炒制、酒炙、醋炙过程中还原糖和5-羟甲基糠醛的变化与美拉德反应密切相关,炒制白芍、酒炙白芍和醋炙白芍的性状、气味与药典一致,其还原糖和5-羟甲基糠醛的含量可以作为质量控制指标之一。