日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原免疫兔血清被动转移诱导保护力的研究

目的　探讨日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原 (Sj Hm Ag)免疫兔血清被动转移至小鼠抗日本血吸虫 (Sj)感染的保护性。方法　用 Sj Hm Ag免疫兔血清经尾静脉转移给昆明鼠 3次 ,每鼠每次0 .5 ml,第 1次转移后 1h,每鼠经腹部感染 (4 0± 1)条 Sj尾蚴 ,第 2、3次转移分别在攻击感染后 1、3周进行 ,4 2 d后剖杀冲虫 ,计数虫数及肝卵数。结果　与对照组相比 ,Sj Hm Ag免疫兔血清被动转移组使虫荷减少 2 9.3% ,每克肝脏虫卵减少 5 0 .6 %。结论　 Sj Hm Ag免疫兔血清被动转移小鼠后可诱导产生抗 Sj攻击感染及抗生殖的免疫保护力。     

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫力的研究

目的构建日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)重组质粒,并观察其在小鼠体内诱导的抗日本血吸虫感染保护作用。方法RT-PCR特异性扩增Sj14FABP基因,将其克隆入真核表达载体pVIVO2,通过PCR、双酶切及测序鉴定。获得的重组质粒pVIVO2-Sj14FABP转染HepG2细胞,间接免疫荧光(IFA)检测蛋白表达;并免疫BALB/c小鼠,30d后攻击感染,感染后45天剖杀,计数检获成虫数和肝脏虫卵数。结果RT-PCR扩增出大小为440bp的Sj14FABP片段,重组质粒经PCR和双酶切后均获得目的片段,转染细胞IFA结果显示有较强荧光。重组质粒免疫小鼠后分别获得24.1%减虫率和27.2%减卵率。结论成功构建和表达重组质粒pVIVO2-Sj14FABP,该核酸疫苗能够诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。     

日本血吸虫Mr 23 000抗原与白细 胞介素-12多价DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 研究能共同表达日本血吸虫Mr 23 000膜抗原（Sj23）与白细胞介素-12(IL-12)的多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23诱导BALB/c小鼠免疫保护作用。 方法 　在多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23和PV-IL12的基础上，构建空白质粒PV和仅表达Sj23的质粒PV-Sj23。50只BALB/c小鼠分为5组，每组10只，分别注射多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23、表达Sj23的质粒PV-Sj23、表达IL-12质粒PV-IL12、空白质粒PV和生理盐水，100 μg/只，免疫1次。4周后每只鼠攻击感染40±2条尾蚴，42 d后剖杀，计数成虫及肝内虫卵数。 结果 成功地构建了空白质粒PV和只表达Sj23的质粒PV-Sj23及多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23。PV-IL12-Sj23组和PV-Sj23组分别获得了45.5%和27.2%的减虫率，两组比较差异有显著性（P<0.05），减卵率分别为58.4%和33.9%。 结论 多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23可诱导BALB/c小鼠产生较显著的抗血吸虫免疫保护作用，且保护性效果比单价DNA疫苗PV-Sj23好。     

日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫菌血清抗体与抗生殖免疫关系的初步研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗（Sj31B1N）抗生殖免疫的可能机理。方法 用Sj31B1N免疫小鼠,每2周1次,每次免疫前均尾静脉采血1次,作血清抗体动态变化分析,免疫4次后尾蚴攻击感染,感染后45天,计数成虫负荷和肝、肠组织内虫卵数。结果 用Sj312B1N免疫小鼠后第2周部分小鼠血清中出现了抗体,随时间延长,出现抗体阳性组小鼠数量增多,抗体滴度增加。抗体阳性组小鼠与阴性组小鼠对比,成虫减少率40.6%,肝组织减卵率为48.0%,肠组织减卵率为45.4%。结论 核酸疫苗Sj31B1N可有效地诱导小鼠产生抗体,并且具有免疫保护作用。核酸疫苗Sj31B1N所诱导的体液免疫可能是抗日本血吸虫生殖免疫的机理之一。     

日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗保护性免疫及IL—12免疫佐剂作用的研究

目的研究日本血吸虫中国大陆株23 kDa膜蛋白(SjC23)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠免疫保护作用以及IL-12的免疫增强效果.方法56只BALB/c雌性小鼠随机分为A、B、C、D 4组,每组14只.A组(对照组),于每鼠两腿股四头肌注射100μgpcDNA3.1质粒DNA;B组(SjC 23组),注射100μgpcDNA3.1-SjC 23质粒DNA;C组(SjC 23+IL-12DNA组),注射100μgpcD-NA3.1-SjC 23、100μgpcDNA3.1-p35、100μgpcDNA3.1-p40质粒DNA的混合液;D组(SjC23+rIL-12蛋白组),免疫剂量同SjC23组.共免疫3次,每次免疫间隔2周,剂量和方法同第1次.于末次免疫后1个月,每鼠攻击感染(45±2)条日本血吸虫中国大陆株尾蚴.但D组的小鼠在攻击感染当天,及感染后第2、4、6天经腹腔注射0.2μg/鼠rIL-12蛋白.攻击后45 d剖杀小鼠,计数成虫及肝内虫卵数.于末次免疫后2周对照组及SjC23组用51Cr释放法测定SjC 23介导的特异性细胞毒作用;用脾细胞培养法检测经重组日本血吸虫23 kDa膜蛋白亲水区大片段融合蛋白(GST-HD)刺激后,在免疫后及攻击后小鼠脾细胞IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平.分别于攻击前后2周经小鼠尾静脉采血,用ELISA法检测血清中抗SjC 23抗体.结果51Cr释放法测定SjC 23介导的特异性细胞毒作用,SjC 23组获得了56.4%的细胞毒活性,而对照组为25.8%;细胞因子IL-2和IFN-γ的水平在攻击前、后SjC 23组较对照组有明显的升高,而IL-4和IL-10则无变化.ELISA法检测抗SjC 23抗体结果表明,免疫后2周,SjC 23组4/10份血清为阳性,SjC 23+IL-12 DNA组5/10份血清阳性,SjC23+rIL-12蛋白组5/10份血清阳性.动物保护性实验结果显示,与对照组相比,B、C组和D组分别获得了28.1%、40.1%和41.7%的减虫率,减卵率分别为37.9%、53.3%和51. 7%,加用IL-12的C组和D组与单独使用SjC 23的B组相比减虫率和减卵率均显著增加(P＜0.05).结论SjC 23 DNA疫苗具有诱导BALB/c小鼠产生部分抗血吸虫免疫作用,IL-12作为细胞因子佐剂具有提高SjC 23 DNA疫苗免疫保护性的作用.     

紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB／c小鼠免疫保护作用研究

目的观察紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠免疫保护作用。方法辐照致弱日本血吸虫尾蚴,经腹部皮肤用UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫诱导BALB／c小鼠,3周后进行攻击感染,同时设正常感染对照组。攻击感染6周后解剖小鼠,计算减虫率、减卵率,并观察虫体发育情况和肝组织细胞免疫应答情况。结果免疫组的减虫率和减卵率分别为37．90％和51．16％;免疫组小鼠体内虫体发育明显滞后于正常感染对照组内虫体;免疫组小鼠肝脏虫卵肉芽肿较正常组明显减少。结论UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠能诱导较好的免疫保护力。     

树突状细胞DNA多价疫苗抗日本血吸虫感染作用机制的研究

摘 要：目的 探讨树突状细胞（DC）DNA混合多价疫苗抗日本血吸虫感染保护性免疫作用机制。方法 BALB/c小鼠耳廓分别注射Sj26、Sj23和Sj14基因转染DC（A组）、Sj26基因转染DC（B组）、Sj23基因转染DC（C组）、Sj14基因转染DC（D组）、pcDNA3转染DC（E组）、未处理DC（F组）和RPMI-1640（G组）,共免疫3次,间隔2周,末次免疫后第2周,每鼠经皮肤感染40条日本血吸虫尾蚴。ELISA法检测血清特异性IgG抗体、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）水平,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经ConA和可溶性虫卵抗原（SEA）刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4水平,噻唑蓝（MTT）法检测脾淋巴细胞的增殖。结果 A组小鼠末次免疫后第2周血清特异性IgG抗体水平显著升高（与G组比较,P<0.001）。A组小鼠免疫后血清IFN-γ水平明显升高(P<0.01),而血清IL-4的水平,各组小鼠免疫前、后无明显变化。A组小鼠脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后诱生的IFN-γ水平显著增高,而IL-4水平显著降低(与G组比较,P<0.001)。A组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数高于其他各组（与G组比较,P<0.001）。结论 体液免疫和细胞免疫共同参与了DC DNA混合多价疫苗诱导的保护性免疫作用,其中Th1型免疫应答在抗日本血吸虫感染的保护性免疫中起主要作用。 关键词：日本血吸虫;树突状细胞;DNA疫苗;保护性免疫     

核酸疫苗VR1012/Sj31粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的研究

目的　探讨日本血吸虫核酸疫苗VR10 12 /Sj3 1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。　方法　将实验小鼠随机分为 5组 ,每组 12只。A组为单磷脂 (MPL)组 ,B组为VR10 12组 ,C组VR10 12 MPL组 ,D组为VR10 12 /Sj3 1组 ,E组为VR10 12 /Sj 3 1 MPL组。滴鼻免疫。在第 3次免疫后 2周 ,每只鼠经腹部感染 40± 1条尾蚴 ,45d后宰杀 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血并收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA、IgG及粪内sIgA水平。　 结果　与对照组相比 ,VR10 12 /Sj 3 1及VR10 12 /Sj 3 1加MPL滴鼻免疫均可引起小鼠血清IgG、IgA和粪内sIgA升高 ,且VR10 12 /Sj 3 1加佐剂滴鼻免疫组抗体的增幅 >不加佐剂组。VR10 12 /Sj3 1和VR10 12 /Sj3 1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 1.70 %和 2 8.82 % ,减卵率分别为 2 7.98%和 40 .72 %。二者的减虫率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但减卵率后者显著高于前者 (P <0 .0 5 )。　结论　VR10 12 /Sj3 1滴鼻免疫可引起小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗攻击感染的免疫保护力。     

日本血吸虫复合表位DNA疫苗免疫保护作用的研究

目的研究日本血吸虫复合表位DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法将40只雌性BALB/c小鼠随机分为4组:pcDNA3.1组(对照组),每鼠经两侧股四头肌注射100μg pcDNA3.1质粒DNA,每侧50μg;TPI组,每鼠肌注100μg pcDNA3.1-TPI质粒DNA;TP组,每鼠肌注100μg pcDNA3.1-T-linker-P质粒DNA;PT组,每鼠肌注100μg pcDNA3.1-P-linker-T质粒DNA。每隔2周加强免疫1次,剂量和方法相同,共免疫3次。末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45±1)条日本血吸虫尾蚴,45d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2 d及感染前2 d尾静脉采血,间接ELISA检测特异IgG及IgG1I、gG2a水平。末次免疫后3周,每组取2只小鼠制备脾细胞,双抗体夹心法检测脾细胞经ConA和rSjCTPI刺激后培养上清中的IL-2I、L-4和IFN-γ水平。结果TP组和PT组小鼠减虫率分别为34.76%和36.14%,显著高于TPI组(P<0.05)和对照组(P<0.01);减卵率分别为51.20%和50.79%,与TPI及对照组比较差异有显著性(P<0.05)。TP组和PT组小鼠血清特异性IgG水平均升高(P<0.05),IgG2a/IgG1的比值分别为4.23和4.34。脾细胞经ConA和rSjCTPI刺激后,IL-2水平TP组和PT组较对照组均升高。结论复合表位DNA疫苗能诱导小鼠产生抗血吸虫感染的免疫保护力,效果优于rSjCTPI疫苗。     

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的观察日本血吸虫31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗(Sj31B1N)在小鼠体内的保护性免疫效果.方法用Sj31B1N和Sj31B1N+pUCDNA疫苗肌注免疫BALB/C小鼠,用空白质粒载体VR1012做对照,在0、4、8周共免疫3次,每次免疫前及末次免疫后4周从尾静脉采血收集血清,经ELISA法检测小鼠血清抗体升高时,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠.结果Sj31B1N和Sj31B1N+pUC减虫率分别为24.2%和22.0%;肝卵减少率分别为34.9%和39.5%,每雌肝卵减少率分别为30.4%和35.3%.结论小鼠接种Sj31B1N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用.加质粒佐剂pUC未见有增强免疫效果的作用.