前列腺癌PSCA、PSMA和血清PSA表达及三者之间的相关性研究

目的研究前列腺干细胞抗原（PSCA）、前列腺特异性膜抗原（PSMA）和前列腺特异性抗原（PSA）在前列腺癌中的表达及三者之间的相关性,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化二步法检测PSCA、PSMA在22例前列腺癌中的表达水平,采用化学发光免疫法测定血清PSA值。结果 PSCA、PSMA在前列腺癌中阳性表达率分别平均为81.82%和77.27%。血清PSA与PSCA表达水平之间呈正相关（r=0.395,p〈0.05）;血清PSA与PSMA表达水平之间呈正相关（r=0.341,p〈0.05）。PSCA与PSMA表达水平之间呈正相关（r=0.432,p〈0.05）。结论前列腺癌组织中：PSCA只表达于癌细胞的细胞浆中,周围正常前列腺组织中未见表达;PSMA在癌细胞的细胞膜和胞浆中有高表达。在相关性方面,PSCA、PSMA及PSA三者之间均呈正相关性,且均与前列腺癌诊断、预后有关,三者在前列腺癌的发生、发展中可能存在某种联系。     

肝细胞癌免疫磁珠的制备及鉴定

目的制备能与肝癌细胞特异结合的免疫磁珠(IMB).方法单抗HAb18经耦联法包被磁珠制备IMB后,将HepG2细胞与外周血单个核细胞混匀,经免疫磁性细胞分离,检测IMB的特异性和敏感性.结果制备的IMB与HepG2细胞敏感而特异地结合,单个核细胞与HepG2细胞比为1×106:1时可检测到癌细胞,结合免疫细胞化学方法可检出外周血单个核细胞中57.2%的微量癌细胞,无假阳性.结论制备的IMB检测微量的肝癌细胞有较高的特异性和敏感性.     

前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达

目的：检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原(PSA）mRNA表达,并探讨其临床意义。方法：选择39例前列腺癌患者,12例健康体检者作为对照,取5 mL静脉血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测PSA mRNA表达。结果：①39例前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达阳性检出率66.7%（26/39）,其中血清PSA＞20.0 μg·L^-1者23例,PSA mRNA表达阳性检出率87.9%（20/23）;血清PSA≤20.0 μg·L^-1者16例,PSA mRNA表达阳性检出率37.5%（6/16）。对照组未见阳性表达。②16例血清PSA≤20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者PSA mRNA阳性表达的Gleason评分为：1~4分0/3,5~7分1/8,8~10分5/5,6例阳性者均为中、低分化癌。 结论：外周血单个核细胞PSA mRNA的检测在血清PSA＞20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者中具有较高的敏感度,是一种可靠的检测方法。血清PSA≤20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA的检测可以预示微转移的发生。     

前列腺癌患者外周血中前列腺特异抗原,前列腺特异膜抗原和人腺体激肽释放酶mRNA的表达及临床意义

目的:采用巢式RT-PCR方法,检测前列腺癌合并骨转移的患者外周血中前列腺特异抗原(PSA)、前列腺特异膜抗原(PSMA)和人腺体激肽释放酶mRNA的表达,探讨其临床意义.方法:应用巢式RT-PCR的方法,检测外周血中PSA、PSMA和hK2mRNA表达.结果:巢式PCR能够检测到经淋巴细胞稀释的LNCaP细胞的PSA、PSM和hK2mRNA的灵敏度,稀释浓度分别为10-6、10-6及10-7.检测初发伴骨转移的前列腺癌患者外周血PSA、PSMA和hK2mRNA的阳性率分别为59.45%、51.35%、59.46%,其中三种检测同时阳性的为32.43%;检测接受内分泌治疗后出现骨转移的前列腺癌患者的阳性率分别为57.14%、85.71%、83.33%,其中三种检测同时阳性的为52.48%.局限性前列腺癌患者、健康男性及健康女性的检测结果均为阴性.以β-actin mRNA做为内参照,所有临床标本检测均为阳性.结论:采用巢式RT-PCR检测前列腺癌患者外周血PSMA、hK2和PSA mRNA有助于发现进入循环系统的前列腺癌细胞,提示隐匿性转移的存在.PSMA和hK2较适合用于内分泌治疗后患者的检测.三种指标联合检测有助于提高敏感性.     

改良IME-FICC方法对乳腺癌外周血微转移的检测

【目的】探讨一种改良IME-FICC（免疫磁珠富集-免疫荧光细胞化学）法检测乳腺癌外周血微转移癌细胞及其意义。【方法】通过与磁珠共价结合的表皮细胞黏附分子（EpCAM）抗体富集外周血中表达EpCAM的癌细胞，结合免疫荧光化学法检测细胞角蛋白（CK）8／18阳性的癌细胞（呈绿荧光）。放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本方法癌细胞回收率及敏感度，检测20例正常女性志愿者及12例Ⅳ期乳腺癌患者治疗前的外周血标本，探索其特异性及临床应用可行性。【结果】免疫磁珠富集后癌细胞回收率达86％～93％．可在10^7外周血单个核细胞中检测到1个癌细胞，特异性为100％。Ⅳ期乳腺癌患者外周血中CK8／18阳性细胞检出率75％。【结论】改良IME-FICC法是一种简便、省时、敏感性及特异性高的检测方法，有较大的临床应用前景。     

前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆及用于临床前列腺癌的检测

目的获得前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因,应用巢式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测前列腺癌(PC)患者外周血中PSMA mRNA.方法从人前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因,克隆入pUC19质粒中,用全自动荧光测序仪测定其序列.根据PSMA cDNA序列设计合成引物,应用巢式RT-PCR方法检测36例PC患者和23例前列腺增生(BPH)患者外周血中PSMAmRNA,结果与巢式RT-PCR方法检测前列腺特异抗原(PSA)mRNA比较.结果获得了PSMA基因(由2 253 bp组成,可编码751个氨基酸),与已发表的PSMA cDNA序列一致.应用巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSMA mRNA灵敏度和特异度分别为66 7%和100.0%,与巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSA mRNA(灵敏度和特异度分别为30.6%和87.0%)比较差异显著.结论成功地克隆了PSMA基因并应用于临床PC诊断,巢式RT-PCR方法检测患者外周血中PSMA mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性明显优于PSA mRNA.     

前列腺癌PSCA、PSMA和血清PSA表达及三者之问的相关性研究

目的 研究前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)和前列腺特异性抗原(PSA)在前列腺癌中的表达及三者之间的相关性,并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化二步法检测PSCA、PSMA在22例前列腺癌中的表达水平,采用化学发光免疫法测定血清PSA值.结果 PSCA、PSMA在前列腺癌中阳性表达率分别平均为81.82%和77.27%.血清PSA与PSCA表达水平之间呈正相关(r=0.395,p＜0.05);血清PSA与PSMA表达水平之间呈正相关(r=0.341,p＜0.05).PSCA与PSMA表达水平之间呈正相关(r=0.432,p＜0.05).结论 前列腺癌组织中:PSCA只表达于癌细胞的细胞浆中,周围正常前列腺组织中未见表达;PSMA在癌细胞的细胞膜和胞浆中有高表达.在相关性方面,PSCA、PSMA及PSA三者之间均呈正相关性,且均与前列腺癌诊断、预后有关,三者在前列腺癌的发生、发展中可能存在某种联系.     

改良IME-FICC方法对乳腺癌外周血微转移的检测

[目的]探讨一种改良IME-FICC(免疫磁珠富集-免疫荧光细胞化学)法检测乳腺癌外周血微转移癌细胞及其意义.[方法]通过与磁珠共价结合的表皮细胞黏附分子(EpCAM)抗体富集外周血中表达EpCAM的癌细胞,结合免疫荧光化学法检测细胞角蛋白(CK)8/18阳性的癌细胞(呈绿荧光).放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本方法癌细胞回收率及敏感度,检测20例正常女性志愿者及12例Ⅳ期乳腺癌患者治疗前的外周血标本,探索其特异性及临床应用可行性.[结果]免疫磁珠富集后癌细胞回收率达86%～93%,可在107外周血单个核细胞中检测到1个癌细胞,特异性为100%.Ⅳ期乳腺癌患者外周血中CK8/18阳性细胞检出率75%.[结论]改良IME-FICC法是一种简便、省时、敏感性及特异性高的检测方法,有较大的临床应用前景.     

免疫磁珠分选和RT-PCR法检测胃癌患者外周血微转移

目的分别建立免疫磁珠分离和RT—PcR技术检测胃癌患者外周血中微转移的情况,讨论两种检测方法的意义和差别以及微转移与临床病理的相关性。方法首先采用密度梯度离心的方法分离出胃癌和慢性胃炎患者外周血中的单个核细胞,再分别采用RT—PCR和免疫磁珠技术检测其中的癌细胞。并行HE染色、免疫细胞化学和免疫荧光化学的方法对于获得的细胞进行检测分析。结果60例胃癌患者有24例采用免疫磁珠分选技术分离到微转移的癌细胞,而RT—PCR法阳性者为32例。慢性胃炎患者的检测结果均为阴性。微转移的检出与胃癌组织的分化程度呈正相关。结论胃癌患者的外周血中存在着微转移的癌细胞,采用免疫磁珠分离技术和RT—PCR的方法均可检测到微转移的癌细胞。RT—PCR法的敏感性高于免疫磁珠分离技术,更适合于临床应用。高分化的胃癌更易发生血行转移。     

前列腺癌患者外周血前列腺特异性膜抗原mRNA检测的意义

目的 观察前列腺癌（PCa）患者外周血前列腺特异性膜抗原mRNA（PSMA-mRNA）的表达,并探讨其临床意义。方法从PCa患者外周血中分离单个核细胞,采用RT-PCR方法检测其中PSMA-mRNA的表达。以前列腺增生（BPH）患者为对照。结果PCa患者PSMA-mRNA阳性率为60．8％（45／74）,BPH患者PSMA-mRNA阳性率为5．9％（1／17）;伴远处转移的PCa患者外周血PSMA-mRNA阳性率高达89．5％（34／38）,无远处转移者阳性率为38．9％（14／36）;PCa患者中血清PSA≥20μg/L者PSMA-mRNA阳性率（68．8％）,显著高于PSA〈20μg／L者（23．0％）。结论外周血PSMA-mRNA检测可诊断前列腺癌血行播散及转移。     

结肠癌手术前后外周血游离癌细胞变化

目的 探讨免疫磁珠技术检测大肠癌患者术前、术后外周血游离癌细胞的变化情况.方法 利用免疫磁珠技术富集2004年1月-2005年12月间,行根治术治疗的43位结肠癌患者术前、术后外周血肿瘤细胞,比较手术前后血中游离癌细胞的变化情况,并利用常规病理和免疫组化确认血中游离癌细胞.结果 术前大肠癌组患者外周血测得的癌细胞阳性率为37.20%(16/27),术后血中游离癌细胞阳性检出率为60.47%(26/17),健康志愿者对照组为0,术前、术后和健康志愿者之间比较具有统计学意义(P＜0.05).术前、术后外周血癌细胞阳性与肿瘤部位、肿瘤病理分型无明显随关系.术前TNM I期、TNMⅡa期、TNM Ⅱ b期之间无统计学意义,与TNMⅢ期之间比较有统计学意义.术后TNM I期与TNM Ⅱ a期间无统计学意义,与TNMⅡ b、TNMⅢ期之间比较,有统计学意义,但术后TNMⅡa期与TNMⅡb期间无统计学意义,与TNMⅢ期之间比较,有统计学意义;术后TNMⅡb期与TNMⅢ期间无统计学意义.结论 免疫磁珠技术是一种有效检测患者外周血中游离肿瘤细胞的方法,可以从大肠癌患者外周血中分离富集肿瘤细胞,对大肠癌患者术后复发转移评估具有重要临床价值.手术牵拉可导致癌细胞进入外周血,是导致术后复发转移的因素之一.     

免疫磁珠技术检测大肠癌患者外周血微转移的临床应用研究

目的探讨检测大肠癌患者外周血微转移的免疫磁珠技术的方法及临床意义。方法采集大肠癌患者外周抗凝血5ml,加入6％HKS200／0．5,4℃下静置60min,取上清,加入抗CEA单克隆抗体,在4℃下作用90min,然后室温下与免疫磁珠作用60min,在磁性细胞分离器中静置30min,镜下观察玫瑰花环形成情况,HE染色,进行免疫磁珠技术敏感性测定。结果5ml外周血中的肿瘤细胞可被检测出来,大肠癌患者的阳性检出率为42．5％。结论免疫磁珠技术是一种有效检测肿瘤细胞的方法,可以从大肠癌患者外周血中分离出肿瘤细胞,监测微转移的存在,有助于临床对大肠癌的诊断及治疗。     

基因修饰树突状细胞诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群重排的研究

目的探讨以腺相关病毒(AAV)为载体,前列腺特异性抗原(PSA)基因转染树突状细胞(DC)诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群变化特点及临床意义。方法抽取30例前列腺癌患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,以rAAV/PSA感染DC前体细胞,采用系列细胞因子诱导DC前体细胞成熟。第6天收集成熟DC并与T细胞按比例混合培养,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。分别于DC与T细胞混合培养前后应用流式细胞术分析外周血T细胞亚群及调节性T细胞(CD4+CD25+FoxP3+Treg)的表达水平。结果 PSA基因转染DC刺激T淋巴细胞爆发增殖,与培养前比较,混合培养6d后CD8+、CD8+CD69+、CD8+CD28+T细胞的比例和CD8+/CD4+比值均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);而CD8+CD28-T细胞和Treg细胞的比例均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。CD4+T细胞比例较前略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PSA基因转染DC能够有效地激活CD8+抗原特异性CTL,下调免疫抑制性T细胞,提高患者的细胞免疫功能,为前列腺癌的免疫治疗提供新的有效策略。     

小细胞肺癌免疫磁性微珠的构建及鉴定

目的 :构建能特异地与靶细胞结合并赋有磁响应性的小细胞肺癌免疫磁性微珠 ,检验其在分离微量癌细胞中的效率。方法 :将微量小细胞肺癌H12 8细胞加入到外周血单个核细胞悬液中混匀 ,再通过特异性单抗包被的免疫磁性微珠吸附、富集、免疫细胞化学鉴定。最后 ,计算癌细胞的回收率和检测敏感性。结果 :包被的小细胞肺癌免疫磁性微珠与H12 8能敏感而特异地结合。与免疫细胞化学方法结合可检出 5 4 .4 %混入外周血单个核细胞中的微量癌细胞 ,未有假阳性。结论 :免疫磁性微珠能有效地从外周血单个核细胞中分离出微量肺癌细胞 ,经进一步研究后将来可能具有较高的临床价值     

以黑色素瘤抗原基因mRNA为特异标记检测乳腺癌患者外周血肿瘤细胞

目的：以黑色素瘤抗原-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3基因mRNA为特异性标记物，检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞，并探讨其临床意义。方法：采集40例乳腺癌患者及20例非肿瘤患者的外周血，用巢式RT-PCR方法检测外周血单核细胞(PBMC)中MAGE—A1和MAGE-A3基因mRNA。同时用RT-PCR方法检测乳腺癌患者肿瘤组织中上述MAGE基因的表达。结果：12．5％(5／40)和17．5％(7／40)乳腺癌患者的PBMC中可分别检测到MAGE-A1和MAGE-A3基因的mRNA，而相应乳腺癌组织中MAGE-A1和MAGE—A3的表达率分别为15．0％(6／40)和22．5％(9／40)，在25．0％(10／40)的乳腺癌患者PBMC中至少可检测到一种MAGE基因mRNA，癌旁组织、乳腺癌组织中不表达MAGE基因的患者以及20例非肿瘤疾病患者的PBMC中均未测出MAGE基因mRNA。乳腺癌患者PBMC中两种MAGE基因mRNA的检出率与肿瘤TNM分期密切相关。结论：MAGE-A1和MAGE-A3基因mRNA可作为特异性肿瘤标记物用于检测乳腺癌患者PBMC中的乳腺癌细胞，巢式RT-PCR的敏感性及特异性较高，其检测结果可能有助于判断乳腺癌患者的预后。     

Increasein the Activity of Human Breast CancerCells to Induce Cytotoxic T Lymphocytes by Sodium Phenylacetate

TheantigenisrecognizedbycytotoxicTlymphocytes(CTL)specifically,theCTLcankillthetargetcellsonwhichsurfacespecificantigenicpeptidespresentedbyhumanselfmajorhistocompatibilityantigen(HLA)moleculesexpress,soCTLismainlyresponsiblefortheeffectiveantitumorimmuneresponse.GreateffortsarebeenconcentratingonadoptiveimmunotherapyoftumorwithspecificCTL.Tumor--specificCTLwasobtainedmainlyfrommixedcellcultureofautologousperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)ortumorinfiltratinglymphocyt.es(TIL)andtum…     

人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。     

过表达miR-4328抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化

目的 研究miR-4328在前列腺癌中的作用及分子机制.方法 采用CCK-8方法检测过表达miR-4328对前列腺癌细胞增殖能力的影响, 采用Transwell方法检测对迁移能力的影响, 采用Real-time PCR和Western blotting方法检测上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin以及上皮间质转化相关转录因子ZEB1的表达水平.结果 miR-4328在前列腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织 (P<0.001) .在前列腺癌细胞中, 转染miR-4328 mimics后, 肿瘤细胞的增殖能力显著降低 (P<0.001) .同时过表达miR-4328可以显著降低前列腺癌细胞的迁移能力 (P<0.001) .在前列腺癌细胞中, 过表达miR-4328后, 上皮细胞标志物E-cadherin的表达水平显著上升 (P<0.001) , 而间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin的含量显著降低 (P<0.001) .进一步研究发现过表达miR-4328可以下调上皮间质转化相关转录因子ZEB1的表达水平 (P<0.001) .结论 过表达miR-4328显著抑制前列腺癌细胞的增殖能力、迁移能力和上皮间质转化过程.     

DC-CIK对卵巢癌细胞杀伤作用及临床治疗安全性评价

目的 树突状细胞(dendritic cells,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)经体外共培养后,探讨其增殖能力和对卵巢癌细胞的杀伤能力,并对其治疗卵巢肿瘤的安全性进行评价.方法 提取健康志愿者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),通过不同细胞因子组合,分别诱导培养DC和CIK细胞,并共培养,用苔盼蓝染色计算活细胞扩增倍数,流式细胞术检测细胞表型,乳酸脱氢酶法(LDH)检测细胞毒性,酶联免疫剂吸附法(ELISA)检测细胞分泌因子水平.在卵巢癌患者签署知情同意书后,提取卵巢癌患者PBMC,诱导DC、CIK,并共培养,将质检合格的DC、CIK细胞通过腹腔注射的方式回输入患者体内,根据美国国立癌症研究所发布的《常见不良反应标准》,对不良反应进行判定,评价DC-CIK细胞治疗的近期安全性.结果 DC和CIK细胞共培养后,CIK增殖速度明显快于CIK单独培养,DC和CIK成熟分型明显增加,对肿瘤的杀伤能力比CIK单独培养时更强,且随着效靶细胞比的增加,杀伤肿瘤能力逐渐增强;DC-CIK回输早期,患者并未出现明显副反应.结论 DC-CIK共培养后,细胞增殖能力、成熟分型及协同抗瘤作用均增强;此外,DC-CIK相对安全可行.