免疫印迹法与金标法检测抗双链DNA的比较

目的：比较两种方法检测抗ds-DNA抗体的敏感性和特异性。方法：用免疫印迹法（IBT）和快速斑点免疫金渗滤法（DIGFA）同时检测109份活动期系统性红斑狼疮（SLE）患者血液标本,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行确证。结果：IBT法和DIGFA法检测抗ds-DNA的敏感性均为100％,阳性率分别为77．1％、85．3％,特异性分别为92．6％、59．3％。结论：IBT法与DIGFA法敏感性相同,阳性率比DIGFA法低,但特异性明显高于DIGFA法。     

生物素—亲合素斑点免疫金渗滤试验检测血清中登革病毒4型抗原

目的 建立用斑点免疫金渗滤试验（DIGFA）检测血清中登革病毒抗原的方法。方法 一株DV4型特异性单克隆抗体点加于硝酸纤维膜上,以捕获血清中的DV4抗原,借助黄病毒组反应性单克隆抗体、生物素化羊抗鼠IgG抗体、金标SPA和金标亲合素,建立用DIGFA检测血清中登革病毒抗原的方法。结果 常规DIGFA检测的敏感性高于病毒分离,而生物素一亲合素DIGFA（BA-DIGFA）的敏感性又高于常规的DIGFA,常规DIGFA可检测到5.0TCID50的病毒抗原,BA-DIGFA可检测到4.3TCID50的病毒抗原。结论 作者建立的BA-DIGFA简便、快速、敏感、特异,可用于快速诊断登革病毒4型感染。     

斑点金免疫渗滤法检测不孕症患者血清抗子宫内膜抗体

目的：建立一种快速测定抗子宫内膜抗体（antiendometrial antibody,EMAb）的新方法。方法：采用经抗人血清抗体－Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原（endometrium antigen ,EMAg)，以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体，根据免疫渗滤原理，建立斑点金免疫渗滤法（Dot-immunogold filtration assay,DIGFA）检测人血清 EMAb。共检测586份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验（ELISA）作对比研究。结果：纯化的人子宫内膜抗原与患者血清中特异性EMAb通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应，8min内即可直接观察结果。在586份血清的检测中，阳性率为36．8％，与ELISA的结果基本一致（x^2＝3．45，P＞0．05），符合率95．0％。特异性为94．7％，敏感性为95．6％。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。结论：DIGFA可测定EMAb，具有推广使用的价值。     

检测抗HSV-1IgG的斑点金免疫渗滤方法的建立

目的：建立检测人血清中抗单纯疱疹病毒Ⅰ型IgG（抗HSV-1 IgG）的斑点金免疫渗滤法（DIGFA）。方法：增殖纯化HSV-1抗原并包被于硝酸纤维素膜，自制胶体金并用于标记羊抗人IgG，自制斑点金免疫渗滤检测装置，用于检测血清中抗HSV-1 IgG。结果：当血清样本中抗HSV-1 IgG为阳性时，滴加的金标羊抗人IgG可使检测装置膜上出现红色斑点。以DIGFA与酶联免疫吸附试验（ELISA）用于检测血清样本41份，两法差异无显著性（X^2=0.01，P〉0.05）。结论：建立了检测抗HSV-1 IgG的斑点金免疫渗滤方法，该法较其他方法检测时间短，操作简便快捷。     

斑点免疫金渗滤技术检测抗心磷脂抗体

目的建立斑点免疫金渗滤技术检测抗心磷脂抗体(Ac Ab)的新方法。方法采用牛心磷脂抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人Ig G为标记抗体,根据斑点免疫金渗滤技术原理,建立斑点免疫金渗滤技术法检测人血清抗心磷脂抗体。分别检测78份抗心磷脂抗体阳性血清和80份正常体检女性血清,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果对比分析。结果与酶联免疫吸附试验的结果对比,其符合率为91.77%,特异性为95.00%,敏感性为88.46%,交叉试验与重复试验结果显示,斑点免疫金渗滤技术测定抗心磷脂抗体具有较好的稳定性和特异性。结论斑点免疫金渗滤技术可以快速准确地测定血清抗心磷脂抗体,便于推广普及。     

金标免疫渗滤法快速检测日本血吸虫IgM抗体的研究

目的探讨金标免疫渗滤法（DIGFA）快速检测日本血吸虫特异性IgM抗体的诊断价值。方法以可溶性虫卵抗原（SEA）为检测抗原，胶体标记羊抗人IgM为检测抗体，建立IgM金标免疫渗滤法（IgM—DIGFA），快速检测不同病期血吸虫病人血清，并以IgG金标免疫渗滤法fig—DIGFA）检测作平行对照。结果IgM—DIGFA和IgG—DIGFA检测25例急性血吸虫病敏感性均为100％；检测72例慢性血吸虫病的敏感性分别为95．8％（69／72）和97．2％（70／72）。检测健康人血清100人份，特异性分别为99％和97％；IgM—DIGFA检测135例其它蠕虫病人血清，除1例出现阳性反应外，其余均为阴性。检测治后6个月病人血清23例，IgM—DIGFA检出8例阳性，抗体阴转率为65．2％（15／23），IgG—DIGFA检出18例阳性，抗体的阴转率为21．7％（5／23），两者差异有显著性意义（P〈0．05）；两法检测治后12个月病人血清25例，阴转率分别为88％（22／25）和64％（16／25），两者差异有显著性意义（P〈0．05）。结论IgM—DIGFA不仅简易快速、不需特殊仪器设备，对急性、慢性血吸虫病诊断的敏感性和特异性与IgG-DIGFA相近，且有更好的疗效考核价值，非常适合当前血吸虫病防治工作需要。     

斑点免疫金渗滤法检测抗荚膜组织胞浆菌抗体的研究

目的 研究快速检测荚膜组织胞浆菌抗体的方法.方法 荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物(P-HTPM)为包被抗原,以葡萄球菌A蛋白(SPA)标记的免疫胶体金为检测标记物,采用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)检测荚膜组织胞浆菌(HC)免疫小鼠血清中抗HC抗体以及其他真菌免疫血清中抗体.结果 DIGFA检测20份HC小鼠免疫血清,结果全为阳性,与ELISA检测结果一致,敏感性为100%.检测8份正常小鼠血清出现1份假阳性,特异性为87.5%.检测其他真菌免疫血清结果为:念珠菌属和马尔尼菲青霉菌免疫血清结果全为阴性;8份皮炎芽生菌血清出现1份阳性,9份副球孢子菌血清出现2份阳性.结论 斑点免疫金渗滤法检测抗HC抗体有较高的敏感性和特异性,快速简便.经临床标本扩大验证后将对荚膜组织胞浆菌病的快速诊断有应用价值.     

快速检测抗斯氏狸殖吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立和应用

目的 :建立一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的快速、敏感和特异的新方法。方法 :以斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原为上样抗原 ,胶体金标记羊抗人IgG为显色剂 ,建立检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) ;并以ELISA作平行对照。结果 :DIGFA和ELISA分别检测 83例斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体 ,其阳性率分别为 95 .2 % (79/ 83)和 91 .6 % (76 / 83) ,两法差异无显著性 (P >0 .0 5 )。DIGFA分别检测正常人血清32例、华支睾吸虫病患者血清 2 3例和日本血吸虫病患者血清 36例 ,前者均为阴性 ,后两者的交叉反应率分别为 4 .3% (1 / 2 3)和 8.3% (3/ 36 ) ;DIGFA和ELISA两法的总符合率达 92 .3% (36 / 39)。结论 :DIGFA的特异性和敏感性与ELISA相近 ,但方法快速、试剂稳定 ,且不需特殊设备 ,适用于各级医疗单位和血清流行病学调查     

斑点免疫结合试验的研究进展

斑点免疫测定法(Dot-ImmunobodingAssay,DIBA)是1982年由Hawkes和Hucl在免疫印迹技术基础上改良发展起来的一项免疫学新技术。由于其敏感性、特异性与RIA、ELISA相当,且操作简单,快速而不断的发展为不同的方法。其中包括斑点免疫渗滤测定法(Dotimmunotictrationassay,DIFA),斑点免疫金测定(Dot-Immunogoldtictrationassy,DIGFA)和斑点免疫层析测定法(Dot-Im-munochromatographic,DICA).这些DIBA法,现已应用于病毒、寄生虫、抗原、抗体,以及单克隆抗体筛选等多种项目的检测。现将有关DIBA法的进展概况综述如下。1　DIBA-…     

滴金免疫渗滤法检测广州管圆线虫抗体的实验研究

目的建立一种检测广州管圆线虫抗体的简便、快速、敏感、特异的新方法。方法以广州管圆线虫成虫抗原为包被抗原,金标记SPA为显色剂,建立检测广州管圆线虫抗体的滴金免疫渗滤法（DIGFA）;并以ELISA平行检测比较。结果用DIGFA检测广州管圆线虫实验感染鼠血清50份,其阳性检出率为96．0％,50份正常鼠血清的阴性符合率达100％。DIGFA分别检测蛲虫阳性鼠血清13份。绦虫阳性鼠血清11份和粪类圆线虫阳性鼠血清18份,前二者均为阴性,后者交叉反应率为5．6％;DIGFA与ELISA平行检测30份广州管圆线虫阳性鼠血清,两法符合率达96,7％。结论DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性。且具有简便、快速、不需特殊仪器设备等优点。是一种检测广州管圆线虫抗体的新方法。     

新型快速流行性感冒病毒抗原检测方法免疫荧光法在流行性感冒筛查中的应用价值研究

背景　与核酸检测相比,传统快速流行性感冒（流感）病毒抗原检测方法灵敏度偏低,因此需要探索新的流感快速检测方法。目的　探讨免疫荧光法流感病毒抗原检测在流感筛查中的临床应用价值。方法　分别于2017年7-12月、2019年1-2月选取北京大学第三医院感染疾病科发热门诊收治的患者472例,采集其鼻咽拭子。采用免疫荧光法流感病毒抗原检测试剂盒读取仪器（简称Sofia）和传统快速流感抗原检测方法（免疫渗滤法和胶体金法）、流感病毒核酸检测实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）进行病原学检测。结果　472例患者采用RT-PCR方法共检出甲型/乙型流感292例（61.9%）,其中甲型流感195例（41.3%）,乙型流感94例（19.9%）,另有3例同时检出甲型流感和乙型流感。472例患者采用免疫荧光法共检出甲型/乙型流感262例（55.5%）,其中甲型流感169例（35.8%）,乙型流感93例（19.7%）。以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型/乙型流感的灵敏度依次为89.0%、82.9%、84.6%,特异度依次为98.9%、97.2%、93.3%;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型流感的灵敏度依次为85.4%、79.3%、79.3%,特异度依次为100.0%、99.3%、97.1%;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测乙型流感的灵敏度依次为93.8%、87.6%、89.7%,特异度依次为99.5%、99.2%、97.3%。以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法对甲型H1流感、甲型H3流感、乙型流感的检出阳性符合率分别为91.8%（56/61）、84.7%（111/131）、94.8%（91/96）。16~20岁、21~40岁、41~60岁、>60岁患者中,免疫荧光法对甲型/乙型流感检测的灵敏度依次为95.6%、90.2%、87.2%、78.4%,特异度依次为100.0%、98.2%、100.0%、100.0%。结论　与传统快速流感病毒抗原检测方法比较,免疫荧光法在甲型/乙型流感的检测中表现出更高的灵敏度,在流感筛查中有一定应用前景。     

廉江市育龄期妇女AsAb、EmAb和AcAb抗体阳性率调查

目的：调查廉江市育龄期妇女抗精子抗体(AsAb)、抗子宫内膜抗体（EmAb）和抗心磷脂抗体（AcAb）阳性率,并比较两种检测方法的可靠性。方法分别以斑点免疫渗滤试验法（DIGFA）与酶联免疫吸附法（ELISA）检测2013年2月至2015年2月于我院行婚前检查的500例廉江市育龄期未生育妇女的AsAb、EmAb和AcAb情况,并比较两种检测方法的敏感度、特异度、符合度和重复率。结果廉江市育龄期妇女AsAb、EmAb、AcAb的ELISA法检测阳性率分别为2.0%、3.8%、1.6%,而DIGFA法检测阳性率分别为2.4%、4.6%、1.8%。DIGFA法检测3种抗体相对于ELISA法的敏感度为87.5%~90.0%,特异度为98.8%~99.6%,符合度为98.4%~99.4%,差异均无统计学意义(P>0.05);DIGFA法的日间重复性为100.0%,明显高于ELISA法的94.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论廉江市育龄期妇女的3种抗体阳性率较低,DIGFA法检测结果与ELISA检测结果相当,但DIGFA法的稳定性要高于ELISA法,且其具有简便、快捷的特点,其在免疫性不孕的流行病学调查中具有重要的临床推广价值。     

酶联免疫吸附试验联合PCR方法检测肺炎支原体感染的临床意义

目的研究血清酶联免疫吸附试验（ELISA）联合肺泡盥洗液PCR方法在肺炎支原体感染检测中的临床意义。方法对我院2008年8月—2010年8月期间住院的332例成人社区获得性肺炎病人分别采用血清ELISA方法和肺泡盥洗液PCR方法检测肺炎支原体（MP）。结果血清ELISA法和肺泡盥洗液PCR法检测肺炎支原体感染敏感性分别为82.45%、75.43%,特异性分别为95C.16%、96.49%。两种方法在检测肺炎支原体感染中敏感性及特异性的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 血清ELISA方法联合肺泡盥洗液PCR方法检测可提高诊断阳性率,对早期诊断支原体肺炎有重要临床意义。     

实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的应用研究

目的应用实时荧光RT-PCR快速检测2009～2012年河池市流感病毒核酸,为流感的预防控制提供科学依据。方法采集河池市哨点医院的流感样病例和暴发疫点现患病例的咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法进行流感病毒核酸检测分型。结果以实时荧光RT-PCR法检测2 090份标本,流感病毒核酸阳性801份,总阳性率为38.28%。其中甲型H1N1流感468份,B型126份,季节性流感H1亚型14份,季节性流感H3亚型109份。结论实时荧光RT-PCR法检测流感病毒具快速、操作方便、特异性强、灵敏度高等优点,值得推广应用。     

三种乙型肝炎血清标志物检测方法的成本-效果分析

目的对三种乙型肝炎血清标志物(HBVMs)的测定方法进行成本-效果分析,找出低成本高效率的检测方法。方法分别用ELISA、胶体金免疫层析法(金标)、化学发光法检测血清HBVMs,同时按照各类成本的特征做实际测算。结果三法方法检测结果的符合性良好,其灵敏性依次为化学发光法,ELISA和金标法;单位成本以化学发光法最高,依次为ELISA、金标法,分别为744．17元、317．23和42．22元。批量成本则以 ELISA为最低。结论 ELISA灵敏性高,成本低,适用于普通病人筛查;金标法简便易行,可用于急诊病人快速检测;化学发光法因其价格昂贵,可用于HBVMs为临界值的病人的确证及某些特殊病人等。     

黄热病毒单克隆抗体的制备及免疫反应特性鉴定

目的 制备黄热病毒单克隆抗体并对其生物特性进行鉴定.方法 通过动物免疫、细胞融合、阳性克隆筛选等方法制备黄热病毒单克隆抗体,免疫Balb/c小鼠收集腹水,得到扩大制备的单抗,辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水.IFA法检测单抗与黄热病毒(YFV)、乙脑病毒(JEV)、登革病毒1-4型(DENV1-4)、西尼罗病毒(WNV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)的特异性反应,并对纯化前后的腹水进行效价分析;ELISA方法进行单抗的亚型分类.结果 获得8株黄热病毒的单克隆抗体,均与YFV有特异性反应,1株与JEV有交叉反应,余7株与其它4种虫媒病毒无交叉反应.抗体分型大部分为IgG;纯化后单抗蛋白含量大多在30 mg/ml以上.纯化后的4株单抗效价在1∶25600,3株在1∶12800,仅1株效价较低.结论 本研究目前获得了几株特异性好、效价高的黄热病毒单克隆抗体,为建立黄热病毒快速检测系统奠定了基础.     

不同血清学检测方法对梅毒螺旋抗体检测效果对比分析

目的对比分析五种不同检测方法的特异性、灵敏性,为临床对梅毒螺旋体的检测提供参考依据。方法140例门诊梅毒病人作为阳性组、再选取同期我院接收治疗非梅毒病人作为阴性组（140例）。利用梅毒螺旋体明胶凝集实验（TPPA）、梅毒苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）、梅毒螺旋体血凝实验（TPHA）、梅毒螺旋体特异性抗原血清实验（RPR）、梅毒酶联免疫吸附测定（ELISA）五种检测方法进行重复检测。比较五种方法在阳性组中检测出的阳性率、特异性率、灵敏度以及阴性组中检测出的假阳性率。结果ELISA组具有最高的阳性率（97．14％）,显著高于除TPPA组之外的其他三种检测方法（均P〈0．05）,但假阳性率也较高（10．71％）,TPPA假阳性率最低（0．00％）,显著低于其他检测方法（均P〈0．05）;TRUST灵敏度（85．62％）和特异性（88．64％）最低,均显著低于其他检测方法（均P〈0．05）。结论综合比较,TPPA法用于检测梅毒螺旋抗体阳性率高、假阳性率低、特异性机灵敏度均较高、综合效果最好。ELISA阳性率最高、但易出现假阳性,TRUST不适合用于梅毒螺旋抗体检测。     

烟台市成人社区获得性肺炎病毒病原学分类的研究

对128例确诊为社区获得性肺炎患者的咽拭子采用多重PCR方法进行病毒分类,分析病毒分类与年龄和季节的关系.病毒性肺炎占34.4％ （44/128）.44例病毒阳性患者中,甲型流感病毒占22.7％（10/44）,鼻病毒、腺病毒各占15.9％（各7/44）,副流感病毒1型和人偏肺病毒各占9.1％（各4/44）,乙型流感病毒占6.8％ （3/44）,副流感病毒2型、副流感病毒3型及肠道病毒各占2.3％（各1/44）,另有6例为多重病毒感染（13.6％）.病毒性肺炎在冬春季节发病高,发病人群中20～ 29岁所占比例高.在烟台市成人社区获得性肺炎病原构成中,病毒性肺炎所占比例较大,尤其以甲型流感病毒、鼻病毒和腺病毒为主.     

斑点免疫金渗滤试验检测淋球菌抗原的应用研究

目的：建立一种简易快速的斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）用于检测淋球功抗原。方法：用抗淋球菌单克隆抗体为包被抗体,以胶体金标记兔抗淋球菌ＩｇＧ作探针,制成ＤＩＧＦＡ反应盒。持异性强。与脑膜炎球菌、葡萄球菌、肺炎球菌、大肠杆菌等无交交丸反应,淋球菌抗原最低检出量为６３．００ｎｇ／ｍｌ。经５１例临床分离株测定,敏感性为９８．０４％,特异性１００％。结论：检测淋球菌抗原的ＤＩＧＦＡ是一种简易快速、敏感、     

压电免疫传感器与ELISA、TPPA法在梅毒筛查试验中的对比研究

目的研制压电免疫传感芯片法快速检测梅毒特异性抗体。方法采用吸附-交联法将梅毒基因工程重组抗原固定在镀金石英晶体表面。运用压电免疫传感阵列检测技术快速检测梅毒特异性抗体。以压电免疫传感芯片为实验方法,以ELISA作对照方法,以TPPA作为确认方法进行对比研究。结果30份临床样本,实验方法与对照方法的灵敏度均为100％,特异度分别是85％和75％,一致率分别是90％和83．3％。压电蛋白芯片法与TPPA法检测数据之间存在相关关系,属半定量实验。结论运用压电免疫传感阵列对梅毒螺旋体抗体进行快速检测,具有灵敏度高、特异性好,检测速度快等优点,特别适用于野战条件下献血者血液快速筛查。