耐药人肝癌细胞模型-7721/Adm的建立

目的　培养建立耐药肝癌细胞模型 - 772 1/ Adm并研究其生物学特性 .方法　应用人肝癌细胞株 - 772 1(以下简称772 1细胞 ) ,采用阿霉素 (Adm )大剂量间歇诱导法 ,建立耐药人肝癌细胞模型 - 772 1/ Adm (以下简称 772 1/ Adm ) .观察该细胞的生长规律 ;用 MTT法鉴定该耐药细胞模型对多种抗癌药物的多药耐药性 ;以流式细胞技术检测该耐药细胞模型细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因 (MDR)的表达产物 - P-蛋白 (P- gp)、多药耐药相关蛋白 MRP及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/ GST)的表达等 .结果　 1经 MTT法鉴定 772 1/ Adm细胞较 HCC- 772 1细胞的阿霉素半数致死浓度 (IC5 0 )增大4.6 5倍 ,并对多种抗癌药物产生耐药性 ,其耐药性提高了 2～6倍不等 ;2耐药细胞倍增时间明显延长 ,S期细胞减少 ,而G2期细胞增多 ;3该耐药模型 P- gp,MRP表达有非常显著的升高 (P<0 .0 1) :P- gp表达为 94.6 % ,MRP表达为 6 9.4% ,而 GSH/ GST的表达无明显变化 (P<0 .0 5 ) .结论　 1HCC-772 1/ Adm是一个明确的多药耐药细胞模型 ;2 772 1/ Adm细胞具有耐药细胞的基本生物学特性     

多药耐药基因MDR1表达与肝癌细胞周期的关系

目的探讨多药耐药基因MDR1表迭与耐药肝癌细胞株SMMC7721细胞周期的关系。方法血清饥饿法,药物双阻断法和分裂中期阻断摇落法同步化细胞;RT—PCR检测MDR1mRNA的表达。结果3种细胞同步化方法可分别得到高度同步化的G0／G1期．S期,G2／M期细胞IMDR1在SMMC7721细胞S期有表达,而在G0／G1和G2／M期无表达。结论S期MDR1基因的表达可能在肿瘤多药耐药出现的早期发挥了重要作用。     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性     

肝癌SMMC-7721细胞中PKB对β-连环蛋白的调控

目的　探讨在肝癌SMMC - 772 1细胞中蛋白激酶B(PKB)对 β 连环蛋白 (β catenin)的调控作用。 方法用WesternBlot和RT PCR等研究在肝癌SMMC - 772 1细胞中激活或抑制PKB后 ,β catenin基因及蛋白水平的变化。结果　以H2 O2 活化PKB ,则SMMC - 772 1细胞胞质内游离的 β catenin水平明显升高 ,而与E cadherin结合的 β catenin水平没有变化 ,β catenin的mRNA表达也未见明显改变 ;用Wortmannin抑制PKB的活性 ,可使胞质内 β catenin的含量下降。 结论　肝癌SMMC - 772 1细胞中PKB可以调控胞质中游离的 β catenin ,这为深入研究 β catenin在肝癌发生中的作用机制提供了重要线索     

5—Fu，HCPT诱导人肝癌细胞凋亡的对比性实验研究（摘要）

用不同浓度的传统的化疗药物 5 -氟尿嘧啶 ( 5 -Fu)、羟基喜树碱 (HCPT)作用人肝癌SMMC - 772 1细胞 ,于不同时间 ,用定性的方法观察有无细胞凋亡的产生 ,用定量的方法对两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果进行比较 .结果 :5 -Fu ,HCPT均能诱导人肝癌SMMC - 772 1细胞产生凋亡 ,两药物诱导人肝癌细胞产生的最高凋亡率的作用时间为 48h ,最佳浓度为 7 5 μg/mL ,1mg/mL ,最高凋亡率分别为 3 8 7% ,42 6% .经统计学处理 ,两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果相当 ,而与对照组有显著性差异 .结论 :小剂量的 5 -Fu ,HCPT均可作为凋亡诱导剂…     

重组人穿孔素肽段的体外杀伤肝癌细胞活性

目的 :以肝癌细胞系SMMC 772 1作为靶细胞 ,观察重组人穿孔素 (PFP)N端肽段 (rhPFP N)及C端肽段 (rh PFP C)体外杀伤肿瘤细胞的活性。　方法 :用大肠杆菌表达PFP N和PFP C与谷胱甘肽转移酶 (GST)的融合蛋白 ,对表达产物进行纯化 ,将不同浓度的GST rhPFP C或GST rhPFP N加入体外培养的人肝癌细胞SMMC 772 1,2 4h后用镜检和MTT法检测细胞存活情况。　结果 :用GST rhPFP N或GST rhPFP C处理后 ,可见SMMC 772 1细胞膜溶解和细胞破裂。用MTT法检测 ,实验组A值显著低于对照组 (P <0 .0 0 1)。GST rhPFP C和GST rhPFP N浓度为 2 .5ml L时 ,其杀伤活性分别为 33.38%和 5 .90 %。　结论 :rhPFP C和rhPFP N对人肝癌细胞SMMC 772 1均有明显的杀伤活性 ,rhPFP C对SMMC 772 1的杀伤活性显著高于rhPFP N。     

多药耐药相关蛋白在肝癌耐药细胞系HepG2/Oxal中的作用机制研究

目的:探讨多药耐药(multi-drug resistance,MDR)相关蛋白在肝癌细胞系HepG2及不同浓度耐奥沙利铂(oxaliplatin,Oxal)亚系中的表达及参与肝癌对Oxal耐药的机制。方法:以浓度递增法诱导肝癌细胞系HepG2,建立2.5、5.0μg/ml的Oxal耐药亚系,以半定量RT-PCR法测定MDR、多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance related protein,MRP)和乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在亲代和不同耐药亚系中的mRNA表达,并在蛋白水平以Western blot法验证基因表达的差异性。结果:成功建立了IC50值为15和25倍亲代细胞的Oxal耐药亚系(HepG2/Oxal);在mRNA和蛋白水平,BCRP的表达与HepG2的耐药性呈正相关,而MDR、MRP的表达在耐药的早期升高不明显,随着耐药程度的增加其表达增加。结论:BCRP在HepG2对Oxal获得性耐药中起着重要作用,MDR和MRP在HepG2/Oxal耐药过程中早期起的作用不明显,随着耐药浓度的增加,表达越来越高。     

阿拉瑞林对GnRH受体阳性肝癌细胞Fas/FasL基因表达的影响

目的　探讨Fas Fasl系统在LHRH类似物抑制肝癌细胞增殖过程中的作用。方法　用免疫组织化学方法检测SMMC772 1肝癌细胞中GnRH受体的表达 ;用半定量RT PCR方法 (QRT PCR)观察LHRH类似物对SMMC772 1肝癌细胞中Fas FasL系统mRNA表达的变化。结果　SMMC772 1肝癌细胞呈GnRH及其受体免疫反应阳性。PCR反应产物均与预期长度相符合。Fas FasL mRNA水平随LHRH类似物浓度增加而增大 ,经方差分析各组间有显著性差异 (Fas ,F =16.5 18FasL ,F =111.5 83 ,P <0 .0 1)。结论　SMMC772 1肝癌细胞具有自分泌GnRH的功能 ;Fas FasL系统可能参与了LHRH类似物对肝癌细胞增殖的抑制作用     

微丝在体外培养四种不同细胞表达的形态观察

【目的】探讨微丝在4种不同细胞内的形态分布。【方法】体外培养人胃低分化粘液腺癌(MGC80 3)细胞系、人肝癌(SMMC772 1)细胞系、原代培养人皮肤成纤维细胞(HSF)和大鼠骨髓间充质干细胞(MSC) ;用考马斯亮蓝显示四种细胞内的微丝,通过光学显微镜观察微丝分布的状态。【结果】MGC80 3细胞系和人肝癌SMMC772 1细胞系内,微丝较细且均匀分布,原代培养的HSF和MSC细胞内微丝较为粗大,分布不均匀。【结论】微丝分布与细胞的粘附状态和细胞形态有密切关系。     

黄芩苷体外抑制氟尿嘧啶耐药肝癌细胞的生长及作用机制

目的:观察黄芩苷体外对氟尿嘧啶(Fu)耐药肝癌细胞株生长的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养人肝癌细胞BEL-7402及其耐药细胞BEL-7402/5-Fu,MTT法观察黄芩苷作用后细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞内罗丹明123荧光强度;RT-PCR检测细胞多重耐药MDR1基因表达;Western印迹法检测细胞P-gP蛋白表达;应用Matrigel模型测定细胞黏附率;荧光免疫技术测定细胞β1-整合素(β1-integrin)和上皮钙黏附素(E-CD)蛋白表达.结果:黄芩苷明显抑制肝癌细胞BEL-7402及其耐药细胞BEL-7402/5-Fu的增殖,IC50分别为34.2、36.6 mg/L.5、10 mg/L黄芩苷能部分逆转耐药细胞对Fu的耐药,逆转倍数分别为28.6、46.7;5、10 mg/L黄芩苷增强BEL-7402对Fu敏感性,增敏倍数分别为1.4、2.1.5、10 mg/L黄芩苷增加耐药细胞内药物积聚,降低MDR1基因及P-gP蛋白表达,抑制耐药细胞黏附率,降低耐药细胞β1-整合素表达,促进E-CD蛋白表达;且10 mg/L黄芩苷效果优于5 mg/L(P均＜0.05).结论:黄芩苷体外能抑制肝癌细胞生长及降低细胞黏附性,并能部分恢复肝癌耐药细胞对Fu的敏感性,这可能与其增加细胞内药物浓度、抑制MDR1基因表达有关.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。