蛋白激酶C在精氨酸加压素诱导的心肌成纤维细胞诱导型一氧化氮合酶-一氧化氮系统活性增高中的作用

目的:观察蛋白激酶C(PKC)在精氨酸加压素(AVP)诱导下仔鼠心肌成纤维细胞(CFs)诱导型一氧化氮合酶(i NOS)-一氧化氮(NO)系统活性增高中的作用。方法:胰酶消化法分离培养Sprague-Dawley仔鼠CFs,硝酸还原酶法、分光光度法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CFs NO含量、一氧化氮合酶(NOS)活性和i NOS mRNA表达。结果:AVP显著提高CFs i NOS-NO系统活性;PKC抑制剂chelerythrine剂量依赖性地抑制AVP对CFs i NOS-NO系统活性的提高作用,其中10-6mol/L chelerythrine可将AVP诱导下CFs i NOS-NO系统活性抑制到与基础状态近似水平。结论:PKC参与了AVP诱导下CFs i NOS-NO系统活性的提高,PKC有可能成为阻断或逆转心肌纤维化新的干预靶点。     

卡维地洛对高血压大鼠心肌成纤维细胞一氧化氮合酶-一氧化氮系统的影响

观察基础和卡维地洛干预条件下,自发性高血压大鼠和Wistar大鼠心肌成纤维细胞一氧化氮合酶-一氧化氤系统活性的变化。胰酶消化法分离、培养大鼠心肌成纤维细胞,采用硝酸还原酶法和分光光度法观察基础和卡维地洛干预条件下,培养基中一氧化氮合酶活性及一氧化氮含量的变化。结果发现,在基础状态下72 h,高血压大鼠组心肌成纤维细胞一氧化氮含量(66.6±3 5/μmol/L)及一氧化氮合酶活性(16.7±0.7 kU/L)较Wistar大鼠组(80.8±6.2/μmol/L和29.1±2.1 kU/L)显著降低,并有统计学意义(P<0.01);一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性随卡维地洛浓度的增高而增加,均呈别量依赖性;另外,在不同浓度卡维地洛作用下,高血压大鼠组心肌成纤维细胞的一氧化氮含量随一氧化氮合酶活性的增强而增高,二者呈显著正相关(r=0.911,P<0.01)。结果提示,高血压大鼠心肌成纤维细胞的一氧化氮合酶一氧化氮系统功能异常,表现为一氧化氮合酶活性降低,一氧化氮含量减少。卡维地洛使心肌成纤维细胞内一氧化氯合酶一氧化氮系统活性显著增高,并呈浓度依赖性,其中对高血压大鼠的影响远远高于正常血压组,这可能是卡维地洛抑制血压增高的重要机制之一。     

卡维地洛对高血压大鼠心肌成纤维细胞一氧化氮合酶-一氧化氮系统的影响

该文选择老年高血压病人153例，男134例，女19例，年龄69～91岁(平均77．4岁)。采用ATL800型彩色显像仪，分别测定左心室舒张末期内径(LVDd)、室间隔厚度(IVST)及左心室后壁厚度(PWT)(单位：cm)。然后根据Devereux公式，计算左心室心肌重量(LVM)，即：LVM=1．04[(LVDd—IVST PWT)。-LVDd^3]-13．6，再按体表面积(BSA)计算左心室重量指数(LVMI)，即：LVMI—LVM／BSA。     

心肌成纤维细胞NOS-NO系统活性的变化及其与AVP的关系

目的 :探讨无干预和血管升压素 （AVP）干预条件下 ,心肌成纤维细胞 （CFs）的一氧化氮合酶—氧化氮 （NOS-NO）系统活性的变化。方法 :胰酶消化法分离、培养新生 SD大鼠 CFs,采用硝酸还原酶法和分光光度法观察无干预和 AVP干预条件下 ,不同培养时间对 CFs的 NOS- NO系统活性的影响。结果 :1无干预条件下 ,CFs的 NO含量和 NOS活性随培养时间延长而增高 ,其中 36 h（4 2± 5 μmol· L- 1 ,37± 5 U· m L- 1 ）显著高于 6 h（14± 3μmol·L- 1 ,10± 4U· m L- 1 ）以及 12 h（2 1± 3μm ol· L- 1 ,15± 3U· m L- 1 ） （均 P<0 .0 5 ）。 2 AVP干预条件下 ,CFs的NO含量和 NOS活性也随培养时间延长而增高 ,其中 2 4h（6 5± 6 μmol· L- 1 ,70± 4U· m L- 1 ） ,36 h（6 2± 1μm ol· L- 1 ,6 9± 6 U· m L- 1 ）都显著高于 6 h （34± 4μmol· L- 1 ,36 +2 U· m L- 1 ）以及 12 h的 （4 5± 4μmol· L- 1 ,45± 1U· m L- 1 ） （均 P<0 .0 5 ）。 3AVP干预条件下 CFs的 NO含量和 NOS活性均较无干预条件下显著增高 ,且 NO含量随 NOS活性增高而增高 ,二者呈显著正相关 （无干预条件下 r=0 .837,P<0 .0 1;AVP干预条件下 r=0 .936 ,P<0 .0 1）。结论 :AVP提高 CFs的 NOS- NO系统活性 ,CFs的 NOS- NO系统活性与培养和 AVP?     

反义MAPK寡核苷酸可抑制血管升压素诱导的心肌成纤维细胞一氧化氮合酶活性

目的探讨反义丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）寡核苷酸对血管升压素（VP）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）一氧化氮合酶（NOS）活性的抑制作用。方法分离培养SD仔鼠CFs,采用分光光度法和RT-PCR测定CFs NOS活性和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达。结果VP显著提高CFs NOS活性和iNOS mRNA表达;反义MAPK寡核苷酸剂量依赖性地抑制VP诱导下CFs NOS活性增高和iNOS mRNA表达增强,其中0.2μmol/L和0.3μmol/L反义MAPK寡核苷酸可将VP诱导下CFs NOS活性和iNOS mRNA表达抑制到与对照组近似水平。结论MAPK参与了VP诱导下CFs NOS活性增高和iNOS mRNA表达增强。     

精氨酸升压素对心肌成纤维细胞核转录因子кB活性的影响

目的 探讨精氨酸升压素(AVP)对心肌成纤维细胞(CFs)核转录因子(NF-кB)活性的影响。方法 胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs，分别采用免疫荧光-共聚焦显微镜法和蛋白质印迹技术检测基础状态下和AVP干预下CFs中NF-出的细胞内定位和CFs核中NF-кB的蛋白含量。结果 基础状态下CFs的NF-кB主要分布于细胞浆，细胞核中无NF-кB蛋白表达，AVP干预后CFs的NF-кB主要分布于细胞核，细胞浆中NF-кB显著减少。结论 AVP能够激活CFs的NF-кB，使其从细胞浆转位至细胞核，提示AVP对CFs的调节作用可能是通过NF-кB激活通路发挥的。     

精氨酸升压素对心肌成纤维细胞核转录因子κB活性的影响

目的探讨精氨酸升压素(AVP)对心肌成纤维细胞(CFs)核转录因子(NF-κB)活性的影响.方法胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs,分别采用免疫荧光-共聚焦显微镜法和蛋白质印迹技术检测基础状态下和AVP干预下CFs中NF-κB的细胞内定位和CFs核中NF-κB的蛋白含量.结果基础状态下CFs的NF-κB主要分布于细胞浆,细胞核中无NF-κB蛋白表达,AVP干预后CFs的NF-κB主要分布于细胞核,细胞浆中NF-κB显著减少.结论 AVP能够激活CFs的NF-κB,使其从细胞浆转位至细胞核,提示AVP对CFs的调节作用可能是通过NF-κB激活通路发挥的.     

精氨酸升压素对心肌成纤维细胞核转录因子κB活性的影响

目的　探讨精氨酸升压素 (AVP)对心肌成纤维细胞 (CFs)核转录因子 (NF κB)活性的影响。方法　胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs,分别采用免疫荧光 -共聚焦显微镜法和蛋白质印迹技术检测基础状态下和AVP干预下CFs中NF κB的细胞内定位和CFs核中NF κB的蛋白含量。结果　基础状态下CFs的NF κB主要分布于细胞浆 ,细胞核中无NF κB蛋白表达 ,AVP干预后CFs的NF κB主要分布于细胞核 ,细胞浆中NF κB显著减少。结论　AVP能够激活CFs的NF κB ,使其从细胞浆转位至细胞核 ,提示AVP对CFs的调节作用可能是通过NF κB激活通路发挥的。     

反义寡核苷酸对精氨酸升压素诱导心脏成纤维细胞β1整合素表达的抑制作用

目的　探讨反义寡核苷酸对精氨酸升压素 (AVP)诱导心脏成纤维细胞 (CFs) β1整合素表达及细胞增殖的影响 ,为防治AVP诱导的心肌纤维化提供理论依据。方法　设计合成反义、正义及错配 β1整合素寡核苷酸片段 ,转入体外培养的CFs中 ,采用原位ELISA技术检测不同状态下 β1整合素表达水平 ,应用四氮唑盐 (MTT)比色法检测细胞增殖。结果　 (1)随着AVP浓度的增加 ,CFs表面β1整合素表达水平呈上升趋势 ,各实验组之间吸光度比较差异有显著意义 (F =4 93;P <0 0 1)。其中 1× 10 -7mol/LAVP和 1× 10 -6mol/LAVP组的CFsβ1整合素表达水平分别为 (0 2 5± 0 0 1)A值和(0 30± 0 0 4 )A值 ,均明显高于对照组的 (0 2 1± 0 0 2 )A值 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;(2 )反义链 +AVP组的CFsβ1整合素表达水平为 (0 19± 0 0 2 )A值 ,反义链与AVP共同作用组明显低于AVP组的 (0 2 5± 0 0 1)A值 ,并有非常显著性差异 (P <0 0 1)。正义链 +AVP组和错配链 +AVP组的CFsβ1整合素表达水平分别为 (0 2 5± 0 0 1)和 (0 2 5± 0 0 2 )A值 ,均明显高于反义链与AVP共同作用组 (P <0 0 1)。 (3)空白对照组、AVP组、反义链 +AVP组、正义链 +AVP组和错配链 +AVP组CFsMTT法分别为 (0 36± 0 0 1)OD值、(0     

促红细胞生成素对新生大鼠心脏成纤维细胞氧化应激时一氧化氮合酶系统的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对心脏成纤维细胞(CFs)氧化应激时一氧化氮合酶(NOS)系统的影响,以及PI3-K/Akt信号途径在其中的作用。方法:应用胰酶和胶原酶双酶法分离培养新生大鼠CFs,EPO、过氧化氢(H2O2)和PI3-K抑制剂LY294002不同因素干预。化学酶法检测CFs培养液中的NO浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blot检测Akt、p-Akt、eNOS、iNOS蛋白的表达。结果:氧化应激使CFs中iNOS的表达显著上调,活性增强;eNOS蛋白的表达明显下降。同时CFs培养液中NO的合成增加显著,达到(25.94±2.57)μmol/L,是对照组的4倍多(P<0.01)。EPO显著抑制CFs氧化应激时iNOS蛋白的表达,同时上调eNOS蛋白,总的NO浓度也显著下降。Akt磷酸化形式p-Akt的表达水平也明显提高。PI3-K抑制剂LY294002能阻断EPO促进eNOS和p-Akt蛋白表达的作用,但EPO抑制iNOS的作用不能完全被阻断。结论:EPO能促进新生大鼠CFs氧化应激时eNOS蛋白的合成,抑制iNOS蛋白的表达。其促进eNOS的表达是通过激活PI3-K/Akt细胞信号途径来实现,抑制iNOS的机制有待进一步探讨。     

醛固酮对血管外膜诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮通路影响的实验研究

目的观察醛固酮对血管外膜诱导型一氧化氮合酶（iNOS）／一氧化氮（NO）通路的影响及作用机制。方法取sD大鼠胸主动脉外膜,分别给予不同浓度醛固酮（ALD）10^-8～10^-6mol／L、ALl）＋螺内酯以及ALD＋RU486进行孵育,此外在给予脂多糖激活血管外膜iNOS／NO的情况下,观察以上各组药物刺激后iNOS／NO系统的变化。与上述药物共同孵育6h后通过Griess法测定相对稳定的代谢产物硝酸盐和亚硝酸盐（NOx）代表NO的产生量,采用[^3H]-L-精氨酸标记的同位素法测定外膜iNOS活性。结果（1）NOx产生的变化：ALD刺激后血管外膜NOx生成无明显变化。用螺内酯拮抗盐皮质激素受体后,高浓度ALD组（10～～10^-6mol／L）血管外膜NOx产生呈下降趋势（P〈0．05）。用RU486拮抗糖皮质激素受体后随ALD浓度增加NOx生成量也呈浓度依赖性增加（P〈0．01）。脂多糖刺激后上述趋势更为明显。（2）iNOS活性的变化：ALD刺激后iNOS活性无明显变化,螺内酯刺激后血管外膜iNOS活性有下降趋势,但无统计学意义。而RU486刺激后血管外膜iNOS活性显著增加（P〈0．05）。同时给予脂多糖刺激后,螺内酯＋ALD组血管外膜iNOS活性显著下降（P〈0．01）,ALD＋RU486组血管外膜iNOS活性显著增加（p〈0．05）。结论ALD主要通过盐皮质激素受体和糖皮质激素受体通路两种途径直接影响血管外膜iNOS／NO系统,醛固酮作用于盐皮质激素受体能够诱导iNOS激活、刺激NO产生,作用于糖皮质激素受体抑制iNOS／NO激活。     

Temporal expression of hepatic inducible nitric oxide synthase in liver cirrhosis

AIM: Nitric oxide (NO) has been implicated in the pathogenesis of liver cirrhosis. We have found inducible nitric oxide synthase (iNOS) can be induced in hepatocytes of cirrhotic liver. This study further investigated the temporal expression and activity of hepatic iNOS in cirrhosis development. METHODS: Cirrhosis was induced in rats by chronic bile duet ligatjon (BDL). At different time points after the operation, samples were collected to examine NO concentration, liver function, and morphological changes. Hepatocytes were isolated for determination of iNOS mRNA, protein and enzymatic activity. RESULTS: Histological examination showed early cirrhosis 1-2 wk after BDL, with advanced cirrhosis at 3-4 wk. Bilirubin increased dramatically 3 d after BDL, but decreased by 47% on d 14. Three weeks after BDL, it elevated again. Systemic NO concentration did not increase significantly until 4 wk after BDL, when ascites developed. Hepatocyte iNOS mRNA expression was identified 3 d after BDL, and enhanced with time to 3 wk, but reduced thereafter. iNOS protein showed a similar pattern to mRNA expression. iNOS activity decreased from d 3 to d 7, but increased again thereafter till d 21. CONCLUSION: Hepatic iNOS can be induced in the early stage, which increases with time as cirrhosis develops. lts enzymatic activity is significantly correlated with protein expression and histological alterations of the liver, but not with systemic NO levels, nor with absolute values of liver function markers.     

精氨酸加压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用

目的 :探讨精氨酸加压素 （AVP）对大鼠心脏成纤维细胞 （CFs）胶原合成的影响。方法 :采用胰酶消化法分离、培养新生 SD大鼠 CFs,3H-脯氨酸掺入法和羟脯氨酸比色法分别观察不同浓度 AVP及其 V1 受体拮抗剂 [d（CH2 ） 5 Tyr2 （Me） ]AVP对 CFs的影响。结果 :1CFs3H-脯氨酸掺入率随着 AVP浓度的增加而增高 ,其中 10 - 7mol/ L,10 - 6 mol/ L AVP组的 3H-脯氨酸掺入率分别为 （5 41± 96 ） cpm/ 5 0 0 0 cells和 （5 6 5± 72 ） cpm/ 5 0 0 0 cells,较对照组 （16 6± 31） cpm/ 5 0 0 0 cells明显增高 （均 P<0 .0 1） ;10 - 7m ol/ L AVP+ 10 - 7mol/ L[d（CH2 ） 5 Tyr2 （Me） ]AVP组3H -脯氨酸掺入率 （2 6 8± 6 4） cpm/ 5 0 0 0 cells较 10 - 7m ol/ L AVP组明显降低 （P<0 .0 1）。 2 CFs培养上清光吸收值（A值 ）随着 AVP浓度的增加而增高 ,其中 10 - 7m ol/ L ,10 - 6 m ol/ L AVP组的培养上清 A值分别为 0 .2 2± 0 .0 1和0 . 2 4± 0 .0 1,明显高于对照组 0 .2 0± 0 .0 1,有统计学意义 （均 P <0 .0 1） ;10 - 7m ol/ L AVP+ 10 - 7mol/ L [d（CH2 ） 5 Tyr2 （Me） ]AVP组的 A值为 0 .19± 0 .0 1,明显低于 10 - 7mol/ L AVP组 （P<0 .0 1）。结论 :AVP促进 SD大鼠 CFs胶原合成 ,其作用可能与 V1 受体介导有关     

Chronic ethanol ingestion increases aortic endothelial nitric oxide synthase expression and nitric oxide production in the rat

Background:  Chronic alcohol consumption perturbs cellular function in a variety of organ systems. Previous studies have suggested that moderate alcohol consumption reduces vascular disease, whereas heavier alcohol consumption may worsen it. The mechanisms for these vascular effects of chronic alcohol ingestion continue to be defined and constitute the focus of this study.
Methods:  Male Sprague Dawley rats were fed an isocaloric, Lieber-Decarli liquid diet containing either ethanol (36% calories) or Maltose–Dextrin (substituted for ethanol) for 6 weeks. Telemetric blood pressure measurements were taken before and after ethanol feeding. After the rats were killed, the aortas were analyzed for endothelial nitric oxide (NO) synthase expression and NO production.
Results:  Chronic ethanol ingestion decreased mean arterial pressure and increased aortic NO production as demonstrated by direct ex vivo measurements using iron diethyldithio-carbamic acid as well as analysis of nitrosyl-hemoglobin (NO-Hb) levels. Consistent with these assays of vascular NO production, endothelium-dependent relaxation responses to acetycholine (Ach) were enhanced in ethanol-fed animals. Aortic endothelial nitric oxide synthase expression was also increased by chronic ethanol ingestion.
Conclusions:  These findings demonstrate that a regimen of chronic alcohol ingestion in the rat produced generally salutary effects in the systemic vasculature following a 6-week treatment regimen. These findings extend previous in vitro studies to demonstrate that alcohol has potent effects on vascular endothelial nitric oxide synthase expression, NO production, and vascular function. Consistent with previous reports, these findings confirm that alcohol-induced alterations in the production of reactive nitrogen species play an important role in the pathogenesis of alcohol-mediated tissue effects.     

大鼠同种异位心脏移植术后血清NO及心肌组织NOS活性的观察

目的　研究内源性一氧化氮（ＮＯ）与心脏移植急性排斥反应的关系。方法　本研究以大鼠同种异位心脏移植为研究对象，观察了术后３、５、７ 天的血清ＮＯ 水平以及心肌组织一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的活性。结果　在急性排斥反应发生的早期开始血清ＮＯ 水平就已显著升高（术后３、５、７ 天皆为Ｐ ＜ ０．０１）；心肌组织ＮＯＳ活性亦显著高于对照组（术后３ 天Ｐ ＜ ０．０５，术后５ 天Ｐ＜ ０．０１，术后７ 天Ｐ ＜ ０．０５）。结论　血清ＮＯ 水平的检测对于心脏移植急性排斥反应的发生可能具有早期的辅助诊断意义。     

香菇多糖对巨噬细胞一氧化氮合酶活性和还原型谷胱甘肽的影响

目的　研究香菇多糖 (LTN)对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)活性和细胞内还原型谷胱甘肽 (GSH)水平的影响及其关系 ,探讨 L TN的免疫调节作用机制。方法　 1观察 LTN诱导小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS活性和细胞内 (GSH)水平的影响 ;2观察 m RNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和 NOS抑制剂对巨噬细胞 i NOS活性和细胞内 GSH水平的影响 ;3观察 GSH去除剂对巨噬细胞 i NOS活性的影响。结果　 1 LTN诱导小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS活性增加和细胞内 GSH减少 ;2 3种抑制剂抑制 L TN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS活性增加和细胞内 GSH减少 ;3GSH去除剂抑制 LTN诱导的巨噬细胞 i NOS活性。结论　 LTN能增加小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS的活性 ,并同时消耗细胞内的 GSH,提示细胞内GSH可能起到调节巨噬细胞 i NOS活性和保护宿主细胞免受 NO介导的细胞毒作用。