组织激肽释放酶及其基因与肾脏疾病

组织激肽释放酶是激肽系统的重要组成部分，参与一系列肾脏的生理、病理变化，与肾脏疾病的发生发展有着密切的联系。本文拟就有关组织激肽释放酶及其基因与肾脏疾病的研究现状及进展作一综述。     

组织激肽释放酶及其基因与肾脏疾病

组织激肽释放酶是激肽系统的重要组成部分 ,参与一系列肾脏的生理、病理变化 ,与肾脏疾病的发生发展有着密切的联系。本文拟就有关组织激肽释放酶及其基因与肾脏疾病的研究现状及进展作一综述。     

组织激肽释放酶基因7在前列腺癌组织中的表达

目的 探讨组织激肽释放酶基因7(KLK7)在不同前列腺组织中的表达情况.方法运用逆转录聚合酶链反应法检测正常前列腺(5例)、良性前列腺增生(BPH)及BPH细胞株(BPH1,13例)、前列腺癌及前列腺癌细胞株(8例)的上皮细胞中KLK7mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测不同前列腺组织上皮细胞中KLK7蛋白表达水平;免疫组化分析正常前列腺(20例)、BPH(50例)、前列腺癌(103例)组织中KLK表达水平.根据染色强度分为4个等级(-,+,++,+++)进行半定量分析,染色强度++及+++者判定为阳性.结果 正常组、BPH组和前列腺癌组KLK7 mRNA表达相对值分别为0.59、0.52、0.02,组间比较差异有统计学意义(F=13.03,P＜0.01),前列腺癌上皮中KLK7 mRNA表达下调(P＜0.01),正常前列腺和BPH上皮中KLK7 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).KLK7蛋白在正常前列腺、增生前列腺、DU145、LNCaP、PC3、22RV1、BPH细胞株中表达水平相对值分别为0.22、0.40、0.01、0.05、0、0.03、0.14.免疫组化染色结果 显示正常前列腺组织、BPH组织、前列腺癌中KLK7蛋白表达阳性率分别为65.0%(13/20)、76.0%(38/50)、17.5%(18/103),前列腺癌组与前2组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),前2组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 KLK7在前列腺癌组织中表达下调,提示KLK7在前列癌的发生和进展中可能起一定作用.     

人类腺激肽释放酶在前列腺癌诊断中的应用

前列腺癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，PSA是目前应用最广泛的前列腺癌瘤标，但其诊断准确率有限，最近研究发现人类腺激肽释放酶（hk2)对诊断位于诊断灰区的前列腺癌具有价值。本文综述了hk2的生物学特性，hk2及其相关指标尤其hk2/fPSA对前列腺癌的诊断价值。目前应用hk2的局限性。     

激肽释放酶激肽系统在大鼠阴茎海绵体表达的研究

目的:研究激肽释放酶激肽系统在成年大鼠阴茎海绵体的表达。方法:利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术分别检测SD大鼠阴茎和心脏组织中组织型激肽释放酶Ⅰ和激肽B2型受体mRNA的表达情况。结果:大鼠心脏与阴茎海绵体组织中均表达组织型激肽释放酶Ⅰ和激肽B2型受体mRNA,两者有几乎相同的表达水平,差异无显著性(P>0.05)。结论:在生理状态下,激肽释放酶激肽系统存在于阴茎海绵体组织中,而且与心血管系统的表达水平相当。     

激肽释放酶-激肽系统与高血压

激肽释放酶—激肽系统由激肽、前体激肽原及其前体等组成，依靠与其受体结合发挥生物学作用；激肽主要通过血管紧张素转化酶、中性内肽酶、氨基端多肽酶和梭基端多肽酶分解；缓激肽通过扩血管和调节水电解质排泄而起到稳定血压作用，血管舒缓素-激肽系统缺陷或功能减低是高血压的发病的重要因素；血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ1型受体阻滞剂、氮基端多肽酶P抑制剂、羧基端多肽酶抑制剂和中性内肽酶抑制剂的降压作用与增加缓激肽水平有关，血管紧张素转换酶和中性内肽酶双重抑制能起到更好的降压效果。     

人组织激肽释放酶12在胃癌中表达的临床意义

目的 探讨人组织激肽释放酶12(KLK12)在胃癌患者外周血血清及肿瘤组织内过度表达的临床意义.方法 收集2008年6月至2009年5月上海交通大学医学院附属仁济医院行胃癌根治术患者的癌组织标本,应用RT-PCR和Western blot检测KLK12在行胃癌根治术患者的胃癌组织、癌旁组织和正常组织的表达情况,检测胃癌患者外周血血清KLK12含量,并以同期非胃癌手术患者外周血血清KLK12的含量作为对照.采用t检验、单因素方差分析.结果 胃癌组外周血KLK12含量为(0.958±0.112)nmol/L,对照组为(0.675±0.101)nmol/L,两组比较,差异有统计学意义(t=13.27,P＜0.05).胃癌低分化者外周血KLK12含量为(1.027±0.165)nmol/L,高分化者为(0.937±0.108)nmol/L.胃癌组织、癌旁组织和正常组织中KLK12 mRNA表达水平分别为39±9、28±6和19±3;蛋白表达水平分别为33±8、30±5和23±4,3者比较,差异有统计学意义(F=3.48,1.48,P＜0.05).结论 KLK12基因在胃癌患者的血清和肿瘤组织中存在过高表达,检测KLK12可能在胃癌诊治中发挥重要作用.     

人类腺激肽释放酶在前列腺癌诊断中的应用

前列腺癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤 ,PSA是目前应用最广泛的前列腺癌瘤标 ,但其诊断准确率有限。最近研究发现人类腺激肽释放酶 (hk2 )对诊断位于诊断灰区的前列腺癌具有价值 ,本文综述了hk2的生物学特性、hk2及其相关指标尤其hk2 /fPSA对前列腺癌的诊断价值 ,目前应用hk2的局限性。     

人组织激肽释放酶6在前列腺癌中的表达和意义

目的初步探讨人组织激肽释放酶6(Kallikrein 6,KLK6)在前列腺癌中的表达和意义。方法搜集徐州医学附属医院泌尿外科2010-06—2013-10行前列腺根治手术患者组织标本共65例,其中40例前列腺癌(Prostate Cancer,PCa),25例为前列腺增生组织,应用免疫组织化学两步法,检测组织中KLK6蛋白表达情况。结果 PCa患者组织中KLK6阳性表达率为75%,前列腺增生(Hyperplasia of prostate,BPH)组织KLK6阳性表达率为24%,两者比较癌组织显著高于增生组织(P0.01);前列腺癌中低危患者KLK6阳性表达率为58.25%,中高危患者为75%,两者比较中高危患者明显高于低危患者(P0.05)。结论 KLK6在前列腺癌组织表达明显高于前列腺增生,中高危患者明显高于低危患者,KLK6基因可能在前列腺癌诊断和预后判断中存在一定价值。     

激肽释放酶-激肽系统与高血压

激肽释放酶-激肽系统由激肽、前体激肽原及其前体等组成,依靠与其受体结合发挥生物学作用;激肽主要通过血管紧张素转化酶、中性内肽酶、氨基端多肽酶和梭基端多肽酶分解;缓激肽通过扩血管和调节水电解质排泄而起到稳定血压作用,血管舒缓素-激肽系统缺陷或功能减低是高血压的发病的重要因素;血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II1型受体阻滞剂、氨基端多肽酶P抑制剂、羧基端多肽酶抑制剂和中性内肽酶抑制剂的降压作用与增加缓激肽水平有关,血管紧张素转换酶和中性内肽酶双重抑制能起到更好的降压效果.     

人乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶基因的表达和意义

目的：探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase，GCS）基因在人乳腺癌细胞的表达及意义。方法：体外培养人耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7／ADR和人敏感乳腺癌细胞MCF-7，MTT法检测MCF-7／ADR细胞耐药倍数，RT-PCR法检测两种细胞GCSmRNA的表达，免疫细胞化学法检测GCS蛋白表达水平。结果：MCF-7／ADR细胞耐药倍数为53倍，RT—PCR检测结果显示两种细胞均有GCSmRNA表达，且MCF-7／ADR细胞GCSmRNA表达水平较MCF-7细胞有显著升高（P〈0．05），免疫细胞化学结果显示二者GCS蛋白均有表达且表达水平有显著差异（P〈0．05）。结论：GCS基因在乳腺癌细胞中表达，GCS对于乳腺癌的发生发展具有重要作用，GCS在耐药乳腺癌细胞的高表达证明GCS与肿瘤耐药密切相关，为肿瘤耐药的逆转治疗提供了新的方向。     

乳腺癌易感基因1、Ki-67在青年乳腺癌患者组织中的表达及其临床意义

目的 探讨乳腺癌易感基因1(BRCA1)和Ki,67蛋白在青年乳腺癌患者组织中的表达及临床意义.方法 选取年龄≤35岁青年乳腺癌89例,对照组为乳腺纤维腺瘤35例及年龄＞35岁的乳腺癌85例,运用免疫组织化学法检测Ki-67和BRCA1蛋白的表达,并结合临床病理因素进行相关分析.结果 在维吾尔族青年乳腺癌患者中,BRCA1的表达(39.33％)低于乳腺纤维腺瘤(74.29％)及年龄＞35岁组(58.82％,P＜0.05),Ki-67的表达(71.91％)高于乳腺纤维腺瘤(28.57％)及年龄＞35岁组(57.64％,P＜0.05);青年乳腺癌患者的病理组织学分级、淋巴结转移、原癌基因表皮生长因子受体2(Her-2)表达与BRCA1及Ki-67表达相关(P＜0.05);青年乳腺癌患者Ki-67与BRCA1蛋白的表达呈负相关(r=-0.265,P＜0.05).结论 青年乳腺癌中BRCA1和Ki-67蛋白表达的异常及BRCA1的失表达,可能与发病早、恶性度高有关.     

化疗前后乳腺癌细胞基因表达谱的变化

目的探讨乳腺癌细胞经化疗药物处理前后分子水平变化特征。方法应用含14000个基因的人cDNA芯片检测经阿霉素（ADM）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、甲氨喋呤MTX）及AF（ADM＋5-Fu）和MF（MTX＋5-Fu）处理前后MCF-7和MDA-MB 231细胞基因表达谱的变化。结果两种细胞经不同药物处理后基因表达的变化有差异，通过cDNA芯片检测，得到了每种细胞经不同药物处理后差异表达的基因，并初步筛选出经ADM处理后在两个细胞株中均差异表达且表达趋势相同的基因10个，5-Fu处理组49个，MTX处理组8个，AF处理组10个以及MF处理组58个。这些基因涉及细胞骨架、细胞增殖、分化及周期调控、基因转录和翻译以及细胞物质与能量代谢等多方面。结论药物作用所致细胞分子水平的变化复杂，涉及多种途径、多个基因，芯片技术可为筛选化疗敏感基因提供全面、可靠的技术支持。     

稳定表达PTEN抑癌基因的炎性乳腺癌细胞系MDA-MB-468的建立和鉴定

目的建立稳定表达外源性PTEN(phosphataseandtensinhomologdeletedfromchromosometen)基因的人炎性乳腺癌MDA MB 468细胞系。方法用脂质体lipofectamine2000转染法,将野生型PTEN基因导入高转移性炎性乳腺癌细胞系MDA MB 468,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,应用RT PCR、免疫组化方法及Westernblot分析目的基因及其蛋白表达。结果野生型PTEN基因成功地导入炎性乳腺癌细胞系MDA MB 468,转染细胞稳定表达PTEN蛋白,PTEN蛋白分布于细胞质。结论MDA MB 468炎性乳腺癌细胞株能稳定表达外源性PTEN基因。     

乳腺癌组织中COX-2与IL-8表达的相关性及临床意义

目的：探讨乳腺癌组织中环氧化酶-2（COX-2）和白细胞介素-8（L-8）表达的相关性及临床意义。方法：采用免疫组织化学法对60例乳腺癌患者病理组织中的COX-2和IL-8进行检测，并与31例乳腺良性疾病对照，分析其相关性，以及二者与肿瘤大小、浸润程度、TNM分期、淋巴结转移及雌激素受体（estrogen receptor，ER）和孕激素受体（progesteronreceptor，PR）表达等生物学行为的关系。结果：乳腺癌组织中COX-2和IL-8阳性表达率分别为66．7％、60．0％均显著高于对照组（P=0．0006、P=0．0002），且二者表达存在明显正相关（r=0．433，P〈0．001）。COX-2和IL-8阳性细胞表达率与肿瘤大小、浸润程度、TNM分期、淋巴结转移情况均有明显差异（P均〈0．05），而与ER和PR的表达状态无明显相关（P均〉0．05）。结论：COX-2和IL-8在乳腺癌组织中过度表达且呈正相关，提示乳腺癌组织中COX-2和IL-8存在相互调控机制，共同促进肿瘤的发生和发展。     

转染ERα基因对MDA-MB-231乳腺癌细胞白细胞介素-8表达的影响

目的 通过转染GFP-C1-ERα质粒建立稳定表达ERα的MDA-MB-23l细胞株,观察ERα对该细胞株白细胞介素(IL)-8表达的影响.方法 pEGFP-C1-ERα质粒经酶切和测序后转染MDA-MB-231细胞,使用G418筛选出稳定表达的克隆并鉴定.使用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定稳定转染ERα的MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231细胞及MCF-7细胞的IL-8mRNA的表达,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞上清液IL-8的浓度.结果 成功建立ERα阳性表达的MDA-MB-231细胞株,转染ERα的细胞株IL-8 mRNA的合成(105±16)ng/L明显低于MDA-MB-231细胞(195±32)ng/L(P<0.05),但仍然高于MCF-7细胞(32±4)ng/L(P<0.05),转染后细胞上清液IL-8浓度较未转染细胞明显降低,分别为(3499±312)ng/L和(6788±427)ng/L(P<0.05),但仍然高于MCF-7细胞(1846±44)ng/L(P<0.05).结论 稳定转染ERα基因抑制了MDA-MB-231细胞的IL-8的合成和分泌.     

乳腺癌中HER-2基因的扩增及意义

目的 研究乳腺浸润性导管癌HER-2基因的扩增情况及其与乳腺癌临床病理因素的关系。方法 采用荧光原位杂交法（FISH）检测254例乳腺浸润性导管癌组织中HER-2基因的扩增情况,分析其与乳腺癌的肿瘤大小、组织学分级、腋淋巴结转移情况、病理分期、雌、孕激素受体表达以及该基因蛋白表达等的关系。结果 FISH检测到254例乳腺癌中有175例发生HER-2基因高扩增,该基因高扩增与乳腺癌的肿瘤大小、组织学分级、病理分期、腋淋巴结转移数、雌孕激素受体表达、HER-2蛋白表达均有关（P均＜0.05）,与患者的年龄无关 (P＞0.05)。结论 乳腺癌中HER-2基因的高扩增导致其蛋白过度表达,HER-2基因高扩增与乳腺癌的生长、恶性程度有关,是判断乳腺癌生物学行为的重要指标。联合检测HER-2基因扩增情况及其他指标有助于指导临床判断乳腺癌预后并制定治疗方案。     

凋亡素基因在人乳腺癌细胞中的表达及诱导凋亡作用

目的 构建pcDvp3重组真核表达质粒，并观察凋亡素基因(vp3)在人乳腺癌细胞一435中的表达及诱导凋亡作用。方法 (1)扩增vp3基因，与pcDNA3．1连接构建pcDvp3重组真核表达载体，并测序；(2)将pcDvp3和pcDNA3．1转染Hela细胞，免疫荧光技术检测凋亡素蛋白表达；(3)将pcDvp3和pcDNA3．1空质粒转染人乳腺癌细胞435和正常细胞，转染48h后用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡。结果 (1)核酸序列分析证明克隆的vp3基因与文献报道一致，且正确插入载体中，表明真核表达载体pcDvp3构建成功；(2)转染pcDvp3的Hela细胞48h后可见明显的荧光，而pcDNA3．1组未见；(3)电镜可见细胞明显形态改变及凋亡小体形成；电泳见典型梯形条带；流式细胞仪检测出现凋亡峰，于转染48h后达最高，凋亡百分率为14．42％；而转染pcDNA3．1细胞未见上述改变。结论 vp3在体内能够表达并有效地诱导人乳腺癌．435细胞凋亡。     

基质溶解因子基因在人直肠癌中的表达及其临床意义

目的通过检测基质溶解因子（MMP-7）基因在直肠癌中的表达，探讨其在直肠癌进展中的作用。方法86对直肠癌肿瘤组织与正常直肠黏膜组织标本自身配对分成肿瘤组与正常组，提取总RNA，采用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应（Quantitative-Real-Time RT-PCR）法检测MMP-7基因的表达。结果MMP-7基因表达比值大于1的52例（62．7％，52／83），在肿瘤组的表达水平高于正常组（P〈0．01）。MMP-7基因表达比值大于1的例数在Dukes C＋D期与Dukes A＋B期中分别为34例（72．3％，34／47）和18例（50．0％，18／36，P〈0．05）。MMP-7基因表达与组织学分化程度（r=-0．635）和CEA水平（r=0．580）相关。结论MMP-7基因在直肠癌中的表达上调。MMP-7在直肠癌的浸润与转移中具有重要作用。     

Clinical significance of tumor-infiltrating lymphocytes in neoplastic progression and lymph node metastasis of human breast cancer

To investigate the clinical significance of tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) within the tumor milieu, we quantitatively measured and compared the subpopulations of TILs in 24 patients with stage I–III breast carcinoma. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), normal breast parenchyma-infiltrating lymphocytes (NILs), and TILs were isolated from tissue specimens and quantified by flow cytometry. The results showed that increased proportion of CD8⁺ T cells, with decreased proportion of CD4⁺ T cells, was significant in gated CD3⁺ TILs as compared to autologous NILs or PBMCs (P < 0.001). The tumor-infiltrating CD8⁺ T cells significantly increased with stage progression, reflected in a more strongly decreased CD4/CD8 percentage (P = 0.003). The CD4/CD8 percentage of TILs was strongly correlated with lymphovascular permeation and subsequent lymph node metastasis (P < 0.001). Increased percentages of tumor-infiltrating CD8⁺ T cells with decreased CD4/CD8 percentages are of prognostic importance for cancer progression in human breast cancer.