兔抗人心肌肌钙蛋白I抗体的制备与鉴定

目的制备兔抗人心肌肌钙蛋白I抗体并进行鉴定。方法用人工合成的cTnI蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果此次获得的抗血清 ELISA方法检测抗体滴度达到了1:16 000,检测cTnI的灵敏度最低为10μg/L。Western blot检测表明该抗体可有效识别原核细胞表达及大鼠心脏组织提取物中存在的cTnI蛋白。结论应用该方法成功制备了人cTnI的多克隆抗体,为进一步研究cTnI的结构与功能打下基础,并为有效制备高特异性的单克隆抗体提供借鉴。     

特异性RBBP10多克隆抗体的制备

目的：制备RBBP10多克隆抗体。方法：用纯化的RBBP10蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体，间接ELISA法检测抗体效价，Western印迹检测抗体特异性。结果：抗血清效价可达1：1000以上。结论：经Western印迹检测证明抗体效价高，特异性强．此抗体可通过免疫组化方法检测RBBP10蛋白在各种肿瘤中的表达。具有一定的应用价值。     

Myosin-Vc特异性片段的原核表达及其抗血清的制备

目的 原核表达Myosin-Vc(Myo5c)蛋白并纯化,制备小鼠、家兔多克隆抗体,为探索MyoSc在病毒感染中的作用提供研究工具.方法 采用RT-PCR方法从人胃粘膜组织中克隆编码Myo5c特异性蛋白的基因片段,构建该片段与6×His标签的融合蛋白表达质粒pQE-31/Myo5c,原核表达与蛋白纯化后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备Myo5c抗血清.采用ELISA检测抗体效价,Western blot和间接免疫荧光染色检验抗体特异性.结果 获得Myo5c特异性片段约42×103的纯化蛋白.ELISA检测小鼠和家兔抗血清效价分别为1:12 800、1:6 400.Western blot和间接免疫荧光染色显示所制备的抗体能特异性识别Myo5c.结论 获得Myo5c特异性蛋白,并成功地制备了Myo5c特异性的小鼠和家兔抗血清.     

兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶多克隆抗体的制备

目的：制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶（NRDR）多克隆抗体。方法：应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果：免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1：2000时检测极限为160rig蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论：获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好。为NRDR的进一步研究打下基础。     

人肝脏微粒体蛋白凝胶免疫多克隆抗体的制备

目的制备人肝微粒体蛋白多克隆抗体,为进一步研究微粒体蛋白的功能及制备单克隆抗体打下基础.方法用含人肝微粒体高丰度蛋白的蛋白凝胶免疫家兔,再用ELISA和Western blot方法检测血清效价和抗体特异性.结果 2只家兔均产生了高效价的抗血清,Western blot结果显示,抗血清可以与相应蛋白结合.结论用含人肝微粒体高丰度蛋白的蛋白凝胶免疫的2只家兔均获得了高效价的抗血清,为深入研究该蛋白的定性、定量及定位奠定了基础,并为将来进行单克隆抗体的制备做前期技术支持.     

抗泡球蚴重组Em18抗原多克隆抗体的纯化与鉴定

目的：制备抗泡球蚴18（Em18）抗原多克隆抗体,纯化并鉴定.方法：表达并纯化rEm18-GST蛋白.用纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰白兔获得抗rEm18-GST的多克隆抗体IgG,采用ELISA法检测抗体效价,进一步纯化抗体,获得抗Em18特异性多克隆抗体IgG,用Western blot及ELISA法检测并进行初步鉴定.结果：免疫制备获得兔抗rEm18-GST抗体,随着免疫次数的增加,抗体滴度不断升高,于第10周达到最高.ELISA检测抗体效价为1∶51 200.Western blot及ELISA法鉴定表明Em18-GST抗体去除了与GST的交叉反应.结论：获得了去除与GST交叉反应的抗Em18多克隆抗体,为进行噬菌体肽库筛选奠定基础.     

小鼠IFIT1多克隆抗体的制备

目的 获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1 )特异性多克隆抗体.方法 扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,用Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价.结果 纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1∶12 800.结论 MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体.     

新耐药基因HA117多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备HA117多克隆抗体。方法以HA117表达质粒pAdTrack-HA117为模板,PCR扩增HA117基因,扩增产物转入BL21(DE3)感受态细胞,进行HA117蛋白诱导表达,采用SDS-PAGE检测表达产物。纯化HA117蛋白后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。通过间接ELISA检测其效价。将转染携带HA117重组腺病毒的HEK293细胞为实验组,未转染的HEK293细胞为对照组,用细胞免疫荧光和Western blot方法检测其过表达的HA117蛋白,验证制备的HA117多克隆抗体的特异性。结果成功获得HA117多克隆抗体,间接ELISA法检测显示抗HA117血清效价为1∶729 000。细胞免疫荧光和Western blot检测示制备的HA117多克隆抗体可以特异性识别HA117抗原蛋白。结论获得了效价和特异性较高的HA117多克隆抗体。     

兔抗人RBBP10多克隆抗体的纯化

目的纯化兔抗人RBBP10多克隆抗体。方法在大肠杆菌中,表达重组PTC-hRBBP10融合蛋白,表达产物以直链淀粉树脂亲合柱和superose 12凝胶柱过滤纯化,将纯化的PTC-hRBBP10偶联于NHS-activated SepharoseTM上,制备亲合层析柱,纯化兔抗人RBBP10多克隆抗体。结果①表达、纯化的PTC-hRBBP10的相对分子质量(Mr)为80×103,纯度为95%;②从抗血清中纯化获得可与PTC-hRBBP10特异性结合的兔抗人RBBP10多克隆抗体。结论获得了特异性较好的纯化兔抗人RBBP多克隆抗体,为进一步研究该蛋白质的功能提供了条件,为肿瘤的诊断和治疗提供了新的理论和手段。     

热休克因子4b多克隆抗体制备及纯化

目的制备兔抗人热休克转录因子4b(Hsf4b)多克隆抗体。方法利用实验室已纯化的GST-Hsf4b融合蛋白免疫新西兰大耳白兔3次,制备Hsf4b多克隆抗体血清,ELISA方法检测血清抗体效价,饱和硫酸铵纯化血清多克隆抗体,Western blot检测多克隆抗体与Hsf4b蛋白结合能力。结果 ELISA检测显示,经过三次免疫,获得了高效价的兔抗人Hsf4b多克隆抗体;Western blot检测表明,制备的兔抗人Hsf4b多克隆抗体与Hsf4b蛋白结合良好。结论成功制备了高效价的抗Hsf4b多克隆抗体,为研究Hsf4b生物学功能提供了有用的实验工具。