绒毛及合体滋养层细胞吲哚胺2,3-二氧化酶表达与流产的关系

目的:探讨人早孕绒毛组织吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)的表达与流产的关系。方法:RT-PCR测正常妊娠和难免流产绒毛组织及JAR细胞株IDOmRNA表达;免疫组化分析两组绒毛组织IDO蛋白质表达;Westernblot检测体外培养的合体滋养层细胞IDO蛋白质表达;高效液相色谱法检测细胞培养上清液中有无犬尿氨酸。结果:难免流产组绒毛组织IDOmRNA及蛋白质表达均低于正常组;JAR细胞株不表达IDOmRNA;合体滋养层细胞表达IDO蛋白质;合体滋养层细胞培养上清中有犬尿氨酸。结论:绒毛组织IDO正常表达是维持妊娠所必需;体外培养的人早孕绒毛合体滋养层细胞表达的IDO具有活性。     

血管生长因子受体3(VEGFR3)在胎盘的细胞定位及其在ART安全性研究中的意义

目的:探讨血管生长因子受体3(vascular endothelial growth factor 3,VEGFR3)在ART妊娠胎盘组织中的差异表达及其安全性研究中的意义。方法:收集11例自然妊娠(对照组)和10例ART妊娠(ART组)的单胎足月妊娠选择性剖宫产分娩的胎盘组织,分析比较组间的临床资料;并应用免疫组织化学技术和实时荧光定量PCR技术,观察VEGFR3在胎盘组织的细胞定位,比较VEGFR3在ART和对照组胎盘组织中的差异表达。结果:VEGFR3在胎盘组织中定位于胎盘绒毛合体滋养层细胞胞质。与对照组相比,VEGFR3细胞定位一致,ART妊娠的胎盘组织中VEGFR3 mRNA表达水平有上升趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论:ART妊娠的胎盘组织中VEGFR3细胞定位和表达水平未见明显变化。     

胎儿生长受限胎盘病理改变与绒毛滋养细胞基质金属蛋白酶9的表达关系

目的　了解胎儿生长受限 (fetal growth restriction,FGR)者胎盘病理改变与胎盘组织中基质金属蛋白酶 9(MMP- 9)表达水平变化的关系。　方法　选取我院 2 0 0 1年 1～ 9月分娩的 FGR患者及正常妊娠妇女胎盘各 30例 ,常规 HE染色及 PAS染色 ,观察胎盘形态学变化。另取 FGR及正常胎盘各 5例 ,5 0 0 H型透射电镜观察。利用免疫组化的方法对胎盘组织切片染色 ,观察 FGR胎盘绒毛组织滋养细胞 MMP- 9表达情况。　结果　 FGR组中 2 2例胎盘有明显病理改变 ,发生率为73.33% ,FGR组绒毛间质纤维化及纤维蛋白样坏死绒毛 (6 3.3% )、绒毛血管减少 (70 .0 % )、合体结节增生 (4 3.3% )、细胞滋养细胞增生 (5 0 .0 % )均明显高于对照组 (分别为 6 .7%、10 .0 %、3.3%和13.3% ) (P<0 .0 1) ;电镜发现蜕膜螺旋动脉内皮损伤 ,管腔狭窄 ,部分动脉末端闭塞。有病理改变的胎盘绒毛滋养细胞 MMP- 9的表达 (18.2 % )明显低于无病理改变胎盘 (75 .0 % ) ,差异有非常显著性(P<0 .0 1)。　结论　 FGR时胎盘发生了明显的病理改变 ,这种病理改变与胎盘中 MMP- 9的异常表达密切相关。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在绒毛和胎盘组织中的表达

目的 探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在绒毛及胎盘组织中的表达以及表达部位。方法 分别取36例妊娠6～9周妇女的早孕绒毛组织、7例因病理指征行中期引产妇女的胎盘组织和11例足月妊娠妇女的胎盘组织,免疫组化方法检测绒毛组织和胎盘组织中EMMPRIN的表达部位变化特点。结果 (1)表达部位：EMMPRIN在早孕绒毛组织、中期和足月妊娠的胎盘组织中均有高度表达。在早孕绒毛组织中的表达部位主要集中在绒毛内细胞滋养细胞、合体滋养细胞及细胞滋养层柱细胞;在中期和足月妊娠的胎盘组织中,主要表达于底蜕膜的绒毛外细胞滋养细胞。(2)表达特点：在早孕绒毛组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞和细胞滋养层柱细胞的。EMMPRIN阳性率随妊娠进展逐渐下降。在妊娠中期的胎盘组织中,细胞滋养细胞、合体滋养细胞和细胞滋养层柱细胞的EMMPRIN阳性率分别为5／7、3／7、5／7;在足月妊娠的胎盘组织中,细胞滋养细胞、合体滋养细胞和细胞滋养层柱细胞的EMMPRIN阳性率分别为73％、18％和82％。在中期和足月妊娠的底蜕膜中的EMMPRIN阳性率较弱,且趋于稳定。而早期妊娠阶段,侵入到底蜕膜的绒毛外细胞滋养细胞中。EMMPRIN阳性表达则随孕周进展逐渐增强。结论 EMMPRIN在妊娠早期与胚胎植入有关,在妊娠的中晚期则可能参与妊娠维持。     

胎儿生长受限VEGFA和VEGFR2在胎盘中的表达

目的检测胎儿生长受限(FGR)患者胎盘血管内皮生长因子(VEGFA)及其受体(VEGFR2)的表达,终末绒毛微血管超微结构的改变。方法通过Realtime-PCR、Western-blot和免疫组化,检测FGR胎盘VEGFA和VEGFR2的表达;通过透视电镜分析FGR胎盘终末绒毛微血管的结构。结果 FGR组VEGFA和VEGFR2的mRNA水平(1.28±0.48)、(1.73±0.29)和蛋白水平(0.71±0.32)、(0.61±0.25)明显低于正常妊娠组(4.21±1.72)、(3.71±0.89)(P0.01);1.90±0.76、1.75±0.48(P0.01);免疫组化分析FGR组VEFGA和VEGFR2均为低表达;FGR胎盘终末绒毛微血管呈退行性变。结论 FGR患者胎盘VEFGA和VEGFR2水平显著下降,可能是导致FGR发病机制的一个重要因素。     

正常妊娠和高血压妊娠妇女的胎盘绒毛,平滑绒毛膜及真蜕膜的超微结构

本文报道正常妊娠及高血压妊娠妇女的真蜕膜,平滑绒毛膜和胎盘绒毛的超微结构。发现高血压妇女胎盘绒毛合体的变性和纤维蛋白沉积增加。细胞滋养层细胞数目也较多。在正常妊娠和高血压     

妊娠期糖尿病胎盘微绒毛形态计量学改变与围产儿并发症关系的探讨

目的:探讨妊娠期糖尿病胎盘绒毛变化与围产儿并发症的关系。方法:选择足月妊娠期糖尿病38例的胎盘为观察组,选择正常足月妊娠30例的胎盘为对照组,分娩时在胎盘母面取材,制成快速脱水、表面喷金镀膜标本,在扫描电镜下用VIDAS型图像分析仪对胎盘微绒毛进行组织形态计量学测定。称取胎盘重量、计算胎盘系数(胎盘重量与新生儿出生体重比值),记录新生儿Apgar评分、体重、脐血胆红素及新生儿出生后30min内血糖值。结果:糖尿病孕妇的胎盘合体滋养层细胞微绒毛面积、周长、长轴、短轴小于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);异形指数大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下观察组胎盘组织超微结构病理变化明显,表现为胎盘绒毛成熟不良、水肿,合体滋养层表面微绒毛排列紊乱,直径大小不一,局部缺损,呈葡萄状。观察组胎盘重量明显高于对照组,两组差异显著(P<0.05)。胎盘系数两组间差异非常显著(P<0,01);两组新生儿窒息、出生30min内血糖值、血胆红素均有显著差异(P<0.01)。结论:妊娠期糖尿病胎盘病理变化进一步加重了胎儿缺氧,增加了新生儿窒息率,导致新生儿发生更多的并发症。     

正常妊娠滋养层组织中Lin28B表达变化的研究

目的:探讨Lin28B在正常妊娠不同阶段滋养层细胞中的表达变化及其临床意义。方法:收集40例正常早期妊娠者(孕早期组),包括20例妊娠5~7+6周(孕早A组)和20例妊娠8~12+2周(孕早B组),15例孕17~27周(孕中期组),以及20例孕37~41周(孕晚期组),共75例正常孕妇的绒毛和胎盘组织。采用RT-q PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测胎盘组织Lin28B基因和蛋白的表达差异及细胞定位。结果:1在正常妊娠不同时期的滋养层组织中细胞滋养细胞和合体滋养细胞中均可检测到Lin28B蛋白的表达。2 Lin28B m RNA表达量各组间有统计学差异(P0.05),早孕A组最高,随着孕周进展逐渐下降,至孕晚期达最低水平。3正常妊娠不同时期的滋养层组织中Lin28B蛋白表达呈现为随着孕周的增加而逐渐下降趋势。结论:Lin28B在正常妊娠进展过程中表达下调,提示其可能参与了滋养细胞的增殖和浸润及胎盘的发育。     

先兆子痫患者母胎界面上细胞凋亡的研究

目的:研究先兆子痫患者母胎界面上细胞凋亡水平及凋亡相关分子的表达变化。方法:分别收集妊娠25、27、29、30和31周及足月分娩的正常妊娠者和先兆子痫患者的胎盘组织,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP刻痕末端标记法(TUNEL)检测母胎界面上细胞凋亡情况, 并行凋亡细胞定位;RT-PCR检测正常妊娠和先兆子痫胎盘组织中P53,Bcl-2和Bax的mRNA表达水平的差异。结果:正常妊娠和先兆子痫患者胎盘中发生凋亡的细胞数目都随孕周延长而逐渐增高,但先兆子痫的胎盘中细胞凋亡率明显高于正常妊娠者;正常妊娠胎盘中凋亡细胞主要为合体滋养层细胞,足月胎盘绒毛内血管内皮细胞亦有少量细胞凋亡,而先兆子痫胎盘中细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和绒毛内血管内皮细胞均发生明显的凋亡;RT-PCR显示先兆子痫胎盘组织中P53和Bax的mRNA水平明显高于同期妊娠的正常胎盘,而Bcl-2水平显著降低。结论:正常妊娠过程中胎盘组织中只在有限部位出现少量细胞凋亡,而先兆子痫胎盘组织中细胞过度凋亡, 且凋亡细胞分布广泛,并伴有凋亡相关分子的表达上调。表明先兆子痫的发生与胎盘组织中滋养层细胞大量凋亡密切相关。     

TGF-β和IGF表达异常与滋养层相关疾病关系的研究

目的:探讨转化生长因子(TGF-β)和胰岛素样生长因子(IGF)等与滋养层侵入调节密切相关的细胞因子在胎盘绒毛组织中的表达,及与葡萄胎、先兆子痫等滋养层细胞相关妊娠疾病病理机制的关系。方法:采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测方法,分别以正常早孕绒毛和正常足月(自然分娩或剖宫产)胎盘绒毛组织为对照,观察葡萄胎组织与先兆子痫足月胎盘绒毛组织中TGF-β和IGF的表达。结果:5种胎盘绒毛组织中均可检测到IGF-I mRNA的表达,且先兆子痫足月胎盘绒毛组织中IGF-I的表达量明显低于正常足月胎盘绒毛组织,而葡萄胎组织中IGF-I的表达略高于正常早孕绒毛。在3种足月胎盘绒毛组织中可检测到IGF-ⅡmRNA的表达,但相互之间无明显差异。葡萄胎组织中IGF-Ⅱ的表达低于早孕绒毛。5种胎盘绒毛组织中均有TGF-β3的表达,而TGF-β1和TGF-β2的表达并未检测到。在表达量上,葡萄胎组织中TGF-β3的表达明显高于正常早孕绒毛组织,先兆子痫胎盘绒毛组织中TGF-β3的表达强于足月自然分娩的正常胎盘绒毛组织,而剖宫产胎盘绒毛组织中,TGF-β3的表达亦相对较强。结论:TGF-β3和IGF-I在胎盘绒毛组织中的表达变化,可能和葡萄胎、先兆子痫等与滋养层密切相关的妊娠疾病的发生有关。     

低分子肝素对胎儿生长受限患者胎盘超微结构及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨低分子肝素对胎儿生长受限（fetalgrowthrestriction,FGR）胎盘组织超微结构及血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）的表达及低分子肝素治疗FGR的机理。方法选择2010年5月至2011年12月北京大学第三医院妇产科收治的资料完整的FGR患者88例,分为肝素治疗组（47例）、常规治疗组（29例）和对照组（12例）,采用透射电镜方法观察各组胎盘的超微结构的变化及免疫组织化学SP法检测胎盘组织中VEGF的表达。结果①肝素治疗组胎盘合体滋养细胞表面有大量排列整齐的微绒毛,细胞质内含丰富的粗面内质网和线粒体,细胞核形态规则,核染色质致密且分布均匀,绒毛间质内有少量胶原纤维,毛细血管扩张。②肝素治疗组滋养细胞、绒毛间质细胞和血管内皮细胞VEGF蛋白表达水平（111．5±5．9、160．2±7．8和161．9±5．4）与对照组（147．8±5．3、181．4±5．1和187．1±7．5）比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。常规治疗组绒毛间质细胞VEGF蛋白表达水平（168．7±7．1）与对照组（181．4±5．1）比较,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论低分子肝素可改善胎盘组织的超微结构,增强胎盘VEGF蛋白的表达,促进胎盘微血管的通透性,治疗FGR。     

胰岛素样生长因子系统在胎儿生长发育中的作用

胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)作为一类多功能的促生长调节因子,在细胞的增殖、分裂以及个体的生长、发育中具有重要的促进作用。IGFs分为1型和2型,主要通过与IGF-1受体结合,参与调控妊娠过程中滋养细胞侵袭、物质转运、胎盘血管重塑以及胎儿生长发育等一系列重要生理过程。其中,IGF-1、IGF-2及其相关受体的表达和功能异常可导致胎盘功能不全及胎儿功能生长受限。深入了解IGFs与胎儿生长发育之间的关系对研究胎盘功能代谢、物质转运、胎儿生长发育等具有重要意义。     

妊娠高血压综合征合并胎儿生长受限胎盘组织血管细胞粘附分子1的表达

目的：探讨血管细胞粘附分子1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)在妊娠高血压综合征（简称妊高征）合并胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR)发病过程中的作用。方法：采用免疫组化法测定30例妊高征合并FGR患者、28例非妊高征合并FGR及30例正常妊娠者胎盘组织中血管内皮及滋养细胞的VCAM－1表达。结果：妊高征合并FGR组胎盘底蜕膜内血管内皮VCAM－1的表达阳性率（80％）及表达强度（＋＋＋）14例，与正常妊娠组25％（＋＋＋）0例及非妊高征合并FGR组155％（＋＋＋）0例相比明显增高（P＜0．005），而前两者间无显著差异，随妊高征病情加重，其表达强度逐渐增强；胎盘绒毛毛细血管VCAM－1阳性表达强度妊高征合并FGR组（73．3％）和非妊高征FGR组（67．8％）明显增强，与正常组（10％）相比差异有显性（P＜0．005）；所有GFR患者胎盘滋养细胞VCAM－1表达强度明显降低（妊高征FGR为0％，非妊高征FGR组3．6％，正常组40％），并且在妊高征组随妊高征病情加重其表达强度急剧减低。结论：胎盘血管内皮及绒毛滋养细胞异常表达的VCAM－1参与了妊高征引起FGR的病理生理过程，可以作为判定妊高征对胎盘损伤程度的一个指标。     

血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1α在妊娠高血压综合征患者胎盘组织中的表达

目的:探讨胎盘组织中血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平与妊娠高血压综合征(PIH综合征)患者严重程度的相关性。方法:采用免疫组织化学EliVision法对35例PIH综合征患者和40例正常产妇(对照组)胎盘组织中VEGF和HIF-1α的表达水平进行检测分析。结果:VEGF和HIF-1α在胎盘滋养细胞和血管内皮细胞中均有的表达,VEGF在轻度PIH综合征患者胎盘中的表达水平与对照组相比无显著差异,VEGF在中度和重度PIH综合征患者胎盘中的表达水平则较对照组显著下降(P0.05),HIF-1α在PIH综合征组患者胎盘中的表达水平显著高于对照组(P0.05),且重度高于中度、中度高于轻度。结论:PIH综合征患者胎盘中VEGF的表达水平降低,而HIF-1α的表达水平升高,并均与病情的严重程度相关,提示其可能参与调控PIH综合征的发生和发展过程。     

雌激素受体α在子痫前期胎盘的表达及临床意义

目的:通过比较雌激素受体α(ERα)在子痫前期胎盘和正常胎盘中组织细胞的定位,探讨ERα与子痫前期疾病的相关性及其临床意义。方法:用免疫组化SP法检测28例正常足月妊娠胎盘组织和33例子痫前期胎盘组织中ERα的表达。结果:免疫组织化学结果显示两组的ERα均呈阳性表达,子痫前期组的ERα在胎盘细胞滋养细胞的细胞质内或细胞核内的阳性表达率高于正常孕妇组(P<0.05)。结论:免疫组化检查定位于胎盘绒毛细胞滋养细胞、绒毛毛细血管管壁细胞和绒毛间质纤维组织成纤维细胞的ERα作为实现雌激素功能的介导中枢,可能通过调控雌激素的作用参与了子痫前期的发生和发展过程。     

The Expression of Connective Tissue Growth Factor in Pregnancies Complicated by Severe Preeclampsia or Fetal Growth Restriction

We tested the hypothesis that the expression of placental connective tissue growth factor (CTGF) is enhanced in pregnancies complicated by severe preeclampsia (PE) or fetal growth restriction (FGR). CTGF expression was analyzed using immunostaining, western blot and real-time quantitative PCR in placental samples obtained after third trimester cesarean deliveries without labor from women with severe PE (n = 11), idiopathic FGR (n = 14), or healthy controls (n = 14). Serum CTGF concentrations were analyzed using ELISA. We found that CTGF was stably expressed in villous trophoblasts throughout pregnancy. The expression of CTGF mRNA in placentas from severe PE or FGR was higher than placentas from controls. Whereas the levels of placental CTGF protein were similar between normal and severe PE, maternal and fetal serum CTGF levels were elevated in severe PE. Maternal CTGF levels were also distinctively elevated in women with PE or FGR with histological evidence of placental injury. The enhancement of CTGF expression as well as serum CTGF levels in clinical conditions attributed to placental dysfunction suggests a role for this secretary protein in the pathophysiology of placental injury or its sequelae.     

环孢素A通过活化粘着斑激酶信号通路促进人滋养细胞的体外生长

目的:探讨粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)信号通路在环孢素A(cyclosporin A,CsA)调节人滋养细胞体外生长中的作用。方法:收集因非意愿妊娠6~9周要求行人工流产术的正常妊娠妇女的绒毛组织,体外分离培养获得滋养细胞,经CsA和/或FAK抑制剂Y15处理后,免疫荧光检测滋养细胞FAK的磷酸化水平;BrdU检测滋养细胞的增殖;Annexin V/PI检测滋养细胞的凋亡。结果:CsA可明显提高滋养细胞FAK的活化水平,FAK抑制剂Y15可阻断CsA诱导的FAK活化,阻抑CsA对细胞增殖的促进作用(P0.05)以及对滋养细胞凋亡的抑制作用(P0.05)。结论:CsA可通过活化FAK信号通路促进人早孕期滋养细胞的体外生长,从而有利于正常妊娠的维持。     

正常妊娠与子痫前期患者胎盘组织VEGF和p53的表达与意义

目的:探讨子痫前期(PE)患者胎盘组织血管内皮生长因子(VEGF)和抑癌基因p53的表达变化、相互关系及其在PE发病过程中的作用。方法:采用链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测35例PE患者(轻度15例和重度20例)和25例正常妊娠(对照组)胎盘组织中VEGF和p53的表达变化。结果:(1)重度PE患者胎盘组织中VEGF表达强度显著低于正常对照组和轻度PE组(P均0.05),而轻度PE组与正常对照组无显著差异(P0.05);(2)PE患者胎盘组织中p53的表达强度较正常对照组均显著升高(P0.05),重度PE组亦显著高于轻度PE组(P0.05);(3)胎盘组织中VEGF和p53的表达呈显著负相关(r=-0.428,P=0.001)。结论:VEGF和p53在PE和正常妊娠胎盘组织中的表达变化预示着其与PE的发生、发展有一定的关系。     

卵母细胞分泌的生长分化因子-9和骨形成蛋白-15与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨卵母细胞分泌的生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)与卵母细胞发育潜能的关系。方法:收集因输卵管性不孕接受IVF-ET治疗患者的卵泡,每侧卵巢穿刺取卵时首先选择一个直径≥18 mm卵泡抽吸,对卵母细胞进行成熟度分型,并观察其受精、卵裂及胚胎评分情况。受精后按是否形成优质胚胎将将卵泡分为优质卵母细胞组和非优质卵母细胞组,采用Western blotting方法检测比较各组卵泡液中GDF-9和BMP-15的含量。结果:①优质卵母细胞组的GDF-9蛋白相对含量为2.498±0.133,非优质卵母细胞组为1.305±0.406,差异有统计学意义(P=0.008)。②优质卵母细胞组的BMP-15蛋白相对含量为3.379±0.482,非优质卵母细胞组为1.336±0.214,差异有统计学意义(P=0.003)。结论:在优质卵母细胞组卵泡液中GDF-9和BMP-15水平均较高,提示人卵泡液中GDF-9、BMP-15水平可以反映卵母细胞的发育潜能,GDF-9、BMP-15水平可以作为评价卵母细胞质量的指标。