红景天苷类似物的合成及低糖低血清损伤的神经保护作用的研究

目的:通过在红景天苷及类似物的苯环上引入乙酰基,合成新型红景天苷类似物,以期获得神经保护活性更好的化合物。方法:以4-甲氧基苯乙醇对芳环进行傅克乙酰化反应,得到关键中间体3-乙酰基-4-羟基苯乙醇,再分别与糖基供体(四乙酰基溴代葡萄糖、四乙酰基氯代氨基葡萄糖)进行糖苷化反应,制备新型红景天苷类似物,并采用PC12细胞低糖低血清损伤模型来测定目标化合物对于低糖低血清损伤PC12细胞活力的影响。结果:合成的红景天苷类似物糖苷均经过质谱,核磁和元素分析的结构确证,红景天苷类似物预保护对低糖低血清损伤引起的PC12细胞活力的下降曾剂量依赖性地拮抗作用,尤其是化合物8a对低糖低血清损伤的拮抗作用显著高于红景天苷组。结论:所合成含有乙酰基的红景天苷类似物具有较好的对PC12细胞低糖低血清损伤的神经保护作用,将为今后进一步研究红景天苷类似物用于治疗神经退行性疾病打下坚实的基础。     

红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的保护作用

目的研究红景天苷（Sal）对Co Cl2诱导PC12细胞低氧损伤的影响。方法用200μM Co Cl2诱导PC12细胞致其损伤,用不同浓度的红景天苷（0.1、1、10μM）作用于PC12细胞,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;RT-q PCR法测定Arc m RNA的表达;Western blot法测定Arc蛋白的表达。结果不同浓度红景天苷能明显抑制Co Cl2诱导的PC12细胞凋亡,并能显著提高PC12细胞中Arc m RNA和蛋白表达水平。结论红景天苷对Co Cl2诱导的PC12细胞低氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与红景天苷抵抗Co Cl2诱导PC12细胞的凋亡,上调PC12细胞Arc m RNA和蛋白表达水平有关。     

红景天苷对NaCN及缺糖诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究红景天苷对PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法:以NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞技术,考察红景天苷对细胞凋亡的保护作用;采用比色法测定Caspase活性、Western-blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,考察红景天苷抗凋亡的机制。结果:红景天苷可以有效地改善NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡,抑制Caspase活性,降低胞浆中细胞色素C的水平。结论:红景天苷可能通过线粒体途径抑制NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡。     

神经节苷脂GM1对神经生长因子诱导PC12细胞分化的影响

目的 研究神经节苷脂GM1是否介导神经生长因子（NGF）诱导的PC12细胞的分化。方法 采用MTT法、葡萄神经酰胺合成抑制剂（D－PDMP）分析神经节苷脂GM1对NGF诱导的PC12细胞分化的影响。结果 神经节苷脂GM1对PC12细胞的生长无明显的影响，而能够促进NGF对PC12细胞的生长抑制作用；NGF能诱导PC12细胞分化，但NGF无法诱导神经节苷脂缺乏型PC12细胞的分化；在神经节苷脂缺乏型PC12细胞中添加神经节苷脂GM1后，细胞恢复对NGF的反应性。结论 神经节苷脂GM1在NGF诱导的PC12细胞分化过程中发挥重要作用。     

红景天苷及其类似物的合成

目的:寻找一种合成红景天苷及其类似物的新方法. 方法:以对羟基苯乙酸为原料,经乙酰化、还原、糖苷化、醇解反应合成了红景天苷及其类似物,总收率分别为63%, 67%. 结果:本实验缩短了反应步骤,提高了产率,且反应条件温和,操作简单易行. 结论:本方法合成红景天苷及其类似物切实可行.     

葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究葛根素对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的影响。方法:建立H2O2致PC12细胞损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:100μmol/L H2O2诱导PC12细胞4 h,细胞呈现明显损伤形态,LDH释放量升高(P<0.001),细胞培养液和细胞内MDA含量增加(P<0.001),SOD活性下降(P<0.001)。葛根素可明显改善形态学损伤,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:葛根素对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

黄豆苷元对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨黄豆苷元(daidizein)对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法用H2O2处理体外培养的PC12细胞建立细胞损伤模型,并加入daidizein预处理作为保护,显微镜下观察PC12细胞形态改变,MTT法检测活细胞数,LDH法检测细胞膜的损伤情况.结果 H2O2处理细胞24 h后,细胞形态发生明显改变,胞体变小、突起缩回,MTT吸光值减小,活细胞数减少,LDH释放量明显增加,与正常对组组比较差异有显著性(P<0.01).daidizein处理组细胞形态明显改善,MTT吸光值显著增加,LDH释放量明显降低,与H2O2处理组相比差异有显著性(P<0.01).结论 daidizein能显著抑制H2O2对PC12细胞的毒性,具有较强的神经保护作用.     

黄芩苷锌对PC12细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。

目的:检验黄芩苷锌(HBZn)是否对神经细胞具有保护功能,并初步探讨其保护机制.方法:以缺氧缺糖(oxygen and glucose deprivation,OGD)诱导PC12细胞损伤模型拟脑缺血病理的改变,采用MTT法检测细胞存活率,研究黄芩苷锌的体外神经细胞保护活性.结果:黄芩苷锌对PC12细胞OGD损伤的保护作用与黄芩苷、灯盏花素的保护效果接近,但在OGD损伤前2h给药保护作用明显.结论:黄芩苷锌对OGD诱导PC12细胞的损伤有预防保护作用.     

白藜芦醇苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤模型的保护作用

目的 探讨白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用.方法 以缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤模型模拟脑缺血病理的改变,研究白藜芦醇苷对该缺氧缺糖损伤模型的影响.结果 白藜芦醇苷能显著减少PC12细胞死亡,降低乳酸脱氢酶漏出量,一氧化氮含量及丙二醛生成,提高超氧化物歧化酶活性.结论 白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用.     

表没食子儿茶素对缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的研究表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对化学缺氧损伤PC12细胞的保护作用。方法建立氯化钴(Co Cl2)诱导PC12细胞化学缺氧损伤模型,实验分为对照组、EGCG组、缺氧组和联合组,通过测定细胞活力、细胞凋亡率、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)含量及Bcl-2、Akt蛋白表达,探讨EGCG对受损细胞的保护作用。结果氯化钴作用后,缺氧组细胞存活率较对照组降低(P0.05),联合组细胞存活率较缺氧组升高(P0.05);缺氧组细胞凋亡增加至34.2%,EGCG干预后,细胞凋亡率降至23.5%;缺氧组细胞SOD活性较对照组降低(P0.05),EGCG干预后可提高氯化钴诱导的细胞SOD活性降低,差异具有统计学意义(P0.05)。缺氧组细胞上清液中的LDH活力增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);EGCG处理后能降低氯化钴引起的上清液中LDH活力增加(P0.05)。缺氧组细胞Bcl-2表达降低(P0.05),EGCG处理后能抑制氯化钴诱导的Bcl-2表达降低(与缺氧组比较P0.05),并提高细胞p-Akt的表达(与缺氧组比较P0.05),各组总的Akt表达量均无改变。结论本缺氧模型可诱导PC12细胞凋亡,EGCG对缺氧损伤PC12细胞具有明显的保护作用。     

高热预处理对大鼠嗜铬细胞瘤株细胞高温损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理(HPC)对大鼠嗜铬细胞瘤株(PC12)细胞高温损伤的影响.方法 体外培养PC12细胞,分为四组,每组6株.正常对照组常规(37 ℃)培养;单纯高热预处理组(HPC组)将细胞置于42 ℃培养箱中1 h后常规培养;严重高温损伤组(LH组)将细胞置于46 ℃培养箱中2 h后常规培养2 h;高热预处理 严重高温损伤组(HPC LH组),细胞置于42 ℃培养箱1 h,恢复常规培养18 h,再于46 ℃下作用2 h后常规培养2 h.处理完毕后观察细胞形态学变化,MTT法测定细胞活力,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,了解细胞损伤.结果 HPC LH组形态明显优于LH组,MTT值极显著高于LH组(P＜0.01),LDH释放量极显著少于LH组(P＜0.01).结论 高热预处理对PC12细胞高温损伤产生保护作用.     

NGF诱导PC12细胞向神经元的分化

目的：研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法：实验分为10、20、50和80 μg•L^-1 NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72 h,在24、48和72 h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72 h后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后PC12细胞向MAP2阳性细胞分化的情况。 结果： 20、50和80 μg•L^-1 NGF组MAP2阳性细胞数明显高于对照组,且以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.05）。与对照组比较,加入NGF组分化的细胞其突起和细胞直径明显增长和增大,以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.01）。结论：NGF能够诱导PC12细胞向神经元分化,50 μg•L^-1 的NGF浓度是诱导PC12细胞向神经元分化的最适浓度。     

氯胺酮对谷氨酸所致神经性PC12细胞株损伤的保护作用

目的研究氯胺酮对谷氨酸 (Glu)所致神经性PC12细胞株损伤的保护作用。方法PC12细胞株 (2× 10 3 /mL)在含10nmol/L 7S NGF的培养基中孵育 6d后 ,分化为神经性PC12细胞株。分别加入Glu、氯胺酮、Glu 氯胺酮、D AP5 Glu 氯胺酮、CNQX Glu并共同孵育 18h ,以MTT法测细胞活力。结果 30mmol/LGlu与神经性PC12细胞株共同孵育 18h ,细胞活力降至5 %以下。氯胺酮与Glu同时加入 ,对细胞活力有明显保护作用 ,且呈剂量依赖性。 0 .1mmol/L氯胺酮使细胞活力升至 (30 .94±11.75 ) % ;1.0mmol/L氯胺酮组细胞活力为 (95 .74± 2 1.4 9) % ;非NMDA受体拮抗剂 2 0 μmol/LCNQX细胞活力为 (19.31± 5 .83) % ,与Glu对照组比较均有显著差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论氯胺酮对Glu损伤的神经性PC12细胞具有保护作用 ,其作用机制主要在于拮抗NMDA受体     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。     

MAPK、PI3K途径在蛇毒神经生长因子诱导PC12细胞分化的作用

目的 研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt途径在蛇毒神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化中的作用.方法 应用蛋白免疫印迹法分析p44/p42MAPK和Akt的磷酸化水平,并利用MAPK抑制剂PD98059和PI3K抑制剂LY294002,观察其对NGF诱导的PC12细胞形态学改变的影响.结果 眼镜蛇毒NGF在10ng/mL即可诱导PC12细胞长出突起,100,1000ng/mL作用明显,呈剂量效应关系;NGF能有效刺激p44/p42MAPK、Akt的磷酸化;分别用特异抑制剂PD98059抑制MAPK活性,LY294002抑制PI3K活性后,NGF诱导的细胞分化均受抑制.结论 蛇毒神经生长因子诱导PC12细胞的分化作用与p44/p42MAPK和PI3K/Akt途径相关.     

神经生长因子对PC12细胞凋亡保护作用的时限性

目的:探讨神经生长因子(nerve growth factor, NGF)抗凋亡的时限性,为帕金森病的治疗提供理论依据.方法:PC12细胞传代培养,在细胞即将汇合前更换无血清RPMI 1640培养12 h后作各种处理.实验分为空白组(即去血清组)、NGF组、6-OHDA组及NGF 6-OHDA组,选取2、24 h两个时间点,以MTT测定细胞存活率,以 Hoechst33342染色法证明凋亡的存在,以流式细胞分析法检测细胞的凋亡率.结果: ① 2、24 h两个时间点在去血清及加入6-OHDA两种情况下NGF均不能提高PC12细胞存活率;②各组均有凋亡现象存在;③在2 h时间点,NGF已不能降低去血清所致PC12细胞凋亡的凋亡率,但能降低6-OHDA所致的PC12细胞的凋亡率;在24 h时间点, NGF仍可降低6-OHDA所致PC12细胞凋亡的凋亡率.结论:NGF的抗凋亡作用对不同的致凋亡因素可能有不同的时限性.     

硒对微波辐照致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨硒对微波致神经细胞损伤的保护作用.方法以离体培养的PC12细胞为研究对象,采用65 mW/cm2的微波照射20 min进行致伤,以细胞存活率、MDA含量、SOD和GSH-Px活性为实验指标反映Na2SeO3预处理对微波辐照致PC12细胞损伤的影响.结果微波辐照后PC12细胞存活率明显降低,MDA含量增加,SOD、GSH-Px活性降低,而经过Na2SeO3预处理后再接受微波辐照,以上指标的变化明显减轻,并且高剂量Na2SeO3预处理作用更明显.结论硒可以提高PC12细胞的抗氧化能力,保护神经细胞对抗微波辐射导致的细胞损伤.