白芍对斜视性弱视模型猫视皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体1表达的影响

目的观察白芍(RPA)对斜视性弱视模型猫的治疗作用及其对视皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)1表达的影响。方法将18只幼猫随机分为正常组、模型组、RPA组,每组6只,构建斜视性弱视猫模型。RPA组灌胃RPA 30 d,正常组和模型组注射等体积生理盐水。给药结束后观察扫描视觉诱发电位(SVEP)视力、图形视觉诱发电位(PVEP)视力、17区的眼驱动细胞数等相关指标,并通过实时定量聚合酶链反应检测眼左右侧17区、21a区NMDAR1的水平。结果 RPA对斜视性弱视模型猫的治疗有显著作用,可提高斜视性弱视模型猫视皮质NMDAR1的表达。结论 RPA可以提高斜视性弱视模型猫视皮质的神经元突触兴奋性,逆转弱视的形成,达到治疗弱视的目的,其作用可能是通过提高斜视性弱视模型猫视皮质NMDAR1的表达来实现的。     

七氟烷对幼鼠认知功能及海马CA1区NMDAR1表达的影响

目的观察七氟烷麻醉对幼鼠认知功能的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为三组各16只,高浓度组吸入3%七氟烷6 h,低浓度组吸入1.5%七氟烷6 h,对照组吸入空气。各组分别于出生后21 d（Ⅰ期）、60 d（Ⅱ期）随机取8只行Y型迷宫试验,连续3 d记录全天总反应时间（TRT）和错误次数（EN）;于最后一次测试后处死,采用免疫组化染色法测定脑海马CA1区N-甲基-D-天冬氨酸1（NMDAR1）表达情况。结果与对照组比较,高浓度组试验Ⅰ期T1时TRT延长,EN增加（P〈0.05）;Ⅱ期各组测试成绩差异无统计学意义;各组海马CA1区NMDAR1表达Ⅰ、Ⅱ期差异均无统计学意义。结论七氟烷麻醉后早期可导致幼鼠一过性认知功能减退,但对NMDAR1表达无明显影响。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断对癫痫模型大鼠行为学、脑电图及脑内泛连接蛋白-1表达的影响

目的观察N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻断对癫痫模型大鼠行为学、脑电图及海马和颞叶泛连接蛋白(Panx)-1表达的影响。方法 SD大鼠应用随机数字表法分为正常对照组,模型组(以海人酸复制癫痫模型),地卓西平(MK-801)0.5、1.0、1.5 mg/kg组,每组10只。MK-801 0.5、1.0、1.5 mg/kg组腹腔注射相应剂量的MK-801,正常对照组和模型组腹腔注射等量的生理盐水,1次/d,连续21 d。观察MK-801对癫痫大鼠行为学、脑电图及脑内Panx-1和Panx-1 mRNA表达的影响。结果与模型组比较,MK-801 0.5、1.0、1.5 mg/kg组Racine分级显著降低,平均癫痫发作时间显著缩短,脑电频率显著升高,脑电波幅显著降低,脑内Panx-1和Panx-1 mRNA表达显著降低(P0.05或P0.01)。结论 NMDA受体阻断可改善癫痫大鼠行为学及脑电图异常,并抑制脑内Panx-1表达。     

康复训练对血管性痴呆大鼠认知障碍影响的NMDAR1机制

目的 探讨康复训练对血管性痴呆（VD）大鼠空间学习记忆能力的影响,并从分子角度探讨其机制.方法 选用Wistar雄性大鼠随机分成对照组5只,VD组10只,VD康复训练组10只.采用两血管阻断（2VO）法制作VD模型,VD康复训练组大鼠术后2 d开始进行康复训练,用Western Bolt方法测定大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1（N-methyl-D-aspartate recepter1,NMDAR1）含量,用Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力.结果 VD组大鼠水迷宫隐匿平台逃避潜伏期明显延长,VD康复训练组大鼠较VD组大鼠水迷宫隐匿平台逃避潜伏期缩短,但仍长于对照组（P＜0.05）.VD组大鼠NMDAR1含量明显减少,VD康复训练组大鼠较VD组大鼠NMDAR1含量增加,但仍比对照组少（P＜0.05）.结论 VD大鼠学习记忆能力降低,NMDAR1含量明显减少,康复训练可提高大鼠空间学习记忆能力,其分子机制可能与NMDAR1的表达增加有关.     

炎症后内脏高敏感大鼠前扣带回皮质NR2A、NR2B表达变化

背景:研究显示N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体参与了伤害性信号的传递,中枢前扣带回皮质(ACC)在内脏高敏感大鼠内脏疼痛反应的调节中起重要作用,该作用是由NMDA受体活性增强介导的。目的:检测炎症后内脏痛觉过敏大鼠ACC区域NMDA受体亚基NR2A、NR2B的表达变化,探讨两者在炎症后内脏高敏感形成中的作用。方法:以去氧胆酸结肠灌注建立炎症后内脏痛觉过敏大鼠模型。造模3周后观察实验组和对照组结肠组织病理学改变,以对结直肠扩张(CRD)的内脏运动反射(VMR)幅值为指标评价内脏痛敏感性的变化,以免疫荧光法和蛋白质印迹法检测ACC区域NR2A、NR2B表达情况。结果:实验组和对照组大鼠结肠组织均未见明显病理学改变。CRD压力为60 mm Hg(伤害性刺激)时,实验组VMR幅值显著高于对照组(P0.05)。与对照组相比,实验组ACC区域NR2A、NR2B荧光强度和蛋白表达量均显著上调(P0.05)。结论:ACC区域NMDA受体亚基NR2A、NR2B表达上调在炎症后内脏高敏感的形成中发挥重要作用。     

缺氧对大鼠心脏N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1表达水平的调控

目的探讨缺氧对大鼠心脏N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(N-methyl-D-aspartate receptor subunit1,NR1)mRNA表达水平的调控。方法雄性SD大鼠12只按照随机数字表法分为对照组(Con组)和循环间歇缺氧(cyclic intermittent hypoxia,CIH)组,每组6只,CIH组给予CIH处理,Con组给予空气模拟缺氧过程,3周后,分离大鼠心脏,通过RT-PCR检测心脏NR1mRNA表达水平。另将大鼠心肌细胞H9C2随机分为4组,为缺氧0h组、1h组、3h组和6h组,RT-PCR检测各组细胞NR1 mRNA表达水平。结果CIH组和Con组大鼠心脏NR1mRNA分别为143.65±3.74、53.01±10.52,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。H9C2细胞缺氧0h组、1h组、3h组和6h组NR1mRNA分别为18.98±3.73、24.16±6.17、243.68±16.03和113.17±6.51,3h组和6h组NR1mRNA表达较0h组和1h组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧诱导心脏NR1mRNA表达水平上调,参与调节心肌对缺氧的反应。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型泛连接蛋白-1表达的影响

目的观察N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻断对大鼠海马神经元癫痫样放电模型神经元细胞活力,凋亡及泛连接蛋白(Panx)-1表达的影响。方法取SD新生乳鼠双侧海马,体外培养海马神经元至第9天,经鉴定的海马神经元随机分为正常对照组、模型组和MK-801(地卓西平,NMDA受体拮抗剂)组。正常对照组为正常细胞的细胞培养液培养3 h后恢复维持培养液;模型组为无镁细胞外液培养3 h后恢复维持培养液;MK-801组加入含10μmol/L MK-801维持培养液预保护30 min,更换为无镁细胞培养液培养3 h后恢复维持培养液。模型建立24 h后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测神经元细胞活力,分别采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)法和流式细胞仪膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测神经元凋亡,采用蛋白质印迹法(Western印迹)检测神经元Panx-1表达,采用实时荧光定量PCR(Real Time-PCR)检测神经元Panx-1 mRNA表达。结果与模型组比较,MK-801组神经元细胞活力显著升高(P<0.05),神经元凋亡指数和凋亡率、Panx-1表达、Panx-1 mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论 NMDA受体阻断可抑制大鼠海马神经元癫痫样放电模型神经元损伤,发挥神经元保护作用,并抑制神经元Panx-1表达。     

氯胺酮对乳鼠海马CA3区神经元凋亡及NMDAR-2B表达的影响

目的探讨氯胺酮对新生大鼠海马CA3区海马神经元凋亡及N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)-2B表达的影响。方法将12只新生7 d的SD大鼠随机分为对照组和氯胺酮组,每组6只。氯胺酮组腹腔注射氯胺酮20 mg/kg,间隔90 min再次注射,共计5次;对照组于相应时间点腹腔注射等体积的生理盐水。24 h后灌注固定,断头取脑;TUNNEL法检测海马神经元凋亡情况;免疫组化法检测海马神经元CA3区NMDAR-2B表达。结果氯胺酮组凋亡细胞密度和NMDAR-2B表达均明显高于对照组(P均<0.05)。结论氯胺酮可引起新生大鼠海马神经元凋亡增加,其机制可能与NMDA受体表达上调有关。     

siRNA沉默Bmi-1表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制作用

目的:探讨运用RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胰腺癌细胞恶性行为的影响,为胰腺癌基因治疗提供新的靶点和思路.方法:构建反义Bmi-1真核表达载体转染人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光显微镜下观察、MTT、Western blot、流式细胞术检测转染效果及细胞周期、凋亡变化.结果:成功构建反义Bmi-1真核表达载体并且...     

脑梗死患者血小板N-甲基-D-天冬氨酸受体表达与阿司匹林抵抗的相关性研究

目的探讨脑梗死患者血小板N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达与阿司匹林抵抗(AR)的相关性。方法选择2011年8月—2013年7月在我院神经内科住院的脑梗死患者45例为脑梗死组,同期在我院体检中心体检健康者40例为对照组。脑梗死患者确诊后即开始规律服用阿司匹林(100 mg/d),检测两组受检者NMDA受体表达水平和血小板聚集率。结果对照组受检者NMDA受体相对表达量为(0.11±0.07),低于脑梗死组-治疗前患者的(0.32±0.12)(P0.001),脑梗死组-治疗前患者NMDA受体相对表达量低于脑梗死组-治疗后患者的(0.69±0.15)(P0.001)。对照组受检者血小板聚集率为(32.38±11.38)%,脑梗死组-治疗后患者为(43.81±14.40)%,均低于脑梗死组-治疗前患者的(57.00±18.96)%。Spearman相关分析结果显示,对照组受检者、脑梗死组-治疗前患者、脑梗死组-治疗后患者血小板NMDA受体相对表达量与血小板聚集率均无直线相关性(P0.05)。结论脑梗死患者血小板NMDA受体表达水平升高,阿司匹林可上调脑梗死患者血小板NMDA受体的表达,NMDA受体表达增加可能是脑梗死患者发生AR的重要原因。     

羟基红花黄色素A对大鼠局灶性脑缺血再灌注NMDAR_1蛋白表达的影响

目的　探讨羟基红花黄色素A(hydrosafflowyellowA ,HSYA)对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及其机制。方法采用大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,观察HSYA对MCAO 2h ,再灌注 0、1、3、6、9、12、2 4及 72h ,1、2周时脑组织病理和NMDAR1 蛋白表达的变化。结果　HE染色显示缺血 2h再灌注 0～ 1h即可见神经细胞变性 ,细胞周围水肿 ,再灌注 3～ 6h可见软化灶。再灌注 12～ 2 4h ,软化灶扩大。治疗组可明显减轻缺血性损伤 ,神经细胞变性和坏死明显减轻。免疫组织化学染色可见NMDAR1 蛋白在正常大鼠大脑皮质锥体样细胞上呈散在阳性表达。缺血再灌注 0～ 1hNMDAR1 蛋白表达即明显增高 ,3h左右达高峰 ,然后逐渐下降 ,2 4～ 72h表达明显低于正常 ,1～ 2周时表达开始恢复 ,但仍偏低。与同时间点对照组比较 ,HSYA可明显降低早期 (12h以内 )NMDAR1 蛋白的表达 ,上调后期 (2 4h以后 )NMDAR1 蛋白的表达。结论　HSYA对缺血再灌注脑组织具有保护作用 ,其对NMDAR1 蛋白表达的双向调节作用可能为其脑保护作用的重要机制     

雌激素影响应激大鼠内脏敏感性机制的研究

目的 研究N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型NR2B是否参与雌激素增加应激大鼠内脏敏感性的作用.方法 健康成年雌性Wistar大鼠,剪除双侧卵巢后单笼饲养,行侧脑室置管(前囟后0.8 mm,中线旁开1.5 mm,深3.4 mm)及留置腹壁电极,恢复5 d后,剔除行动异常或肌电图信噪比＜0.05的大鼠,最终入选48只,根据侧脑室注射药物不同均分为0.9%氯化钠溶液(NS)、雌二醇(E2)、NMDA受体竞争性拮抗剂(AP5)、NR2B选择性拮抗剂(Ro25-6981)、E2+AP5及E2+R025-6981组,腹壁埋置电极记录20、40、60和80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)梯度压力结直肠扩张(CRD)内脏运动反射(VMR)幅度,以评价药物对去卵巢慢性避水应激大鼠内脏敏感性的影响;采用实时PCR法测定E2对中枢前扣带回及外周L1至S2背根神经节NR2B mRNA表达的影响.结果 在40、60、80 mmHg压力水平CRD,NS+E2组VMR幅度值分别为34.93±3.45、52.33±8.26和68.20±9.07,明显高于NS组(28.46±5.28、42.74±6.37和53.53±4.75,P值分别=0.039、0.033和0.001).NS+E2组与E2+Ro25-6981组比较,在40和60 mmHg压力扩张时VMR幅度值差异无统计学意义(P值分别为0.576、0.054),而80 mmHg压力扩张时VMR幅度值差异有统计学意义(P=0.002).NS+E2组与E2+AP5组比较,在60、80 mmHg压力扩张时VMR幅度值差异有统计学意义(P值分别为0.011和0.001).E2组大鼠前扣带回NR2B mRNA相对定量为0.57±0.41,明显高于NS组(0.21±0.13,P=0.048);而E2组大鼠背根神经节NR2B mRNA为0.35±0.45,与NS组比较差异无统计学意义(0.38±0.31,P=0.465).结论 雌激素通过NR2B受体通路增加应激大鼠的内脏敏感性;该作用可能与大鼠前扣带回NR2B mRNA表达增加有关.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体1在一过性肠道感染大鼠内脏高敏感形成中的意义

目的 研究N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDA-R1)在SD大鼠—过性肠道感染旋毛虫后形成的内脏高敏感中的作用.方法 40只SD大鼠均分为健康对照组、内脏高敏感组、0.9％氯化钠溶液组、MK-801组,其中内脏高敏感组、0.9％氯化钠溶液组和MK 801组分别予旋毛虫感染造模.8周后,0.9％氯化钠溶液组和MK-801组分别予0.9％氯化钠溶液和NMDA-R1拮抗剂MK-801.观察各组在20、40、60和80 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)结直肠扩张压力下腹壁肌电活动反应.测定腹壁肌电活动后,取大鼠结肠标本,采用Western印迹检测NMDA-R1蛋白水平的表达.统计学处理采用Bivariate相关分析和LSD检验.结果 健康对照组、内脏高敏感组、0.9％氯化钠溶液组和MK-801组腹壁肌电图曲线下面积(AUC)与扩张压力之间均有相关性(r=0.823、0.618、0.913、0.889,均P＜0.01).在20、40、60和80 mm Hg扩张压力下,MK-801组与内脏高敏感组AUC间差异均有统计学意义(LSD检验,P值均＜0.05),MK-801组AUC均小于健康对照组,但只在80 mm Hg扩张压力下差异有统计学意义(LSD检验,P=0.029).MK-801组NMDA-R1蛋白积分吸光度相对值为1.238±0.210,较内脏高敏感组(2.231±0.450)和0.9％氯化钠溶液组(2.104±0.220)均显著降低(LSD检验,P=0.025和0.046),内脏高敏感组NMDA-R1蛋白积分吸光度相对值和0.9％氯化钠溶液组较健康对照组显著升高(1SD检验,P=0.007和0.014).结论 内脏高敏感的形成与突触后NMDA-R1的高表达密切相关,抑制肠道神经系统中NMDA-R1的表达可调节内脏高敏感性.     

抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎精神行为异常的研究

摘要 抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎是自身免疫性脑炎(AE)的最主要类型,精神行为异常是其常见、有时甚至是首发的临床症状,会造成患者首诊于精神科,极易导致漏诊、误诊和误治。因此,正确认识和识别抗NMDAR脑炎的精神行为异常有助于及早明确诊断、及时给予恰当的治疗、进而改善患者的预后。本文拟对抗NMDAR脑炎精神行为异常的发病机制、临床特点、辅助检查、治疗及预后等进行综述,为提高临床医生对抗NMDAR脑炎精神行为异常的认识和识别能力而提供帮助。     

雌激素对AD大鼠模型N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的 探讨雌激素对阿尔茨海默病 (AD) 大鼠模型的学习记忆能力及N-甲基-D天冬氨酸受体-1 (NMDAR1) 表达的影响.方法 大鼠卵巢切除术(OVX)后给予雌激素替代治疗(ERT),然后采用Aβ1～40,1 μl(10 μg/μl) 立体定位单侧海马内注射建立AD动物模型,通过水迷宫实验检测动物模型的学习、记忆能力;免疫组化检测NMDAR1的蛋白表达情况.结果 ERT组AD动物模型的水迷宫逃避潜伏期较OVX组明显缩短(P<0.05);同时ERT组AD动物模型的海马CA1、CA3区的NMDAR1的蛋白表达上调(P<0.05).结论 雌激素可以改善AD动物模型的认知功能;其神经保护作用可能与上调NMDAR1的蛋白表达有关.     

同型半胱氨酸与N-甲基-D-天冬氨酸受体的研究进展

同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是心血管疾病的独立危险因子,作用机制涉及损伤血管功能、活化炎症细胞和血小板、促进凝血及心肌肥大等方面。N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体是兴奋性氨基酸受体的一种亚型,传统观点认为其主要分布在中枢神经系统,在神经元回路的形成及学习、记忆过程中起关键作用,并与神经退行性疾病密切相关。近年来,NMDA受体在心血管疾病中的作用得到人们的关注。现就NMDA受体在Hcy致心血管细胞功能损伤中的作用方面的研究进展作一综述。     

构建高效抑制细胞色素P450 2E1基因转录位点的siRNA表达载体

目的 寻找高效抑制细胞色素P450 3E1(CYP2E1)基因转录的位点,构建该位点的siRNA表达载体.方法 用PCR的扩增物作为表达框架,直接转染E47细胞,产生siRNA抑制CYP 2E1基因转录,筛选高效抑制CYP 2E1基因表达的位点,并构建BS/U6/CYP2E1的表达质粒,转染E47细胞,观察该质粒在E47细胞中发生RNAi效果.结果 4个备选位点的抑制效率最高,用该位点构建BS/U6/CY2E1的表达质粒可有效地、特异地抑制CYP2E1基因的表达.结论 用PCR产物作为表达框架,在体内产生双链的siRNA作为筛选高效的RNA干扰位点的方法,既快速又简便.用该位点的构建BS/U6/CYP2E1的表达质粒可用于CYP2E1基因的功能研究、酒精性脂肪肝病和非酒精性脂肪性肝病的发病机制及肿瘤发生的研究等领域中.     

PAI siRNA表达载体的构建及鉴定

目的 构建和鉴定针对PAI 的发卡样小干扰RNA（siRNA）真核表达载体PAI siRNA.方法 人工合成一对互补并编码相应短发夹状PAI siRNA 的寡核苷酸链, 将其插入到pSilencerTM 2.1-U6 neo 载体中,经测序鉴定所构建的重组载体是否正确;采用电转染法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中, 采用逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR） 、West ern印迹法分别检测转染细胞PAI mRNA 和蛋白的表达.结果 经测序证明PAI siRNA 序列正确;转染PAI siRNA 载体后,HpG2细胞PAI mRNA 和蛋白表达均较对照组明显下降（P ＜0.01）.结论 测序结果表明发卡样PAI siRNA 真核表达载体构建成功,转染Hp G2细胞后获得稳定表达,并可特异性封闭PAI的表达, 为进一步研究PAI siRNA 载体提供了实验基础.     

N-甲基-D-天门冬氨酸受体和活性氧对血管平滑肌细胞活性的影响

目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methy-D-aspartate,NMDA)受体和活性氧(reactive oxygen species,ROS)是否参与同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导血管平滑肌细胞活性的增强。方法采用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)合成实验观察细胞的增殖活性,Trans well方法观察细胞的迁移活性,二乙酰二氯氢化荧光素检测平滑肌细胞中ROS水平。结果随Hcy浓度增加,Hcy诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移活性增强,呈剂量依赖性,NMDA受体拮抗剂MK801、NAD(P)H氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)、自由基清除剂N-2酰半胱氨酸(NAC)能抑制Hcy诱导的增殖、迁移活性的增强。Hcy刺激后平滑肌细胞ROS水平升高作用能够被MK801、DPI、NAC抑制。结论ROS参与了Hcy诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移活性的增强,并且该途径是通过NMDA受体介导的。     

RNAi沉默Stat1基因对胶质瘤细胞FAT10表达的影响

目的 观察U251人胶质瘤细胞中Stat1基因沉默对FAT10蛋白表达的影响.方法 采用电穿孔法将Stat1 siRNA转染人胶质瘤细胞系U251细胞,采用Western印迹检测各组细胞中Stat1和FAT10蛋白的表达变化,用染色体核型分析Stat1干扰对FAT10过表达而导致的非整倍体现象的阻断作用.结果 Westem印迹结果显示,Stat1 siRNA干扰可以有效抑制U251细胞中Stat1的表达,并且通过抑制Stat1可以有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达,进而通过有效抑制TNF-α诱导的FAT10高表达而阻断TNF-α诱导的非整倍体现象.结论 Stat1的表达下调可以抑制TNF-α诱导的FAT10高表达及非整倍体现象.