龙牙葱木皂苷对培养心肌细胞游离钙浓度的影响

目的:观察龙牙葱木皂苷对培养心室肌细胞游离钙离子浓度的影响,旨在从细胞水平进一步证明了As的正性肌力作用的机制。方法:采用特异性的荧光指示剂Fluo-3/AM(5μmmol/l)负载心肌细胞,应用激光共聚焦显微镜观察并连续动态扫描细胞内荧光强度的变化,从而反映其对细胞内游离钙浓度的影响。结果:As(10μg/ml)明显增加培养乳鼠心肌细胞内的游离钙离子浓度。Ca2+平均荧光强度明显升高,与对照组相比,P<0.01,差异显著。荧光强度比正常对照组增30%。结论:增加心肌细胞的钙离子浓度,影响心肌兴奋-收缩藕过程,As增加心肌细胞的收缩力,进而实现正性肌力作用。     

龙牙楤木总皂苷及楤木皂苷A对缺氧/复氧诱导的AC16心肌细胞铁死亡的影响

目的 探讨龙牙楤木总皂苷及其组分楤木皂苷A能否减轻缺氧/复氧诱导的AC16心肌细胞铁死亡。方法 将AC16细胞随机分为正常组、模型组、龙牙楤木总皂苷组、楤木皂苷A组。通过缺氧24小时、复氧12小时建立AC16细胞缺氧/复氧模型,药物组缺氧/复氧损伤前6小时给予药物处理。CCK-8检测细胞存活率,乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞受损程度,透射电子显微镜观察AC16细胞形态学变化,比色法检测Fe²⁺水平,酶联免疫试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,DHE荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,蛋白免疫印迹法检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11、SAT1、GLS2的表达。结果 与正常组相比,模型组AC16细胞存活率明显下降,细胞受损程度明显升高,细胞内的线粒体皱缩、内嵴增厚、膜电子密度增高,Fe²⁺、ROS、MDA水平明显上升,GSH活力明显下降,铁死亡相关蛋白p53、SAT1、GLS2蛋白表达明显升高,SLC7A11蛋白表达明显降低,...     

龙牙楤木化学成分与药理作用研究进展

龙牙楤木是五加科楤木属植物,在我国有着悠久的使用历史,广泛用于治疗肝炎、风湿性关节炎等多种疾病。龙牙楤木的化学成分多样,包括三萜皂苷、多糖类、甾体及其苷类、生物碱、氨基酸、挥发油等,其中研究最多的是皂苷类和多糖类成分,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保护心脏、保肝护肝等作用。笔者综述了龙牙楤木的化学成分及药理作用研究进展,并对该植物的潜在药用价值和研究不足之处展开讨论,以期为其进一步开发利用提供参考依据。     

龙牙楤木皂苷类成分及药理活性研究进展

龙牙楤木Aralia elata为五加科楤木属植物,广泛分布于亚洲地区,在我国东北三省的储量极为丰富,而且龙牙楤木在民间作为重要药物来源用于治疗糖尿病、关节炎、心肌梗死等多种疾病.近年来,该植物受到越来越多的关注,并得到了深入研究.在化学成分方面,从其中分离得到100余种皂苷类成分;在药理研究方面,发现龙牙楤木总皂苷具有保护心血管、抗肿瘤、抗炎等多种重要的生物活性.通过检索,围绕龙牙楤木的化学成分及其药理活性等相关研究报道进行系统的总结,并对其研究现状进行剖析,以期为其深入开发利用提供参考.     

楤木皂苷抗肿瘤活性研究

目的 研究楤木皂苷的体内外抗肿瘤作用.方法 以人红白血病细胞株K562、人肝癌细胞株HepG2、人结肠癌细胞株LOVO和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为模型,采用cell counting kit-8 (CCK-8)检测楤木皂苷的体外抗肿瘤活性;以小鼠肝癌H22和小鼠肉瘤S180为移植性肿瘤模型,检测楤木皂苷的体内抗肿瘤活性.结果 楤木皂苷可抑制K562、HepG2,LOVO和MDA-MB-231的增殖,其IC50值分别为(209.10±32.69),(273.30±20.40),(293.60±5.85),(329.67±26.42) mg · L-1,均大于30 mg · L-1;在50,100 mg·kg-1时,楤木皂苷对小鼠肝癌H22的抑瘤率分别为28.8%,47.06%,对小鼠肉瘤S180的抑瘤率分别为27.94%,54.92%.结论 楤木皂苷体外抗肿瘤活性弱,但体内抗肿瘤活性较强.     

黄毛楤木皂苷C的结构研究

 目的 为寻找降枯活性成分,对黄毛楤木(Aralia decaisneana Hance.)的化学成分进行了研究。方法用常规的硅胶柱 层析进行分离,根据化合物的理化性质和光语数据鉴定其结构。结果得到42个化合物,本文主要报道黄毛雄木皂苷C的 结构研究。结论黄毛得木皂苷C为一新化合物。     

龙牙楤木对大鼠急性心梗死亡率的影响

急性心肌梗死（AMI）早期,由于心肌缺血、再灌注损伤可以引起折返、触发活动及延迟后除极等多种心电不稳定现象,易发生室性心律失常和猝死。龙牙槐木（Araliaelate）提取物中的主要化学成分为皂苷,具有抗心肌缺血、抗衰老、抗炎和抗癌等多方面的作用。本研究旨在研究龙牙稳木总皂苷（Aralosides,As）对急性心肌梗死引发的室性心律失常及生存率的改善作用,以期为As的临床应用提供实验依据。     

楤木皂苷对大鼠肝纤维化的影响及机制研究

目的:研究楤木皂苷对大鼠肝纤维化的影响及其可能的机制。方法:采用皮下注射四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,楤木皂苷给药8周,MASSON染色观察胶原纤维增生情况,检测各组大鼠肝脾指数、血清肝功能、LN、COI-Ⅲ、COI-Ⅳ的变化。结果:楤木皂苷30 mg/kg、60 mg/kg可减少肝细胞变性、坏死和纤维增生程度,改善肝功能,降低血清中LN、COI-Ⅲ、COI-Ⅳ的含量。结论:楤木皂苷对大鼠肝纤维化有防治作用,其机制可能与保护肝功能、降低血清中LN、COI-Ⅲ、COI-Ⅳ的含量有关。     

太白楤木根皮中两个新的齐墩果酸皂苷

 目的:对新种太白楤木(Aralia taibaiensis Z. Z. Wang et H. C. Zheng)根皮的皂苷成分继续进行研究。方法:利用硅胶柱层析和高效液相层析进行分离，根据皂苷的理化性质和光谱数据鉴定其结构。结果:得到3个化合物，分别确定为齐墩果酸-28- O-β-D_吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)，3-O-β-D- 吡喃葡萄糖醛酸丁酯-齐墩果酸_28_O-βD-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ)和3- O-β-D- 吡喃葡萄糖醛酸癸酯-齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷( Ⅲ ) 。结论:皂苷Ⅱ和Ⅲ为新化合物，分别命名为太白楤木皂苷Ⅳ ( taibaienoside Ⅳ)和太白楤木皂普Ⅴ( taibaienoside Ⅴ) ,皂苷I为首次从该植物中分得。     

分光光度法测定楤芝片中楤木皂苷的含量

目的　建立　芝片中的三萜皂苷含量测定方法。方法　采用分光光度法 ,测定波长 :5 4 4 nm。结果　人参皂苷 Re的平均回收率 98.6 % ,RSD=2 .9 (n=6 )。结论　本方法简便 ,快速 ,结果准确     

淫羊藿总黄酮注射液对大鼠乳鼠心肌细胞内氧化还原状态的干预

 目的观察H₂O₂作用下乳鼠心肌细胞早期凋亡和细胞内氧化还原状态的改变及淫羊藿总黄酮注射液(epimedium flavonoids injection,EFI)的干预作用。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,复制H₂O₂损伤模型,流式细胞仪检测心肌细胞早期凋亡和活性氧水平,测定心肌细胞内总抗氧化能力,免疫印迹法检测心肌细胞硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,100μmol·L^-1H₂O₂作用12h后心肌细胞早期凋亡率显著增高(P<0.001);心肌细胞平均荧光强度(MFI)明显上升(P<0.01);总抗氧化能力显著下降(P<0.01或P<0.05);Trx和SOD蛋白表达减少。EFI可剂量依赖性降低心肌细胞早期凋亡率和MFI、升高总抗氧化能力、Trx和SOD蛋白表达增加,与H₂O₂作用组比较,200和400mg·L^-1EFI组差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论H₂O₂可诱导心肌细胞早期凋亡,促使心肌细胞处于氧化状态;EFI可促使心肌细胞处于还原状态,对H₂O₂诱导的心肌细胞损伤具有保护作用。     

黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaf total flavonoid SSTF)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧时凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,缺氧(hypoxia H)2h后,复氧(reoxygenation R)4h制备缺氧/复氧损伤模型。以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示。结果:缺氧2h再复氧4h,心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数(positive expressionindex PEI)显著低于对照组(P<0.01),Bax蛋白PEI显著高于对照组(P<0.01)。细胞存活率明显低于对照组(P<0.05)。SSTF干预组Bcl-2蛋白PEI明显高于缺氧/复氧组(P<0.05),Bax蛋白PEI显著低于缺氧/复氧组(P<0.05),细胞存活率明显高于缺氧/复氧组(P<0.05)。结论:心肌细胞缺氧再复氧时,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增强;细胞存活率降低。SSTF可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,减少细胞凋亡,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

活络效灵丹对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用研究

目的 探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立H/R心肌细胞损伤模型,实验分为4组:正常血清对照组、模型组(H/R组)、活络效灵丹(HXP)血清组和单硝酸异山梨酯(ISMN)血清组,采用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率的影响,测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量以及胞浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并采用流式细胞仪检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞凋亡的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量升高,SOD活性降低,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);与模型组比较,活络效灵丹含药血清可明显提高细胞存活率,增加胞浆SOD活性,减少上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量,并降低细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用可能与其抗脂质过氧化作用有关.     

丹皮酚对钙反常培养心肌细胞的保护作用

丹皮酚能显著抑制正常心肌细胞快相(5min)和慢相(120min)⁴⁵Ca摄取及搏动频率,显著抑制钙反常心肌细胞⁴⁵Ca摄取和降低胞内过氧化脂质含量,且呈剂量依赖性。表明丹皮酚减轻钙反常损伤与阻止Ca²⁺内流及抗氧化有关。     

人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞钠、钾离子通道的影响

目的：观察人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞电压依赖性的钠、钾离子通道的影响,揭示其抗心律失常的作用机制。方法：采用酶分法获得单个大鼠心室肌细胞,在全细胞膜片钳技术模式下,记录电压依赖性钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流,并观察不同浓度的人参皂苷Re对电流幅度的影响。结果：给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后钠通道电流幅度呈现减小的趋势,对通道电流幅度的抑制率分别为（25.5±5.7）%（n=3）和（46.2±18）%（n=4）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）对瞬时外向钾电流幅度略有抑制,洗脱后电流恢复,其中100μmol·L-1人参皂苷对电流的抑制率为（13±9）%（n=3）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后内向整流钾电流幅度呈现逐渐减小的趋势,药物洗脱后电流完全恢复,（10,100μmol·L-1）对通道电流幅度的抑制率分别为（16.3±8.7）%（n=5）和（35.4±11.2）%（n=5）。结论：人参皂苷Re能够抑制心室肌细胞电压依赖性的钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流发挥抗心律失常的作用。     

氧耗剂致乳鼠心肌缺氧/复氧模型的建立

目的 探讨利用氧耗剂建立乳鼠心肌缺氧/复氧损伤模型的一种新方法.方法 取SD乳鼠原代心肌细胞培养,观察氧耗剂连二亚硫酸钠不同浓度(1,2,3,4,5 ,6 mmol/L)分别缺糖缺氧1 h复氧 24 h及在4 mmol/L浓度下缺糖缺氧不同时间(5 min,15 min,30 min,1 h,2 h,4 h,6 h)后复氧24 h对心肌细胞存活率及培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的影响,并进行细胞形态学观察.结果 乳鼠心肌细胞经过缺氧/复氧处理后,与正常对照组相比,连二亚硫酸钠可呈浓度依赖性降低心肌细胞存活率,尤其 Na2S2O4 浓度大于3 mmol/L时细胞MTT的OD值与正常对照组有显著性差异,同时上清液中LDH含量升高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).而当连二亚硫酸钠4 mmol/L浓度下随着缺氧时间延长,细胞的存活率显著降低,而心肌细胞上清液中LDH的释放量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),呈现时间依赖性.结论 应用连二亚硫酸钠可建立心肌细胞缺氧再灌注损伤模型.     

四逆汤类方提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：探讨四逆汤类方提取物对离体培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用。方法：培养的乳鼠心肌细胞经终浓度分别为1、5、25μg／mL的四逆汤类方提取物预处理，进行缺氧／复氧损伤后，比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性、丙二醛(MDA)含量及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：与对照组比较，附子、干姜配葱白提取物(EAGO)，附子、干姜配甘草提取物(EAGL)，附子、干姜配胆汁提取物(EAGB)，附子、干姜配人参提取物(EAGG)可以提高细胞内线粒体脱氢酶活性，与附子配干姜提取物(EAG)组比较无显著差异。EAGO、EAGL、EAGB、EAGG可以降低上清液中乳酸脱氢酶活性，与EAG组比较差异显著。EAGL、EAGG可以降低细胞内MDA含量，与FAG组比较差异显著。结论：四逆汤类方均可以提高缺氧／复氧损伤的乳鼠心肌细胞内线粒体脱氢酶活性，降低上清液中乳酸脱氢酶活性。四逆汤和人参四逆汤提取物有降低细胞内MDA的作用。提示四逆汤类方对缺氧／复氧损伤的心肌细胞均有保护作用。     

芪冬颐心口服液对柯萨奇B3病毒感染的乳鼠心肌细胞的保护作用研究

柯萨奇B组病毒(CVB)是病毒性心肌炎(Viral My.ocarditis,VMC)的主要致病原,该病毒与心肌炎、心肌病的发生具有高度的相关性[1],但临床治疗VMC仍缺乏有效的抗病毒药物.本研究采用体外培养心肌细胞技术,选用CVB3作为致病病毒,观察芪冬颐心对培养心肌活细胞的直接作用,从而证明了该制剂对VMC心肌细胞的保护作用.     

刺囊酸预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

 目的 研究刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法 用终浓度分别为0.5, 5和50 μmol·L^-1的刺囊酸预处理原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞1 h, 予以缺氧3 h后, 再复氧2 h后,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛含量及热休克蛋白70表达等指标,观察其对缺氧/复氧损伤的延迟保护作用,并探讨一氧化氮合成酶抑制剂0.1 mmol·L^-1的N-硝基-L-精氨酸甲酯、促分裂原活化蛋白激酶抑制剂50 μmol·L^-1的PD98059和1 μmol·L^-1K⁺-ATP通道阻断剂格列苯脲对其保护作用的影响。结果 与缺氧/复氧组比较,不同剂量的刺囊酸预处理组能显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶活性,呈剂量依赖性,且显著能增加超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛含量,增加热休克蛋白70表达,能对抗缺氧/复氧损伤;而N-硝基-L-精氨酸甲酯和PD98059能部分取消刺囊酸预处理的上述保护作用。结论 刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤有显著抗氧化作用,且其保护作用机制可能与一氧化氮生成、促分裂原活化蛋白激酶活化及增加热休克蛋白70表达有关。     

脂联素受体在正常SD大鼠乳鼠心肌细胞的分布和表达

目的通过体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,研究脂联素受体1（AdipoR1）、脂联素受体2（AdipoR2）及T-钙黏蛋白（Tcadherin）三种脂联素受体在大鼠乳鼠心肌细胞上的分布和表达。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,通过a-肌动蛋白免疫荧光法对原代培养的心肌细胞进行鉴定,并在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。选用原代培养96h的单层心肌细胞进行实验,使用RT—PCR和细胞免疫组织化学方法检测AdipoR1、AdipoR2、Tcadherin的mRNA和蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均检测到了AdipoR1、AdipoR2、T—cadherin的mRNA和蛋白表达,其中以AdipoR1和Tcadherin的mRNA和蛋白表达量高,与AdipoR2的表达量相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论脂联素受体1、脂联素受体2和T钙黏蛋白,三种脂联素受体在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均有表达,并以脂联素受体1和T-钙黏蛋白的表达为主,脂联素受体2表达量较少。