L-精氨酸对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察L-精氨酸(L-Arg)对哮喘气道重构大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)的细胞周期分布及细胞周期调节蛋白(CCRP)表达水平的影响,探讨L-Arg体内干预哮喘大鼠ASMC增殖的可能作用机制.方法 实验分成对照组、哮喘组、L-Arg组,建立大鼠哮喘气道重构模型,检测血清NO-2/NO-3含量、肺内支气管内管壁和平滑肌层厚度及ASMC核数、ASMC的细胞周期分布以及ASMC内细胞周期素E(cyclin E)、cyclin A、cyclin B、蛋白27kip1(P27kip1)的表达.结果 哮喘组大鼠支气管内管壁、平滑肌层的厚度和ASMC数目显著大于对照组(P<0.05);L-Arg组大鼠支气管内管壁的厚度、平滑肌层的厚度和ASMC数目显著小于哮喘组(P<0.05).哮喘组血清一氧化氮(nitricoxide,NO)水平显著低于对照组(P<0.05);L-Arg组血清NO水平显著高于哮喘组(P<0.01).哮喘组G0/G1期ASMC比例及P27kip1表达水平显著低于对照组(P<0.01),G2/M+S期ASMC比例及cyclin E、cyclin A和cyclin B表达水平显著高于对照组(P<0.01);L-Arg组G0/G1期ASMC比例及P27kip1表达水平显著高于哮喘组(P<0.05),G2/M+S期ASMC比例及cyclin E和cyclin A表达水平显著低于哮喘组(P<0.05).结论 L-Arg通过调控CCRP的表达水平阻滞细胞从G1期进入S期而抑制哮喘ASMC的增殖.     

瘦素对大鼠气道平滑肌β_2肾上腺素能受体表达的影响

目的观察瘦素(LP)对大鼠气道平滑肌细胞β2肾上腺素能受体(β2-AR)表达的影响,探讨LP参与哮喘发病的机制。方法组织贴块法原代培养大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),随机分为空白对照组(A组),LP 50 ng/L组(B组),LP 100 ng/L组(C组),LP 200 ng/L组(D组)及LP拮抗剂组(LP 200 ng/L+LP拮抗剂200 ng/L)(E组)分别干预24 h,采用Western印迹法及实时荧光半定量RT-PCR测瘦素受体(Ob-R)及β2-AR的表达。结果与A组相比,B、C、D组Ob-R表达明显升高,而β2-AR表达下降,证实LP可以上调Ob-R的表达并抑制β2-AR的表达;E组Ob-R表达较B、C、D组下降(P<0.05),与A组相比(P>0.05);E组β2-AR表达较B、C、D组升高(P<0.05),与A组相比(P>0.05)。结论 LP呈浓度依赖抑制大鼠气道平滑肌细胞β2-AR的表达。     

瘦素经PI3K-AKT-NFκB通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:观察瘦素在SD大鼠心肌缺血再灌注损伤中对磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸(苏氨酸)蛋白激酶B-核转录因子κB(PI3K-Akt-NFκB)信号通路的影响。方法:100只健康雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组(每组20只)。A组为单纯缺血再灌注模型对照组;B组为假手术组,仅开胸不作血管结扎;C、D、E组分别为瘦素低、中、高剂量干预组(剂量依次为20、50、100μg/kg)。使用线栓法制作心肌缺血再灌注模型,缺血30 min再灌注24 h后观察HE染色心肌病理学改变,蛋白印迹技术(Western Blot)观察PI3K、Akt1、NFκB蛋白的表达,酶联免疫法(ELISA)检测肿瘤刺激因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6),观察瘦素的抗炎作用。结果:①与A组比较,C、D、E组心肌组织病理学表现均缓解,C、D、E组TNF-α、IL-6的表达较A组降低(均P0.05),D组P13K、AKT1、NFκB表达均增加(均P0.05),C组AKT1表达增高(P0.05),E组PI3K、NFκB表达上调(均P0.05);③与B组比较,A、C、D、E组心肌组织病理学变化均有差异,且TNF-α、IL-6表达均增加(均P0.05),A组PI3K表达增加(P0.05),C组PI3K、AKT1表达增加(均P0.05),D、E组PI3K、AKT1、NFκB表达均增加(均P0.05)。结论:瘦素能控制大鼠心肌缺血再灌注损伤的炎症反应,促进相关抑凋亡蛋白并维持细胞生存,其可能经PI3K-AKT-NFκB信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。     

补脾益气方药对哮喘大鼠嗜酸性粒细胞趋化因子表达的影响

目的观察补脾益气方药对哮喘大鼠肺组织嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达的干预作用。方法SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、生理盐水治疗组(C组)、地塞米松组(D组)和补脾益气方药治疗组(E组)。哮喘组通过卵蛋白(OVA)致敏、激发建立大鼠哮喘模型,以生理盐水和地塞米松分别做对照治疗。E组大鼠在复制哮喘模型后,按照1 mL/100 g体质量给予补脾方药1次/d,共14 d。计数肺泡灌洗液细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数;光镜下观察肺组织病理学改变;采用RT-PCR和Western bloting检测肺组织eotaxin的表达。结果与A组比较,B、C组肺泡灌洗液EOS计数、eotaxin的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.01),D、E组较B组降低(P<0.01),D、E组间无差异(P>0.05)。结论补脾益气方药可能通过降低哮喘大鼠体内eotaxin水平,减轻炎症细胞在肺组织局部浸润,抑制气道炎症。     

转化生长因子β1对不同阶段支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞外信号调节激酶通道的影响

目的 本文旨在探讨转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)对不同阶段(急性和慢性)支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMC)上细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2 mRNA、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平的影响.方法 建立2周、6周哮喘大鼠模型,用TGF-β1和ERK的特异性抑制剂PD98059干预哮喘大鼠ASMC的培养.用RT-PCR检测不同阶段哮喘大鼠模型ASMC上ERK1/2 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测p-ERK1/2蛋白的表达及定位.结果 与正常对照组ASMC比较,2周、6周哮喘组ERK mRNA、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率显著增高.经PD98059干预之后,2周、6周哮喘组ASMC的ERKmRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率均显著降低.经TGF-β1干预后,2周、6周哮喘组ASMC的ERK mRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量较各自哮喘组显著增高,而这一作用可以被PD98059部分抑制.但以上结果 2周和6周哮喘模型组之间差异无统计学意义.结论 TGF-β1可上调不同阶段哮喘大鼠ASMC上ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2表达.在哮喘的不同阶段,TGF-β1可能持续通过促进ERK信号转导通道的活性对ASMC的增殖进行调控.     

阿托伐他汀对1型糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及机制

目的探讨阿托伐他汀(ATO)对1型糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及可能的作用机制。方法 40只健康雄性成年SD大鼠,随机分为A组(健康对照组),B组(糖尿病模型组),C组(健康大鼠ATO干预组)和D组(糖尿病大鼠ATO干预组),每组10只。采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法对B组和D组大鼠进行实验性1型糖尿病诱导。采用ATO(10 mg·kg-1·d-1,喂饲)对C组和D组大鼠进行干预治疗;8 w后,测量并记录各组大鼠的空腹血糖值和体重值,干预治疗后的第1、2、4、8周,检测各组大鼠的各时相点24 h尿中尿白蛋白(UAL)、血尿素氮(SUN)和血肌酐(Scr)水平;8 w后,颈椎脱臼法处死各组大鼠,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠肾脏组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、前列腺素(PG)E2、肿瘤坏死因子(TNF)-α和C反应蛋白(CRP)水平;蛋白免疫印迹试验法检测各组大鼠肾脏组织中Smad2蛋白表达水平和转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达水平。结果ATO治疗8 w后,D组大鼠体重明显高于B组(P0.05),但仍明显低于A组、C组(P0.05);D组空腹血糖与B组比较差异无统计学意义(P0.05)。从第4周开始,与B组相比,D组大鼠24 h UAL、BUN、Scr水平明显降低(P0.05)。8 w后,与B组相比,D组大鼠肾脏组织内IL-1β、IL-6、IL-10、PGE2、TNF-α和CRP表达水平均显著降低(P0.05),Smad2和TGF-β1蛋白表达水平均显著下降(P0.05)。而A组与C组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论 ATO对1型糖尿病大鼠的肾损伤有保护作用,其机制可能与降低肾脏组织中炎症细胞因子水平、抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关。     

运动预适应对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的探讨运动预适应(EP)对非动脉硬化大鼠及动脉硬化大鼠急性心肌缺血心肌细胞B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达及半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白的影响。方法选取7周龄SD大鼠90只,随机分为5组:对照组(A组)、急性心肌缺血组(B组)、动脉硬化+急性心肌缺血组(C组)、EP+急性心肌缺血组(D组)、动脉硬化+EP+急性心肌缺血组(E组),其中A组10只,其余各组20只。C、E组予维生素D3连续灌胃4 d,喂高脂饲料(猪油、胆固醇、胆酸、丙基硫氧嘧啶)6 w制备动脉硬化模型。B、C、D、E组腹腔注射3 mg/kg异丙肾上腺素(ISO),复制大鼠急性心肌缺血损伤模型。D、E组建立EP大鼠模型进行间歇性游泳运动,以尾部负重体重的3%重物。建模后24 h内采用脊髓脱臼法处死大鼠,取左心室心肌组织,采用免疫组化检测Bcl-2及Bax蛋白的表达,Western印迹检测Caspase-3蛋白。结果与A组比较,B、C、D、E组心肌细胞Bcl-2的表达均显著降低(P<0.05),而Bax表达均显著升高(P<0.05);B组与C组心肌细胞Bcl-2的表达差异无统计学意义(P>0.05),但C组Bax的表达显著升高(P<0.05);D组、E组心肌细胞Bcl-2的表达较B组、C组显著升高(P<0.05),而Bax的表达显著降低(P<0.05);与D组比较,E组Bcl-2的表达显著降低,而Bax的表达显著升高(P<0.05)。与A组相比,B、C、D、E组心脏Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与B组、C组相比,D组、E组心脏Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与D组比较,E组心脏Caspase-3蛋白表达水平无明显差异(P>0.05);与A组比较,B、C、D、E组细胞凋亡指数(AI)显著增高(P<0.05),其中C组AI最高;与B组、C组比较,D组、E组AI显著降低(P<0.05),而D组比E组AI稍低(P<0.05)。结论EP可能改善急性心肌缺血或是在合并动脉硬化基础上急性心肌缺血大鼠的心肌细胞凋亡,可能基于凋亡相关基因Bcl-2表达升高、Bax表达降低调控及下调Caspase-3蛋白所致。     

三黄泻心汤对肥胖大鼠血清瘦素及胰岛素水平影响的实验研究

目的通过三黄泻心汤对肥胖大鼠体重、Lee’s指数、腹腔脂肪湿重及血清瘦素、胰岛素水平的影响,探讨清热解毒法对肥胖及瘦素、胰岛素抵抗的调整作用。方法给予高脂饮食建立营养性肥胖大鼠模型,将肥胖大鼠随机分为3组,分别给予三黄泻心汤(A组)、盐酸芬氟拉明(B组)和生理盐水(C组)灌胃,连续12周,每周测体重,试验末取血测血脂、血清瘦素及胰岛素。结果A组和B组大鼠体重分别为(387.8±12.1)g和(378.3±10.7)g较C组的(493.1±8.9)g低(P<0.05);腹腔脂肪湿重A组和B组也较C组低(P<0.01),且随喂养时间的延长体重变化趋势A组下降缓慢,B组亦下降,但试验末略有上升,C组体重继续增长。A组和B组血糖、胆固醇和低密度脂蛋白均较C组低,瘦素和胰岛素的变化A组和B组较C组亦低(P<0.05),且A组与C组血糖和胰岛素差异更大(P<0.01)。结论三黄泻心汤可能通过降低肥胖大鼠体重、血糖及血清瘦素、胰岛素水平而发挥调节血脂、改善瘦素和胰岛素抵抗的作用。     

不同浓度人参总皂苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织细胞凋亡、免疫球蛋白及LCN2/AQP4蛋白的影响

目的 探究不同浓度人参总皂苷对慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)大鼠肺组织细胞凋亡、免疫球蛋白及脂质运载蛋白(LCN)2/水通道蛋白(AQP)4的影响。方法 选取60只SPF级SD雄性大鼠，随机分为正常组(A组：健康大鼠),模型组(B组：慢阻肺模型大鼠),二陈汤加味组(C组：模型大鼠给予二陈汤干预),低浓度人参总皂苷组(D1组：模型大鼠给予低浓度人参总皂苷干预),中浓度人参总皂苷组(D2组：模型大鼠给予中浓度人参总皂苷干预),高浓度人参总皂苷组(D3组：模型大鼠给予高浓度人参总皂苷干预),每组10只，干湿重法测定肺体脂数(LBF)、肺含水量(LWC),苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态；流式细胞仪检测肺组织细胞凋亡；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM水平；Western印迹检测肺组织中LCN2、AQP4蛋白表达。结果 B组与A组比较，LBF、LWC含量、细胞凋亡率、LCN2显著升高(P<0.05),与B组比较，C、D1、D2、D3组的含量明显降低(P<0.05),且人参总皂苷各剂量组呈剂量依赖趋势，而C组与D1组相比无明显差异...     

瘦素和瘦素受体mRNA表达与哮喘和肥胖的关系

目的探讨瘦素(LEP)和瘦素受体(LEPR)mRNA表达与哮喘和肥胖的关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法测定各组PBMC LEP和LEPR mRNA表达水平,分析LEP mRNA与血浆瘦素浓度、EOS%、IgE和FEV1占预计值(%)的关系。结果哮喘、肥胖、哮喘合并肥胖组的PBMC LEP mRNA表达量与健康对照组相比明显升高(P均0.01),中、重度哮喘与轻度哮喘相比明显升高(P均0.05);肥胖组LEPR mRNA表达量与其余各组相比明显升高(P均0.01);哮喘组PBMC LEP mRNA表达量与血浆LEP浓度呈正相关(r=0.211,P=0.012),与FEV1占预计值(%)成负相关(r=-0.314,P=0.043),与EOS%、IgE无相关关系(r=0.002、0.001,P=0.58、0.96)。结论 LEP mRNA表达升高可能参与哮喘和肥胖的发生,并且导致较为严重的哮喘表型,其机制可能与血浆瘦素浓度增高有关,其相关的哮喘是非嗜酸细胞性、非过敏性的;LEPR mRNA高表达参与肥胖发生,但与哮喘无关。     

DP_2拮抗剂抑制哮喘模型小鼠气道炎症的作用机制及与激素的比较

目的探讨DP2拮抗剂抑制哮喘模型小鼠气道炎症的作用机制,并比较其同吸入激素的差异。方法 SPF级BALB/c小鼠24只,随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、吸入激素干预组(C组)和DP2拮抗剂干预组(D组),每组6只,用卵白蛋白(OVA)雾化诱喘。应用Pro Cyte DxTM全自动血细胞分析仪进行支气管肺泡灌洗液细胞分类计数,Western blot方法检测肺组织DP1和DP2蛋白的表达。结果与B组相比,C、D两组的嗜酸性粒细胞计数、DP1和DP2蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。D组的DP2蛋白水平较A组显著下降(P0.01),C组的DP2蛋白水平较A组亦有下降(P0.05),C、D两组之间比较有统计学异常(P0.05)。DP1的蛋白表达水平在A、C、D组之间无统计学差异。结论 DP2拮抗剂能通过抑制其蛋白表达水平从而减少气道的嗜酸性粒细胞浸润,达到抑制哮喘模型小鼠气道炎症的作用。DP2拮抗剂对DP2蛋白表达的抑制作用强于吸入激素,或可作为新的药物用于支气管哮喘的治疗。     

低氧运动对营养性肥胖大鼠形态及肥胖相关血液指标的影响

目的 探讨低氧运动对营养性肥胖大鼠形态及肥胖相关血液指标的影响。方法 构建7 w高脂膳食诱导SD大鼠营养性肥胖模型，建模后随机分为常氧高脂膳食安静组和运动组(A组和AE组，各10只)、16.3%低氧高脂膳食安静组和运动组(B组和BE组，各10只)、13.3%低氧高脂膳食安静组和运动组(C组和CE组，各10只),继续高脂饲养，运动组进行8 w耐力训练，即20 m/min, 40 min/d, 5 d/w。末次运动24 h后处死大鼠并采样，测定各组血糖、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和三酰甘油水平；酶联免疫吸附试验测定瘦素、脂联素水平。结果 低氧运动改善营养性肥胖大鼠的形态、血糖及血脂。低氧干预后，AE组与BE组、AE组与CE组、B组与BE组、C组与CE组血清中瘦素含量均具有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。A组与B组、A组与C组、AE与CE组、B组与BE组、AE与BE组、C组与CE组血清中脂联素表达均具有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。结论 低氧运动可改善营养性肥胖大鼠形态及肥胖相关血液指标。     

整合素β1基因沉默对支气管哮喘小鼠气道平滑肌功能的影响

目的 探讨整合素β1基因沉默对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖和分泌功能的影响.方法 原代培养正常及哮喘模型小鼠ASMC,分别取各自第5代ASMC进行实验,利用RNA干扰(RNAi)技术沉默ASMC的整合素β1基因,RT-PCR技术观察沉默前后ASMC整合素β1 mRNA表达水平变化,蛋白印迹检测沉默前后ASMC整合素β1蛋白含量变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测整合素β1基因沉默前后ASMC细胞增殖变化;流式细胞仪测定整合素β1基因沉默前后ASMC细胞周期分布及细胞凋亡率变化情况;ELISA检测整合素β1 基因沉默前后ASMC分泌的白细胞介素(IL)-6及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)的含量变化.结果 (1)哮喘PBS对照组RT-PCR显示整合素β1 mRNA(0.907±0.041)较正常PBS对照组(0.527±0.027)显著增高(t=24.632,P＜0.05),哮喘siRNA干预组(0.503±0.034)较哮喘PBS对照组明显减低(t=24.079,P＜0.05),正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化(t=1.077,P＞0.05);(2)Western blot检测显示哮喘PBS对照组整合素β1蛋白表达(0.733±0.067)较正常PBS对照组(0.386±0.044)显著增高(t=13.622,P＜0.05),哮喘siRNA干预组(0.453±0.074)较哮喘PBS对照组显著减低(t=8.880,P＜0.05),正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化(t=1.908,P＞0.05);(3)MTT实验显示3～5 d的吸光度(A)值哮喘PBS对照组较同期正常PBS对照组 显著增强(均P＜0.05),哮喘siRNA干预组的A值较同期哮喘PBS对照组显著降低(均P＜0.05),正常siRNA干预组与正常PBS对照组差异无统计学意义(均P＞0.05);(4)哮喘PBS对照组ASMC处于增殖状态的S期+G2/M期ASMC比例为[(49±4)%],明显高于正常PBS对照组[(34±4)%](t=8.035,P＜0.05),哮喘siRNA干预组ASMC的S期+G2/M期ASMC比例(42±7)%明显低于哮喘PBS对照组(t=2.212,P＜0.05),正常siRNA干预组与正常PBS对照组差异无统计学意义(t=0.699,P＞0.05);(5)哮喘PBS对照组的凋亡率[(3.9±1.4)%]较正常PBS对照组[(7.4±0.5)%]显著升高(t=7.465,P＜0.05),哮喘siRNA干预组凋亡率[(12.6±2.4)%]明显高于哮喘PBS对照组(t=9.839,P＜0.05),正常siRNA干预组凋亡率与正常PBS对照组相比差异无统计学意义(t=2.094,P＞0.05);(6)哮喘PBS对照组IL-6[(545±28)ng/L]、RANTES分泌值[(345±28)ng/L]高于正常PBS对照组[分别为(219±26)ng/L和(138±16)ng/L,均P＜0.05],哮喘siRNA干预组分泌量[分别为(348±26)ng/L和(250±24)ng/L]显著低于哮喘PBS对照组(t值分别为6.192和4.590,均P＜0.05),而正常siRNA干预组较正常PBS对照组差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 靶向ASMC整合素β1基因沉默能抑制哮喘模型小鼠ASMC的增殖、降低分泌功能并促进ASMC凋亡.     

瘦素对支气管哮喘大鼠气道炎症及Th1/Th2细胞因子表达作用的影响

目的 探讨瘦素对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道炎症和Th1/Th2细胞因子表达的影响.方法 应用随机数字表法将40只雌性SD大鼠随机分为正常体重对照组(A组)、正常体重哮喘组(B组)、正常体重瘦素干预组(C组)、肥胖对照组(D组)和肥胖哮喘组(E组),建立大鼠肥胖和哮喘模型.测定气道反应性,计数BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞及中性粒细胞数目,ELISA法测定血清和BALF中白细胞介素(IL)-4、γ-干扰素(IFN-γ)及瘦素浓度,Western blot及逆转录PCR法测定肺组织瘦素蛋白及mRNA的表达.结果 C、E组大鼠以10、100、300 ug/kg浓度乙酰胆碱尾静脉注射后气道阻力[分别为(0.89±0.11)、(1.02±0.10)、(1.13±0.11)cm H2O·ml-1·s-1(1 cm H2O=0.098 kPa)和(0.95±0.10)、(1.12±0.10)、(1.14±0.10)cm H2O·ml-1·s-1],明显高于B组[分别为(0.64±0.13)、(0.74±0.07)、(0.77±0.09)cm H2O·ml-1·s-1],均P<0.05.C、E组BALF中白细胞总数[分别为(91±9)×104/ml和(108±21)×104/ml],中性粒细胞计数[分别为(12.4±4.0)×104/ml和(14.2±5.9)×104/ml]均高于B组[分别为(79±7)×104/ml和(2.4±1.1)×104/ml],均P<0.05.C、E组血清及BALF中IFN-γ浓度[分别为(42.3±3.5)、(45.1±4.8)、(19.2±1.8)和(20.3±1.5)ng/L]明显高于B组[分别为(16.5±1.4)和(9.3±1.0)ng/L],均P<0.05.C、E组肺组织瘦素蛋白及mRNA表达[分别为(0.40±0.07)、(0.44±0.05)ng/L和(0.34±0.06)、(0.38±0.04)ng/L]均明显高于B组[(0.31±0.03)ng/L和(0.21±0.04)ng/L],均P<0.05.结论 瘦素可促进哮喘气道炎症,并以中性粒细胞浸润和Th1型炎症反应增强为特点.     

转化生长因子β1对不同阶段支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞外信号调节激酶通道的影响

目的本文旨在探讨转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）对不同阶段（急性和慢性）支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells,ASMC）上细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）1／2 mRNA、磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）表达水平的影响。方法建立2周、6周哮喘大鼠模型,用TGF-β1和ERK的特异性抑制剂PD98059干预哮喘大鼠ASMC的培养。用RT-PCR检测不同阶段哮喘大鼠模型ASMC上ERK 1／2mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测P—ERK1／2蛋白的表达及定位。结果与正常对照组ASMC比较,2周、6周哮喘组ERKmRNA、ERK1／2蛋白、p-ERK 1／2蛋白的表达量以及ERK活化率显著增高。经PD98059干预之后,2周、6周哮喘组ASMC的ERKmRNA、p-ERK 1／2蛋白的表达量以及ERK活化率均显著降低。经TGF-β1,干预后,2周、6周哮喘组ASMC的ERK mRNA、p-ERK 1／2蛋白的表达量较各自哮喘组显著增高,而这一作用可以被PD98059部分抑制。但以上结果2周和6周哮喘模型组之间差异无统计学意义。结论TGF-β1可上调不同阶段哮喘大鼠ASMC上ERK1／2mRNA及p-ERK1／2表达。在哮喘的不同阶段,TGF-β1可能持续通过促进ERK信号转导通道的活性对ASMC的增殖进行调控。     

基于Btk-PLCγ2-NFATc1通路分析调控miR-17-5p表达对根尖周炎大鼠骨破坏的修复作用

目的 分析基于布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)-磷脂酰肌醇特异性磷酯酶(PLCγ2)-活化T-细胞核因子(NFATc)1通路调控微小RNA-17-5p(miR-17-5p)表达对根尖周炎大鼠骨破坏的修复作用。方法 将60只大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、上调(C)组、下调(D)组各15只，除A组外，其余大鼠均建立根尖周炎模型，C组、D组分别转染miR-17-5p模拟物(mimics)、miR-17-5p抑制剂(inhibitor)行上调、下调转染，A组、B组给予等体积生理盐水干预。观察各组病理组织学、miR-17-5p表达量、骨细胞阳性细胞数、炎性浸润指标水平及Btk-PLCγ2-NFATc1通路蛋白表达量。结果 与C组相比，D组miR-17-5p表达量，炎性浸润指标水平，Btk、PLCγ2、NFATc1蛋白表达量显著较低(P<0.05)。与C组相比，D组骨细胞阳性细胞数显著较少(P<0.05)。结论 下调miR-17-5p可能通过下调Btk、PLCγ2、NFATc1蛋白表达量、抑制Btk-PLCγ2-NFATc1通路，减少骨细胞阳性细胞数，对骨破坏起一定的修复作用。     

外源性CGRP对ALI大鼠肺组织AQP1及p-JNK表达的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对脂多糖诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织水通道蛋白(AQP)1和磷酸化c-Jun氨基端蛋白激酶(p-JNK)表达的影响及可能的致病机制。方法将42只SD大鼠随机分为NS对照组(NS组)、CGRP对照(CGRP)组、6 h ALI组、12 h ALI组、6 h干预组(6 h Control组)和12 h干预组(12 h Control组)各7只。ALI组按10 mg/kg尾静脉注射LPS后6 h和12 h后分别取材;干预组按5μg/kg尾静脉注射药物CGRP 1 h后再予LPS(10 mg/kg)尾静脉注射,后分别于6 h和12 h后分别取材;CGRP对照组予CGRP(5μg/kg)尾静脉注后6 h取材;NS组按NS(1 ml/kg)尾静脉注射后6 h取材。比较各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数及分类计数、湿/干重比值(W/D);分别用免疫组织化学(IHC)和Western印迹检测各组大鼠肺组织AQP1和p-JNK蛋白表达水平。结果 ALI组大鼠BALF细胞总数和分类计数、W/D比值和p-JNK的表达量较NS组明显增高,AQP1表达较NS组明显下降(均P0.05);相同时段ALI组BALF中细胞分类计数和p-JNK的表达量较干预组明显增加,肺组织AQP1表达量较干预组明显下降(均P0.05)。CGRP组与NS组大鼠BALF中细胞计数及细胞分类计数百分比、p-JNK表达和AQP1表达差异不明显(P0.05)。结论外源性CGRP可上调ALI大鼠肺组织AQP1的表达水平,抑制p-JNK的活化,可减轻LPS诱导的ALI大鼠炎症反应和肺水肿的程度。     

地塞米松对哮喘小鼠气道平滑肌细胞中胸腺活化调节趋化因子表达的影响

目的探讨胸腺活化调节趋化因子(TARC)在哮喘小鼠气道平滑肌细胞中的表达及地塞米松对TARC的影响。方法 36只小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松治疗组(C组),每组12只。以卵白蛋白OVA和氢氧化铝混悬液致敏及OVA激发建立哮喘小鼠模型。行支气管肺泡灌洗液(BALF)沉渣白细胞及嗜酸性粒细胞(EOS)计数,HE染色观察肺组织病理改变,应用酶联免疫吸附实验测定血清及BALF中TARC、IL-4的浓度,并用免疫组织化学的方法测定气道平滑肌细胞中TARC蛋白的表达量。结果 B组白细胞及EOS计数明显高于A、C组(P<0.01),C组EOS计数高于A组(P<0.05)。B组血清及BALF中TARC及IL-4的浓度显著高于A、C组(P<0.01);C组血清、BALF中TARC的浓度低于B组(P<0.01)。B组气道平滑肌细胞中TARC蛋白表达量较A、C组显著增高(P<0.01)。小鼠血清、BALF中TARC浓度与IL-4浓度呈正相关(r=0.669、0.845,P均<0.01)。结论 TARC在哮喘组小鼠肺组织气道平滑肌细胞中的蛋白表达量较正常组明显增多,地塞米松可能通过减少IL-4的分泌从而抑制TARC的表达。     

基于PI3K/Akt信号通路探究电针对带状疱疹后遗神经痛大鼠神经功能的干预机制

目的 分析电针对带状疱疹后遗神经痛大鼠脊髓神经功能及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响，明确电针治疗带状疱疹后遗神经痛的机制。方法 选取60只SFP级雄性大鼠，随机分为A、B、C、D组各15只，A组不做任何处理，B、C、D组接种水痘带状疱疹病毒制备带状疱疹后遗神经痛模型。建模完成后A组、B组不做任何干预，C组使用普瑞巴林灌胃，D组行电针干预。分析电针对带状疱疹后遗神经痛大鼠的干预作用。结果 与A组相比，B、C、D组机械痛敏阈值、热痛敏阈值均显著降低，神经递质P物质(SP)、神经激肽(NK)-1、脊髓神经元凋亡指数、p-PI3k、p-Akt蛋白表达量均显著升高(P<0.05);与B、C组相比，D组机械痛敏阈值、热痛敏阈值显著升高，SP、NK-1、脊髓神经元凋亡指数、p-PI3k、p-Akt蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论 电针可能经作用于PI3K/Akt信号通路调控带状疱疹后遗神经痛大鼠脊髓神经功能，改善神经递质异常表达，减少神经元凋亡，最终发挥抑制疼痛的作用。     

肝素对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖及分泌的影响及其作用机制

目的观察肝素在体外对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖及分泌的影响,并探讨其作用机制。方法应用Nycodenz分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞置培养板中,并分为三组。A、B组分别加入1000μg/ml及2000μg/ml肝素,C组不用药。应用MTT比色法检测各组肝星状细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、层粘连蛋白(LN)的表达。结果OD值A组为0.0626±0.0137,B组为0.0746±0.0131,C组为0.1106±0.0198,A、B组均显著低于C组(P均<0.05),B组低于A组(P>0.05);C组肝星状细胞胞质中可见α-SMA、TGF-β1和LN明显表达,A、B组各指标表达均低于C组(P分别<0.01和<0.05),A组表达低于B组(P<0.05)。结论肝素可抑制肝纤维化大鼠肝星状细胞的增殖及胶原分泌,作用机制可能是抑制肝星状细胞表达TGF-β1。